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结肠癌中p73基因改变的意义 被引量：16
1
作者 李陕区 崔大祥 +5 位作者 刘变英 闫小君 孙安乐 郭宴海 段杰 苏成芝 《第四军医大学学报》 2000年第3期314-316,共3页
目的　研究 p73基因在结肠癌中的改变及其意义 .方法　采用 PCR- SSCP方法检测 40例结肠癌及其癌旁非癌组织中 p73基因突变 ,采用定量 RT- PCR方法检测 p73基因的表达 .结果　 1PCR- SSCP检测出 7例存在 p73等位基因缺失 ,未见突变 ;2定... 目的　研究 p73基因在结肠癌中的改变及其意义 .方法　采用 PCR- SSCP方法检测 40例结肠癌及其癌旁非癌组织中 p73基因突变 ,采用定量 RT- PCR方法检测 p73基因的表达 .结果　 1PCR- SSCP检测出 7例存在 p73等位基因缺失 ,未见突变 ;2定量 RT- PCR检测出 33例结肠癌呈高表达 ,7例呈中等表达 ;非癌组织中 2 6例呈低水平表达 ,14例呈中等水平表达 ;p73基因在结肠癌与癌旁组织中的表达存在显著性差异 (P<0 .0 1) .结论　 p73基因以等位基因缺失。 展开更多
关键词 结肠癌 P73基因 定量rt-pcr
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柑橘脉突病毒实时荧光定量RT-PCR检测体系的建立与应用 被引量：16
2
作者 王艳娇 崔甜甜 +4 位作者 黄爱军 陈洪明 李中安 周常勇 宋震 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1613-1620,共8页
为了快速、灵敏地检测柑橘脉突病毒(Citrus vein enation virus,CVEV),通过设计特异性引物(EVq F4/EVq R4),优化反应条件,建立了CVEV的实时荧光定量RT-PCR检测体系。该方法特异性良好;检测灵敏度比常规RT-PCR高100倍;标准曲线循环阈值... 为了快速、灵敏地检测柑橘脉突病毒(Citrus vein enation virus,CVEV),通过设计特异性引物(EVq F4/EVq R4),优化反应条件,建立了CVEV的实时荧光定量RT-PCR检测体系。该方法特异性良好;检测灵敏度比常规RT-PCR高100倍;标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数为0.992,扩增效率101.8%;检测组内和组间变异系数均小于2.85%,重复性较好。利用所建立的实时荧光定量方法对柑橘植株进行检测发现,‘代代酸橙’和‘象山红’植株中CVEV分布不均匀,其中根部病毒滴度最高,分别为162.52和45.32拷贝·ng^(-1) RNA,皮及叶部病毒滴度相对较低。 展开更多
关键词 柑橘脉突病毒 实时荧光定量rt-pcr
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积雪草甙对兔耳增生性瘢痕TGF-β_1 mRNA表达的影响 被引量：12
3
作者 赵文鲁 匡瑞霞 +1 位作者 刘肃 陈璐 《中国美容医学》 CAS 2009年第1期72-75,共4页
目的:通过建立兔耳腹侧增生性瘢痕的模型,探讨积雪草甙(Asiaticoside,Ad)对TGF-β1mRNA表达的影响。方法:新西兰大白兔20只(喂养过程中死亡4只),在兔耳腹侧制备直径为1cm、深达软骨膜的圆形瘢痕93个,随机分为4组:空白对照组、得宝松组... 目的:通过建立兔耳腹侧增生性瘢痕的模型,探讨积雪草甙(Asiaticoside,Ad)对TGF-β1mRNA表达的影响。方法:新西兰大白兔20只(喂养过程中死亡4只),在兔耳腹侧制备直径为1cm、深达软骨膜的圆形瘢痕93个,随机分为4组:空白对照组、得宝松组、低浓度积雪草甙组(25mg/ml)、高浓度积雪草甙组(50mg/ml),分别于瘢痕制备3天后局部应用相应药物,2周后取材,分别测量瘢痕组织TGF-β1mRNA的表达量。结果:积雪草甙组与空白对照组相比,TGF-β1mRNA表达量明显降低,有明显统计学差异(P<0.01);积雪草甙与阳性对照组相比,二者mRNA表达量无统计学差异(P>0.05);积雪草甙组之间,高浓度组与低浓度组相比有统计学差异(P<0.05)。结论:较高浓度积雪草甙注射液局部注射可以减少增生性瘢痕TGF-β1mRNA的表达。 展开更多
关键词 增生性瘢痕瘢痕 积雪草 TGF-Β1 荧光pcr
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非小细胞肺癌化疗药物敏感基因表达及其临床病理特征分析 被引量：14
4
作者 罗春英 王璇 +3 位作者 时姗姗 周晓军 马恒辉 王建东 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2013年第5期481-484,共4页
目的肺癌是全球癌症死亡的首要原因,其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)约占肺癌总数的85%。目前化疗是晚期NSCLC常规治疗方案。文中分析几种常见化疗药物敏感性相关基因mRNA在中国人群中表达情况及其与临床病理特征... 目的肺癌是全球癌症死亡的首要原因,其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)约占肺癌总数的85%。目前化疗是晚期NSCLC常规治疗方案。文中分析几种常见化疗药物敏感性相关基因mRNA在中国人群中表达情况及其与临床病理特征的相关性以便进行个体化治疗。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative re-verse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测49例NSCLC石蜡组织标本中编码3型β微管蛋白的TUBB3基因、核苷酸切除修复交叉互补组1基因(excision repair cross complementation group1,ERCC1)、胸苷酸合成酶基因(thymidylate syn-thetase,TYMS)、核糖核苷酸还原酶亚单位M1基因(ribonucleotide reductase M1,RRM1)mRNA表达水平。结果 TUBB3mRNA在53.33%NSCLC组织中高表达;ERCC1 mRNA在40.00%NSCLC组织中高表达,其中肺腺癌高表达率为53.33%、肺鳞状细胞癌为8.33%,两者之间的表达差异有统计学意义,P=0.019;TYMS mRNA在76.19%NSCLC组织中低表达;RRM1mRNA在78.57%NSCLC组织中低表达。TUBB3、ERCC1、TYMS、RRM1基因mRNA表达与NSCLC患者的性别、年龄、肿瘤分化程度无显著相关性。结论多数中国人NSCLC肿瘤组织中TYMS、RRM1 mRNA低表达;肺腺癌ERCC1 mRNA表达明显高于肺鳞状细胞癌。研究结果提示,多数NSCLC患者对化疗药物吉西他滨、培美曲塞敏感,肺鳞癌患者较腺癌患者应用铂类抗癌药物更有效。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 药物敏感性 实时荧光定量rt—pcr 基因表达
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香蕉苹果酸脱氢酶基因克隆及其逆境胁迫表达 被引量：13
5
作者 张建斌 贾彩红 +4 位作者 邓秋菊 金志强 刘菊华 张建平 徐碧玉 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1942-1949,共8页
从香蕉果实抑制差减文库中获得一条香蕉苹果酸脱氢酶基因片段,采用RACE技术获得全长,命名为MaMDH;MaMDH基因全长1 249bp,编码332个氨基酸。生物信息学分析预测其编码蛋白分子量约35 448Da,等电点为6.53。与已知植物苹果酸脱氢酶基因相比... 从香蕉果实抑制差减文库中获得一条香蕉苹果酸脱氢酶基因片段,采用RACE技术获得全长,命名为MaMDH;MaMDH基因全长1 249bp,编码332个氨基酸。生物信息学分析预测其编码蛋白分子量约35 448Da,等电点为6.53。与已知植物苹果酸脱氢酶基因相比,氨基酸同源性均达92%。保守结构域分析发现,MaMDH基因具有NAD结合位点、苹果酸结合位点和二聚体结合位点。系统进化树比对分析表明,MaMDH与玉米和小麦的亲缘关系较近。MaMDH基因在乙烯利处理香蕉苗中上调表达;在盐、Al 3+胁迫和香蕉尖孢镰刀菌4号生理小种处理幼苗中先上调表达,后下调表达;在冷害胁迫幼苗中先下调表达,后上调表达;而在干旱胁迫、伤害胁迫幼苗中表达没有明显变化。研究表明,香蕉中的苹果酸脱氢酶基因具有响应生物胁迫和非生物胁迫能力,可能在香蕉适应衰老、盐、铝、低温胁迫和枯萎病菌侵染等逆境中发挥重要作用。 展开更多
关键词 香蕉 苹果酸脱氢酶 序列分析 逆境胁迫 荧光定量pcr
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利用基因芯片技术筛选棉纤维伸长相关基因 被引量：13
6
作者 李龙云 于霁雯 +5 位作者 翟红红 黄双领 李兴丽 张红卫 张金发 喻树迅 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期95-104,共10页
从回交近交系(backcross inbred lines,BIL)群体中选取纤维长度差异较大的两个系NMGA-062(33.03 mm)和NMGA-140(25.87 mm),利用Affymetrix棉花基因芯片,分析其开花后10 d(DPA,days post anthesis)棉纤维伸长相关基因表达谱。在24 029条... 从回交近交系(backcross inbred lines,BIL)群体中选取纤维长度差异较大的两个系NMGA-062(33.03 mm)和NMGA-140(25.87 mm),利用Affymetrix棉花基因芯片,分析其开花后10 d(DPA,days post anthesis)棉纤维伸长相关基因表达谱。在24 029条转录本中,两材料间差异表达的转录本有7 282条,占总数的30.31%;其中差异表达倍数在2倍或2倍以上的转录本有3 993条,占筛选转录本总数的16.62%,功能分类表明这些转录本主要包括功能预测基因(15.57%),翻译、核糖体结构相关基因(13.54%)和翻译后修饰、蛋白质转换相关基因(9.29%)3大类。为了验证芯片数据的可信性,8个差异表达显著的基因(Ghi.10655.1.S1_s_at,ACO1,ARF1,SAHH,TUA6,TUA7,β-tub1,β-tub10)被用于实时荧光定量PCR。两种检测手段表现出一致性。随后,利用实时荧光定量PCR对3个与棉纤维相关基因(ARF1,β-tub1,β-tub10)在纤维发育不同时期(5、10、15、20和25 DPA)的表达模式进行了研究,结果表明,3个基因在纤维伸长发育时期(10和15 DPA)大量表达,推测这3个基因可能与棉纤维伸长有重要关系。 展开更多
关键词 基因芯片 纤维伸长相关基因 差异表达基因 实时荧光定量pcr
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葡萄扇叶病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：12
7
作者 周俊 范旭东 +4 位作者 董雅凤 张尊平 胡国君 任芳 李正男 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期538-548,共11页
根据葡萄扇叶病毒(Grapevine fanleaf virus,GFLV)RNA2序列设计4对特异性引物,通过引物筛选、体系优化,建立了以FL-HP1-F/R为引物的GFLV的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法。该方法标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,扩增... 根据葡萄扇叶病毒(Grapevine fanleaf virus,GFLV)RNA2序列设计4对特异性引物,通过引物筛选、体系优化,建立了以FL-HP1-F/R为引物的GFLV的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法。该方法标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,扩增效率为100%,相关性系数为0.998,灵敏性分别是常规RT-PCR和巢式RT-PCR的100倍和10倍。重复性试验表明组内和组间变异系数均小于2.59%,显示该方法具有较好的检测稳定性。内参基因的稳定性测试结果表明葡萄EF1和GAPDH基因具有较好的试验稳定性。利用建立的荧光定量方法测定12个葡萄样品中GFLV含量,并检测58个葡萄样品,结果表明不同葡萄样品中GFLV含量差异较大,最高含量是最低含量的81 245.5倍,与ELISA和巢式RT-PCR相比,实时荧光定量方法能检测出更多的GFLV分离物。 展开更多
关键词 葡萄 葡萄扇叶病毒 实时荧光定量rt-pcr 病毒浓度
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苦参碱抑制神经母细胞瘤LA-N-5细胞增殖及MYCN基因mRNA的表达 被引量：10
8
作者 冯晨 唐锁勤 +2 位作者 王建文 龙卉 杨光 《中国当代儿科杂志》 CAS CSCD 2008年第2期225-227,共3页
目的神经母细胞瘤是4岁以下儿童最常见的恶性实体肿瘤,MYCN基因的高表达导致预后更加恶劣。苦参碱作为中药苦参的重要成分对多种肿瘤有治疗作用,该实验拟应用苦参碱作用神经母细胞瘤细胞(LA-N-5),对肿瘤细胞增殖及MYCN基因mRNA表达受抑... 目的神经母细胞瘤是4岁以下儿童最常见的恶性实体肿瘤,MYCN基因的高表达导致预后更加恶劣。苦参碱作为中药苦参的重要成分对多种肿瘤有治疗作用,该实验拟应用苦参碱作用神经母细胞瘤细胞(LA-N-5),对肿瘤细胞增殖及MYCN基因mRNA表达受抑制情况进行初步研究,希望可以为神经母细胞瘤的治疗开拓新的思路。方法以终浓度为0.25mg/mL,0.50mg/mL,0.75mg/mL,1.00mg/mL苦参碱作用神经母细胞瘤LA-N-5细胞,MTT法检测LA-N-5细胞增殖情况变化,采用SYBR绿色荧光染料Ⅰ的实时荧光定量RT-PCR检测MYCN基因mRNA表达受抑制情况。结果苦参碱对LA-N-5细胞增殖的抑制呈明显的剂量、时间依赖性,随剂量的增加,作用时间的延长,抑制效果逐渐加强。1.00mg/mL作用72h后肿瘤细胞增殖抑制效率达36.3%,单细胞MYCN基因mRNA表达9.7±0.35拷贝,抑制效率达44.6%。结论应用苦参碱在体外环境作用LA-N-5细胞,可以有效抑制该细胞的增殖、原癌基因MYCN mRNA的表达,为临床上神经母细胞瘤的治疗开拓了新的思路。 展开更多
关键词 苦参碱 神经母细胞瘤 MYCN 荧光定量rt-pcr 细胞株
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Trametessp.AH28-2漆酶A的诱导合成及其基因5′-端调控区的克隆与分析 被引量：6
9
作者 洪宇植 肖亚中 +4 位作者 房伟 张书祥 查向东 李剑凤 周宏敏 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期547-552,共6页
Trametessp.AH28_2漆酶同工酶的合成需要铜离子的存在,较高浓度的Cu2+有利于漆酶合成。在以葡萄糖为碳源补加0·5mmol/LCu2+的培养基中生长时,发酵液漆酶活性为44·3u/L,同时补加4·0mmol/L邻甲苯胺时,漆酶酶活提高到71... Trametessp.AH28_2漆酶同工酶的合成需要铜离子的存在,较高浓度的Cu2+有利于漆酶合成。在以葡萄糖为碳源补加0·5mmol/LCu2+的培养基中生长时,发酵液漆酶活性为44·3u/L,同时补加4·0mmol/L邻甲苯胺时,漆酶酶活提高到71·0u/L;而在补加Cu2+和邻甲苯胺的纤维二糖培养基中,酶活上升至2584u/L,为葡萄糖培养基的36·4倍。邻甲苯胺和铜离子诱导产生的漆酶同工酶组分,均为漆酶A(LacA)。竞争性RT_PCR分析表明,漆酶A基因(lacA)转录本的累积伴随有发酵液漆酶活性的增加,邻甲苯胺对lacA的调控发生在转录水平。lacA结构基因长2110bp,含有10个内含子;lacA的cDNA序列为1560bp,编码520aa的漆酶蛋白,其氨基酸序列与其它真菌漆酶具有较高的相似性。采用改进的反向PCR技术,扩增得到的lacA5′_端调控区长1881bp,分析表明,该区域上分布有1个TATA框、7个CAAT框和多个潜在的顺式作用元件序列位点,包括5个MRE元件、9个CreA结合位点、4个XRE元件、2个STRE元件和7个氮因子调控位点等。这些序列位点的存在部分地对应了菌株摇瓶发酵条件下lacA的表达规律。 展开更多
关键词 真菌漆酶 定量rt-pcr 长距离反向pcr 顺式作用元件
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定量PCR技术检测增生性瘢痕组织纤维连接蛋白的基因表达 被引量：8
10
作者 杨银辉 付小兵 +3 位作者 王亚平 孙同柱 许明火 盛志勇 《中华整形烧伤外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期404-406,483,共3页
目的探讨纤维连接蛋白的表达水平与创伤后增生性瘢痕形成的关系。方法采用定量PCR技术,对纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)在正常皮肤和增生性瘢痕中mRNA表达水平的变化进行比较。结果在增生性瘢痕中,FN的mRNA表达水平较正常皮肤增高。结... 目的探讨纤维连接蛋白的表达水平与创伤后增生性瘢痕形成的关系。方法采用定量PCR技术,对纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)在正常皮肤和增生性瘢痕中mRNA表达水平的变化进行比较。结果在增生性瘢痕中,FN的mRNA表达水平较正常皮肤增高。结论实验结果表明细胞外基质成分的变化在创伤修复失控形成中起重要作用。 展开更多
关键词 创伤修复 纤维连接蛋白 增生性瘢痕 定量pcr
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丹参咖啡酸-O-甲基转移酶基因(SmCOMT1)的克隆及其分析 被引量：10
11
作者 宋银 王东浩 +3 位作者 吴锦斌 周露 王国栋 王喆之 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期437-443,共7页
依据丹参转录组数据库得到的咖啡酸-O-甲基转移酶基因序列设计特异性引物,采用RT-PCR方法从丹参分离得到一个新的COMT基因,命名为SmCOMT1(GenBank注册号为JF693491)。该基因cDNA全长1 158 bp,包含一个长为1 095 bp的开放阅读框,编码364... 依据丹参转录组数据库得到的咖啡酸-O-甲基转移酶基因序列设计特异性引物,采用RT-PCR方法从丹参分离得到一个新的COMT基因,命名为SmCOMT1(GenBank注册号为JF693491)。该基因cDNA全长1 158 bp,包含一个长为1 095 bp的开放阅读框,编码364个氨基酸。SmCOMT1 gDNA序列长2 275 bp,包含4个外显子和3个内含子。序列分析结果表明,SmCOMT1编码的多肽具有COMT的序列保守元件,与同科植物罗勒COMT编码的多肽高度同源,同源性达到89%。系统进化树分析表明,SmCOMT1与双子叶植物的COMT亲缘关系较近。qRT-PCR结果表明,SmCOMT1基因在丹参不同组织器官中差异表达,其中茎中的表达量最高,并且其表达受茉莉酸甲酯和病原菌的诱导,显示SmCOMT1基因可能在植物防御反应中发挥作用。 展开更多
关键词 丹参 咖啡酸-O-甲基转移酶 基因克隆 qrt—pcr
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定量RT-PCR法对“苦参”在心肌炎模型中药效学研究 被引量：8
12
作者 陈曙霞 成威 +3 位作者 谢龙山 钱富荣 陈美芳 刘晶星 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2003年第1期1-4,共4页
目的用定量RT-PCR法检测“苦参”中抗柯萨奇B病毒有效成份“抗柯注射液”,在Balb/c小鼠病毒性心肌炎模型病毒血症时,对抗“柯萨奇B病毒”的药效。 方法取48只雄性18-22g 8周龄的Balb/c小鼠,随机分成A-H共8组,每组6只。1.各治疗组(A-F组)... 目的用定量RT-PCR法检测“苦参”中抗柯萨奇B病毒有效成份“抗柯注射液”,在Balb/c小鼠病毒性心肌炎模型病毒血症时,对抗“柯萨奇B病毒”的药效。 方法取48只雄性18-22g 8周龄的Balb/c小鼠,随机分成A-H共8组,每组6只。1.各治疗组(A-F组),每只小鼠从腹腔接种0.1ml l04TCID50 CVB3m病毒2h后,每天从尾静脉分别注射抗柯注射液,5、10、15、20、25、30mg/kg,2次/d,连续用药3d。2.病毒组(G组),注射病毒同上法,2h后从尾静脉注入0.3ml无菌生理盐水,2次/d,连续3d。3.空白对照组(H组),腹腔内注射无小牛血清的RPMI-1640培养液,2h后从尾静脉注入0.3ml无菌生理盐水,2次/d,连续3d。 结果 空白组CVB-RNA(-)对接种CVB3m感染后用不同剂量“抗柯注射液”治疗的各小组血液中CVB3m-RNA含量与病毒组相比明显下降,其抑制率(％)与所用抗柯注射液的剂量呈正比,即“抗柯”剂量增加,CVB3m-RNA含量下降的幅度亦增加,每天5-30mg,/kg中的各剂量都有明显抑制病毒增殖的作用。 结论用定量RT-PCR法检测到“抗柯注射液”对Balb/c小鼠病毒性心肌炎病毒血症时效果明显,最小有效剂量为5mg·kg-1·d-1。 展开更多
关键词 苦参 抗柯注射液 柯萨奇B病毒 定量rt-pcr 病毒性心肌炎 动物模型
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T3基因型柑橘衰退病毒实时荧光定量RT-PCR检测体系的建立及应用 被引量：9
13
作者 陶珍珍 李中安 +4 位作者 贾敏 唐萌 唐科志 周常勇 周彦 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期183-190,共8页
根据不同基因型柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)ORF1a的序列差异,设计T3基因型CTV的特异性引物T3-4F/R,通过优化得到最佳反应条件建立T3基因型CTV分离株的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR,并进行灵敏性、重复性试验。应用该方... 根据不同基因型柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)ORF1a的序列差异,设计T3基因型CTV的特异性引物T3-4F/R,通过优化得到最佳反应条件建立T3基因型CTV分离株的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR,并进行灵敏性、重复性试验。应用该方法测定柑橘植株中T3基因型CTV分离株含量。建立了一种特异性检测T3基因型CTV分离株的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法,其灵敏性比普通RT-PCR方法高100倍。标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,扩增效率为97.1%,相关性系数为0.992。组内和组间变异系数均小于2.94%,表明该方法重复性好。田间样品中T3基因型CTV含量差异较大,最高含量是最低含量的1 250倍。本研究中建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法能够准确检测柑橘植株内的T3基因型CTV分离株,可用于研究T3基因型的CTV的变化规律。 展开更多
关键词 柑橘衰退病毒 T3基因型 实时荧光定量rt-pcr
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龙眼果实发育过程中果糖激酶活性及其基因表达分析 被引量：9
14
作者 帅良 薛晓清 +3 位作者 牛佳佳 顾渝娟 韩冬梅 吴振先 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期99-104,共6页
【目的】以石硖龙眼Dimocarpus longan cv.shixia为材料,研究了龙眼果实在发育过程中假种皮蔗糖、葡萄糖和果糖含量的变化规律,以及果糖激酶活性及其基因的表达变化情况.【方法】利用高效液相色谱测定果实糖含量变化;RT-q PCR测定基因... 【目的】以石硖龙眼Dimocarpus longan cv.shixia为材料,研究了龙眼果实在发育过程中假种皮蔗糖、葡萄糖和果糖含量的变化规律,以及果糖激酶活性及其基因的表达变化情况.【方法】利用高效液相色谱测定果实糖含量变化;RT-q PCR测定基因表达变化量;构建原核表达载体,并在大肠埃希菌Escherichia coli Rosetta(DE3)中进行表达.【结果和结论】随着龙眼果实的发育,假种皮中蔗糖、葡萄糖和果糖的含量逐渐增加,但进入成熟期后,糖含量水平趋于稳定;在果实成熟前,果糖激酶活性随着果实发育逐渐降低,由发育最初的25.97μmol·g^(-1)·h^(-1)下降到13.18μmol·g^(-1)·h^(-1),而在成熟时增大到22.44μmol·g^(-1)·h^(-1);荧光定量分析显示,龙眼果糖激酶基因的表达量在果实发育前期变化不大,而在假种皮迅速膨大、含糖量迅速上升时期则呈下降趋势;SDS-PAGE结果表明,成功构建了pET-32a-DlFRK原核表达载体,经IPTG诱导能够在大肠埃希菌中得到高效表达. 展开更多
关键词 龙眼 果糖激酶 荧光定量 原核表达
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应用内含子法构建PC基因mRNA竞争RT-PCR内参照 被引量：4
15
作者 徐闯 夏成 +2 位作者 刘国文 王哲 姜玉富 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期1056-1059,共4页
运用PC基因mRNA与PC基因DNA相比缺少1个81bp内含子序列的基本原理,应用PCR技术和生物工程原理,通过1对引物,进行1次克隆,成功构建了PC基因mRNA的466bp竞争DNA模板重组质粒,PC基因mRNA与PC基因DNA可以互为内参照。为应用逆转录-聚合酶链... 运用PC基因mRNA与PC基因DNA相比缺少1个81bp内含子序列的基本原理,应用PCR技术和生物工程原理,通过1对引物,进行1次克隆,成功构建了PC基因mRNA的466bp竞争DNA模板重组质粒,PC基因mRNA与PC基因DNA可以互为内参照。为应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测糖代谢过程中PC基因mRNA水平奠定方法学基础。 展开更多
关键词 内含子法 PC基因 MRNA 竞争模板 rt-pcr 内参照 丙酮酸羟化酶
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联用免疫磁珠及定量RT-PCR检测胃癌外周血微转移 被引量：5
16
作者 张新军 郭俊明 +4 位作者 季峰 秦丽君 肖丙秀 金之瑾 陈健 《浙江预防医学》 2004年第8期13-14,19,共3页
目的　探讨联用免疫磁珠和定量RT PCR检测胃癌患者外周血微转移的方法学及意义。方法　首先将人胃癌MGC 80 3细胞以不同浓度加入到健康人外周血中 ,其次用淋巴细胞分离液收集单核细胞 ,然后等分成 4份分别用 4种方法处理———直接扩增... 目的　探讨联用免疫磁珠和定量RT PCR检测胃癌患者外周血微转移的方法学及意义。方法　首先将人胃癌MGC 80 3细胞以不同浓度加入到健康人外周血中 ,其次用淋巴细胞分离液收集单核细胞 ,然后等分成 4份分别用 4种方法处理———直接扩增 (A方法 )、阴性磁珠筛选 (B方法 )、阳性磁珠筛选 (C方法 )及联用阴性和阳性磁珠筛选 (D方法 ) ,最后用定量RT PCR检测β2 微球蛋白mRNA和癌胚抗原 (CEA)mRNA并计算出相对CEA .mRNA值。同法测定 41例胃癌、 10例良性胃病患者和 5例健康人外周血CEAmRNA。结果　参照模型中D方法测出的相对CEAmRNA值均小于A、B和C方法测出的 ,其检测灵敏度为每ml血含有1个癌细胞。 41例胃癌患者中用A、B、C和D方法测出的阳性例数分别为 19例 ( 4 6 3 4% )、 2 3例( 5 6 10 % )、 2 2例 ( 5 3 66% )和 2 7例 ( 65 85 % ) ;D方法与A方法比较 ,P <0 0 5。D方法检测 10例良性胃病均为阴性 ,而用其它 3种方法检测有 1例阳性 ;5例健康人均未见扩增。结论　联合使用免疫磁珠阴性、阳性筛选和定量RT PCR可提高胃癌患者外周血微转移的检出率。 展开更多
关键词 免疫磁珠 定量rt-pcr检测 胃癌 外周血微转移 淋巴细胞
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猪ADSL基因克隆及其在部分组织中的mRNA定量表达 被引量：8
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作者 刘基伟 徐日福 +4 位作者 李奎 白丽景 应正宙 唐中林 杨述林 《畜牧与兽医》 北大核心 2010年第6期22-27,共6页
试验以通城猪为研究对象,在对猪ADSL基因全长编码区cDNA片段进行克隆、序列测定、与GenBank中已收录的其他14种动物的ADSL全长编码区序列进行同源性分析,并构建系统发生树的基础上,采用实时(相对)定量PCR方法对刚出生和65日龄两个不同... 试验以通城猪为研究对象,在对猪ADSL基因全长编码区cDNA片段进行克隆、序列测定、与GenBank中已收录的其他14种动物的ADSL全长编码区序列进行同源性分析,并构建系统发生树的基础上,采用实时(相对)定量PCR方法对刚出生和65日龄两个不同生长发育时期的通城猪心、肝、肾脏、背最长肌4种组织的ADSL基因表达谱进行分析。结果表明,所克隆的ADSL基因片段大小为1 548 bp(GenBank登录号:GU249574),其中包含一长为1 455 bp的完整阅读框,通过核酸序列分析发现,该基因编码484个氨基酸;与GenBank中已收录的猪ADSL基因序列同源性最高,达99.9%;与恒河猴和黑猩猩的序列同源性最低,分别为66.3%和41.3%;15种动物的20条ADSL全长CDS序列聚类分布为两个主支。刚出生时的通城猪ADSL基因在心、肝、肾脏组织的mRNA表达水平均高于65日龄通城猪的心、肝、肾脏组织中的mRNA表达;然而,其背最长肌的ADSL基因mRNA表达水平则低于65日龄的通城猪。本结果为猪ADSL基因的生物学功能研究和遗传进化研究提供了分子依据。 展开更多
关键词 ADSL基因 克隆 肾脏组织 mRNA expression 定量表达 pig 通城猪 序列同源性 mRNA表达水平 GENBANK 背最长肌 日龄 核酸序列分析 编码区序列 系统发生树 同源性分析 研究对象 序列测定 收录 片段
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陆地棉GhSPL3基因的克隆、亚细胞定位及表达分析 被引量：7
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作者 李洁 范术丽 +2 位作者 宋美珍 庞朝友 喻树迅 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2012年第5期414-419,共6页
利用生物信息学结合RT-PCR技术从陆地棉中克隆出SPL转录因子,命名为GhSPL3,在GenBank的登录号为JN795132。该基因包含一个426 bp的ORF(开放阅读框),推测编码141个氨基酸的多肽。生物信息学分析表明GhSPL3包含一个典型的SBP结构域和一个... 利用生物信息学结合RT-PCR技术从陆地棉中克隆出SPL转录因子,命名为GhSPL3,在GenBank的登录号为JN795132。该基因包含一个426 bp的ORF(开放阅读框),推测编码141个氨基酸的多肽。生物信息学分析表明GhSPL3包含一个典型的SBP结构域和一个核定位信号;进化树分析发现,GhSPL3与AtSPL3聚为一组,推测棉花GhSPL3和拟南芥AtSPL3在结构和功能上可能有着一定的相似性。亚细胞定位表明,GhSPL3定位于细胞核中,荧光定量RT-PCR结果表明,GhSPL3基因在棉花各组织中都有表达,但表达量不同。在花中表达量最高,其次是在顶芽和茎中的表达量,在根和叶中表达量较低。通过分析GhSPL3在顶芽的不同发育时期的表达量发现,GhSPL3在三片真叶展平时的顶芽中表达量最高,推测GhSPL3可能在花芽的分化、生长阶段的转变和花器官的形成上起着重要作用。 展开更多
关键词 陆地棉 GhSPL3 亚细胞定位 荧光定量rt—pcr
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DD3和PSA基因在前列腺癌组织中的定量表达分析 被引量：6
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作者 毛晓露 陶志华 +11 位作者 徐伟 陈晓东 陈占国 翁志梁 胡元平 吴秀玲 张筱骅 谢辉 王瓯晨 宋其同 李澄棣 余凯远 《中华泌尿外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期624-627,共4页
目的探讨DD3 mRNA和PSA mRNA在前列腺组织中表达的临床意义及诊断前列腺癌(PCa)的价值。方法荧光定量RT—PCR法分析21例PCa组织、39例良性前列腺增生(BPH)组织DD3 mRNA和PSA mRNA的表达,ROC曲线对DD3 mRNA、PSA mRNA和DD3 mRNA／PSA mRN... 目的探讨DD3 mRNA和PSA mRNA在前列腺组织中表达的临床意义及诊断前列腺癌(PCa)的价值。方法荧光定量RT—PCR法分析21例PCa组织、39例良性前列腺增生(BPH)组织DD3 mRNA和PSA mRNA的表达,ROC曲线对DD3 mRNA、PSA mRNA和DD3 mRNA／PSA mRNA比值诊断PCa的价值进行分析。结果PCa组织中DD3 mRNA、PSA mRNA表达量和DD3 mRNA／PSA mRNA比值均显著高于BPH组织,差异有统计学意义(P<0．01)。不同临床分期和分化程度之间DD3 mRNA、PSA mRNA和DD3 mRNA／PSA mRNA比值差异无统计学意义(P值均>0．05)。ROC曲线分析结果显示,DD3 mRNA、PSA mRNA和DD3 mRNA／PSA mRNA的曲线下面积分别为0．937、0．755和0．839。当DD3 mRNA、PSA mRNA和DD3 mRNA／PSA mRNA临界值分别为1．4×105拷贝／mg组织、3．0×107拷贝／mg组织和5．0×10-3时,敏感性分别为90．5％、81．0％和81．0％,特异性分别为85．0％、62．0％和66．7％。若将DD3 mRNA和PSA mRNA联合用于PCa的诊断,其特异性与DD3 mRNA相同,为85．0％,敏感性可达100．0％。结论PCa组织中DD3 mRNA和PSA mRNA表达量均增加,但组织中DD3 mRNA的定量检测更具诊断价值,联合检测有利于提高诊断敏感性,对PCa的诊断具有一定临床应用价值。 展开更多
关键词 DD3基因 PSA基因 MRNA 定量rt—pcr 前列腺肿瘤
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肿瘤转移抑制基因KiSS-1在乳腺癌脑转移患者的表达及临床意义 被引量：3
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作者 邹志军 郭爱林 +2 位作者 周清 文剑明 曾爱华 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 2005年第8期757-760,共4页
目的转移抑制基因KiSS-1在多种肿瘤的浸润转移中起着重要的作用。但该基因与乳腺癌脑转移的关系仍很不清楚。本研究检测了乳腺癌原发灶和脑转移灶中KiSS-1基因的表达并探讨其临床意义。方法选择2002年6月￣2004年6月行乳腺癌脑转移病灶... 目的转移抑制基因KiSS-1在多种肿瘤的浸润转移中起着重要的作用。但该基因与乳腺癌脑转移的关系仍很不清楚。本研究检测了乳腺癌原发灶和脑转移灶中KiSS-1基因的表达并探讨其临床意义。方法选择2002年6月￣2004年6月行乳腺癌脑转移病灶切除的患者12例,应用实时荧光定量PCR检测乳腺癌原发灶和转移灶中KiSS-1基因mRNA的表达,应用Westernblot检测KiSS-1蛋白的表达,并进一步应用免疫组化进行验证。结果实时荧光定量PCR显示脑转移标本KiSS-1mRNA表达仅为原发灶的1/10,与原发灶比较有显著差异(P<0.01),Westernblot检测显示脑转移灶KiSS-1蛋白较原发灶明显减弱,免疫组化显示KiSS-1在原发灶中表达率明显低于原发灶。结论KiSS-1基因在乳腺癌脑转移中具有转移抑制作用,可能在乳腺癌脑转移治疗中发挥作用。 展开更多
关键词 脑转移瘤 乳腺肿瘤 肿瘤转移抑制基因 定量rt-pcr
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