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NRP2表达抑制对结肠癌细胞LoVo移植瘤淋巴管生成和转移的影响 被引量：6
1
作者 周琪 梁后杰 +5 位作者 阎晓初 彭秋平 周进明 吴峰 高俊勇 刘以淑 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2009年第6期481-486,共6页
目的:探讨抑制Neuropilins-2(NRP2)基因表达对结肠癌淋巴管生成和转移的影响。方法:采用RNA干扰(RNAi)下调结肠癌LoVo细胞株NRP2表达,接种NRP2 RNAi的LoVo细胞株于裸鼠,建立裸鼠结肠癌结肠原位移植瘤模型,分别观察移植后4、6、8和12周... 目的:探讨抑制Neuropilins-2(NRP2)基因表达对结肠癌淋巴管生成和转移的影响。方法:采用RNA干扰(RNAi)下调结肠癌LoVo细胞株NRP2表达,接种NRP2 RNAi的LoVo细胞株于裸鼠,建立裸鼠结肠癌结肠原位移植瘤模型,分别观察移植后4、6、8和12周裸鼠结肠原位移植瘤淋巴管生成以及转移的情况。结果:成功建立结肠癌裸鼠原位移植瘤动物模型。下调结肠癌LoVo细胞株NRP2表达能显著降低裸鼠结肠原位移植瘤的淋巴管密度以及远处转移。结论:抑制NRP2表达可以抑制结肠癌的淋巴管生成和转移,它将是一个潜在的肿瘤治疗靶点。 展开更多
关键词 NRP2 rna干扰 移植瘤 淋巴管生成 转移
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livin基因沉默对人恶性黑素瘤A375细胞周期和凋亡的影响 被引量：6
2
作者 王琳琳 郑洪 +2 位作者 唐薇薇 厉国慧 安文波 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期345-349,共5页
目的:探讨小干扰RNA(small interfening RNA,siRNA)沉默livin基因对人恶性黑素瘤A375细胞周期和凋亡的影响。方法:构建2个针对人源livin基因的siRNA表达质粒,并通过脂质体介导转染人恶性黑素瘤A375细胞株,利用荧光定量PCR检测livin mRN... 目的:探讨小干扰RNA(small interfening RNA,siRNA)沉默livin基因对人恶性黑素瘤A375细胞周期和凋亡的影响。方法:构建2个针对人源livin基因的siRNA表达质粒,并通过脂质体介导转染人恶性黑素瘤A375细胞株,利用荧光定量PCR检测livin mRNA的表达情况,AnnexinⅤ-PE FCM法检测A375细胞凋亡情况,PI单染FCM法检测细胞周期情况。结果:成功构建livin siRNA表达质粒,转染siRNA-1和siRNA-2后48h的A375细胞中livin mRNA表达量较空白对照组分别下降17%和42%,72h分别下降71%和61%。转染siRNA-1和siRNA-2后48h的A375细胞凋亡率(29.45%和33.25%)及72h细胞凋亡率(33.52%和38.18%)均高于空白组(7.95%和9.70%)(P<0.05)。siRNA-2可引起G0/G1期升高,S期下降(P<0.05),siRNA-1作用不明显(P>0.05)。结论:siRNA-1、2体外均能有效抑制livin mRNA的转录,促进人恶性黑素瘤A375细胞凋亡。siRNA-2表达质粒能使人恶性黑素瘤A375细胞周期出现G/G期阻滞,细胞增殖受到抑制。 展开更多
关键词 黑色素瘤 实验性 rna干扰 细胞凋亡 细胞周期 基因 LIVIN
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siRNA沉默livin基因对恶性黑素瘤LiBr细胞凋亡、周期及增殖的影响 被引量：3
3
作者 王昊 谭升顺 +3 位作者 王新阳 刘栋华 于春水 白转丽 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2007年第24期2235-2238,共4页
目的:观察沉默livin基因对恶性黑素瘤LiBr细胞凋亡和周期及增值的影响.方法:采用siRNA-3转染人恶性黑素瘤LiBr细胞后分别应用TUNEL法和Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响,应用PI单染流式细胞术分析对细胞周期的改... 目的:观察沉默livin基因对恶性黑素瘤LiBr细胞凋亡和周期及增值的影响.方法:采用siRNA-3转染人恶性黑素瘤LiBr细胞后分别应用TUNEL法和Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响,应用PI单染流式细胞术分析对细胞周期的改变,应用免疫荧光细胞化学技术检测siRNA对凋亡效应蛋白Caspase-3表达的影响及应用MTT法检测siRNA对细胞增殖的作用.结果:siRNA-3转染LiBr细胞72h可诱导细胞凋亡(P<0.05)和引起细胞G0/G1期阻滞(P<0.05);可下调Caspase-3蛋白表达(P<0.05)及抑制细胞增殖(P<0.05).结论:Livin可做为应用RNA干扰技术探索恶性黑素瘤基因治疗的潜在靶基因. 展开更多
关键词 LIVIN 黑色素瘤 rna干扰 细胞凋亡 细胞周期 细胞增殖
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靶向小鼠整合素β_1的shRNA表达载体构建及鉴定 被引量：1
4
作者 史菲 邱晨 彭文科 《海南医学》 CAS 2011年第18期4-7,共4页
目的构建小鼠整合素β1的shRNA表达载体,用RNA干扰下调整合素β1基因在小鼠支气管平滑肌细胞中的表达。方法设计并合成靶向小鼠整合素β1基因的shRNA表达载体,转染入哮喘小鼠的支气管平滑肌细胞,检测shRNA表达载体对靶基因的抑制效果。... 目的构建小鼠整合素β1的shRNA表达载体,用RNA干扰下调整合素β1基因在小鼠支气管平滑肌细胞中的表达。方法设计并合成靶向小鼠整合素β1基因的shRNA表达载体,转染入哮喘小鼠的支气管平滑肌细胞,检测shRNA表达载体对靶基因的抑制效果。结果 shRNA表达载体能稳定转染小鼠支气管平滑肌细胞,转染后的整合素β1mRNA及蛋白质水平均显著下调。结论成功构建了靶向小鼠整合素β1高效、持久的shRNA表达载体,转染细胞后可下调整合素β1表达,为进一步研究整合素β1在哮喘气道重塑中的作用及其基因治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 整合素Β1 SHrna表达载体 rna干扰
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Beclin1基因siRNA慢病毒载体构建和鉴定 被引量：3
5
作者 王文玉 赵国强 +2 位作者 周云 樊红琨 伍钢 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第1期131-135,共5页
本研究通过慢病毒载体(pRNAT-U6.2/Lenti)构建靶向Beclin1基因的RNA干扰(RNAi)重组体,用以建立Beclin1基因稳定沉默的非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞株。PCR鉴定结果显示3个扩增的阳性片段均已插入pRNAT-U6.2/Lenti载体;测序结果证明3个... 本研究通过慢病毒载体(pRNAT-U6.2/Lenti)构建靶向Beclin1基因的RNA干扰(RNAi)重组体,用以建立Beclin1基因稳定沉默的非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞株。PCR鉴定结果显示3个扩增的阳性片段均已插入pRNAT-U6.2/Lenti载体;测序结果证明3个重组慢病毒载体pRNAT-U6.2/Lenti-si356、pRNAT-U6.2/Lenti-si423和pRNAT-U6.2/Lenti-si684的插入序列完全正确;重组慢病毒载体感染A549细胞后,RT-PCR和Westernblot检测结果均证实3组重组体感染的细胞内Beclin1mRNA和蛋白表达都受到不同程度的抑制,Beclin1mRNA的沉默效率分别为35.56%、89.22%和66.78%。结果显示成功构建了Beclin1基因的RNAi病毒重组载体,并建立了其稳定表达的NSCLC A549细胞株,为探讨Beclin1基因对NSCLCA549细胞生物学行为的影响提供了新的细胞模型。 展开更多
关键词 Beclin1基因 sirna慢病毒载体 rna干扰 A549细胞
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RNAi在抗肿瘤研究中的应用
6
作者 郁兵 淡飞妮 罗雯 《科学技术与工程》 2009年第20期6114-6121,共8页
RNA干扰作用(RNA interferenc,RNAi)是近年来发现的一种由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)引发的转录后基因沉默现象(post transcriptional gene silencing,PTGS)。随着RNAi作用机制的逐渐阐明,已被广泛应用于多种领域。它不但是研... RNA干扰作用(RNA interferenc,RNAi)是近年来发现的一种由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)引发的转录后基因沉默现象(post transcriptional gene silencing,PTGS)。随着RNAi作用机制的逐渐阐明,已被广泛应用于多种领域。它不但是研究基因功能的有力工具,而且为特异性基因治疗提供了新的技术手段。RNAi技术的进一步发展,为肿瘤基因治疗开拓了一条新的途径。本文介绍RNAi的作用机制与抗肿瘤应用的研究进展。 展开更多
关键词 rna干扰作用 小分子干扰rna 双链rna 基因沉默
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大鼠β防御素2基因RNAi慢病毒载体的构建及效应测定 被引量：1
7
作者 雷撼 方路 +1 位作者 汪蜀 何翔 《中华生物医学工程杂志》 CAS 2010年第5期453-456,共4页
目的 构建大鼠β防御素2（rBD2）基因RNAi慢病毒重组载体,转染培养细胞,检测其沉默效应,筛选出最佳的RNAi慢病毒载体.方法 序列软件设计3条针对rBD2基因CDS区的siRNA序列,合成单链后退火形成双链DNA,分别与酶切处理的慢病毒载体lentivi... 目的 构建大鼠β防御素2（rBD2）基因RNAi慢病毒重组载体,转染培养细胞,检测其沉默效应,筛选出最佳的RNAi慢病毒载体.方法 序列软件设计3条针对rBD2基因CDS区的siRNA序列,合成单链后退火形成双链DNA,分别与酶切处理的慢病毒载体lentivirus连接构成3个RNAi慢病毒重组载体,再转化细菌,测序鉴定.脂质体法转染细胞,荧光实时定量PCR（RT-PCR）及Western免疫印迹测rBD-2 mRNA及蛋白表达,筛选沉默效果最佳的为LV-shrBD2载体.用慢病毒包装系统对LV-shrBD2进行慢病毒颗粒包装并梯度稀释法测定病毒滴度.结果 凝胶电泳显示3个RNAi慢病毒重组载体的PCR产物为316 bp,测序结果表明序列正确.转染细胞后RT-PCR及Western免疫印迹检测,siRNA序列1构建的重组载体mRNA抑制率达82%,干扰效率最高,为所需的rBD2基因RNAi慢病毒载体LV-shrBD2.包装慢病毒颗粒并调整病毒滴度至1×105ifu/μl.结论 成功构建并筛选出沉默效应最佳的rBD2基因RNAi慢病毒表达载体LV-sh1rBD2,为进一步开展rBD2研究提供了依据. 展开更多
关键词 β防御素2 转染 慢病毒属 rna干扰 沉默效应
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