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阴道毛滴虫RRas基因序列的cDNA一步克隆、表达及鉴定
被引量:
2
1
作者
王文柯
贾鑫
+2 位作者
曹磊
王黎
薛长贵
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2016年第11期999-1003,共5页
目的一步克隆、表达及鉴定阴道毛滴虫RRas基因,以了解其在组织细胞定位和功能。方法用PCR方法从阴道毛滴虫cDNA文库中扩增RRas片段,用一步克隆法构建RRas-PQE-80L载体,进行菌落PCR和酶切鉴定,阳性克隆提取质粒,经测序鉴定后转化至大肠...
目的一步克隆、表达及鉴定阴道毛滴虫RRas基因,以了解其在组织细胞定位和功能。方法用PCR方法从阴道毛滴虫cDNA文库中扩增RRas片段,用一步克隆法构建RRas-PQE-80L载体,进行菌落PCR和酶切鉴定,阳性克隆提取质粒,经测序鉴定后转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21,经异丙硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导。表达产物用NiAgarose His纯化试剂盒纯化,纯化产物经SDS-PAGE电泳鉴定和Western blot分析。结果从阴道毛滴虫cDNA表达文库中扩增的RRas基因片段长617bp,酶切及DNA测序证实RRas-PQE-80L重组质粒构建正确。表达的融合蛋白分子质量单位约为23.6ku,该蛋白能被抗His标签抗体识别。结论成功构建重组原核表达质粒RRas-PQE-80L载体,并能在E.coli BL21中表达,表达蛋白具有反应原性。
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关键词
阴道毛滴虫
rras
基因
一步克隆
原核表达
WESTERN
BLOT
原文传递
阴道毛滴虫RRas同源基因的克隆和序列分析
被引量:
2
2
作者
许铭炎
傅玉才
+1 位作者
刘居理
张仁利
《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第3期215-218,共4页
目的克隆和分析阴道毛滴虫RRas同源基因,以探讨其在细胞内信号传导通路中的功能。方法从已构建的阴道毛滴虫cDNA表达文库中分离得到一个与人类RRas同源的cDNA克隆,用PCR扩增该cDNA克隆TvRRas相对应的基因组DNA,并对cDNA克隆及其对应的...
目的克隆和分析阴道毛滴虫RRas同源基因,以探讨其在细胞内信号传导通路中的功能。方法从已构建的阴道毛滴虫cDNA表达文库中分离得到一个与人类RRas同源的cDNA克隆,用PCR扩增该cDNA克隆TvRRas相对应的基因组DNA,并对cDNA克隆及其对应的基因组DNA进行测序。利用BLASTP,RPS-BLAST和ClustalW等工具进行序列分析。结果TvRRascDNA序列全长705对碱基,读码框含615对碱基,推测蛋白质序列具205个氨基酸。序列分析显示该基因的基因组DNA序列含有5′端ATG起始密码子和3′端的终止密码子,与cDNA序列完全一致,提示该基因无内含子;进一步分析表明该基因系RRas亚家族的同源基因,其氨基酸序列与人类和小鼠的RRas同源性最高(两者的一致性均为51%,相似性均为70%),同时拥有人类RRas基因高度保守的结合GTP的结构域和完全一致的效应结构域。进化树分析表明该基因与人类的RAS原癌蛋白基因分支及RRas分支聚类。结论获得了阴道毛滴虫RRas同源基因。
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关键词
阴道毛滴虫
rras
同源基因
基因克隆
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职称材料
阴道毛滴虫RRas基因的cDNA克隆和原核表达
被引量:
2
3
作者
张丽芳
傅玉才
+1 位作者
许铭炎
许锦阶
《热带医学杂志》
CAS
2006年第12期1257-1259,共3页
目的克隆和表达阴道毛滴虫RRas(TvRRas)基因,以便进一步探讨其组织定位及功能。方法应用PCR方法从构建的阴道毛滴虫cDNA表达文库中扩增TvRRas基因片段,克隆至pGEM-T载体,经PCR、酶切和测序鉴定后亚克隆至原核表达载体pET-41a,转化大肠...
目的克隆和表达阴道毛滴虫RRas(TvRRas)基因,以便进一步探讨其组织定位及功能。方法应用PCR方法从构建的阴道毛滴虫cDNA表达文库中扩增TvRRas基因片段,克隆至pGEM-T载体,经PCR、酶切和测序鉴定后亚克隆至原核表达载体pET-41a,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21,经异丙基硫代--βD-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,镍-硝基三乙酸(Ni-NTA)柱纯化表达产物后用SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行分析鉴定。结果从阴道毛滴虫cDNA表达文库中扩增的TvRRas基因片段长522bp,酶切及DNA测序证实pET-41a/TvRRas重组质粒构建正确,表达融合蛋白分子量约为45000u。结论成功构建重组原核表达质粒pET-41a/TvRRas,并能在大肠埃希菌内表达,所表达的融合蛋白分子量大小与预期一致。
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关键词
阴道毛滴虫
rras
基因
克隆
原核表达
下载PDF
职称材料
题名
阴道毛滴虫RRas基因序列的cDNA一步克隆、表达及鉴定
被引量:
2
1
作者
王文柯
贾鑫
曹磊
王黎
薛长贵
机构
郑州大学基础医学院人体寄生虫学教研室
出处
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2016年第11期999-1003,共5页
文摘
目的一步克隆、表达及鉴定阴道毛滴虫RRas基因,以了解其在组织细胞定位和功能。方法用PCR方法从阴道毛滴虫cDNA文库中扩增RRas片段,用一步克隆法构建RRas-PQE-80L载体,进行菌落PCR和酶切鉴定,阳性克隆提取质粒,经测序鉴定后转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21,经异丙硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导。表达产物用NiAgarose His纯化试剂盒纯化,纯化产物经SDS-PAGE电泳鉴定和Western blot分析。结果从阴道毛滴虫cDNA表达文库中扩增的RRas基因片段长617bp,酶切及DNA测序证实RRas-PQE-80L重组质粒构建正确。表达的融合蛋白分子质量单位约为23.6ku,该蛋白能被抗His标签抗体识别。结论成功构建重组原核表达质粒RRas-PQE-80L载体,并能在E.coli BL21中表达,表达蛋白具有反应原性。
关键词
阴道毛滴虫
rras
基因
一步克隆
原核表达
WESTERN
BLOT
Keywords
Trichomonas
vaginalis
rras
gene
one-step
cloning
prokaryotic
expression
Western
blotting
分类号
R382.21 [医药卫生—医学寄生虫学]
原文传递
题名
阴道毛滴虫RRas同源基因的克隆和序列分析
被引量:
2
2
作者
许铭炎
傅玉才
刘居理
张仁利
机构
汕头大学医学院寄生虫学教研室
深圳市疾病预防控制中心
出处
《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第3期215-218,共4页
基金
汕头大学研究与发展项目基金(No.L00013)~~
文摘
目的克隆和分析阴道毛滴虫RRas同源基因,以探讨其在细胞内信号传导通路中的功能。方法从已构建的阴道毛滴虫cDNA表达文库中分离得到一个与人类RRas同源的cDNA克隆,用PCR扩增该cDNA克隆TvRRas相对应的基因组DNA,并对cDNA克隆及其对应的基因组DNA进行测序。利用BLASTP,RPS-BLAST和ClustalW等工具进行序列分析。结果TvRRascDNA序列全长705对碱基,读码框含615对碱基,推测蛋白质序列具205个氨基酸。序列分析显示该基因的基因组DNA序列含有5′端ATG起始密码子和3′端的终止密码子,与cDNA序列完全一致,提示该基因无内含子;进一步分析表明该基因系RRas亚家族的同源基因,其氨基酸序列与人类和小鼠的RRas同源性最高(两者的一致性均为51%,相似性均为70%),同时拥有人类RRas基因高度保守的结合GTP的结构域和完全一致的效应结构域。进化树分析表明该基因与人类的RAS原癌蛋白基因分支及RRas分支聚类。结论获得了阴道毛滴虫RRas同源基因。
关键词
阴道毛滴虫
rras
同源基因
基因克隆
Keywords
Tnchomonas
vaginalis
rras
homologue
gene
cloning
分类号
R382.211 [医药卫生—医学寄生虫学]
下载PDF
职称材料
题名
阴道毛滴虫RRas基因的cDNA克隆和原核表达
被引量:
2
3
作者
张丽芳
傅玉才
许铭炎
许锦阶
机构
汕头大学医学院寄生虫学教研室
出处
《热带医学杂志》
CAS
2006年第12期1257-1259,共3页
文摘
目的克隆和表达阴道毛滴虫RRas(TvRRas)基因,以便进一步探讨其组织定位及功能。方法应用PCR方法从构建的阴道毛滴虫cDNA表达文库中扩增TvRRas基因片段,克隆至pGEM-T载体,经PCR、酶切和测序鉴定后亚克隆至原核表达载体pET-41a,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21,经异丙基硫代--βD-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,镍-硝基三乙酸(Ni-NTA)柱纯化表达产物后用SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行分析鉴定。结果从阴道毛滴虫cDNA表达文库中扩增的TvRRas基因片段长522bp,酶切及DNA测序证实pET-41a/TvRRas重组质粒构建正确,表达融合蛋白分子量约为45000u。结论成功构建重组原核表达质粒pET-41a/TvRRas,并能在大肠埃希菌内表达,所表达的融合蛋白分子量大小与预期一致。
关键词
阴道毛滴虫
rras
基因
克隆
原核表达
Keywords
Trichomonas
vaginalis
rras
gene
clone
prokaryotic
expression
分类号
R382.21 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
阴道毛滴虫RRas基因序列的cDNA一步克隆、表达及鉴定
王文柯
贾鑫
曹磊
王黎
薛长贵
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2016
2
原文传递
2
阴道毛滴虫RRas同源基因的克隆和序列分析
许铭炎
傅玉才
刘居理
张仁利
《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006
2
下载PDF
职称材料
3
阴道毛滴虫RRas基因的cDNA克隆和原核表达
张丽芳
傅玉才
许铭炎
许锦阶
《热带医学杂志》
CAS
2006
2
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
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引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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