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陕西洛川苹果园不同覆盖措施对土壤性质、细菌群落及果实产量和品质的影响 被引量:26
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作者 沈鹏飞 王威雁 +3 位作者 李彤 廖允成 李亚君 温晓霞 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期817-831,共15页
以渭北旱作苹果园4种覆盖模式(秸秆覆盖、锯末覆盖、森林土覆盖、清耕对照)土壤为研究对象,在土壤基本理化指标及土壤酶活性测定的基础上,利用荧光定量PCR(q-PCR)和Illumina HiSeq高通量测序技术对土壤细菌群落结构和多样性进行分析。... 以渭北旱作苹果园4种覆盖模式(秸秆覆盖、锯末覆盖、森林土覆盖、清耕对照)土壤为研究对象,在土壤基本理化指标及土壤酶活性测定的基础上,利用荧光定量PCR(q-PCR)和Illumina HiSeq高通量测序技术对土壤细菌群落结构和多样性进行分析。研究结果表明,各覆盖处理较对照显著提高了0~20cm土层水分、有机质和全氮含量,降低了土壤pH;同时显著提高土壤脲酶、蔗糖酶和过氧化氢酶活性;各覆盖处理下土壤细菌16S rRNA拷贝数均显著高于清耕;变形菌门、酸杆菌门和放线菌门为优势种群,相对丰度之和占57.12%~74.72%;α变形菌纲、Subgroup_6、β变形菌纲和δ变形菌纲为优势菌纲,相对丰度之和占33.39%~43.15%。α多样性分析表明覆盖能够提高土壤细菌群落的丰度、种群丰富度和多样性指数。β多样性分析表明各覆盖处理较对照细菌群落系统发育组成存在显著差异;冗余分析(RDA)结果表明,不同覆盖处理下土壤细菌群落相对丰度与土壤养分及酶活性存在一定相关关系。覆盖有助于提高果实百果质量及糖度,其中秸秆覆盖效果最佳。 展开更多
关键词 苹果 果园 覆盖模式 高通量测序 荧光定量pcr 土壤细菌
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多年蔬菜连作对土壤氨氧化微生物群落组成的影响 被引量:20
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作者 孟德龙 杨扬 +4 位作者 伍延正 吴敏娜 秦红灵 朱亦君 魏文学 《环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第4期1331-1338,共8页
为揭示农业生产中长期大量施用化学肥料对土壤硝化过程微生物种群的影响及其与土壤硝化能力的偶联关系,本研究通过在长沙黄兴蔬菜基地采集长期连作蔬菜(20 a以上,VL)和短期蔬菜种植地(2 a左右,VS)表层土壤(0~20 cm),利用末端限制性片... 为揭示农业生产中长期大量施用化学肥料对土壤硝化过程微生物种群的影响及其与土壤硝化能力的偶联关系,本研究通过在长沙黄兴蔬菜基地采集长期连作蔬菜(20 a以上,VL)和短期蔬菜种植地(2 a左右,VS)表层土壤(0~20 cm),利用末端限制性片段多态性(T-RFLP)和实时定量PCR(Q-PCR)等手段系统研究了蔬菜连作对氨氧化细菌(ammonia-oxidizingbacteria,AOB)和氨氧化古菌(ammonia-oxidizing archaea,AOA)的组成和丰度的影响及其与土壤硝化势的偶联关系.结果表明,长期蔬菜连作显著使得土壤中AOB amoA的组成趋于单一,同时也影响了土壤中AOA amoA的群落组成;RDA分析结果表明,影响AOB amoA群落结构的主要土壤因素为土壤pH以及Olsen-P的含量.土壤中AOA amoA基因拷贝数明显高于AOB,平均为细菌丰度的6倍,但土壤硝化势(PNF)与土壤中AOB amoA基因丰度成显著的正相关,而与土壤中AOA amoA基因丰度没有显著的相关性.尽管多年蔬菜连作对AOB和AOA丰度的影响还不清楚,却使得AOB优势种群富集,土壤硝化能力增强. 展开更多
关键词 蔬菜连作 硝化势 AOA和AOB群落组成 T-RFLP q-pcr AMOA基因
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一种适用于油菜、大豆、花生、芝麻四种油料作物种子的RNA提取方法 被引量:18
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作者 孙海波 王智慧 +3 位作者 刘学群 黄军艳 董彩华 刘胜毅 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期353-358,共6页
油料作物种子中,大量油脂、蛋白、酚类物质的存在和易氧化的特点导致RNA提取困难。为了解决这一问题,本研究在商业化RNA提取试剂盒的基础上,通过以下3方面的改进,使之成功应用于油菜、花生、芝麻和大豆的各个时期种子RNA提取和后期的荧... 油料作物种子中,大量油脂、蛋白、酚类物质的存在和易氧化的特点导致RNA提取困难。为了解决这一问题,本研究在商业化RNA提取试剂盒的基础上,通过以下3方面的改进,使之成功应用于油菜、花生、芝麻和大豆的各个时期种子RNA提取和后期的荧光定量分析实验:1)增加抗氧化剂巯基乙醇和PVP;2)根据不同作物的油脂含量调整氯仿的比例;3)改进RNA沉淀方法,加大洗脱液体积后用乙醇沉淀。与常规的CTAB、TRIZOL及文献报道的RNA提取方法比较,本方法提取的RNA更完整、得率更高、纯度更高;所得RNA被成功应用于FAD2基因的荧光定量表达分析,发现了四种作物种子不同发育时期的FAD2基因的表达差异,证明了改良方法的有效性。 展开更多
关键词 RNA提取 油料作物 种子 荧光定量 油菜 大豆 花生 芝麻
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堆肥对污泥中四环素类抗生素及抗性基因的影响 被引量:15
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作者 韦蓓 黄福义 苏建强 《环境工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期5431-5438,共8页
近年来,抗生素及抗性基因的污染与扩散成为全球关注的热点。污泥,作为污水处理系统的副产物,是环境中抗生素抗性基因的重要存储库。污泥经堆肥后可作为肥料施用于农田,然而关于污泥堆肥过程中抗性基因丰度变化的研究却很少。对污泥堆肥... 近年来,抗生素及抗性基因的污染与扩散成为全球关注的热点。污泥,作为污水处理系统的副产物,是环境中抗生素抗性基因的重要存储库。污泥经堆肥后可作为肥料施用于农田,然而关于污泥堆肥过程中抗性基因丰度变化的研究却很少。对污泥堆肥过程中四环素类抗生素(四环素、土霉素和金霉素)和四环素类抗性基因(tet(A),tet(C),tet(M),tet(O)和tet(X))的动态变化进行了定量研究。结果表明,四环素、土霉素和金霉素的浓度经堆肥处理后分别减少85.6%,91.4%和85.3%。高温是导致四环素类抗生素降解的主要因素。经堆肥处理后,tet(A)和tet(X)的相对丰度增加,tet(C)、tet(M)和tet(O)的相对丰度略微下降,说明堆肥处理对污泥中四环素类抗性基因的削减效果有限。 展开更多
关键词 四环素 四环素类抗性基因 污泥堆肥 定量pcr
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金线莲转录组测序及其黄酮类合成相关基因分析 被引量:13
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作者 邹福贤 许文 +4 位作者 黄泽豪 张勋 陈抒云 林羽 徐伟 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期66-74,共9页
首次采用RNA-seq高通量测序技术对不同种植时期的金线莲进行转录组测序,并通过Q-PCR和HPLC对其结果进行验证和分析。转录组测序共获得金线莲51 370条基因,并注释到Nr、GO、Swiss-Prot、KEGG和KOG数据库,根据同源序列比对,与油棕和海枣... 首次采用RNA-seq高通量测序技术对不同种植时期的金线莲进行转录组测序,并通过Q-PCR和HPLC对其结果进行验证和分析。转录组测序共获得金线莲51 370条基因,并注释到Nr、GO、Swiss-Prot、KEGG和KOG数据库,根据同源序列比对,与油棕和海枣的同源性最高。通过比较不同生长时间的金线莲转录组,分析其差异基因主要集中在黄酮类生物合成相关基因,运用Q-PCR对6个黄酮类生物合成相关基因(反式肉桂酸4-单加氧酶、咖啡酰辅酶A O-甲基转移酶、查尔酮合成酶、黄酮醇合成酶、莽草酸O-羟基肉桂酰转移酶、黄酮类3',5'-羟化酶)表达量进行验证;并结合HPLC对相应的金线莲样品中6种主要黄酮类成分(芦丁、异槲皮苷、水仙苷、槲皮素、山柰酚和异鼠李素)进行含量测定。结果表明6种主要黄酮类成分含量随着金线莲黄酮类合成基因的表达量的升高而增加,并结合转录组数据,绘制出金线莲中黄酮类成分的生物合成途径。此研究为金线莲黄酮合成关键基因及黄酮类成分生物合成提供重要的遗传信息,同时为其药用价值开发提供依据。 展开更多
关键词 金线莲 RNA-SEq q-pcr 含量测定 黄酮类 生物合成
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热毒宁注射液对大鼠肝脏CYP450酶的影响 被引量:12
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作者 张云燕 徐王彦君 +8 位作者 汤响林 马增春 王宇光 梁乾德 谭洪玲 肖成荣 王振中 萧伟 高月 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第14期2737-2742,共6页
研究热毒宁注射液对大鼠肝脏CYP450酶酶活性及其mRNA表达水平的影响。将SD大鼠腹腔注射7 d后,处死,制备大鼠的肝微粒体,与探针药物共孵育,利用LC/MS法测定各同工酶特异性底物在大鼠肝微粒的代谢产物的生成量,间接反映各同工酶的活性。... 研究热毒宁注射液对大鼠肝脏CYP450酶酶活性及其mRNA表达水平的影响。将SD大鼠腹腔注射7 d后,处死,制备大鼠的肝微粒体,与探针药物共孵育,利用LC/MS法测定各同工酶特异性底物在大鼠肝微粒的代谢产物的生成量,间接反映各同工酶的活性。应用荧光定量PCR技术考察热毒宁注射液对大鼠肝脏CYP450酶mRNA表达水平的影响。结果显示,酶活性方面,热毒宁注射液与空白组比较可抑制CYP2B1,2C12,2C13,2D2的酶活性,诱导CYP3A1的酶活性,对CYP1A2酶活性无明显影响。mRNA表达方面,热毒宁注射液对CYP2B1,3A1,1A2,2C11,2D1,2E1 mRNA的表达具有诱导作用。通过对上述结果分析,可以看出热毒宁注射液在酶活性和mRNA水平均对CYP3A1具有显著的诱导作用,与大环内酯类抗生素合用时可能会出现不良反应;对CYP2B1,2C12,2C13,2D2的酶活性均具有抑制作用,与其他药物联合用药时要充分考虑可能出现的药物相互作用或潜在风险。 展开更多
关键词 热毒宁注射液 细胞色素P450酶 Cocktail探针法 荧光定量pcr技术
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葛根芩连汤对抗生素相关腹泻肠道乳酸杆菌属的影响研究 被引量:12
7
作者 刘茜明 杨光勇 +6 位作者 何光志 田维毅 蔡琨 王平 黄高 梁建东 王文佳 《家畜生态学报》 北大核心 2016年第11期74-78,共5页
为了探讨葛根芩连汤对抗生素相关腹泻模型肠道中乳酸杆菌属的调理作用,运用氨苄青霉素灌胃建立巴马猪抗生素性腹泻动物模型,用葛根芩连汤进行治疗,处死巴马猪并收集不同位置的肠道内容物(包括十二指肠、空肠、回肠、盲肠和结肠)作为检... 为了探讨葛根芩连汤对抗生素相关腹泻模型肠道中乳酸杆菌属的调理作用,运用氨苄青霉素灌胃建立巴马猪抗生素性腹泻动物模型,用葛根芩连汤进行治疗,处死巴马猪并收集不同位置的肠道内容物(包括十二指肠、空肠、回肠、盲肠和结肠)作为检测样品;通过建立定量检测乳酸杆菌属的荧光定量PCR方法,对葛根芩连汤治疗前后肠道内乳酸杆菌的动态变化进行检测。结果显示,与正常对照组相比,模型组肠道内乳酸杆菌属含量显著降低(P<0.01);与模型组相比,葛根芩连汤治疗组乳酸杆菌在各个肠段中数量明显上升(P<0.05)。长期使用抗生素会引起肠道内优势杆菌乳酸杆菌属数量明显减少;葛根芩连汤对抗生素相关腹泻模型肠道乳酸杆菌属具有调理作用。 展开更多
关键词 葛根芩连汤 抗生素相关腹泻 乳酸杆菌属 荧光定量pcr
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决明子水提液对大鼠肝脏CYP450酶的影响 被引量:11
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作者 许龙龙 汤响林 +7 位作者 马增春 王宇光 梁乾德 谭洪玲 肖成荣 李桦 原梅 高月 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1504-1510,共7页
该文研究决明子水提液对大鼠肝脏CYP450酶酶活性、mRNA及蛋白表达水平的影响。取SD大鼠,口服灌胃受试药物后,处死,用冰冷生理盐水灌流肝脏,提取大鼠肝脏微粒体、肝脏总RNA和总蛋白,采用Cocktail体外孵育法结合液质联用(LCMS)技术对大鼠... 该文研究决明子水提液对大鼠肝脏CYP450酶酶活性、mRNA及蛋白表达水平的影响。取SD大鼠,口服灌胃受试药物后,处死,用冰冷生理盐水灌流肝脏,提取大鼠肝脏微粒体、肝脏总RNA和总蛋白,采用Cocktail体外孵育法结合液质联用(LCMS)技术对大鼠肝脏中CYP1A2,2B1,2C11,2D2,2E1,3A1各亚酶的酶活性进行测定,并应用荧光定量PCR技术和Western blot对上述亚型的mRNA和蛋白表达水平进行检测。结果表明,酶活性方面,决明子水提液组与空白组比较可明显诱导CYP1A2,2B1,2C11,2D2,2E1,3A1的酶活性,其中决明子低剂量组对CYP2D2有明显的抑制作用,中、高剂量组对CYP2D2有明显的诱导作用,且都呈剂量依赖性增加,但对CYP3A1的诱导不呈剂量依赖性;mRNA表达方面,决明子水提液对CYP1A2,2C11,2D2,2E1mRNA的表达具有显著诱导作用,其中对CYP1A2,2D2,2E1诱导作用呈剂量依赖性,与酶活性水平具有一致性,对CYP2B1,3A1没有明显作用;蛋白表达方面,决明子水提液对CYP2C11,2E1的表达也具有诱导作用,但没有统计学差异。决明子水提液对CYP450同工酶不同程度诱导或抑制作用,特别是对于CYP2C11,2E1亚型酶,酶活性与mRNA,蛋白表达水平具有一致性,提示当与这些酶底物合并用药时,尤其是与CYP2C11,2E1代谢有关的药物合用时,应充分考虑到潜在的有益和不利的药物相互作用。 展开更多
关键词 决明子 细胞色素P450酶 Cocktail探针法 荧光定量pcr技术 Western BLOT
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艾比湖湿地盐节木根际土壤氨氧化微生物多样性和丰度及其与环境因子的相关性分析 被引量:10
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作者 何园 胡文革 +3 位作者 马得草 杨扬 兰鸿珠 高岩 《环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期1967-1975,共9页
氨氧化反应是硝化作用的关键步骤,参与这一反应的微生物是氨氧化细菌(AOB)和氨氧化古菌(AOA).对新疆艾比湖湿地盐节木根际和非根际土壤的氨氧化微生物进行群落结构和丰度分析,并探究其与土壤理化因子的相关性.同时,以氨单加氧酶基因(amo... 氨氧化反应是硝化作用的关键步骤,参与这一反应的微生物是氨氧化细菌(AOB)和氨氧化古菌(AOA).对新疆艾比湖湿地盐节木根际和非根际土壤的氨氧化微生物进行群落结构和丰度分析,并探究其与土壤理化因子的相关性.同时,以氨单加氧酶基因(amo A)为分子标记,构建克隆文库和测序并与q-PCR法结合研究AOA、AOB的群落结构和丰度,利用Pearson相关分析法探究其与环境因子的相关性.结果表明,根际土壤中AOB的多样性高于AOA,amo A基因序列多属于土壤/水体沉积物分支,AOB克隆文库中的所有序列均属于亚硝化单胞菌属(Nitrosomonas).根际土壤中AOA amo A和AOB amo A的数量分别为2.09×104和2.91×105copies·g^(-1),AOB/AOA的比值为13.9;非根际土壤中AOA amo A和AOB amo A的数量分别为3.85×104和4.76×105copies·g^(-1),AOB/AOA的比值为12.36.相关分析显示,氨氧化微生物的群落结构和丰度与电导率(EC)、有机质(OM)、速效氮(AN)、氨氮(NH_4^+-N)和总氮(TN)等环境因子显著相关.这些结果表明,根际土壤中AOB的群落多样性高于AOA,根际和非根际土壤中AOB的丰度均高于AOA,说明在艾比湖湿地AOB是氨氧化微生物的优势种群,且EC、OM、AN、NH_4^+-N和TN可能会影响氨氧化微生物的群落结构和丰度. 展开更多
关键词 氨氧化细菌(AOB) 氨氧化古菌(AOA) 克隆文库 q-pcr 根际土壤
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实时定量PCR检测46例初诊急性早幼粒细胞白血病患者PML/RARα mRNA的分子表达 被引量:10
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作者 主鸿鹄 刘艳荣 +6 位作者 秦亚溱 李金兰 常艳 王亚哲 单福香 江滨 陆道培 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2007年第1期1-5,共5页
本研究探讨实时定量PCR(Q-PCR)检测PML/RARαmRNA的方法学,并对46例初诊急性早幼粒细胞白血病(APL)患者骨髓标本进行检测。构建PML/RARα的bcr1型和bcr3型转录本以及内参照abl基因转录本的阳性标准品质粒;利用ABI Prism7500型Q-PCR仪对4... 本研究探讨实时定量PCR(Q-PCR)检测PML/RARαmRNA的方法学,并对46例初诊急性早幼粒细胞白血病(APL)患者骨髓标本进行检测。构建PML/RARα的bcr1型和bcr3型转录本以及内参照abl基因转录本的阳性标准品质粒;利用ABI Prism7500型Q-PCR仪对46例初诊APL患者和40例非APL患者骨髓标本进行检测,PML/RARαmRNA定量结果以校正比值(NQ)表示,NQ=PML/RARαmRNA拷贝数/ABLmRNA拷贝数;应用四色流式细胞术检测免疫表型。结果显示,Q-PCR结果的日间差和日内差平均变异系数(CV)分别为1.58%和0·88%。可重复敏感度为可以检测5copies/100ng RNA。40例非APL患者PML/RARαmRNA均为阴性。46例初诊APL患者PML/RARαmRNA表达量NQ中位值为0.450(0.084-1.082)。比较32例bcr1型和14例bcr3型两组患者的特征表明,PML/RARαmRNA NQ中位值分别为0.454(0.084-1.082)和0.386(0.151-0.848)(P>0·05)。形态学诊断M3v的患者比例分别为9.40%和48.96%(P<0.05);初诊时WBC中位数分别为2.15(0.2-59.6)和9·35(0.91-122.8)(P<0.05),而在性别、年龄、初诊时血红蛋白和血小板计数、骨髓中APL细胞比例、DIC指标等方面无差异。流式细胞仪术检测时,CD45/SSC射门情况下,APL细胞群分布可以分为两类:高侧向角(L-SSC,粗颗粒)和非高侧向角(NL-SSC,细颗粒)两类。bcr1型患者中85.70%表现为L-SSC,而bcr3型患者中64·29%表现为NL-SSC。结论:建立的Q-PCR方法稳定可靠,敏感度高;bcr1型和bcr3型APL患者的PML/RARαmRNA表达量无差异,bcr3型APL患者中形态学M3v比例和WBC数比bcr1型患者高;PML/RARα不同转录本类型和免疫表型以及细胞形态学之间有一定的相关性。 展开更多
关键词 白血病 急性早幼粒细胞白血病 实时定量pcr PML/RARΑ
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甘蔗独脚金内酯生物合成关键基因ScD27的克隆与表达分析 被引量:9
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作者 吴转娣 刘新龙 +8 位作者 刘家勇 昝逢刚 李旭娟 刘洪博 林秀琴 陈学宽 苏火生 赵培方 吴才文 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期31-41,共11页
独脚金内酯(strigolactones,SLs)是一类新型植物激素,D27基因是独脚金内酯生物合成途径中最上游的调控基因,且该基因调控SLs的合成是一个可逆的过程。本研究根据水稻、玉米、高粱、二穗短柄草4种禾本科作物的D27基因核苷酸序列保守区域... 独脚金内酯(strigolactones,SLs)是一类新型植物激素,D27基因是独脚金内酯生物合成途径中最上游的调控基因,且该基因调控SLs的合成是一个可逆的过程。本研究根据水稻、玉米、高粱、二穗短柄草4种禾本科作物的D27基因核苷酸序列保守区域设计引物,以甘蔗品种ROC22的c DNA为模板,利用RT-PCR和RACE技术,从甘蔗中克隆出D27基因的c DNA全长序列,命名为Sc D27,Gen Bank登录号为KP987221.1。该基因序列全长1379 bp,包含一个867 bp的完整开放阅读框(ORF),编码288个氨基酸残基。Sc D27编码的蛋白质分子量为71.58 k D,理论等电点为5.04,是一种非分泌性蛋白,主要分布于叶绿体上,该蛋白的保守区可能具有2个锌指蛋白结构域(Zn F_TAZ和Zn F_A20),且不存在信号肽;该基因编码的氨基酸序列具有较高的保守性,与高粱、谷子、大麦、短穗二柄草等禾本科植物的D27氨基酸序列相似性在70%以上;Sc D27基因在甘蔗各组织部位均有表达,其中茎尖和腋芽中表达量较高,叶、茎和根中的表达较低。此外,Sc D27基因在甘蔗茎尖中的表达受PEG、盐胁迫、磷缺乏和营养缺乏的诱导,推测Sc D27基因是甘蔗独脚金内酯生物合成途径中响应非生物胁迫的关键基因。 展开更多
关键词 甘蔗 ScD27 同源克隆 生物信息学 q-pcr
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参麦注射液对大鼠心脏细胞色素P450酶的调节作用 被引量:10
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作者 张红曦 王宇光 +6 位作者 马增春 梁乾德 肖成荣 谭洪玲 汤响林 董志 高月 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期484-490,共7页
目的研究参麦注射液及各单药注射液对大鼠心脏P450酶mRNA表达和花生四烯酸代谢的影响。方法 SD大鼠连续腹腔注射参麦注射液及各单药注射液14 d后取心脏,采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)方法,检测各处理组药物对大鼠心脏P450亚酶CYP1A1、C... 目的研究参麦注射液及各单药注射液对大鼠心脏P450酶mRNA表达和花生四烯酸代谢的影响。方法 SD大鼠连续腹腔注射参麦注射液及各单药注射液14 d后取心脏,采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)方法,检测各处理组药物对大鼠心脏P450亚酶CYP1A1、CYP1B1、CYP2B1、CYP2C11、CYP2E1、CYP2J3、CYP4A1、CYP4A3、CYP4F1、CYP4F4、CYP4F5、CYP4F6、ANP、BNP、EPHX2mRNA表达的影响。结果对各处理组的心脏P450酶mRNA表达水平检测显示:与空白组比较,除CYP2B1、CYP4A3和CYP4F6参麦注射液对其他CYP各亚型mRNA的表达均表现了上调的作用,红参注射液组对CYP2E1、CYP4A3、CYP4F1和EHPX2mRNA表达有上调作用,麦冬注射液对ANP、BNP和EHPX2mRNA的表达上调作用明显,同时能明显下调CYP2B1和CYP2C11的表达。结论虽然参麦注射液对CYP2B1的作用没有统计学意义,但总体呈现出诱导的趋势,而麦冬注射液对CYP2B1呈现明显的抑制作用,提示红参注射液可能对CYP2B1的诱导作用更大。参麦注射液、红参注射液与麦冬注射液均对CYP2E1、CYP4F1和EHPX2有诱导作用,提示参麦注射液对CYP2E1、CYP4F1和EHPX2的诱导作用可能由复方中的红参和麦冬共同贡献。参麦注射液和麦冬注射液对ANP和BNP均具有诱导的作用,提示在对ANP和BNP的作用中麦冬比红参的作用更强。同时参麦注射液对心血管疾病疗效明确,可能与其对CYP2J3、ANP和BNP等调节作用较强相关。 展开更多
关键词 参麦注射液 细胞色素P450酶 花生四烯酸代谢 时荧光定量聚合酶链式反应 诱导 抑制
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仔猪粪便DNA中产气荚膜梭菌主要毒素基因检测及荧光定量PCR计数方法的建立 被引量:8
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作者 韩春生 戴益民 +3 位作者 王林康 王婧祺 周姣 张锦华 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期57-62,共6页
为探究产气荚膜梭菌(Cp)及其产生的β2毒素对7日龄内仔猪腹泻的影响,本试验利用PCR技术对江西不同地区96份仔猪粪样DNA进行分析。首先检测产气荚膜梭菌α、β、β2、ε、ι、CPE毒素基因来推断Cp存在和基因型,然后对不同地区的β2毒素... 为探究产气荚膜梭菌(Cp)及其产生的β2毒素对7日龄内仔猪腹泻的影响,本试验利用PCR技术对江西不同地区96份仔猪粪样DNA进行分析。首先检测产气荚膜梭菌α、β、β2、ε、ι、CPE毒素基因来推断Cp存在和基因型,然后对不同地区的β2毒素基因全长进行测序比对、MEGA7构建进化树,最后采用荧光定量PCR对携带CpA(β2+)的健康、腹泻样品中的Cp菌数进行测定。结果显示:α毒素基因在健康、腹泻仔猪的检测率分别为85.4%(41/48),81.3%(39/48),β2毒素基因则分别为79.2%(38/48),77.1%(37/48);β、ε、CPE及ι毒素基因未能检测到,综合各分型毒素检测结果,阳性粪样存在的Cp均为A型。β2基因全长除九江地区得到的β2基因在第706~733bp缺失28个碱基,其他地区β2全长序列不多于3个碱基的差异,与GenBank登录号AJ537530.1对应序列同源性最高。携带CpA(β2+)的健康、腹泻粪样同浓度DNA中Cp菌数为104~105 CFU,经SPSS17分析,差异不显著(P>0.05)。结果表明,江西地区的猪源β2毒素基因保守性较高,但仔猪腹泻与β2毒素基因存在与否和Cp菌数没有明显的相关关系,是否与毒素表达有关有待进一步的研究,本试验结果为研究Cp致病机制提供了依据。 展开更多
关键词 仔猪 产气荚膜梭菌 毒素基因 β2毒素 荧光定量pcr
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MicroRNA-143在急性白血病患者与正常人骨髓细胞中的差异表达及意义 被引量:6
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作者 张媛媛 郑永青 +3 位作者 李小雨 吴淡森 谢水玲 沈建箴 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2011年第2期308-311,共4页
microRNA(miR)与急性白血病的发生密切相关。为分析急性白血病患者与正常人骨髓细胞中miR-143的差异表达情况,常规提取50例急性白血病患者及20例正常人骨髓细胞中的总RNA,应用实时荧光定量PCR的方法检测标本中miR-143的表达状况。结果表... microRNA(miR)与急性白血病的发生密切相关。为分析急性白血病患者与正常人骨髓细胞中miR-143的差异表达情况,常规提取50例急性白血病患者及20例正常人骨髓细胞中的总RNA,应用实时荧光定量PCR的方法检测标本中miR-143的表达状况。结果表明:急性白血病患者骨髓细胞中miR-143表达明显下调(p<0.05);化疗缓解后表达明显上调;miR-143的表达与靶基因DNMT3A呈负相关。结论:miR-143在白血病病人骨髓细胞中的表达下调,这可能与白血病的发生发展有关。 展开更多
关键词 急性白血病 MIR-143 骨髓细胞 q-pcr
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前列宁胶囊调控MMP-2影响细胞外基质对良性前列腺增生治疗的影响 被引量:7
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作者 周建衡 杨弘 +1 位作者 林久茂 洪振丰 《世界中医药》 CAS 2018年第11期2829-2834,共6页
目的:观察前列宁胶囊(QC)对基质金属蛋白酶-2(MMP-2)介导的细胞外基质(ECM)的影响,探讨QC对BPH的治疗机制。方法:SD大鼠随机分为空白组,BPH模型组,QC低、中、高观察组,建立BPH模型,QC干预,ELISA法检测大鼠血清MMP-2、FN、Collagen IV、L... 目的:观察前列宁胶囊(QC)对基质金属蛋白酶-2(MMP-2)介导的细胞外基质(ECM)的影响,探讨QC对BPH的治疗机制。方法:SD大鼠随机分为空白组,BPH模型组,QC低、中、高观察组,建立BPH模型,QC干预,ELISA法检测大鼠血清MMP-2、FN、Collagen IV、LN; BPH-1细胞培养,分别加入MMP-2和未加MMP-2刺激因子,QC干预,MTT法观察细胞活性,Q-PCR及Western-Blot分别检测MMP-2、FN、Collagen IV、LN基因及蛋白表达(未加MMP-2),加入MMP-2组检测FN、Collagen IV、LN。结果:QC各剂量组大鼠血清中的FN、LN、Collagen IV含量降低,MMP-2升高(P <0. 05 or P <0. 01);BPH-1细胞培养QC干预,加入及未加入MMP-2刺激因子细胞活力均有下降,以48 h后最明显;加入MMP-2刺激因子FN、Collagen IV、LN基因及蛋白表达明显低于未加MMP-2刺激因子,差异有统计学意义。结论:QC对BPH具有治疗作用,QC调控MMP-2介导细胞外基质FN、Collagen IV、LN基因和蛋白表达可能是其治疗BPH机制之一。 展开更多
关键词 前列腺增生 前列宁胶囊 ECM MMP-2 FN Collagen IV LN q-pcr WESTERN-BLOT
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荧光染料SYBR GreenI及EB在定量PCR中敏感性比较 被引量:1
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作者 张茜 谢湘芝 经承学 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2005年第3期459-461,共3页
目的:比较荧光染料SYBRGreenI及EB在定量PCR诊断中检测DNA的敏感性。方法:分别用琼脂糖凝胶电泳SYBRGreenI染色及EB染色,检测26例21三体综合征患者及20例正常人DNAPCR扩增产物,并进行光密度分析比较。结果:SYBRGreenI染色于24个循环PCR... 目的:比较荧光染料SYBRGreenI及EB在定量PCR诊断中检测DNA的敏感性。方法:分别用琼脂糖凝胶电泳SYBRGreenI染色及EB染色,检测26例21三体综合征患者及20例正常人DNAPCR扩增产物,并进行光密度分析比较。结果:SYBRGreenI染色于24个循环PCR产物带型清楚,可准确定量检测;EB染色则在28个循环才能进行定量分析。结论:荧光染料SYBRGreenI染色较EB染色测量DNA敏感、快捷,在定量PCR技术中值得推广应用。 展开更多
关键词 SYBR Green EB 定量pcr
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热诱导表达的水稻OsBBX30基因克隆和表达分析 被引量:7
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作者 饶力群 刘兰兰 +4 位作者 汪启明 帅进 彭澎 李梦云 唐世伟 《湖南大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第6期101-106,共6页
生物信息学分析表明:OsBBX30基因启动子含有与逆境相关的作用元件HSE.为进一步了解OsBBX30基因在生物体内受热诱导,通过OsBBX30基因克隆构建原核表达和实时定量PCR分析,证实OsBBX30基因表达受热胁迫诱导,能增强大肠杆菌的耐热能力,为深... 生物信息学分析表明:OsBBX30基因启动子含有与逆境相关的作用元件HSE.为进一步了解OsBBX30基因在生物体内受热诱导,通过OsBBX30基因克隆构建原核表达和实时定量PCR分析,证实OsBBX30基因表达受热胁迫诱导,能增强大肠杆菌的耐热能力,为深入了解该家族基因和挖掘水稻耐热基因奠定基础. 展开更多
关键词 克隆 水稻BBX基因 热胁迫 实时定量pcr
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欧美杂交杨Pnd-LRR3基因克隆及其抗锈菌侵染表达 被引量:6
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作者 陈俏丽 李丹蕾 +7 位作者 王峰 邹莉 王志英 牛春阳 王博文 零雅茗 崔嵘 张玉洲 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期95-98,103,共5页
为深入探究欧美杂交杨(Populus nigra×P.deltoides)感病的分子机理,以及抗病基因在发病过程中所起的作用,克隆了欧美杂交杨LRR3蛋白编码基因Pnd-LRR3。对Pnd-LRR3基因进行了生物信息学分析,并对其在抗锈菌过程中的功能进行了研究。... 为深入探究欧美杂交杨(Populus nigra×P.deltoides)感病的分子机理,以及抗病基因在发病过程中所起的作用,克隆了欧美杂交杨LRR3蛋白编码基因Pnd-LRR3。对Pnd-LRR3基因进行了生物信息学分析,并对其在抗锈菌过程中的功能进行了研究。Q-PCR结果显示,强致病性的落叶松-杨栅锈菌(Melampsora larici-populina)E4菌株接种6 h,Pnd-LRR3基因表达量上调增幅较大,168 h为显著下调。说明Pnd-LRR3基因在E4侵染过程中起到一定抗性作用,但最终无法阻止锈菌的侵染。 展开更多
关键词 LRR3基因 落叶松-杨栅锈菌 欧美杂交杨 E4株系 q-pcr
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头孢菌素菌渣有机肥对玉米土壤中耐药菌及相关抗性基因的影响
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作者 刘婉琴 易鸳鸯 +3 位作者 彭小武 谢芳 顾美英 张志东 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1003-1010,共8页
【目的】研究头孢菌素菌渣有机肥施用后对玉米农田土壤中耐药菌及相关抗性基因丰度的影响,为头孢菌素菌渣有机肥施用生物安全性评价提供科学依据。【方法】设置不施菌渣有机肥(CK)、施用菌渣有机肥500 kg/667m^(2)(B_(1))、1000 kg/667m... 【目的】研究头孢菌素菌渣有机肥施用后对玉米农田土壤中耐药菌及相关抗性基因丰度的影响,为头孢菌素菌渣有机肥施用生物安全性评价提供科学依据。【方法】设置不施菌渣有机肥(CK)、施用菌渣有机肥500 kg/667m^(2)(B_(1))、1000 kg/667m^(2)(B_(2))3个处理,分别采用可培养方法和实时荧光定量检测,分析各处理下玉米农田中耐药菌及相关抗性基因丰度变化。【结果】施用头孢菌素菌渣有机肥能显著提高玉米苗期和结果期土壤中细菌总数及苗期时头孢拉定耐药菌菌数。获得了主要抗生素耐药菌株41株,其中,头孢拉定耐药菌8株,分属于6个属。【结论】施用头孢菌素菌渣有机肥能显著提高玉米苗期土壤中各ARGs基因的相对丰度,但在结果期各处理间β-内酰胺类ARGs基因bla TEM相对丰度无显著影响,并对其它耐药基因无明显规律性影响。 展开更多
关键词 头孢菌素菌渣 玉米土壤 耐药菌 ARGs q-pcr
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橡胶树蛋白激酶基因SnRK2.7的克隆及表达
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作者 刘云飞 李言 田维敏 《热带生物学报》 2024年第1期1-9,共9页
为了探索蔗糖非发酵相关蛋白激酶2(Sucrose non-fermentating1-related protein kinase 2,SnRK2)在巴西橡胶树响应低温胁迫应答中的作用,采用RT-PCR技术,从橡胶树抗寒无性系93-114的叶片中克隆了SnRK2亚家族的一个成员,命名为HbSnRK2.7... 为了探索蔗糖非发酵相关蛋白激酶2(Sucrose non-fermentating1-related protein kinase 2,SnRK2)在巴西橡胶树响应低温胁迫应答中的作用,采用RT-PCR技术,从橡胶树抗寒无性系93-114的叶片中克隆了SnRK2亚家族的一个成员,命名为HbSnRK2.7。该基因包含一个1095 bp的开放阅读框,编码364个氨基酸。HbSnRK2.7的分子量为41.39 kD,等电点为4.70,具有保守丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶结构域,预测其能催化磷酸基从ATP转移到蛋白质底物上的丝氨酸/苏氨酸残基上,也是磷酸化位点的集中区域,还具有非生物胁迫所需的结构域和ABA(脱落酸)依赖的HbSnRK2.7激活所需结构域。q-PCR结果显示,HbSnRK2.7基因响应ABA诱导,呈下调表达模式。在ABA处理8 h时,表达量下调到最低点。在低温胁迫下,HbSnRK2.7的表达量极显著降低。低温胁迫4 h和8 h时,HbSnRK2.7持续下调表达,低温胁迫24 h时,HbSnRK2.7表达量下调到最低,大约为非胁迫表达量的1/2。而且,HbSnRK2.7在不抗寒种质中的表达量显著高于抗寒种质。这些结果表明,HbSnRK2.7可能作为负调控因子介导橡胶树依赖ABA的低温胁迫抗性形成。 展开更多
关键词 巴西橡胶树 蔗糖非发酵相关蛋白激酶 荧光定量pcr 低温胁迫抗性 脱落酸信号途径
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