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miR-34b/c启动子区多态性与原发性肝细胞肝癌易感性的关联研究 被引量:23
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作者 刘莉 陈小军 +4 位作者 徐妍 董静 刘继斌 胡志斌 沈洪兵 《中华疾病控制杂志》 CAS 2011年第7期551-554,共4页
目的探讨miR-34b/c rs4938723 T>C与中国人群原发性肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)易感性的关系。方法采用病例对照研究设计,选取501例原发性肝细胞肝癌病例和548例正常对照。选取miR-34b/c rs4938723 T>C为研究位点,... 目的探讨miR-34b/c rs4938723 T>C与中国人群原发性肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)易感性的关系。方法采用病例对照研究设计,选取501例原发性肝细胞肝癌病例和548例正常对照。选取miR-34b/c rs4938723 T>C为研究位点,以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法进行多态性检测,应用Logistic回归计算OR值及95%CI,比较不同基因型与HCC发病风险的关系。结果在调整年龄、性别、吸烟、饮酒因素后,携带rs4938723 TC/CC基因型者与携带rs4938723 TT基因型个体相比,发生肝癌的风险增加了40%(调整OR=1.40,95%CI=1.10~1.80)。进一步分析显示在原发性肝细胞肝癌的发生中rs4938723基因型与饮酒存在交互作用(相乘交互作用P=0.049,相加交互作用P=0.012)。结论本研究表明位于miR-34b/c启动子区的rs4938723 T>C多态性可能影响中国人群原发性肝细胞肝癌发病风险。 展开更多
关键词 启动区(遗传学) 多态性 单核苷酸 肝细胞 疾病易感性
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应用噬菌体展示技术筛选乙型肝炎病毒表面抗原基因启动子Ⅱ结合蛋白 被引量:18
2
作者 杨艳杰 成军 +4 位作者 陈东风 钟彦伟 张忠东 王建军 刘妍 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期23-26,共4页
目的 通过筛选乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原基因启动子Ⅱ(SPⅡ)结合蛋白 ,为HBV复制机制的研究探索新的途径。方法 应用噬菌体展示技术 ,以HBV的表面抗原基因启动子Ⅱ的聚合酶链反应 (PCR)产物DNA作为固相筛选分子 ,对噬菌体人肝细胞c... 目的 通过筛选乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原基因启动子Ⅱ(SPⅡ)结合蛋白 ,为HBV复制机制的研究探索新的途径。方法 应用噬菌体展示技术 ,以HBV的表面抗原基因启动子Ⅱ的聚合酶链反应 (PCR)产物DNA作为固相筛选分子 ,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行 5轮“吸附 洗脱 扩增”筛选过程 ,经噬斑的PCR扩增后 ,构建克隆载体 ,最后对所筛选克隆进行DNA序列测定和同源性分析。结果 噬菌体经富集后 ,从随机筛选的 2 0个克隆中得到 4个阳性克隆 ,成功构建了克隆载体。序列测定后经过同源性分析 ,确定了和HBVSPⅡ结合的肝细胞蛋白———尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶 4 (NADHDH4 )。结论 用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到了HBVSPⅡ的结合蛋白 ,分析了该蛋白的编码基因 ,为进一步研究HBV的复制、转录、调节机制开辟了新的途径。 展开更多
关键词 噬菌体展示技术 肝炎病毒 乙型 抗原 表面 启动区(遗传学) 筛选
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人端粒酶逆转录酶启动子调控下胞嘧啶脱氨酶胸苷激酶融合基因治疗卵巢癌的体外研究 被引量:11
3
作者 孔北华 宋悦 +2 位作者 马道新 曲迅 江森 《中华妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期390-395,共6页
目的 探讨人端粒酶逆转录酶 (hTERT)启动子调控下的融合双自杀基因———胞嘧啶脱氨酶 胸苷激酶 / 5 氟胞嘧啶 +更昔洛韦 (CD TK/ 5 FC +GCV)系统对人卵巢癌细胞及正常细胞的体外杀伤作用。方法 应用脂质体转染法将hTERT核心启动子... 目的 探讨人端粒酶逆转录酶 (hTERT)启动子调控下的融合双自杀基因———胞嘧啶脱氨酶 胸苷激酶 / 5 氟胞嘧啶 +更昔洛韦 (CD TK/ 5 FC +GCV)系统对人卵巢癌细胞及正常细胞的体外杀伤作用。方法 应用脂质体转染法将hTERT核心启动子报告质粒pBTdel 2 79转染人卵巢癌细胞系3AO、正常卵巢上皮细胞 (NOEC)和人胚肺成纤维细胞株HELF ,用荧光素酶分析检测hTERT启动子活性 ;应用RT PCR技术检测hTERTmRNA的表达水平。应用基因克隆技术分别构建hTERT启动子和巨细胞病毒 (CMV)启动子调控下的CD TK基因真核表达载体pBTdel 2 79 CD TK和pcDNA3 CD TK ,以及hTERT启动子调控下的TK基因表达载体pBTdel 2 79 TK。用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法和流式细胞术检测pBTdel 2 79 CD TK/ 5 FC +GCV系统和pcDNA3 CD TK/ 5 FC +GCV系统对上述 3种细胞不同的杀伤作用 ;应用RT PCR技术检测pBTdel 2 79 CD TK和pcDNA3 CD TK转染前后 3AO和NOEC细胞中CD和TK基因的表达情况。用扫描电子显微镜观察pBTdel 2 79 CD TK/ 5 FC +GCV作用后 3AO细胞的形态变化。结果 卵巢癌细胞系 3AO中hTERT启动子活性增高 ,为 2 4 1% ,RT PCR检测hTERTmRNA为阳性 ,而在正常细胞NOEC和HELF中 ,hTERT启动子活性仅为 0 3%和 0 7% ,hTERTmRNA为阴性。 展开更多
关键词 人端粒酶逆转录酶 启动子 调控 胞嘧啶脱氨酶 胸苷激酶 基因治疗 卵巢癌 体外研究
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上皮型钙黏素基因启动子甲基化及其mRNA和蛋白表达在鼻咽癌组织中的意义 被引量:10
4
作者 李智 林素暇 梁英杰 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期25-30,共6页
目的 探讨鼻咽癌癌细胞上皮型钙黏素基因启动子甲基化的程度及其mRNA和蛋白表达水平在鼻咽癌早期浸润和转移中的作用。方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应 (methylation specificPCR ,MSP)、蛋白印迹、免疫组织化学和逆转录聚合酶链反... 目的 探讨鼻咽癌癌细胞上皮型钙黏素基因启动子甲基化的程度及其mRNA和蛋白表达水平在鼻咽癌早期浸润和转移中的作用。方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应 (methylation specificPCR ,MSP)、蛋白印迹、免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)等方法检测 2 1例鼻咽癌患者鼻咽原发癌和淋巴结转移癌配对组织中的上皮型钙黏素基因启动子甲基化程度和上皮型钙黏素、β 链接素在不同组织中mRNA和蛋白水平的表达。 结果  ( 1)在 2 1例鼻咽原发癌组织中 ,11例( 5 2 4% )可以检测到上皮型钙黏素基因启动子的甲基化 ,而在配对的 2 1例淋巴结转移癌组织中 17例 ( 80 9% )则可检测到 ,二者差异具有显著性 (P <0 0 5 )。 ( 2 )在鼻咽原发癌组织中 ,80 %的癌细胞均表达上皮型钙黏素蛋白 ,在淋巴结转移癌组织中只有平均 5 0 %的癌细胞表达 ,两者亦差异有显著性 (P =0 0 0 4) ;但β 链接素蛋白在原发癌和淋巴结转移癌组织中均有较高的表达量 (均为 85 % )。 ( 3 )蛋白印迹检测表明 ,上皮型钙黏素在鼻咽原发癌组织中表达的平均相对强度为 2 0 6 7± 3 2 7,明显高于在转移癌组织中的蛋白平均相对强度 65 0± 15 9;而 β 链接素在不同组织中的蛋白表达相对强度则差异无显著性 (P =0 75 4)。 ( 4)上皮型钙黏? 展开更多
关键词 上皮型钙黏素 基因启动子 甲基化 mRNA 蛋白表达 鼻咽癌 临床意义 淋巴转移
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Klotho基因G-395A多态性与动脉硬化的相关性研究 被引量:15
5
作者 王虎林 司良毅 +2 位作者 孙兰英 孟萍 肖航 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2008年第2期96-98,共3页
目的研究重庆市汉族人群Klotho基因启动子区域G-395A单核苷酸多态性的分布,探讨该多态性住点与动脉硬化的相关性。方法232倒健康体检者均进行臂踝脉搏波传导速度测定,并记录动脉硬化的传统危险因素,根据测定结果分为动脉硬化组(130... 目的研究重庆市汉族人群Klotho基因启动子区域G-395A单核苷酸多态性的分布,探讨该多态性住点与动脉硬化的相关性。方法232倒健康体检者均进行臂踝脉搏波传导速度测定,并记录动脉硬化的传统危险因素,根据测定结果分为动脉硬化组(130例)和对照组(102例)。应用TaqMan探针等位基因特异性杂交分析法对Klotho基因G-395A多态性位点进行分析。结果G-395A多态性住点共检测出GG、GA、AA3种基因型,频率分别为60.3%、34.1%和5.6%,符合Hardy-Weinberg平衡。动脉硬化组-395A等位基因的频率显著低于对照组(33.1% VS 48.0%,P=0.022)。logistic回归分析,调整传统危险因素后-395A与动脉硬化呈负相关(P=0.042,OR=0.537,95%CI:0.295-0.977)。结论Klotho基因-395A等位基因可能是动脉硬化的遗传学保护因素。 展开更多
关键词 动脉硬化 多态性 单核苷酸 启动区(遗传学)
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散发性乳腺癌组织中BRCA1基因启动子甲基化与蛋白表达的相关性 被引量:12
6
作者 任婕 魏敏杰 +4 位作者 金锋 杨栋 林哲珠 马文峰 金万宝 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2007年第3期161-164,共4页
目的:探讨BRCA1基因启动子甲基化对BRCA1蛋白表达的影响,及与散发性乳腺癌发病之间的关系。方法:甲基化特异性PCR(MSP)法检测51例散发性乳腺浸润导管癌和10例乳腺良性组织的BRCAl基因启动子甲基化状态,SP法检测BRCA1蛋白表达水平。结果... 目的:探讨BRCA1基因启动子甲基化对BRCA1蛋白表达的影响,及与散发性乳腺癌发病之间的关系。方法:甲基化特异性PCR(MSP)法检测51例散发性乳腺浸润导管癌和10例乳腺良性组织的BRCAl基因启动子甲基化状态,SP法检测BRCA1蛋白表达水平。结果:10例乳腺良性组织中均未检测到BRCA1启动子的异常甲基化,BRCA1蛋白在细胞核均阳性表达,其中70%(7/10)为强阳性表达。在51例散发性乳腺浸润性导管癌组织中检测到7例(13.73%)BRCA1启动子发生异常甲基化,其余44例(86.27%)未检测到BRCA1启动子甲基化。7例BRCA1启动子甲基化的组织均未见BRCA1蛋白细胞核阳性表达(0/7),仅有1例BRCA1蛋白细胞质表达;44例未检测到BRCA1启动子甲基化的浸润性导管癌中,30例(68.18%)BRCA1蛋白在细胞核阳性表达,14例(31.82%)BRCA1蛋白在细胞核阴性表达。BRCA1启动子甲基化与BRCA1蛋白核低表达密切相关,χ2=11.959 1,P=0.000 5;BRCA1蛋白的表达在乳腺良性组织与癌组织之间差异有统计学意义,χ2=4.587 9,P=0.032。结论:乳腺癌易感基因BRCA1启动子甲基化可抑制BRCA1蛋白表达,并影响其参与散发性乳腺癌的发生发展过程。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 基因 BRCA1 启动区(遗传学) 甲基化
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慢性乙型肝炎患者干扰素a受体1基因启动子多态性和干扰素应答的关系 被引量:11
7
作者 方建凯 潘晨 郑玲 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期286-289,共4页
目的探讨慢性乙型肝炎患者的I型干扰素受体1(IFNAR1)基因启动子多态性和IFN—a治疗应答之间的关系。方法选择接受IFN-a治疗的慢性乙型肝炎患者61例,采用重组IFN—a2b500万U,隔天肌内注射,疗程48周,观察应答情况,对人选患者的IFN... 目的探讨慢性乙型肝炎患者的I型干扰素受体1(IFNAR1)基因启动子多态性和IFN—a治疗应答之间的关系。方法选择接受IFN-a治疗的慢性乙型肝炎患者61例,采用重组IFN—a2b500万U,隔天肌内注射,疗程48周,观察应答情况,对人选患者的IFNAR1基因启动子区进行测序。计量资料采用t检验,计数资料采用卡方检验。结果治疗的慢性乙型肝炎患者中,完全应答22例,部分应答8例,无应答31例。IFNAR1基因启动子区-408C/T、-3C/T、-77GT双核苷酸重复序列[-77(GT)n]存在基因多态性,这三个位点基因多态性存在连锁,形成-408C/-77(GT)5/-3C等基因单体型。IFNAR1启动子区基因型为-408C/-77(GT)5/-3C及-408C/-77(GT)5/-3C的,基因型为-408C/-77(GT)5/-3C和非-408C/-77(GT)5/-3C的慢性乙型肝炎患者对IFN—a的应答率为61.0%,高于基因型为非-408C/-77(GT)5/-3C,非-408C/-77(GT)5/-3C患者的25.0%(x2=6.961,P=0.008)。结论IFNAR1启动子基因型为-408C/-77(GT)5/-3C及-408c/-77(GT)5/-3C的,-408C/-77(GT)5/-3C和非-408C/-77(GT)5/-3C的慢性乙型肝炎患者对IFN—a治疗应答较好,IFNAR1基因启动子多态性与慢性乙型肝炎患者的干扰素应答有关。 展开更多
关键词 肝炎 乙型 慢性 多态现象 遗传 启动区(遗传学) 干扰素A 受体 干扰素 基因型
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人肝细胞癌金属蛋白酶组织抑制因子-3的表达及与其基因启动子甲基化的关系 被引量:6
8
作者 吕国丽 文剑明 +3 位作者 胥健敏 张萌 徐若冰 田保玲 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期230-233,共4页
目的 探讨肝细胞癌的发生和门脉浸润机制。方法 20例肝细胞癌患者,每例在手术后分别取原发瘤、门脉瘤栓及远离肝癌之肝组织。用Western印迹法检测金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)的蛋白表达,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TIMP-3 mRN... 目的 探讨肝细胞癌的发生和门脉浸润机制。方法 20例肝细胞癌患者,每例在手术后分别取原发瘤、门脉瘤栓及远离肝癌之肝组织。用Western印迹法检测金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)的蛋白表达,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TIMP-3 mRNA的表达,用甲基化特异性PCR检测TIMP-3基因启动子的甲基化。结果 远离肝癌之肝组织中均可见TIMP-3蛋白和mRNA的表达,原发瘤和门脉瘤栓组织TIMP-3蛋白和mRNA表达明显降低,其中分别有5例和6例完全丢失。远离肝癌之肝组织均未发现TIMP-3启动子甲基化。原发瘤中有7例、门脉瘤栓组织中有9例出现甲基化。所有有甲基化的肝癌组织,包括原发瘤和门脉瘤栓,有13例TIMP-3 mRNA和蛋白表达完全丢失,6例表达降低。TIMP-3启动子甲基化和肝细胞癌组织学分级无关(P>0.05)。结论 肝细胞癌的发生和门脉浸润与TIMP-3基因和蛋白缺失或降低相关、而TIMP-3启动子甲基化是其基因和蛋白缺失或降低的原因。 展开更多
关键词 肝细胞癌 金属蛋白酶组织抑制因子-3 表达 基因启动子 甲基化
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雌激素上调LRP16基因表达靶启动子区的研究 被引量:7
9
作者 司艺玲 韩为东 +4 位作者 赵亚力 李琦 李雪 宋海静 母义明 《军医进修学院学报》 CAS 北大核心 2006年第3期161-163,共3页
目的:鉴定雌激素上调LRP16基因表达关键的靶启动子区域并探讨其分子机制。方法:对LRP16基因5′-侧翼2.6kb中的-213bp至-24bp启动子区进行亚克隆,构建5个控制不同启动子长度的荧光素酶报告重组子pS7-11,以既往构建的pS5、pS6为对照,与雌... 目的:鉴定雌激素上调LRP16基因表达关键的靶启动子区域并探讨其分子机制。方法:对LRP16基因5′-侧翼2.6kb中的-213bp至-24bp启动子区进行亚克隆,构建5个控制不同启动子长度的荧光素酶报告重组子pS7-11,以既往构建的pS5、pS6为对照,与雌激素受体α(ERα)真核表达载体共转染MCF-7和Hela细胞,加入雌二醇(17β-E2)刺激后通过Luciferase assay方法测定相对荧光素酶活性。结果:MCF-7和Hela两个细胞系各组相对荧光素酶活性值上升趋势相平行,-213bp至-24bp区域各启动子克隆均具有较高的转激活活性,特别是pS10,在MCF-7细胞中对报告基因的上调活性达427倍,远远高于pS5。结论:E2主要通过-213bp至-24bp区域增强LRP16基因的转录,其中-213bp至-126bp(pS10)应为关键的启动子区。 展开更多
关键词 雌激素 基因表达调控 LRP16 启动区(遗传学)
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食管癌中DNA修复基因MGMT启动子区CpG岛过甲基化研究 被引量:9
10
作者 孟庆山 王建军 +2 位作者 李振芬 孔长保 蔡万军 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期761-764,共4页
目的:探索O^0-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O^6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)基因启动子区过甲基化状态与食管癌的关系。方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)分析食管癌、癌旁和正常食管黏... 目的:探索O^0-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O^6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)基因启动子区过甲基化状态与食管癌的关系。方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)分析食管癌、癌旁和正常食管黏膜细胞中MGMT基因启动子区过甲基化状态。用免疫组织化学SP法检测上述组织中MGMT蛋白表达情况。结果:76例食管癌组织中有26例(34.2%)MGMT基因启动子过甲基化,相应的癌旁组织中有8例发生甲基化,而正常食管黏膜细胞中均无甲基化。所有甲基化的癌组织中均无MGMT蛋白表达,而所有非甲基化的癌组织、相应癌旁组织和8例正常组织中均有MGMT蛋白表达。结论:MGMT基因启动子区过甲基化而使其蛋白表达缺失,可能是食管癌发生的重要因素。 展开更多
关键词 食管肿瘤 DNA甲基化 基因 MGMT基因表达 启动区(遗传学)
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散发性乳腺癌中DNMT3a、DNMT3b表达与ERα基因启动子甲基化状态及蛋白表达的关系 被引量:10
11
作者 王勇 王晓东 +4 位作者 陈文捷 于兆进 吴慧哲 赵琳 魏敏杰 《天津医药》 CAS 2015年第5期500-504,共5页
目的探讨散发性乳腺癌中DNA甲基转移酶(DNMT)3a、DNMT3b蛋白表达情况及其与雌激素受体(ER)α基因启动子甲基化状态及蛋白表达的关系。方法选取180例散发性乳腺癌与30例乳腺纤维腺瘤组织,采用免疫组化法检测组织中DNMT3a、DNMT3b蛋... 目的探讨散发性乳腺癌中DNA甲基转移酶(DNMT)3a、DNMT3b蛋白表达情况及其与雌激素受体(ER)α基因启动子甲基化状态及蛋白表达的关系。方法选取180例散发性乳腺癌与30例乳腺纤维腺瘤组织,采用免疫组化法检测组织中DNMT3a、DNMT3b蛋白的表达情况,甲基化特异性PCR检测97例散发性乳腺癌中ERα基因启动子的甲基化状态。结果乳腺纤维腺瘤与乳腺癌组织中的DNMT3a、DNMT3b蛋白阳性表达率差异无统计学意义;Ⅲ-Ⅳ期乳腺癌组织的DNMT3a、DNMT3b水平高于Ⅰ-Ⅱ期,有淋巴结转移者的DNMT3a表达水平高于无淋巴结转移者(均P〈0.05);97例乳腺癌中有39例(40.2%)发生ERα基因启动子甲基化,DNMT3a蛋白阳性表达与ERα基因甲基化呈正相关(rs=0.250);DNMT3a蛋白表达对患者的总体生存期(OS)有显著影响(P=0.035),对无病生存期(DFS)无明显影响(P=0.064),DNMT3b蛋白表达对患者的OS和DFS无影响(P分别为0.914、0.961)。结论DNMT3a、DNMT3b阳性表达与乳腺癌侵袭转移、病程进展、预后相关;DNMT3a与ERα基因启动子甲基化状态呈正相关;抑制DNMT3a、DNMT3b蛋白可能有利于散发性乳腺癌的预防和治疗。 展开更多
关键词 散发性乳腺癌 DNMT3a DNMT3B ERΑ DNA甲基化 启动区(遗传学)
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肝脂酶基因启动子-514C/T多态性与脑梗死的关系 被引量:8
12
作者 傅毅 倪培华 +4 位作者 应雅韵 陆国强 刘建荣 辛晓瑜 陈生弟 《中华神经科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期758-761,共4页
目的探讨上海汉族人群肝脂酶(HL)基因启动子-514C/T多态性与脑梗死的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测133例脑梗死患者和75名健康老年人HL基因启动子-514C/T多态性基因型,并研究其对血脂水平的影响... 目的探讨上海汉族人群肝脂酶(HL)基因启动子-514C/T多态性与脑梗死的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测133例脑梗死患者和75名健康老年人HL基因启动子-514C/T多态性基因型,并研究其对血脂水平的影响。结果脑梗死组的基因型和等位基因频率分布与健康老年组相比,差异均有统计学意义;在脑梗死组中,突变型的甘油三酯(TG,mmol/L)水平(2·21±1·45)高于无突变型(1·68±0·72),而突变型的高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平低于无突变型,差异均有统计学意义(P<0·05);Logistic回归分析示,收缩压、血糖和T等位基因是脑梗死的独立危险因素。结论HL基因启动子-514C/T的多态性与脑梗死的发生直接相关;脑梗死患者启动子-514C/T基因突变可引起TG和HDL-C水平的变化。 展开更多
关键词 脑梗塞 脂肪酶 启动区(遗传学) 多态现象(遗传学)
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用原核增强子提高hTERT启动子介导的基因表达 被引量:6
13
作者 王丽娜 李卓 +8 位作者 薛志刚 薛金锋 胡友金 周银 李剑 潘乾 夏昆 梁德生 夏家辉 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2006年第15期1125-1130,共6页
目的:探讨原核增强子能否提高hTERT启动子的转录活性及对其肿瘤特异性的影响。方法:将增强子SV40、CMV分别或组合构建一系列GFP和荧光素酶报告基因载体,转染人肝癌、鼻咽癌、宫颈癌、结直肠癌细胞、成纤维肉瘤和正常成纤维细胞,流... 目的:探讨原核增强子能否提高hTERT启动子的转录活性及对其肿瘤特异性的影响。方法:将增强子SV40、CMV分别或组合构建一系列GFP和荧光素酶报告基因载体,转染人肝癌、鼻咽癌、宫颈癌、结直肠癌细胞、成纤维肉瘤和正常成纤维细胞,流式细胞仪计数和双荧光酶分析系统检测基因的表达效率。结果:在正常成纤维细胞中这些载体均不能有效表达;而在肿瘤细胞中hTERT启动子能介导基因表达但效率不高,增强子能使基因表达增强3~26倍,特别是单独CMV增强子和SV40-CMV双增强子使荧光素酶表达提高20-26倍,是常用的CMV增强子/启动子的2~7倍;完整CMV增强子/启动子对hTERT启动子的活性影响因不同细胞而异。结论:增强子能显著增强hTERT启动子的转录活性并对其肿瘤特异性没有影响,CMV增强子或SV40-CMV双增强子/hTERT启动子是高效特异的通用调控元件,用于靶向性肿瘤基因治疗具有巨大潜力。 展开更多
关键词 端粒 末端转移酶/遗传学 启动区(遗传学) 增强子元件(遗传学) 基因表达 转染
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卵泡刺激素对多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞分泌抗苗勒管激素的影响 被引量:8
14
作者 李轶 梁晓燕 《中华妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期5-8,共4页
目的 研究卵泡刺激素(FSH)对多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞分泌抗苗勒管激素(AMH)的影响.方法 选择2008年8月至2009年12月于中山大学附属第六医院生殖中心就诊的33例PCOS患者,从其直径为8~10 mm的窦卵泡中分离颗粒细胞,... 目的 研究卵泡刺激素(FSH)对多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞分泌抗苗勒管激素(AMH)的影响.方法 选择2008年8月至2009年12月于中山大学附属第六医院生殖中心就诊的33例PCOS患者,从其直径为8~10 mm的窦卵泡中分离颗粒细胞,并分为以下3组进行培养:未经FSH刺激的颗粒细胞(未刺激组,n=12);外源性FSH刺激的颗粒细胞(体外刺激组,n=12),此组颗粒细胞来源同未刺激组;对患者行FSH促排卵治疗,采集FSH体内刺激的颗粒细胞(体内刺激组,n=21).分别采用ELISA法和实时荧光定量PCR技术检测培养液中颗粒细胞分泌的AMH水平,及AHM mRNA表达水平;构建AMH荧光报告载体,检测卵巢颗粒细胞中AMH启动子的活性.结果 培养液中颗粒细胞分泌的AMH水平,未刺激组为(11.4±4.0)μg/L,体外刺激组为(7.9±1.1)μg/L,体内刺激组为(5.6±1.7)μg/L,体内、体外刺激组分别与未刺激组比较,差异均有统计学意义(P均<0.05).AMH mRNA表达水平未刺激组为2.5±1.2,体外刺激组为1.5±0.5,体内刺激组为1.1±0.7,未刺激组高于体内、外刺激组,分别比较,差异均有统计学意义(P均<0.05).未刺激组颗粒细胞中AMH启动子的活性为11.5±2.3,体外刺激组为8.7±2.4,体内刺激组为6.8±2.4,未刺激组高于体内、外刺激组,分别比较,差异均有统计学意义(P均<0.05).结论 FSH可能通过抑制PCOS患者卵巢颗粒细胞中AMH的启动子活性及其mRNA表达,抑制AHM的过度分泌,促进卵泡的生长发育. 展开更多
关键词 多囊卵巢综合征 抗苗勒管激素 卵泡刺激素 粒层细胞 启动区(遗传学)
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乙型肝炎病毒前C区和核心启动子区突变与慢性乙型肝炎病情的关系 被引量:8
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作者 翁彭剑 高国生 +2 位作者 丁世雄 梁晓岳 唐向荣 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期769-771,共3页
乙型肝炎病毒(HBV)感染能导致急、慢性肝病,其中全球慢性乙型肝炎感染者近4亿。每年由于HBV慢性感染引起的肝硬化,肝细胞癌死亡患者超过47万人。而由于HBV病毒复制过程缺乏校对机制,在慢性感染的过程中发生基因突变的概率很高,相... 乙型肝炎病毒(HBV)感染能导致急、慢性肝病,其中全球慢性乙型肝炎感染者近4亿。每年由于HBV慢性感染引起的肝硬化,肝细胞癌死亡患者超过47万人。而由于HBV病毒复制过程缺乏校对机制,在慢性感染的过程中发生基因突变的概率很高,相关研究最多的HBV突变株主要有:发生在翻译水平的前C区突变(G1896A);发生在核心启动子(BCP)区,即A1762T和G1764A的联合突变;发生在HBV DNA聚合酶区的变异包括P区528、552位点的突变。研究表明,HBV前C区1896位突变以及BCP区突变普遍存在于CHB患者中, 展开更多
关键词 肝炎 乙型 慢性 肝炎病毒 乙型 启动区(遗传学) 突变 基因芯片
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膀胱癌中CDH13基因启动子甲基化的临床意义 被引量:8
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作者 林英立 管同郁 +3 位作者 向代香 孙光 吴刚 王红 《国际泌尿系统杂志》 2013年第2期174-178,共5页
目的探讨膀胱癌中CDH13基因启动子甲基化的临床意义。方法应用甲基化特异性PCR检测在23例正常膀胱黏膜和71例原发性膀胱移行细胞癌组织中CDH13基因启动子甲基化状态,并结合膀胱癌临床病理资料进行统计学分析。结果在23例正常膀胱黏膜... 目的探讨膀胱癌中CDH13基因启动子甲基化的临床意义。方法应用甲基化特异性PCR检测在23例正常膀胱黏膜和71例原发性膀胱移行细胞癌组织中CDH13基因启动子甲基化状态,并结合膀胱癌临床病理资料进行统计学分析。结果在23例正常膀胱黏膜组织中CDH13基因启动子均未出现甲基化,在71例膀胱癌组织中CDH13基因启动子甲基化率为60.6%,两组相比差异有统计学意义(P〈0.01);在膀胱癌组织中CDH13基因启动子甲基化与患者年龄、性别、肿瘤数目和肿瘤形态无关(P〉0.05),但是与肿瘤的生长、分化不良以及侵袭密切相关(P〈0.05)。结论CDH13基因启动子甲基化与膀胱癌的发生发展密切相关,有可能成为膀胱癌早期诊断、监测和预后判断的分子标志物。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 启动区(遗传学) 甲基化
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ALOX5AP基因启动子区单核苷酸多态性与中国北方汉族人群缺血性卒中的关系 被引量:6
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作者 冀瑞俊 贾建平 《中华神经科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期600-604,共5页
目的探讨 ALOX5AP 基因启动子区单核苷酸多态性与中国北方汉族人群缺血性脑血管病的相关关系。方法本研究共入选北方汉族脑梗死患者220例,同期年龄与性别匹配的对照组191名。采用聚合酶链反应目的基因扩增和基因直接测序的方法鉴别基因... 目的探讨 ALOX5AP 基因启动子区单核苷酸多态性与中国北方汉族人群缺血性脑血管病的相关关系。方法本研究共入选北方汉族脑梗死患者220例,同期年龄与性别匹配的对照组191名。采用聚合酶链反应目的基因扩增和基因直接测序的方法鉴别基因型和单核苷酸多态性分析。病例组和对照组基因型分布差异采用关联分析的方法进行检测。经多元 Logistic 回归方法校正经典血管病危险因素后,分析基因多态性与缺血性卒中的相关关系。结果发现3个 ALOX5AP 启动子区未报道的单核苷酸多态性位点,由这3个位点组成的单体型与缺血性脑血管病的发生明确相关,其中 Hap Ⅰ是一种保护性单体型,可以减少缺血性脑血管病发生(OR 0.54,95% CI 0.408~0.715);而 HapⅡ(OR 2.91,95% CI 1.351~6.239)和 Hap Ⅲ(OR 18.82,95% CI 2.562~138.38)则作为一种危险因素,增加缺血性脑血管病发生的风险。另外,-499和-290位点单核苷酸多态性与全脑动脉粥样硬化密切相关。结论与炎症介质白三烯代谢密切相关的 ALOX5AP 基因启动子区单核苷酸多态性与中国北方汉族人群脑梗死的发生有密切关系。 展开更多
关键词 脑梗塞 载体蛋白类 膜蛋白质类 启动区(遗传学) 多态性 单核苜酸
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端粒酶逆转录酶基因启动子调控的肿瘤细胞特异表达载体的构建和鉴定 被引量:3
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作者 尹家俊 胡祥 +2 位作者 傅攀峰 袁晓东 张锦瑜 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第14期1274-1277,共4页
目的 利用端粒酶逆转录酶基因启动子 ,构建能在人肿瘤细胞中特异表达目的基因的表达载体。方法 通过PCR方法从 pEGFP N1质粒中扩增出绿色荧光蛋白基因并克隆到逆转录病毒载体pLNCX的多克隆位点上 ,命名为 pLNCX EGFP。设计含有特定酶... 目的 利用端粒酶逆转录酶基因启动子 ,构建能在人肿瘤细胞中特异表达目的基因的表达载体。方法 通过PCR方法从 pEGFP N1质粒中扩增出绿色荧光蛋白基因并克隆到逆转录病毒载体pLNCX的多克隆位点上 ,命名为 pLNCX EGFP。设计含有特定酶切位点的引物 ,从人基因组中扩增出端粒酶逆转录酶基因启动子序列 ,将该序列片段定向克隆到已用限制性内切酶切除巨细胞病毒启动子的 pLNCX EGFP载体上 ,构建成端粒酶逆转录酶基因启动子调控的含有绿色荧光蛋白报告基因的表达载体 pLNT EGFP。将该表达载体pLNT EGFP瞬时转染高表达端粒酶活性的HLF细胞株和不表达端粒酶活性的WI38细胞株 ,以检测端粒酶逆转录酶基因启动子的转录活性。结果 表达载体pLNT EGFP经酶切、测序分析证实与设计的完全一致。细胞瞬时转染结果表明 ,pLNT EGFP能特异地在端粒酶阳性细胞中高效表达绿色荧光蛋白报告基因 ,而在端粒酶阴性细胞中不表达报告基因。结论 成功构建了由端粒酶逆转录酶基因启动子调控的肿瘤细胞靶向表达载体。 展开更多
关键词 端粒酶 逆转录酶基因 肿瘤细胞特异表达载体 鉴定 基因治疗 恶性肿瘤 克隆
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正常皮肤与瘢痕组织成纤维细胞对细胞因子、细胞外间质和胶原基因启动子反应性比较研究 被引量:7
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作者 高春芳 徐玲玲 +2 位作者 王皓 赵文静 孔宪涛 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期628-631,共4页
目的比较正常和病理增生性瘢痕皮肤成纤维细胞对细胞因子、细胞外间质和胶原基因启动子的不同反应性。方法进行原代正常和增生性瘢痕皮肤的成纤维细胞培养,两种细胞分别用重组人干扰素(IFN-αA,hIFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNFα)和层黏... 目的比较正常和病理增生性瘢痕皮肤成纤维细胞对细胞因子、细胞外间质和胶原基因启动子的不同反应性。方法进行原代正常和增生性瘢痕皮肤的成纤维细胞培养,两种细胞分别用重组人干扰素(IFN-αA,hIFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNFα)和层黏连蛋白(LN)处理24h,BrdU-ELISA测定细胞增殖活性。两种细胞分别转染含人α1(Ⅰ)前胶原上游调控序列和报告基因氯霉素乙酰基转移酶(CAT)的重组体,48h后测定并比较两种细胞报告基因CAT的活性。结果正常成纤维细胞对IFN-αA、hIFN-γ、TNFα、LN出现增殖反应,而瘢痕成纤维细胞则对IFN-αA和LN出现抑制效应,对hIFN-γ和TNFα表现为微弱抑制或无反应性。人α1(Ⅰ)前胶原上游启动序列(-2483^+42bp,-1448^+42bp)在瘢痕细胞中启动活性低于其在正常成纤维细胞。结论正常与病理性瘢痕成纤维细胞对细胞因子、细胞外间质成分的增殖反应性及对人胶原基因启动子活性反应性上存在差异,这种反应性差异与机体的自身反馈调节及增生性瘢痕形成的病理机制和特点有关。 展开更多
关键词 瘢痕组织 成纤维细胞 干扰素 肿瘤坏死因子-Α 层黏连蛋白 细胞外间质 胶原基因启动子
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食管癌组织APC基因启动子区5-′CpG岛甲基化模型的研究 被引量:7
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作者 程蕾 凌志强 毛伟敏 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2011年第3期200-204,共5页
目的:探讨原发性食管癌组织中结肠腺瘤性息肉(APC)基因启动子区5-′CpG岛甲基化的状况及其与临床病理特征之间的关系。方法:实时荧光甲基化特异性聚合酶链反应检测182例食管癌及癌旁组织中APC基因启动子区5-′CpG岛甲基化状况。单因素... 目的:探讨原发性食管癌组织中结肠腺瘤性息肉(APC)基因启动子区5-′CpG岛甲基化的状况及其与临床病理特征之间的关系。方法:实时荧光甲基化特异性聚合酶链反应检测182例食管癌及癌旁组织中APC基因启动子区5-′CpG岛甲基化状况。单因素分析采用Kaplan-Meier法,多因素分析采用Cox比例风险模型。结果:在182例食管癌组织中,APC基因启动子区5-′CpG岛甲基化率为54.40%(99/182),在182例相对应的癌旁组织中,甲基化率为9.90%(18/182),差异有统计学意义,P<0.05。APC基因启动子区5-′CpG岛甲基化分别与淋巴结转移、肿瘤远处转移、临床分期及不良预后差异有统计学意义,χ2=76.669,P=0.000。单因素结果提示,远处转移、分期及APC基因启动子区5-′CpG岛甲基化与食管癌患者的生存期相关,P值均<0.05。Cox多因素分析提示,APC基因启动子区5-′CpG岛甲基化是独立的预后因素,P<0.05。结论:APC基因启动子区5-′CpG岛甲基化在食管癌的发生发展中起重要作用,APC基因可能是食管癌新的肿瘤分子标志。 展开更多
关键词 食管肿瘤 基因 APC 启动区(遗传学) 甲基化
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