目的:构建人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)18型E6、E7基因的短发夹RNA(short hairpin ribonucleic acid,shRNA)重组腺病毒载体,为探讨食管癌与其发病关系的研究提供实验基础.方法:设计并合成2条shRNA均克隆到PL-Dest腺病毒骨架...目的:构建人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)18型E6、E7基因的短发夹RNA(short hairpin ribonucleic acid,shRNA)重组腺病毒载体,为探讨食管癌与其发病关系的研究提供实验基础.方法:设计并合成2条shRNA均克隆到PL-Dest腺病毒骨架载体(pAd/PL-Dest)之中,分别组成HPV18 E6、HPV18 E7基因重组腺病毒基因沉默子(shpAd-E6-eGFP、shpAd-E7-eGFP).然后对重组腺病毒基因沉默子(shpAd-E6-eGFP、shpAd-E7-eGFP)采用酶切、DNA测序、PCR鉴定.将验证后的沉默子经酶切后转染至HEK293A细胞,然后再行包装、扩增、纯化与病毒滴度测定.结果:酶切鉴定得到阳性shpAd-E6-eGFP、s h p A d-E6-e G F P重组腺病毒质粒;转染到HEK293A细胞包装成功.结论:成功构建了HPV18 E6、HPV18 E7基因的shRNA重组腺病毒载体,为HPV相关食管癌的基因治疗研究提供实验基础.展开更多
文摘目的:构建人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)18型E6、E7基因的短发夹RNA(short hairpin ribonucleic acid,shRNA)重组腺病毒载体,为探讨食管癌与其发病关系的研究提供实验基础.方法:设计并合成2条shRNA均克隆到PL-Dest腺病毒骨架载体(pAd/PL-Dest)之中,分别组成HPV18 E6、HPV18 E7基因重组腺病毒基因沉默子(shpAd-E6-eGFP、shpAd-E7-eGFP).然后对重组腺病毒基因沉默子(shpAd-E6-eGFP、shpAd-E7-eGFP)采用酶切、DNA测序、PCR鉴定.将验证后的沉默子经酶切后转染至HEK293A细胞,然后再行包装、扩增、纯化与病毒滴度测定.结果:酶切鉴定得到阳性shpAd-E6-eGFP、s h p A d-E6-e G F P重组腺病毒质粒;转染到HEK293A细胞包装成功.结论:成功构建了HPV18 E6、HPV18 E7基因的shRNA重组腺病毒载体,为HPV相关食管癌的基因治疗研究提供实验基础.
