疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的高效表达 被引量：8

1

作者 郑艳 周波 +1 位作者 宋宁宁 李多川 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期268-274,共7页

疏棉状嗜热丝孢菌Thermomyces lanuginosus可产生具有重要工业生产价值的脂肪酶。根据已报道的相应序列设计特异引物,综合运用PCR、RT-PCR技术克隆到脂肪酶基因的全长DNA和cDNA序列。其中DNA序列长1071bp,包含876bp的开放阅读框以及3段... 疏棉状嗜热丝孢菌Thermomyces lanuginosus可产生具有重要工业生产价值的脂肪酶。根据已报道的相应序列设计特异引物,综合运用PCR、RT-PCR技术克隆到脂肪酶基因的全长DNA和cDNA序列。其中DNA序列长1071bp,包含876bp的开放阅读框以及3段内含子;cDNA序列长885bp。结构基因编码蛋白包含292个氨基酸,前17个氨基酸构成信号肽。序列提交GenBank,登录号分别为EU022703和EU370914。将脂肪酶基因cDNA序列的开放阅读框克隆到酵母分泌型表达载体pPIC9K中,转化毕赤酵母GS115得到重组子且实现了分泌表达。将重组子诱导产酶,在培养温度30℃、甲醇添加量1%的情况下,小规模发酵量达0.93mg/mL,其分泌表达的最高酶活为7.2U/mL。重组酶最适反应温度和pH分别是60℃和8.0。表达蛋白在60℃保温1h后仍有完全酶活,具有较高的热稳定性。 展开更多

关键词 内含子 成熟蛋白 诱导 分泌表达 重组酶 最适反应温度 最适反应pH 热稳定

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猪圆环病毒3型Cap重组蛋白的低温诱导表达研究

2

作者 潘向英 祝羊 +8 位作者 曾智勇 汤德元 梁海英 王彬 叶泥 田红利 边孟婷 柳佳佳 黄书 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第15期73-77,共5页

为了提高猪圆环病毒3型(PCV-3)Cap重组蛋白的可溶性表达量,试验采用PCR方法扩增PCV-3 Cap基因,将其插入原核表达载体pET-32a(+)中构建重组原核表达载体pET-32a(+)-Cap,再将重组原核表达载体转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中,分... 为了提高猪圆环病毒3型(PCV-3)Cap重组蛋白的可溶性表达量,试验采用PCR方法扩增PCV-3 Cap基因,将其插入原核表达载体pET-32a(+)中构建重组原核表达载体pET-32a(+)-Cap,再将重组原核表达载体转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中,分析不同浓度IPTG和温度的诱导表达效果,并通过Western-blot鉴定重组蛋白。结果表明:PCR扩增出大小为645 bp的Cap基因片段,与预期结果一致;构建的重组原核表达载体pET32a(+)-Cap可在大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中表达,重组蛋白分子量约为43.1 ku;不同浓度IPTG诱导表达可溶性蛋白的表达量不同,IPTG终浓度为0.1 mmol/L时重组蛋白可溶性表达量较高;37℃诱导时重组蛋白主要在沉淀中表达,而20℃诱导时重组蛋白主要在上清液中表达;表达的重组蛋白能与带His标签的抗体特异性结合。说明试验成功构建了重组蛋白,低温诱导可获得了更多的可溶性蛋白。 展开更多

关键词 猪圆环病毒3型 CAP蛋白 低温诱导 原核表达 可溶性蛋白

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瑞替普酶融合蛋白在大肠杆菌中表达条件的优化及其复性 被引量：4

3

作者 孙石静 张新元 +2 位作者 孙雄华 廖建民 沈子龙 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期363-367,共5页

目的:为优化瑞替普酶(reteplase,r-PA)在大肠杆菌中的高效融合表达的条件,并提高其复性率。方法:通过改变诱导时间和温度、诱导剂浓度、培养基pH值及氨苄青霉素(Amp)浓度等条件,利用SDS-PAGE分析以上条件的改变对表达产物产量的影响。... 目的:为优化瑞替普酶(reteplase,r-PA)在大肠杆菌中的高效融合表达的条件,并提高其复性率。方法:通过改变诱导时间和温度、诱导剂浓度、培养基pH值及氨苄青霉素(Amp)浓度等条件,利用SDS-PAGE分析以上条件的改变对表达产物产量的影响。运用金属螯合层析对融合蛋白进行纯化和复性。结果与结论:LB培养基pH值为6,Amp浓度为100μg/mL,乳糖浓度为5 mmol/L的条件下39℃诱导4 h可获得高效表达的r-PA融合蛋白,其表达量占全菌蛋白的70%,其产物主要以包涵体形式存在。融合蛋白运用金属螯合层析一步纯化复性,其复性率可达10%,比活为55.7 U/μL。 展开更多

关键词 瑞替普酶 融合蛋白 诱导表达 优化 复性

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新型抗菌肽Perinerin在大肠杆菌中的融合表达 被引量：2

4

作者 周庆峰 李明月 +1 位作者 李成伟 奚涛 《生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第2期35-38,共4页

为了获得新型抗菌肽perinerin在大肠杆菌中的高效和可溶表达,实验首先采用SOE法(重叠PCR法)获得的perinerin基因序列,对目的基因密码子优化,然后将其连接到pET32a载体中获得重组表达载体pET32a-PEN,通过改变诱导时间和温度、诱导剂IPTG... 为了获得新型抗菌肽perinerin在大肠杆菌中的高效和可溶表达,实验首先采用SOE法(重叠PCR法)获得的perinerin基因序列,对目的基因密码子优化,然后将其连接到pET32a载体中获得重组表达载体pET32a-PEN,通过改变诱导时间和温度、诱导剂IPTG浓度以及诱变工程菌株等条件和方法,观察重组蛋白的表达效果,并运用金属螯合层析对融合蛋白进行纯化。SDS-PAGE显示重组菌诱导后表达的融合蛋白分子量约为26kD,采用变异重组菌株MUT3诱导表达,在2×YT培养基培养条件下,30℃诱导4 h可获得高效表达的perinerin融合蛋白,其表达量约占菌体总蛋白的50%左右,重组蛋白主要以可溶性表达形式存在,可溶性产物最高可达重组蛋白总表达量的60%。融合蛋白运用金属螯合层析一步纯化,纯度可达90%以上。 展开更多

关键词 perinerin 融合蛋白 诱导表达 优化

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小反刍兽疫病毒核衣壳蛋白(N)重组表达条件的优化 被引量：2

5

作者 李文涛 李震 +2 位作者 董世娟 朱于敏 于瑞嵩 《上海农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第3期7-9,共3页

为获得更高含量的可溶性N蛋白,对构建的重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)(pET-32a-N)的表达条件(如诱导温度、诱导时间、IPTG浓度)进行了优化。结果表明:N蛋白最佳诱导表达条件为18℃诱导17 h、IPTG浓度0.2 mmol/L;优化后可溶性N蛋白的表... 为获得更高含量的可溶性N蛋白,对构建的重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)(pET-32a-N)的表达条件(如诱导温度、诱导时间、IPTG浓度)进行了优化。结果表明:N蛋白最佳诱导表达条件为18℃诱导17 h、IPTG浓度0.2 mmol/L;优化后可溶性N蛋白的表达量为22.1 mg/L,比优化前37℃、IPTG浓度1.0 mmol/L条件下诱导4 h提高了58.5%。 展开更多

关键词 小反刍兽疫 核壳蛋白 诱导表达 大肠杆菌

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抗甲硝唑单链抗体融合蛋白的表达及其ELISA检测方法建立 被引量：1

6

作者 何扩 张秀媛 +2 位作者 王云峰 赵瑞平 李育峰 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2019年第9期46-50,共5页

为实现甲硝唑单链抗体(single-chain variable fragment,scFv)在大肠杆菌中的可溶性表达,以甲硝唑抗体可变区基因(VH、VL)为模板,扩增甲硝唑的scFv基因,scFv双酶切后与PLIP6/GN载体重组,构建重组质粒PLIP6/GNscFv,转化大肠杆菌JM109,阳... 为实现甲硝唑单链抗体(single-chain variable fragment,scFv)在大肠杆菌中的可溶性表达,以甲硝唑抗体可变区基因(VH、VL)为模板,扩增甲硝唑的scFv基因,scFv双酶切后与PLIP6/GN载体重组,构建重组质粒PLIP6/GNscFv,转化大肠杆菌JM109,阳性克隆转大肠杆菌BL21经温度诱导表达重组单链抗体,并通过聚丙酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)对其鉴定。采用竞争酶联免疫(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测重组单链抗体的抗原结合活性。结果表明诱导表达的scFv分子量接近33 kDa,能够特异性识别兽药甲硝唑,半抑制率(IC50)为(0.72±0.04)ng/mL。选择虾样品进行添加回收试验,建立的方法检测其回收率在88.54%到113.27%之间。这说明成功构建重组质粒PLIP6/GN-scFv并实现可溶性表达并可用于实际样品检测。 展开更多

关键词 甲硝唑 单链抗体 融合蛋白 诱导表达 酶联免疫吸附

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肠致病性大肠埃希菌EspB基因的体外诱导表达研究 被引量：1

7

作者 郑金鑫 刘晓军 +5 位作者 李多云 马桂红 潘伟光 陈重 余治健 邓启文 《深圳中西医结合杂志》 2013年第4期193-196,共4页

目的:研究肠致病性大肠埃希菌(enteropathogenic E.coli,EPEC)EspB基因的体外诱导表达情况,获得纯化的EspB蛋白。方法:体外构建重组质粒pET-28a-EspB,转化BL21感受态细菌培养,提取重组质粒并行琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定。重组质粒pET-28... 目的:研究肠致病性大肠埃希菌(enteropathogenic E.coli,EPEC)EspB基因的体外诱导表达情况,获得纯化的EspB蛋白。方法:体外构建重组质粒pET-28a-EspB,转化BL21感受态细菌培养,提取重组质粒并行琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定。重组质粒pET-28a-EspB经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹试验(Western blot)分析。pET-28a-EspB表达产物再次经纯化,获得的纯化蛋白进一步经SDS-PAGE和蛋白质Western blotting分析验证。结果:经双酶切和测序验证pET-28a-EspB重组质粒构建成功。pET-28a-EspB重组质粒经IPTG诱导后,在诱导表达不同时间点,培养菌液、沉淀和上清中均有良好的蛋白表达。经SDS-PAGE和蛋白质Western blotting分析验证我们获得了纯化的EspB蛋白。结论:体外可成功诱导EPECEspB蛋白稳定高效表达并获得纯化EspB蛋白产物。 展开更多

关键词 肠致病性大肠埃希菌 EspB基因 重组质粒 蛋白诱导表达 蛋白质印迹试验

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HPV16L1重组蛋白在甲醇营养型酵母菌中的诱导表达及鉴定

8

作者 李秀荣 谷鸿喜 +2 位作者 曲章义 张凤民 郭彩玲 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 2000年第1期3-5,共3页

目的　HPV16L1重组蛋白的表达为研制HPV16L1预防性蛋白疫苗及诊断试剂盒打下基础。方法　pPIC3 5 HPV16L1 GS115阳性菌株 ,经 0 5 %甲醇诱导 ,运用SDS PAGE电泳检测L1蛋白 ;用鼠抗HPV16L1单克隆抗体 ,经WesternBlotting检测蛋白的特... 目的　HPV16L1重组蛋白的表达为研制HPV16L1预防性蛋白疫苗及诊断试剂盒打下基础。方法　pPIC3 5 HPV16L1 GS115阳性菌株 ,经 0 5 %甲醇诱导 ,运用SDS PAGE电泳检测L1蛋白 ;用鼠抗HPV16L1单克隆抗体 ,经WesternBlotting检测蛋白的特异性 ;在透射电镜下观察类病毒颗粒 (VLPs)。结果　SDS PAGE检测结果表明 ,在5 5KD处有诱导蛋白带的出现 ;经WesternBlotting验证 ,该蛋白能与HPV16L1单克隆抗体特异结合 ,证明该蛋白确为HPV16L1蛋白 ;电镜下见到了直径约为 5 0nm、形态结构与天然病毒颗粒极其相似的VLPs。结论　pAIC3 5 HPV16L1重组质粒在甲醇营养型酵母菌中可经甲醇诱导产生HPV16L1晚期蛋白 ,该蛋白在酵母菌中可自我组装成VLPs。 展开更多

关键词 HPV16L1 重组蛋白 甲醇 子宫颈肿瘤

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链球菌溶血素与真菌果胶酶融合表达及纯化条件的优化

9

作者 王建 赵庆新 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2016年第3期252-256,共5页

目的优化链球菌溶血素（streptolysin O,SLO）与真菌果胶酶（pectin lyase,PL）的融合表达及纯化条件。方法将活化培养的工程菌以2%接种量接种于发酵液体培养基中,于37℃,200 r/min培养至不同生长期（A_（600）值分别为0.6、0.8和1.0）... 目的优化链球菌溶血素（streptolysin O,SLO）与真菌果胶酶（pectin lyase,PL）的融合表达及纯化条件。方法将活化培养的工程菌以2%接种量接种于发酵液体培养基中,于37℃,200 r/min培养至不同生长期（A_（600）值分别为0.6、0.8和1.0）,分别于不同温度（10、15、20、25、30、35和37℃）及加入不同终浓度IPTG（0.05、0.1、0.2、0.4、0.5、0.6、0.8和1.0 mmol/L）条件下诱导表达不同时间（6、12、20、24、36、48和60 h）。将诱导表达的融合蛋白进行Ni离子亲和层析纯化,对纯化中的上样缓冲液（binding buffer,分别含0、5、10、15、20、25、30 mmol/L咪唑）、清洗缓冲液（washing buffer,分别含0、5、10、20、30、40、50、60 mmol/L咪唑）及洗脱缓冲液（elution buffer,分别含100、200、500、1 000 mmol/L咪唑）的咪唑浓度进行优化。结果最佳诱导表达条件为：工程菌培养至A_（600）为0.8时,加入0.4 mmol/L IPTG,于20℃诱导24 h,目的蛋白的相对分子质量约91 500,占全菌总蛋白的38.6%,溶血活性可达4.0×10~7U/ml。最佳纯化条件为：binding buffer和washing buffer最佳咪唑浓度为5和60 mmol/L,elution buffer分别使用200和500 mmol/L咪唑进行阶段性梯度洗脱,纯化产物纯度可达95%。结论成功优化了SLO与PL融合蛋白的表达及纯化条件,纯化后获得了纯度较高的融合蛋白,为进一步研究SLO蛋白的性质及应用奠定了基础。 展开更多

关键词 链球菌溶血素 真菌果胶酶 融合蛋白 诱导表达 纯化

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植物病原相关蛋白研究进展 被引量：7

10

作者 王义琴 张利明 +1 位作者 李文彬 孙勇如 《生物工程进展》 CSCD 2000年第5期36-38,共3页

植物在受到真菌、细菌、病毒侵染或意外的伤害时体内会产生新的蛋白质 ,称作病原相关蛋白 (pathogenesis relatedprotein简称PR蛋白 )。PR蛋白的产生与植物对病原物的抵御直接相关 ,本文就PR蛋白的诱导表达、调控和作用机理方面的最新... 植物在受到真菌、细菌、病毒侵染或意外的伤害时体内会产生新的蛋白质 ,称作病原相关蛋白 (pathogenesis relatedprotein简称PR蛋白 )。PR蛋白的产生与植物对病原物的抵御直接相关 ,本文就PR蛋白的诱导表达、调控和作用机理方面的最新研究进展作一综述。 展开更多

关键词 植物病原相关蛋白 诱导表达 作用机理 表达调控

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苹果蠹蛾热激蛋白Hsp90基因的克隆及热胁迫下的表达分析 被引量：22

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作者 申建茹 李明福 +2 位作者 陈乃中 王进军 万方浩 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1236-1248,共13页

世界检疫性害虫苹果蠹蛾Cydia pomonella是一种温度耐受可塑性很高的物种。本研究针对温度波动可能导致其耐热性增强的科学问题,采用生测法鉴定了苹果蠹蛾实验种群的高温耐受阈值,采用同源克隆、RACE和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)等方法... 世界检疫性害虫苹果蠹蛾Cydia pomonella是一种温度耐受可塑性很高的物种。本研究针对温度波动可能导致其耐热性增强的科学问题,采用生测法鉴定了苹果蠹蛾实验种群的高温耐受阈值,采用同源克隆、RACE和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)等方法研究了苹果蠹蛾热激蛋白Hsp90基因的应激表达对耐热性的重要作用。高温耐受阈值研究结果表明,苹果蠹蛾实验种群的死亡率随温度的升高和时间的延长显著性升高,1-5龄幼虫分别经50℃和52℃高温处理2,5和10min后,3龄幼虫耐热性最差,5龄幼虫最强。50℃和52℃分别处理10min和5min均可导致1-4龄幼虫全部死亡,而5龄幼虫在这两种处理下仍有25.0%和11.1%的存活率。以35℃处理的5龄雌幼虫为材料克隆苹果蠹蛾Hsp90基因全长cDNA,结果显示该基因全长为2470bp,完整开放阅读框为2148bp,共编码716个氨基酸,预测分子量为82.07kDa,命名为Cphsp90(GenBank登录号JN624775)。该基因编码的氨基酸序列与亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis和甘蓝夜蛾Mamestra brassicae等昆虫的Hsp90的氨基酸序列一致性高达96%,表明了Hsp90家族的保守特性。Cphsp90mRNA的相对表达量在32～44℃高温胁迫下随温度的升高而显著增高,证实Cphsp90是诱导型热激基因,且mRNA相对表达量与胁迫程度正相关。Cphsp90基因的表达还具有组织特异性,35℃处理幼虫的表皮中Cphsp90相对表达量显著高于血淋巴、脂肪体和中肠,应激响应最为活跃。与未经温热预处理的昆虫相比,35℃温热预处理3h后的5龄幼虫在40,45和50℃更高的温度胁迫下,Cphsp90mRNA达到最高表达量所需要的胁迫温度有所提升,由未经预热处理的40℃处理10min提高到45℃处理10min,这与温热预处理会增强5龄幼虫耐热性的现象相符,表明Cphsp90基因的响应表达在苹果蠹蛾耐热性及其可塑性过程中发挥重要的作用。 展开更多

关键词 苹果蠹蛾 耐热性 热激蛋白 系统发育 热激诱导 相对表达模式

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芥菜锌指蛋白转录因子基因Bj26的克隆与鉴定 被引量：2

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作者 贾双伟 高英 赵开军 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1174-1181,共8页

锌指蛋白是一类重要的转录因子家族,参与植物基因转录调节、发育及胁迫反应等生理过程。我们前期研究发现芥菜诱导型启动子BjC-P的W-box-like-4为其真菌诱导的核心元件,本研究通过酵母单杂交技术从芥菜cDNA文库中筛选到与W-box-like-4... 锌指蛋白是一类重要的转录因子家族,参与植物基因转录调节、发育及胁迫反应等生理过程。我们前期研究发现芥菜诱导型启动子BjC-P的W-box-like-4为其真菌诱导的核心元件,本研究通过酵母单杂交技术从芥菜cDNA文库中筛选到与W-box-like-4序列特异互作的转录因子基因Bj26。生物信息学分析表明,Bj26含735 bp的开放阅读框,编码一个新的C2H2型锌指蛋白,包括2个典型的C2H2型锌指结构及2个植物特有的QALGGH氨基酸保守序列,等电点pI为9.2,分子量为26.6 kD。亚细胞定位显示该蛋白位于细胞核。本氏烟瞬时表达分析表明Bj26蛋白通过与BjC-P的真菌诱导核心元件序列特异互作,激活启动子BjC-P。实时荧光定量PCR结果显示Bj26在真菌诱导下表达量明显增高。Bj26的CDS序列与拟南芥和水稻中的C2H2型锌指蛋白序列比对及进化树分析表明,Bj26与拟南芥的C2H2型蛋白同源性高于水稻。以上结果揭示Bj26蛋白可能介导BjC-P真菌诱导响应并参与植物抗真菌病原菌的调控过程。 展开更多

关键词 酵母单杂交 C2H2锌指蛋白 Bj26基因 真菌诱导 瞬时表达 实时荧光定量PCR

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坏死梭杆菌外膜蛋白基因的克隆与表达 被引量：1

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作者 徐晶 陈立志 +3 位作者 刘晓颖 冯二凯 汪孙杰 曹阅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第6期57-60,共4页

依据GenBank中登录的坏死梭杆菌外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)基因序列,设计1对引物进行PCR扩增OMP片段并克隆至pET-28a中,构建原核表达重组质粒pET-28a-OMP。将pET-28a-OMP转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态中,表达含2个His的重... 依据GenBank中登录的坏死梭杆菌外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)基因序列,设计1对引物进行PCR扩增OMP片段并克隆至pET-28a中,构建原核表达重组质粒pET-28a-OMP。将pET-28a-OMP转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态中,表达含2个His的重组蛋白。SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,该重组蛋白分子质量为93ku,为包涵体表达,具有反应原性。本试验结果为坏死梭杆菌OMP免疫机制的研究提供了基础数据。 展开更多

关键词 坏死梭杆菌 OMP 诱导表达 免疫活性

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肝区微波照射后肝脏HSP70的表达及机制初探

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作者 童玲玲 丁炳丽 +4 位作者 周筱艳 李纯颍 谢文彪 袁秀琴 谢红卫 《南华大学学报（医学版）》 2006年第2期188-190,共3页

目的 采用20W、2450MHz微波照射家免肝区，观察照射过程中肝前区温度及肛温的变化，并于24小时后从家兔肝右中方叶前缘取组织用免疫组化方法检测HSP70的表达。方法 健康成年家免13只，对其中4只在微波照射过程中肝前区温度及肛温的变化... 目的 采用20W、2450MHz微波照射家免肝区，观察照射过程中肝前区温度及肛温的变化，并于24小时后从家兔肝右中方叶前缘取组织用免疫组化方法检测HSP70的表达。方法 健康成年家免13只，对其中4只在微波照射过程中肝前区温度及肛温的变化进行测定，其余9只分为两组，一组（n=4）取肝组织用免疫组化方法观察照射前肝HSP70的表达，另一组（n=5）进行微波预处理，24小时后观察肝脏HSP70的表达。结果 肝区微波照射过程中，家兔肝前区温度升高0．5～2．2℃，肛温升高0．5～0．7℃，24小时后肝细胞核内有HSP70的高表达，而预处理前动物肝细胞内无或仅有低水平HSP70的表达。结论 肝区微波照射过程中肝前区温度及肛温有轻度升高，24小时后肝细胞核内有HSP70的高表达。 展开更多

关键词 微波 肝脏 热休克蛋白70(HSP70) 诱导 表达

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TGEV和PEDV融合S蛋白在乳酸乳球菌食品级细胞壁锚定高效诱导表达与免疫原性分析

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作者 徐波 熊维娜 +4 位作者 李烨青 周通 刘志文 应碧 郭晓燕 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第6期32-38,共7页

近年来猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻在我国广泛流行,给养殖业带来了巨大的经济损失。目前对此两种疾病的防治手段还停留在使用常规疫苗。现有的疫苗免疫效果不够理想,急需寻求一种安全高效的防治手段。本文首先构建了猪传染性胃肠炎病... 近年来猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻在我国广泛流行,给养殖业带来了巨大的经济损失。目前对此两种疾病的防治手段还停留在使用常规疫苗。现有的疫苗免疫效果不够理想,急需寻求一种安全高效的防治手段。本文首先构建了猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)融合S基因,以乳酸乳球菌食品级细胞壁锚定高效诱导表达载体p RNV48为基础,构建了TGEV和PEDV融合S基因的表达质粒p RNV48-TPs。将得到的重组质粒用电穿孔方法转入乳酸乳球菌NZ9000感受态细胞中,获得了重组菌乳酸乳球菌Z9000/p RNV48-TPs。再利用nisin对重组菌进行诱导,提取细胞壁蛋白后采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析目的蛋白的表达情况,然后分别对兔子进行注射免疫和口服免疫,并用Western Blot分析。通过乳酸乳球菌食品级细胞壁锚定高效诱导表达载体,诱导表达TGEV与PEDV融合S蛋白产生中和抗体,以期探讨口服疫苗的免疫反应机理,为由TGEV与PEDV研发的安全、高效的疫苗奠定良好的基础。 展开更多

关键词 TGEV和PEDV融合S蛋白 乳酸乳球菌 食品级载体 细胞壁锚定高效诱导表达 免疫原性

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