野生型p53基因的抑癌活性在肿瘤患者中常存在被抑制的现象。最新研究发现,p53的抑癌活性由p53凋亡刺激蛋白(apoptosis-stimulating protein of p53,ASPP)家族调控。该家族包含3个成员:p53凋亡抑制蛋白(inhibitory member of the apoptos...野生型p53基因的抑癌活性在肿瘤患者中常存在被抑制的现象。最新研究发现,p53的抑癌活性由p53凋亡刺激蛋白(apoptosis-stimulating protein of p53,ASPP)家族调控。该家族包含3个成员:p53凋亡抑制蛋白(inhibitory member of the apoptosis-stimulating protein of p53,iASPP)、p53 ASPP1和p53 ASPP2。大量研究表明,iASPP是抑制p53活性和功能的重要因素,其表达和功能与肿瘤患者的临床表现、治疗效果和预后密切相关,在多种肿瘤的发生发展过程中发挥着重要的促进作用。通过本篇综述,作者期望对iASPP的特性和功能有较全面的了解,为今后以iASPP为靶点的抗肿瘤治疗提供新的思路。展开更多
目的研究P53凋亡刺激蛋白2(apoptosis stimulating protein of P53-2,ASPP2)在代谢相关脂肪性肝病(metabolic associated fatty liver disease,MAFLD)中对肝细胞脂质蓄积的分子机制。方法利用ASPP2单倍体敲除小鼠(ASPP2+/-)和对照小鼠(A...目的研究P53凋亡刺激蛋白2(apoptosis stimulating protein of P53-2,ASPP2)在代谢相关脂肪性肝病(metabolic associated fatty liver disease,MAFLD)中对肝细胞脂质蓄积的分子机制。方法利用ASPP2单倍体敲除小鼠(ASPP2+/-)和对照小鼠(ASPP2^(+/+))进行转录组差异分析,筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),利用京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)数据库对DEGs进行富集和功能注释,基于相邻基因重复实例的搜索工具(search tool for recurring instances of neighbouring genes,STRING)数据库及Cytoscape软件分析相互作用关键基因。体外实验,培养正常小鼠肝细胞AML 12细胞系和人正常肝细胞系7702,分别在ASPP2过表达及敲除状态下构建MAFLD细胞模型。采用油红染色观察脂质蓄积情况,采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)分析mRNA差异表达情况。结果共筛选出285个DEGs,包括147个上调基因和138个下调基因。基因本体(gene ontology,GO)功能富集显示,DEGs显著富集在脂质代谢过程、CYP450途径、脂质贮存调控和脂质生物合成过程负调控等;KEGG通路富集显示,DEGs显著富集在花生四烯酸代谢、PPAR信号通路和TRP通道的炎症介质调节等。蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络筛选出CYP4A 15个关键基因。体外结果显示,ASPP2过表达时脂质蓄积加重,CYP4A及炎症因子mRNA增加(P<0.001);ASPP2敲除时,CYP4A及炎症因子mRNA减少(P<0.01)。结论ASPP2可促进肝细胞脂质蓄积,从而加快MAFLD的进展。展开更多
目的探讨p53正向细胞凋亡调控因子(p53up-regulated modulator of apoptosis protein,PUMA)/p53促凋亡蛋白(apoptosis stimulating protein of p53,ASPP)1融合基因及单个基因对胃癌SGC-7901细胞的杀伤作用。方法通过脂质体(lipofectamin...目的探讨p53正向细胞凋亡调控因子(p53up-regulated modulator of apoptosis protein,PUMA)/p53促凋亡蛋白(apoptosis stimulating protein of p53,ASPP)1融合基因及单个基因对胃癌SGC-7901细胞的杀伤作用。方法通过脂质体(lipofectamine)2000TM将PUMA/ASPP1融合基因及PUMA、ASPP1单个基因分别转染胃癌SGC-7901细胞系[实验设5组,分别为胃癌细胞无转染空白对照(SGC-7901)组,空载质粒转染细胞对照(SGC-7901-pcDNA3.1)组以及重组ASPP1质粒转染细胞实验(SGC-7901-ASPP1)组、重组PUMA质粒转染细胞实验(SGC-7901-PUMA)组、重组PUMA/ASPP1质粒转染细胞实验(SGC-7901-PUMA/ASPP1)组],再次经G418筛选,获得稳定表达融合基因SGC-7901-PUMA/ASPP1细胞株。通过MTT法及使用流式细胞仪测定各组胃癌SGC-7901系细胞的存活数(光吸收度即A值)及细胞周期。结果 SGC-7901组与SGC-7901-pcDNA3.1组A值比较差异无统计学意义(P>0.05);SGC-7901-ASPP1组、SGC-7901-PUMA组和SGC-7901-PUMA/ASPP1组A值明显低于SGC-7901组与SGC-7901-pcDNA3.1组(均P<0.01);SGC-7901-ASPP1组、SGC-7901-PUMA组和SGC-7901-PUMA/ASPP13组中,SGC-7901-PUMA/ASPP1细胞组A值最低(P<0.01)。与SGC-7901组、SGC-7901-pcDNA3.1组比较,SGC-7901-ASPP1、SGC-7901-PUMA、SGC-7901-PUMA/ASPP1组的G1期明显增多,S期明显减少,尤以SGC-7901-PUMA/ASPP1组S期减少为甚(均P<0.01);SGC-7901-pcDNA3.1组与SGC-7901组比较G1期、S期差异无统计学意义(P>0.05)。结论双抑癌基因可有效抑制胃癌SGC-7901系细胞增殖,双抑癌基因较单个抑癌基因具有更强的抗肿瘤作用。展开更多
目的探讨p53凋亡刺激蛋白2(apoptosis-stimulating protein of p53-2,ASPP2)对人肝星状细胞活化的调节作用及机制。方法人永生的肝星状细胞系LX-2在孵箱中培养,转染ASPP2腺病毒和单荧光自噬指示体系(GFP-LC3)质粒,免疫印迹法检测ASPP2、...目的探讨p53凋亡刺激蛋白2(apoptosis-stimulating protein of p53-2,ASPP2)对人肝星状细胞活化的调节作用及机制。方法人永生的肝星状细胞系LX-2在孵箱中培养,转染ASPP2腺病毒和单荧光自噬指示体系(GFP-LC3)质粒,免疫印迹法检测ASPP2、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、自噬基因表达相关蛋白(Beclin-1)的表达水平。免疫荧光检测,LX-2细胞共转染ASPP2腺病毒和GFP-LC3质粒后,ASPP2过表达对LX-2细胞自噬的影响,M30染色检测ASPP2过表达对LX-2细胞凋亡的影响。结果转染ASPP2腺病毒后LX-2细胞内ASPP2蛋白表达明显增加;与转染对照空载腺病毒的LX-2细胞相比,转染ASPP2腺病毒的LX-2细胞自噬和α-SMA的表达明显减少,肝星状细胞的活化受到抑制;转染ASPP2腺病毒后LX-2细胞的凋亡水平增加明显。结论 ASPP2过表达在体外具有抑制肝星状细胞活化的作用。展开更多
文摘野生型p53基因的抑癌活性在肿瘤患者中常存在被抑制的现象。最新研究发现,p53的抑癌活性由p53凋亡刺激蛋白(apoptosis-stimulating protein of p53,ASPP)家族调控。该家族包含3个成员:p53凋亡抑制蛋白(inhibitory member of the apoptosis-stimulating protein of p53,iASPP)、p53 ASPP1和p53 ASPP2。大量研究表明,iASPP是抑制p53活性和功能的重要因素,其表达和功能与肿瘤患者的临床表现、治疗效果和预后密切相关,在多种肿瘤的发生发展过程中发挥着重要的促进作用。通过本篇综述,作者期望对iASPP的特性和功能有较全面的了解,为今后以iASPP为靶点的抗肿瘤治疗提供新的思路。
文摘目的探讨p53正向细胞凋亡调控因子(p53up-regulated modulator of apoptosis protein,PUMA)/p53促凋亡蛋白(apoptosis stimulating protein of p53,ASPP)1融合基因及单个基因对胃癌SGC-7901细胞的杀伤作用。方法通过脂质体(lipofectamine)2000TM将PUMA/ASPP1融合基因及PUMA、ASPP1单个基因分别转染胃癌SGC-7901细胞系[实验设5组,分别为胃癌细胞无转染空白对照(SGC-7901)组,空载质粒转染细胞对照(SGC-7901-pcDNA3.1)组以及重组ASPP1质粒转染细胞实验(SGC-7901-ASPP1)组、重组PUMA质粒转染细胞实验(SGC-7901-PUMA)组、重组PUMA/ASPP1质粒转染细胞实验(SGC-7901-PUMA/ASPP1)组],再次经G418筛选,获得稳定表达融合基因SGC-7901-PUMA/ASPP1细胞株。通过MTT法及使用流式细胞仪测定各组胃癌SGC-7901系细胞的存活数(光吸收度即A值)及细胞周期。结果 SGC-7901组与SGC-7901-pcDNA3.1组A值比较差异无统计学意义(P>0.05);SGC-7901-ASPP1组、SGC-7901-PUMA组和SGC-7901-PUMA/ASPP1组A值明显低于SGC-7901组与SGC-7901-pcDNA3.1组(均P<0.01);SGC-7901-ASPP1组、SGC-7901-PUMA组和SGC-7901-PUMA/ASPP13组中,SGC-7901-PUMA/ASPP1细胞组A值最低(P<0.01)。与SGC-7901组、SGC-7901-pcDNA3.1组比较,SGC-7901-ASPP1、SGC-7901-PUMA、SGC-7901-PUMA/ASPP1组的G1期明显增多,S期明显减少,尤以SGC-7901-PUMA/ASPP1组S期减少为甚(均P<0.01);SGC-7901-pcDNA3.1组与SGC-7901组比较G1期、S期差异无统计学意义(P>0.05)。结论双抑癌基因可有效抑制胃癌SGC-7901系细胞增殖,双抑癌基因较单个抑癌基因具有更强的抗肿瘤作用。
文摘目的探讨p53凋亡刺激蛋白2(apoptosis-stimulating protein of p53-2,ASPP2)对人肝星状细胞活化的调节作用及机制。方法人永生的肝星状细胞系LX-2在孵箱中培养,转染ASPP2腺病毒和单荧光自噬指示体系(GFP-LC3)质粒,免疫印迹法检测ASPP2、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、自噬基因表达相关蛋白(Beclin-1)的表达水平。免疫荧光检测,LX-2细胞共转染ASPP2腺病毒和GFP-LC3质粒后,ASPP2过表达对LX-2细胞自噬的影响,M30染色检测ASPP2过表达对LX-2细胞凋亡的影响。结果转染ASPP2腺病毒后LX-2细胞内ASPP2蛋白表达明显增加;与转染对照空载腺病毒的LX-2细胞相比,转染ASPP2腺病毒的LX-2细胞自噬和α-SMA的表达明显减少,肝星状细胞的活化受到抑制;转染ASPP2腺病毒后LX-2细胞的凋亡水平增加明显。结论 ASPP2过表达在体外具有抑制肝星状细胞活化的作用。
