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RNA干扰人端粒酶逆转录酶基因抑制Hep-2细胞生长增殖的实验研究
被引量：
1
1
作者
陈始明
陶泽璋
+3 位作者
肖伯奎
潘松
刘丹
池花明
《中华病理学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第12期796-800,共5页
目的探讨RNA干扰人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因对Hep-2细胞生长增殖的抑制作用及诱导凋亡作用.方法根据hTERT cDNA序列构建表达hTERT mRNA特异的、含荧光素基因的shRNA真核表达质粒pshRNA1、pshRNA2.随机选取一段与人类基因无同源性的碱...
目的探讨RNA干扰人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因对Hep-2细胞生长增殖的抑制作用及诱导凋亡作用.方法根据hTERT cDNA序列构建表达hTERT mRNA特异的、含荧光素基因的shRNA真核表达质粒pshRNA1、pshRNA2.随机选取一段与人类基因无同源性的碱基序列构建表达shRNA的含荧光素基因的质粒pshRNA3.构建不表达shRNA的含荧光素基因的对照质粒pshRNA4.实验分为5组:A(pshRNA1)、B(pshRNA2)、C(pshRNA3)、D(pshRNA4)、E(空白培养液).酶切后电泳分析鉴定质粒pshRNA1～3.采用共聚焦显微镜检测质粒转染后细胞荧光表达情况;以蛋白印迹法研究hTERT表达变化;以TRAP-PCR ELISA 法研究端粒酶活性变化;以四甲基偶氮唑盐(MTT)法、倒置相差显微镜及原位细胞凋亡法观察各质粒抑制细胞增殖及诱导凋亡作用.结果(1)质粒pshRNA1～3 SalⅠ酶切后电泳见400 bp小带,与预期插入的目的基因大小一致.共聚焦显微镜下见大量的细胞表达绿色荧光.(2)pshRNA1、2转染细胞后hTERT表达显著降低;细胞端粒酶活性明显受到抑制,A组细胞活性为:0.159±0.039、B组细胞活性为0.163±0.028、E组细胞活性为1.512±0.076.A、B组与E组比较,差异均有统计学意义(P<0.01).(3)与E组细胞吸光度(A)值比较,A、B组细胞各时间点均减小,P值均小于0.01.同等培养条件下,A、B组脱落瓶壁的死亡细胞显著增多,凋亡率明显升高.结论 (1)靶向hTERT mRNA的shRNA真核表达质粒能有效转染 Hep-2细胞;(2)RNA干扰hTERT能显著地抑制Hep-2细胞的生长增殖并诱导细胞凋亡.
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关键词
喉肿瘤
端粒
末端转移酶
双链
rna
基因治疗
原文传递
RNA干涉与基因沉默
被引量：
39
2
作者
汤富酬
薛友纺
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第2期167-172,共6页
：双链RNA介导的遗传干涉的机制是1998年发现的。它通过双链RNA的介导特异性地降解相应序列的mRNA，从而导致转录后水平的基因沉默。到目前为止在真菌、拟南芥、线虫、锥虫、水螅、涡虫、果蝇、斑马鱼、小鼠等真核生物中都发现存在这一...
：双链RNA介导的遗传干涉的机制是1998年发现的。它通过双链RNA的介导特异性地降解相应序列的mRNA，从而导致转录后水平的基因沉默。到目前为止在真菌、拟南芥、线虫、锥虫、水螅、涡虫、果蝇、斑马鱼、小鼠等真核生物中都发现存在这一基因沉默机制。目前的研究表明，RNA干涉与植物中的共抑制（cosuppression）、真菌中的基因压制（quelling）很可能具有共同的基本分子机制。这也说明，很可能在进化的很早期阶段，生物就获得了这种机制。RNA干涉对于抵抗病毒入侵、抑制转座子活动等具有重要作用，对于生物体的发育和基因调控可能也有重要作用。
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关键词
rna
干涉
双链
rna
基因沉默
遗传干涉
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职称材料
RNA干扰技术在几项研究领域的应用
被引量：
2
3
作者
燕飞
成卓敏
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
2004年第8期14-19,共6页
作为一项新的反向遗传学技术 ,RNA干扰技术正在越来越多地应用于包括鉴定基因功能、疾病治疗、植物病毒抗性研究在内的多项研究领域。在鉴定基因功能研究中 ,由于该技术的操作简便性 ,使得在基因组水平进行大范围的基因功能鉴定成为可...
作为一项新的反向遗传学技术 ,RNA干扰技术正在越来越多地应用于包括鉴定基因功能、疾病治疗、植物病毒抗性研究在内的多项研究领域。在鉴定基因功能研究中 ,由于该技术的操作简便性 ,使得在基因组水平进行大范围的基因功能鉴定成为可能 ;而针对致病相关基因、致病病毒基因组进行RNA干扰 ,可以有效抑制病情恶化 ,有可能成为未来疾病治疗的重要手段 ;同时 ,将RNA干扰技术应用于植物抗病毒研究 ,为工程化植物抗病毒遗传育种提供了一个高效、特异的抗性获得手段。对RNA干扰技术在上述三个研究领域的应用作简要综述 。
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关键词
rna
干扰
双链
rna
同源序列
rna
I
反向遗传学技术
基因
疾病
治疗
病毒
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职称材料
RNAi在抗肿瘤研究中的应用
4
作者
郁兵
淡飞妮
罗雯
《科学技术与工程》
2009年第20期6114-6121,共8页
RNA干扰作用(RNA interferenc,RNAi)是近年来发现的一种由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)引发的转录后基因沉默现象(post transcriptional gene silencing,PTGS)。随着RNAi作用机制的逐渐阐明,已被广泛应用于多种领域。它不但是研...
RNA干扰作用(RNA interferenc,RNAi)是近年来发现的一种由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)引发的转录后基因沉默现象(post transcriptional gene silencing,PTGS)。随着RNAi作用机制的逐渐阐明,已被广泛应用于多种领域。它不但是研究基因功能的有力工具,而且为特异性基因治疗提供了新的技术手段。RNAi技术的进一步发展,为肿瘤基因治疗开拓了一条新的途径。本文介绍RNAi的作用机制与抗肿瘤应用的研究进展。
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关键词
rna
干扰作用
小分子干扰
rna
双链
rna
基因沉默
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职称材料
题名
RNA干扰人端粒酶逆转录酶基因抑制Hep-2细胞生长增殖的实验研究
被引量：
1
1
作者
陈始明
陶泽璋
肖伯奎
潘松
刘丹
池花明
机构
武汉大学人民医院耳鼻咽喉-头颈外科
出处
《中华病理学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第12期796-800,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(30471873)
湖北省教育厅资助项目(301140180)
文摘
目的探讨RNA干扰人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因对Hep-2细胞生长增殖的抑制作用及诱导凋亡作用.方法根据hTERT cDNA序列构建表达hTERT mRNA特异的、含荧光素基因的shRNA真核表达质粒pshRNA1、pshRNA2.随机选取一段与人类基因无同源性的碱基序列构建表达shRNA的含荧光素基因的质粒pshRNA3.构建不表达shRNA的含荧光素基因的对照质粒pshRNA4.实验分为5组:A(pshRNA1)、B(pshRNA2)、C(pshRNA3)、D(pshRNA4)、E(空白培养液).酶切后电泳分析鉴定质粒pshRNA1～3.采用共聚焦显微镜检测质粒转染后细胞荧光表达情况;以蛋白印迹法研究hTERT表达变化;以TRAP-PCR ELISA 法研究端粒酶活性变化;以四甲基偶氮唑盐(MTT)法、倒置相差显微镜及原位细胞凋亡法观察各质粒抑制细胞增殖及诱导凋亡作用.结果(1)质粒pshRNA1～3 SalⅠ酶切后电泳见400 bp小带,与预期插入的目的基因大小一致.共聚焦显微镜下见大量的细胞表达绿色荧光.(2)pshRNA1、2转染细胞后hTERT表达显著降低;细胞端粒酶活性明显受到抑制,A组细胞活性为:0.159±0.039、B组细胞活性为0.163±0.028、E组细胞活性为1.512±0.076.A、B组与E组比较,差异均有统计学意义(P<0.01).(3)与E组细胞吸光度(A)值比较,A、B组细胞各时间点均减小,P值均小于0.01.同等培养条件下,A、B组脱落瓶壁的死亡细胞显著增多,凋亡率明显升高.结论 (1)靶向hTERT mRNA的shRNA真核表达质粒能有效转染 Hep-2细胞;(2)RNA干扰hTERT能显著地抑制Hep-2细胞的生长增殖并诱导细胞凋亡.
关键词
喉肿瘤
端粒
末端转移酶
双链
rna
基因治疗
Keywords
Laryngeal
neoplasms
Telomerase
rna
double
-
stranded
Gene
therapy
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
原文传递
题名
RNA干涉与基因沉默
被引量：
39
2
作者
汤富酬
薛友纺
机构
北京大学生命科学学院
出处
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第2期167-172,共6页
基金
国家自然科学基金!(39730250)资助
文摘
：双链RNA介导的遗传干涉的机制是1998年发现的。它通过双链RNA的介导特异性地降解相应序列的mRNA，从而导致转录后水平的基因沉默。到目前为止在真菌、拟南芥、线虫、锥虫、水螅、涡虫、果蝇、斑马鱼、小鼠等真核生物中都发现存在这一基因沉默机制。目前的研究表明，RNA干涉与植物中的共抑制（cosuppression）、真菌中的基因压制（quelling）很可能具有共同的基本分子机制。这也说明，很可能在进化的很早期阶段，生物就获得了这种机制。RNA干涉对于抵抗病毒入侵、抑制转座子活动等具有重要作用，对于生物体的发育和基因调控可能也有重要作用。
关键词
rna
干涉
双链
rna
基因沉默
遗传干涉
Keywords
rna
interference；
double
-
stranded
rna
；gene
silenc
ing
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
RNA干扰技术在几项研究领域的应用
被引量：
2
3
作者
燕飞
成卓敏
机构
中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
2004年第8期14-19,共6页
文摘
作为一项新的反向遗传学技术 ,RNA干扰技术正在越来越多地应用于包括鉴定基因功能、疾病治疗、植物病毒抗性研究在内的多项研究领域。在鉴定基因功能研究中 ,由于该技术的操作简便性 ,使得在基因组水平进行大范围的基因功能鉴定成为可能 ;而针对致病相关基因、致病病毒基因组进行RNA干扰 ,可以有效抑制病情恶化 ,有可能成为未来疾病治疗的重要手段 ;同时 ,将RNA干扰技术应用于植物抗病毒研究 ,为工程化植物抗病毒遗传育种提供了一个高效、特异的抗性获得手段。对RNA干扰技术在上述三个研究领域的应用作简要综述 。
关键词
rna
干扰
双链
rna
同源序列
rna
I
反向遗传学技术
基因
疾病
治疗
病毒
Keywords
rna
interference
double
stranded
rna
Homologous
sequence
分类号
Q522 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
RNAi在抗肿瘤研究中的应用
4
作者
郁兵
淡飞妮
罗雯
机构
西安文理学院生命科学系
出处
《科学技术与工程》
2009年第20期6114-6121,共8页
基金
陕西省教育厅专项科研计划(07JK371)
西安文理学院自然科学专项基金资助
文摘
RNA干扰作用(RNA interferenc,RNAi)是近年来发现的一种由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)引发的转录后基因沉默现象(post transcriptional gene silencing,PTGS)。随着RNAi作用机制的逐渐阐明,已被广泛应用于多种领域。它不但是研究基因功能的有力工具,而且为特异性基因治疗提供了新的技术手段。RNAi技术的进一步发展,为肿瘤基因治疗开拓了一条新的途径。本文介绍RNAi的作用机制与抗肿瘤应用的研究进展。
关键词
rna
干扰作用
小分子干扰
rna
双链
rna
基因沉默
Keywords
rna
interferenc
small
interfering
rna
double
-
stranded
rna
gene
silencing
分类号
Q75 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
RNA干扰人端粒酶逆转录酶基因抑制Hep-2细胞生长增殖的实验研究
陈始明
陶泽璋
肖伯奎
潘松
刘丹
池花明
《中华病理学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005
1
原文传递
2
RNA干涉与基因沉默
汤富酬
薛友纺
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2001
39
下载PDF
职称材料
3
RNA干扰技术在几项研究领域的应用
燕飞
成卓敏
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
2004
2
下载PDF
职称材料
4
RNAi在抗肿瘤研究中的应用
郁兵
淡飞妮
罗雯
《科学技术与工程》
2009
0
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职称材料
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