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牛RECQL解旋酶的原核表达纯化及解旋条件优化
1
作者 翟留涛 秦魏 +1 位作者 刘娜女 奚绪光 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2017年第6期9-15,29,共8页
【目的】通过大肠杆菌表达纯化牛(Bos taurus)RECQL蛋白,利用停流光谱技术对解旋条件进行优化,为研究RECQL的酶促反应动力过程奠定基础。【方法】将人工合成的牛RECQL蛋白编码序列与pET21a载体相连接,获得重组表达载体pET21a-BtRecql后... 【目的】通过大肠杆菌表达纯化牛(Bos taurus)RECQL蛋白,利用停流光谱技术对解旋条件进行优化,为研究RECQL的酶促反应动力过程奠定基础。【方法】将人工合成的牛RECQL蛋白编码序列与pET21a载体相连接,获得重组表达载体pET21a-BtRecql后,将其导入大肠杆菌BL21(DE3)菌株中进行诱导表达,经过Ni-NTA亲和层析和Superdex 200凝胶过滤层析,得到纯化的重组蛋白BtRECQL;再利用停流光谱技术对BtRECQL解旋过程进行检测分析,通过摸索不同的试验参数找到BtRECQL发挥解旋功能较适宜的条件。【结果】得到了纯度大于95%的BtRECQL蛋白,产量为0.29 mg/L。在BtRECQL浓度为60nmol/L,反应条件为1.0 mmol/L ATP,30mmol/L Tris-HCl,pH 7.5,60mmol/L NaCl,1mmol/L MgCl2,2mmol/L DTT,孵育温度为37℃时,该蛋白解旋活性较好。【结论】成功表达并纯化了BtRECQL蛋白,确定了其最优的解旋条件。 展开更多
关键词 牛 recql解旋酶 原核表达纯化 解旋活性
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解螺旋酶RECQL5的功能及其在肿瘤中作用的研究进展
2
作者 李永民 崔滨滨 +2 位作者 姜世雄 苑梁 李栗 《现代生物医学进展》 CAS 2015年第31期6171-6174,共4页
目前,研究已在小鼠和人类中发现5个Rec Q基因家族成员,分别是Recql1、BLM、WRN、Recql4和RECQL5。其中,RECQL5具有抑制姐妹染色体交换、抑制同源重组修复、阻止双链DNA断裂以及与TOPⅡα的协同作用等功能。最近研究在缺乏RECQL5的Apcmi... 目前,研究已在小鼠和人类中发现5个Rec Q基因家族成员,分别是Recql1、BLM、WRN、Recql4和RECQL5。其中,RECQL5具有抑制姐妹染色体交换、抑制同源重组修复、阻止双链DNA断裂以及与TOPⅡα的协同作用等功能。最近研究在缺乏RECQL5的Apcmin小鼠小肠和结肠中均发现有肿瘤生长,提示RECQL5蛋白与肿瘤的发生密切相关。此外,RECQL5可能是影响喜树碱(CPT)治疗结直肠癌效果的主要因素,并可能是以伊立替康为基础药物治疗结肠癌效果评估的潜在生物标记物。本文就解螺旋酶RECQL5的功能及其在肿瘤中作用的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 解螺旋酶 recql5 基因稳定 肿瘤
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DNA解旋酶RecQL1在宫颈癌及其癌前病变中的表达及临床意义 被引量：1
3
作者 吴林 杨慧 +4 位作者 高孝家 王巧丽 杨垒 周福祥 周云峰 《武汉大学学报（医学版）》 CAS 2015年第4期506-509,516,共5页
目的:探讨宫颈癌及癌前病变组织中DNA解旋酶RecQL1的表达及临床意义。方法:采用链霉卵白素-过氧化物酶连结(SP)免疫组化方法,检测宫颈癌(75例)、宫颈上皮内瘤变(CIN,60例)和正常宫颈(20例)组织中RecQL1蛋白表达与宫颈癌临床病理特征和... 目的:探讨宫颈癌及癌前病变组织中DNA解旋酶RecQL1的表达及临床意义。方法:采用链霉卵白素-过氧化物酶连结(SP)免疫组化方法,检测宫颈癌(75例)、宫颈上皮内瘤变(CIN,60例)和正常宫颈(20例)组织中RecQL1蛋白表达与宫颈癌临床病理特征和预后的关系。结果:在正常宫颈、CIN、宫颈癌组织中,RecQL1蛋白的阳性表达率分别为10.000%(2/20)、55.000%(33/60)、74.700%(55/75),差异均有统计学意义(P<0.05)。75例宫颈癌患者中,有淋巴结转移和无淋巴结转移患者的RecQL1阳性表达率分别为89.300%和63.800%,差异有统计学意义(P<0.05)。随访的75例宫颈癌患者中,RecQL1阳性和阴性患者的总生存时间(OS)分别为(42.000±20.762)个月和(115.990±13.593)个月,两者差异有统计学意义(P<0.001)。多因素分析显示,RecQL1表达情况、淋巴结转移情况和肿瘤分期为影响宫颈癌预后的独立因素。结论:RecQL1蛋白可能参与了宫颈癌的发生和发展,其与宫颈癌是否发生淋巴结转移及预后有关。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 宫颈上皮内瘤样病变 免疫组织化学 DNA解旋酶recql1
原文传递
固本抑瘤Ⅱ号对乳腺癌小鼠RECQL4蛋白和mRNA表达的影响
4
作者 徐晓华 刘敏 +1 位作者 李可欣 张青 《环球中医药》 CAS 2021年第5期816-821,共6页
目的观察固本抑瘤Ⅱ号及其联合阿霉素对4T1乳腺癌荷瘤小鼠原位瘤生长及RECQL4蛋白和mRNA表达的影响。方法将4T1乳腺癌荷瘤小鼠随机分为对照组、中药组、阿霉素组和中药+阿霉素组,每组6只,每7天测量体重和瘤体积,给药第28天取原位瘤称重... 目的观察固本抑瘤Ⅱ号及其联合阿霉素对4T1乳腺癌荷瘤小鼠原位瘤生长及RECQL4蛋白和mRNA表达的影响。方法将4T1乳腺癌荷瘤小鼠随机分为对照组、中药组、阿霉素组和中药+阿霉素组,每组6只,每7天测量体重和瘤体积,给药第28天取原位瘤称重,计算抑瘤率,并用蛋白免疫印迹法(Western-blot,WB)和实时定量荧光聚合酶链式扩增反应检测原位瘤组织中RECQL4蛋白和mRNA的表达。结果中药组、阿霉素组、中药+阿霉素组小鼠瘤重均小于对照组(P<0.01),中药+阿霉素组小鼠瘤重均小于中药组、阿霉素组(P<0.01),阿霉素组小鼠瘤重小于中药组(P<0.01)。在给药第28天,中药+阿霉素组小鼠原位瘤体积小于中药组(P<0.05)和对照组(P<0.01),阿霉素组和中药+阿霉素组小鼠体重均较对照组减轻(P<0.01),中药组小鼠体重未见明显影响。与对照组相比,中药组(P<0.05)、阿霉素组(P<0.01)、中药+阿霉素组(P<0.01)中RECQL4蛋白表达和阿霉素组(P<0.05)和中药+阿霉素组(P<0.01)中RECQL4 mRNA表达均偏低。结论固本抑瘤Ⅱ号及其联合阿霉素均能抑制4T1乳腺癌荷瘤小鼠原位瘤的生长,其机制可能与其抑制原位瘤组织中RECQL4蛋白的表达有关。 展开更多
关键词 乳腺癌 固本抑瘤Ⅱ号 阿霉素 解旋酶recql4 原位瘤 小鼠
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