DNA疫苗的研究现状 被引量：9

1

作者 聂建辉 王佑春 《中国药事》 CAS 2007年第2期114-118,共5页

DNA疫苗的概念提出已有十几年的时间,其间针对DNA疫苗的研究工作取得了很大进展,其有效性已在动物体内得到了验证,而且部分疫苗已进入临床试验阶段,但在取得进展的同时也遇到了许多制约其发展的难题。本文对DNA疫苗发展现状,遇到的问题... DNA疫苗的概念提出已有十几年的时间,其间针对DNA疫苗的研究工作取得了很大进展,其有效性已在动物体内得到了验证,而且部分疫苗已进入临床试验阶段,但在取得进展的同时也遇到了许多制约其发展的难题。本文对DNA疫苗发展现状,遇到的问题,采取的策略及可能引起的副反应加以综述。 展开更多

关键词 DNA疫苗 电穿孔技术 基因枪 聚丙交脂-乙交酯 纳米颗粒载体 基因佐剂 α病毒载体 初免-加强免疫策略

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猪支原体肺炎活疫苗与灭活疫苗联合免疫效果评价 被引量：1

2

作者 郝飞 白昀 +8 位作者 袁厅 张磊 刘蓓蓓 谢星 韦艳娜 甘源 熊祺琰 邵国青 冯志新 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第4期89-95,共7页

为探寻一种更加合理高效的猪支原体肺炎(MPS)免疫方式,本研究使用MPS弱毒疫苗进行基础免疫后14 d再使用灭活疫苗进行加强免疫,通过人工感染猪肺炎支原体来评价其免疫效果。同时将这种免疫程序在规模化猪场进行应用,通过计算一定时期内... 为探寻一种更加合理高效的猪支原体肺炎(MPS)免疫方式,本研究使用MPS弱毒疫苗进行基础免疫后14 d再使用灭活疫苗进行加强免疫,通过人工感染猪肺炎支原体来评价其免疫效果。同时将这种免疫程序在规模化猪场进行应用,通过计算一定时期内的日增重来评价其免疫效果。结果显示:联合免疫在保证黏膜免疫效果的同时并未降低体液免疫水平;更为重要的是,联合免疫不但具备较高攻毒保护率,而且在攻毒后剖杀时其肺泡灌洗液中抗原含量远低于其他免疫方式。以上结果表明,联合免疫可以产生较好的免疫协同作用,从而提高了机体的综合免疫保护能力。田间试验结果发现:联合免疫组猪群从21日龄至80日龄平均增重27.31 kg,比活疫苗免疫组猪群多增重3.02 kg,比灭活疫苗免疫组猪群多增重3.73 kg;其平均日增重可达0.46 kg/d。本研究为防治猪支原体肺炎提供了新的思路。 展开更多

关键词 猪支原体肺炎活疫苗和灭活疫苗 初免-加强免疫策略 攻毒保护 日增重

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探讨BCG初次免疫结核杆菌DNA疫苗加强免疫方案的效应 被引量：2

3

作者 唐权 窦骏 +3 位作者 赵枫姝 禇莉莉 潘猛 王永仿 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期591-594,共4页

目的:探讨BCG初次免疫(BCG-prime),结核杆菌共表达DNA疫苗加强免疫(DNA疫苗-boost)的策略对小鼠的免疫效果。方法:将BCG及结核杆菌重组DNA疫苗依次免疫小鼠,通过检测CTL和NK细胞的杀伤活性和特异性淋巴细胞增殖,以及小鼠血清抗体及细胞... 目的:探讨BCG初次免疫(BCG-prime),结核杆菌共表达DNA疫苗加强免疫(DNA疫苗-boost)的策略对小鼠的免疫效果。方法:将BCG及结核杆菌重组DNA疫苗依次免疫小鼠,通过检测CTL和NK细胞的杀伤活性和特异性淋巴细胞增殖,以及小鼠血清抗体及细胞因子的水平,观测BCG-prime、共表达结核杆菌Ag85A/GM-CSFDNA疫苗boost策略对小鼠的免疫效果。结果:采用prime-boost免疫策略组的小鼠CTL的杀伤活性明显增强、特异性淋巴细胞明显增殖、IFN-γ的水平明显增高,NK细胞杀伤活性与对照组相比也有一定提高,但未超过BCG单独免疫效果。免疫小鼠血清特异性抗体的滴度超过单独DNA疫苗免疫组。结论:在采用BCG-prime-结核杆菌DNA疫苗boost免疫策略后,能增强对小鼠的免疫效应,尤其是Th1型细胞免疫反应增强明显,为进一步在动物体内进行保护性效应试验的研究提供了实验依据。 展开更多

关键词 结核杆菌 抗原85A BCG DNA疫苗 prime-boost免疫策略

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基于Prime-Boost免疫策略的猪附红细胞体eno基因免疫效果评价

4

作者 李明宣 董亮 +3 位作者 相思宇 闫可心 许应天 薛书江 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第3期88-92,共5页

为了评估猪附红细胞体eno基因核酸疫苗与重组腺病毒疫苗采用Prime-Boost免疫策略对小鼠的免疫效果,本研究应用pVAX1-eno核酸疫苗和Ad5-M/eno重组腺病毒疫苗免疫接种小鼠,将20只BALB/c小鼠随机分为4组:Prime-Boost策略组、Ad5-M/eno重组... 为了评估猪附红细胞体eno基因核酸疫苗与重组腺病毒疫苗采用Prime-Boost免疫策略对小鼠的免疫效果,本研究应用pVAX1-eno核酸疫苗和Ad5-M/eno重组腺病毒疫苗免疫接种小鼠,将20只BALB/c小鼠随机分为4组:Prime-Boost策略组、Ad5-M/eno重组腺病毒疫苗组、pVAX1-eno核酸疫苗组及PBS对照组。通过ELISA检测方法分别测定血清中抗猪附红细胞体特异性抗体、IgG_(1)、IgG_(2a)抗体水平及IFN-γ、IL-4细胞因子水平,三免后测定小鼠脾脏细胞中CD4^(+)、CD8^(+)的含量,对试验数据进行统计分析。结果显示,Prime-Boost策略组接种的小鼠血清中抗猪附红细胞体特异性抗体、IgG_(1)、IgG_(2a)抗体水平均显著高于Ad5-M/eno重组腺病毒疫苗组(P<0.05),极显著高于pVAX1-eno核酸疫苗组(P<0.01);Prime-Boost策略组的IL-4与IFN-γ细胞因子水平、CD4^(+)与CD8^(+)水平显著高于Ad5-M/eno疫苗组和pVAX1-eno核酸疫苗组(P<0.05)。试验结果表明,与猪附红细胞体Ad5-M/eno,PVAX1-eno单疫苗相比,采用Prime-Boost免疫策略更能显著提高小鼠体液免疫水平与细胞免疫水平。 展开更多

关键词 猪附红细胞体 eno基因 prime-boost策略 免疫水平

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pHSP65疫苗增强结核杆菌特异性T细胞产生IFN-γ 被引量：2

5

作者 岳艳 高海峰 +3 位作者 胡林昆 蒋正刚 徐薇 熊思东 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期274-278,共5页

为提高BCG的免疫效果,以BCG进行初次免疫,比较pHSP65基因疫苗和BCG疫苗加强免疫的效果,寻找新型结核疫苗的初免-加强免疫策略。于第0周皮下接种BCG,第6、8周给予pHSP65滴鼻免疫或BCG加强免疫,末次免疫后2周检测全身及肺脏局部IFN-γ的... 为提高BCG的免疫效果,以BCG进行初次免疫,比较pHSP65基因疫苗和BCG疫苗加强免疫的效果,寻找新型结核疫苗的初免-加强免疫策略。于第0周皮下接种BCG,第6、8周给予pHSP65滴鼻免疫或BCG加强免疫,末次免疫后2周检测全身及肺脏局部IFN-γ的产生。与BCG初免/BCG加强免疫相比,经pHSP65基因疫苗滴鼻加强免疫后,ELISPOT结果显示脾脏和肺局部分泌IFN-γ的淋巴细胞数量显著增加,流式检测显示IFN-γ+CD4+T细胞数量显著增加,ELISA结果证实淋巴细胞IFN-γ的分泌显著增高,提示经BCG初次免疫后,以pHSP65 DNA滴鼻加强免疫可显著增强全身和肺局部T淋巴细胞IFN-γ的产生,具有良好的抗结核感染潜能。 展开更多

关键词 结核 基因疫苗 HSP65 初免-加强免疫策略

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H9N2禽流感病毒M2 DNA疫苗初免-蛋白加强免疫的保护效果研究 被引量：2

6

作者 黄恋 彭波 +2 位作者 李小曼 陈则 常海艳 《激光生物学报》 CAS CSCD 2012年第5期441-445,共5页

流感病毒M2(基质蛋白2)是A型流感病毒的一个高度保守的蛋白。由于其免疫原性较弱,本研究采用M2 DNA疫苗初免-蛋白加强的策略来考察M2的免疫保护效果。制备A/Chicken/Jiangsu/07/2002(H9N2)流感病毒的M2 DNA疫苗以及经大肠杆菌表达的去... 流感病毒M2(基质蛋白2)是A型流感病毒的一个高度保守的蛋白。由于其免疫原性较弱,本研究采用M2 DNA疫苗初免-蛋白加强的策略来考察M2的免疫保护效果。制备A/Chicken/Jiangsu/07/2002(H9N2)流感病毒的M2 DNA疫苗以及经大肠杆菌表达的去除M2跨膜区的M2蛋白即sM2。以SPF级BALB/c小鼠为模型,电击法免疫M2 DNA疫苗,滴鼻法免疫sM2蛋白,免疫间隔三周,并于末次免疫后三周以致死量5LD50流感病毒H9N2攻击小鼠,通过检测小鼠存活率、体重丢失率、肺部病毒滴度及IgG抗体水平等指标来评价免疫的保护效果。实验结果表明,基于M2的疫苗采用DNA疫苗初免蛋白加强免疫二次的免疫程序能诱导较高的特异性抗体,明显减轻小鼠流感病症,提供完全的保护。 展开更多

关键词 禽流感病毒 基质蛋白2 DNA疫苗 初免-加强策略

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Flt3L及CCL5对prime/boost免疫策略中抗原特异性免疫应答的增强及抗肿瘤作用

7

作者 刘春燕 郑龙 +3 位作者 尤红煜 张艳 王俊霞 宋淑霞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期982-985,共4页

目的:研究Flt3L与CCL5作为联合佐剂在prime/boost免疫策略中对HBc抗原特异性免疫应答的增强及抗肿瘤作用。方法:将两种细胞因子质粒与携带HBc抗原的DNA疫苗经肌内注射法共免疫小鼠,免疫3次后再用原核表达的HBc颗粒蛋白或HBcDNA疫苗加强... 目的:研究Flt3L与CCL5作为联合佐剂在prime/boost免疫策略中对HBc抗原特异性免疫应答的增强及抗肿瘤作用。方法:将两种细胞因子质粒与携带HBc抗原的DNA疫苗经肌内注射法共免疫小鼠,免疫3次后再用原核表达的HBc颗粒蛋白或HBcDNA疫苗加强,观察对稳定表达HBcAg的小鼠黑色素瘤细胞(B16-HBc)的生长抑制作用;并分别采用MTT法检测荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖、流式细胞术检测脾CD8+T淋巴细胞中IFN-γ表达、ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清IL-2、IL-4含量及乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测特异性CTL杀伤活性。结果:与对照组相比,佐剂联合DNA疫苗免疫经蛋白加强组(DDP/Adj)显著抑制肿瘤生长;佐剂联合DNA疫苗免疫组(DDD/Adj)及DDP/Adj组均可促进特异性淋巴细胞增殖反应(P<0.05),且DDP/Adj高于DDD/Adj组(P<0.05);DDD/Adj及DDP/Adj组小鼠脾脏CD8+T淋巴细胞中IFN-γ表达、IL-2表达水平及CTL杀靶活性均高于对照组(P<0.01或P<0.05),IL-4表达水平在各组无显著区别(P>0.05)。结论:在prime/boost免疫策略中,采用Flt3L与CCL5两种细胞因子联合应用可显著促进荷瘤小鼠产生抗原特异性免疫应答及抗肿瘤作用。 展开更多

关键词 DNA疫苗 Flt3L/CCL5/佐剂 小鼠 抗原特异性免疫应答 prime/boost策略

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DNA疫苗预敏蛋白疫苗增强策略对乙型肝炎病毒表面抗原蛋白免疫应答的影响 被引量：1

8

作者 赵明丽 邢益平 +3 位作者 黄祖瑚 杜合娟 王世霞 卢山 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第6期1008-1011,共4页

目的:观察核酸疫苗预敏,乙型肝炎病毒HBsAg蛋白疫苗增强的免疫对Balb/c小鼠免疫应答的影响。方法:以Transfection TM脂质体将乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白(MHBs)核酸疫苗pSW3891/MHBs/ad(r简称为adr),及空载体pSW3891(简称vector)体外转... 目的:观察核酸疫苗预敏,乙型肝炎病毒HBsAg蛋白疫苗增强的免疫对Balb/c小鼠免疫应答的影响。方法:以Transfection TM脂质体将乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白(MHBs)核酸疫苗pSW3891/MHBs/ad(r简称为adr),及空载体pSW3891(简称vector)体外转染293T细胞。免疫印迹法(Westernblot)检测adr,vector的体外表达;动物体内研究选用Balb/c小鼠共18只,每组6只,编号后随机分为3组,即空载体质粒组(vector+vector组)、adr核酸疫苗+HBsAg蛋白疫苗(adr+protein组)、HBsAg蛋白疫苗+HBsAg蛋白疫苗(Protein+Protein组);于第0周肌肉注射法分别以vector、adr及HBsAg蛋白疫苗免疫小鼠,于第4周肌内注射法分别以vector、HBsAg蛋白疫苗、及HBsAg蛋白疫苗免疫小鼠。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清HBsAg特异性抗体、酶联免疫斑点(ELISPOT)法检测小鼠脾细胞HBsAg多肽特异性IFN-γ分泌细胞。结果:adr体外转染293T细胞后,能够表达乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白(MHBs);体内研究结果显示:除vector+vector组外,adr+protein组、Protein+Protein组小鼠均能检出血清抗-HBs,Protein+Protein组抗-HBs终点滴度比adr+protein组高,但无统计学意义;三组中vector+vector组没有检测到特异性INF-γ分泌的脾细胞,而adr+protein组、Protein+Protein组小鼠均能检出,且adr+protein组特异性细胞数量显著高于protein+protein组(P<0.001),具有统计学意义。结论:乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白(MHBs)核酸疫苗预敏,能明显增强Balb/c小鼠对乙型肝炎HBsAg蛋白疫苗细胞免疫应答水平。 展开更多

关键词 核酸疫苗 乙型肝炎 表面抗原中蛋白 初免-加强免疫策略

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利用体内电脉冲增强治疗型HBV DNA疫苗细胞免疫反应的研究 被引量：1

9

作者 丘力功 孙希海 +2 位作者 韦剑 赵亮 黄明 《中国医药导报》 CAS 2010年第11期23-26,共4页

目的:研究在初次免疫和加强免疫阶段分别使用不同的免疫模式能否增强HBV DNA疫苗的细胞免疫反应。方法:肌内注射10μg HBV DNA疫苗的Balb/c小鼠根据电脉冲实施时间的不同选择两种免疫模式,DNA+EP或EP+3d+DNA,按在初次免疫和加强免疫阶... 目的:研究在初次免疫和加强免疫阶段分别使用不同的免疫模式能否增强HBV DNA疫苗的细胞免疫反应。方法:肌内注射10μg HBV DNA疫苗的Balb/c小鼠根据电脉冲实施时间的不同选择两种免疫模式,DNA+EP或EP+3d+DNA,按在初次免疫和加强免疫阶段免疫模式的不同组合次序进行分组。各组小鼠在实施加强免疫后第14天取脾细胞做抗原特异的IFN-γ ELISPOT检测和FACS分析。结果:在初次免疫和加强免疫阶段使用不同免疫模式的实验组与采用相同免疫模式的实验组相比,诱导的特异性IFN-γT细胞频数和IFN-γ的CD8+T细胞百分比均增加了4倍以上,差异有高度统计学意义(P<0.01),而分别在初次免疫和加强免疫阶段实施的两种免疫模式的不同次序产生的细胞免疫效果之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在初次免疫和加强免疫阶段利用体内电脉冲实施不同的免疫模式能显著增强HBV DNA疫苗在动物体内的细胞免疫效果。 展开更多

关键词 HBV DNA疫苗 体内电脉冲 初次免疫-加强免疫策略 细胞免疫反应

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抗旋毛虫病Ts87DNA疫苗滴鼻初免-蛋白疫苗加强免疫策略增强免疫保护应答

10

作者 顾园 黄京京 +1 位作者 杨静 诸欣平 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 北大核心 2016年第2期78-85,共8页

为优化抗旋毛虫病核酸疫苗免疫策略，本文探讨了Ts87DNA疫苗滴鼻初免与蛋白疫苗皮下注射加强免疫诱导产生的保护效果及免疫应答特征。分别在第0d以旋毛虫Ts87DNA疫苗sL7207／pVAx1-Ts87滴鼻初免，第14／28d以蛋白疫苗rTs87皮下注射加强... 为优化抗旋毛虫病核酸疫苗免疫策略，本文探讨了Ts87DNA疫苗滴鼻初免与蛋白疫苗皮下注射加强免疫诱导产生的保护效果及免疫应答特征。分别在第0d以旋毛虫Ts87DNA疫苗sL7207／pVAx1-Ts87滴鼻初免，第14／28d以蛋白疫苗rTs87皮下注射加强免疫小鼠，在第35d攻击感染旋毛虫肌幼虫，第84d剖杀小鼠，计算减虫率观察免疫保护效果；进行小鼠血清中特异性IgG抗体效价、抗体亚型分析及肠道盥洗液sIgA水平分析，检测脾淋巴细胞增殖反应、脾及颈部淋巴结细胞分泌细胞因子水平。结果显示，DNA疫苗滴鼻初免一重组蛋白加强的联合免疫组的保护作用优于单独DNA疫苗滴鼻及单独重组蛋白免疫组，显著提高了减虫率（46．1％）；DNA疫苗滴鼻初免和蛋白疫苗加强免疫方式不仅诱导小鼠产生了粘膜免疫应答，同时也诱导了有效的细胞和体液免疫应答，其免疫应答类型是以Th2型为主的混合型Th1／Th2免疫反应。该研究为新型抗旋毛虫病疫苗接种策略的优化提供了实验依据。 展开更多

关键词 旋毛虫 疫苗 初免-加强策略 Ts87

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丙型肝炎病毒(HCV)实验性疫苗的研究进展 被引量：10

11

作者 谭文杰 张柯 阮力 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期64-70,共7页

丙型肝炎病毒是引起输血相关肝炎及慢性肝炎、肝硬化、肝癌的主要病原,目前尚无有效的治疗与预防手段。综述了HCV感染所引起的机体免疫应答及近年来实验性疫苗(主要是DNA疫苗、病毒载体疫苗及联合疫苗)的研究进展及面临的挑战,并提出,... 丙型肝炎病毒是引起输血相关肝炎及慢性肝炎、肝硬化、肝癌的主要病原,目前尚无有效的治疗与预防手段。综述了HCV感染所引起的机体免疫应答及近年来实验性疫苗(主要是DNA疫苗、病毒载体疫苗及联合疫苗)的研究进展及面临的挑战,并提出,激发广谱、强大T细胞应答的初免-加强免疫方案是HCV实验性疫苗研制的新策略。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 DNA疫苗病 毒载体疫苗 初免-加强免疫策略

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电转染技术结合初免后加强免疫策略增强结核杆菌核酸疫苗免疫原性的研究 被引量：6

12

作者 宋丹 张颖 +6 位作者 黄嘉璐 王晓一 何为 刘庆良 张洪勇 熊思东 李忠明 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期127-131,共5页

目的研究电转染技术结合初免后加强免疫策略能否增强结核杆菌核酸疫苗的免疫原性。方法将编码结核杆菌的Ag85A和ESAT-6蛋白抗原的基因分别插入到质粒pVAX1载体中，构建成HG85和HG6两种核酸疫苗。每只BALB／c小鼠肌肉注射10μg核酸疫苗... 目的研究电转染技术结合初免后加强免疫策略能否增强结核杆菌核酸疫苗的免疫原性。方法将编码结核杆菌的Ag85A和ESAT-6蛋白抗原的基因分别插入到质粒pVAX1载体中，构建成HG85和HG6两种核酸疫苗。每只BALB／c小鼠肌肉注射10μg核酸疫苗，同时于注射部位施加方型波电脉冲促进质粒DNA体内转染；进行3次初免，再用相应蛋白质抗原或卡介苗加强免疫。结果肌肉注射10μg核酸疫苗加电转染能诱导出与不用电转染接种100μg核酸疫苗相似或更强的抗体免疫应答。初免后采用相应蛋白加强后小鼠产生的免疫应答偏向于TH2型，血清特异性抗体的几何平均滴度比加强前提高5—76倍。而用卡介苗加强免疫，产生的免疫应答偏向TH1型。结论采用电转染技术结合蛋白质或卡介苗加强免疫策略，能显著增强结核杆菌核酸疫苗在动物体内的免疫原性。 展开更多

关键词 结核病疫苗 体内电转染 DNA初免和加强免疫策略 免疫原性

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结核分枝杆菌联合DNA疫苗初免—BCG加强的免疫效果观察 被引量：4

13

作者 高蕾 鲍朗 +1 位作者 郝牧 张会东 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期122-125,共4页

目的:研究并比较结核分枝杆菌免疫保护性抗原DNA(Ag85A和ESAT-6)疫苗联合免疫,BCG免疫以及联合DNA疫苗初免—BCG加强免疫等不同的免疫策略,诱导免疫应答效果观察。方法:健康雌性BALB/c小鼠24只,随机分成PBS阴性对照组,DNA初免—BCG异源... 目的:研究并比较结核分枝杆菌免疫保护性抗原DNA(Ag85A和ESAT-6)疫苗联合免疫,BCG免疫以及联合DNA疫苗初免—BCG加强免疫等不同的免疫策略,诱导免疫应答效果观察。方法:健康雌性BALB/c小鼠24只,随机分成PBS阴性对照组,DNA初免—BCG异源加强组,DNA(Ag85A和ESAT-6)初免DNA同源加强组和BCG阳性对照组,共进行3次免疫,初免2次,最后1次加强,间隔2周1次。PBS组3次均注射PBS溶液;DNA/BCG组以质粒DNA免疫2次,最后1次以BCG加强免疫;DNA/DNA组3次均以质粒DNA进行免疫;BCG组则注射PBS溶液2次后以BCG免疫。末次免疫后4、6、8周分别分离血清测定总IgG水平,同时分离小鼠脾细胞,体外经TB-PPD刺激后进行淋巴细胞增殖实验(XTT法)并测定脾细胞培养上清中IFN-γ和IL-4水平。结果:DNA/BCG、DNA/DNA、BCG组体外经TB-PPD刺激后均检测到特异性IgG抗体产生,3组平均效价为1∶120、1∶160、1∶80,DNA/DNA组的抗体效价高于另外2组;小鼠脾细胞体外经TB-PPD刺激后,均能产生特异性淋巴细胞增殖并诱生较强的IFN-γ反应,其中DNA/BCG组IFN-γ的分泌水平高于DNA/DNA组和BCG组(P<0.05)。结论:联合DNA疫苗初免—BCG加强的免疫策略能在小鼠体内诱导较强的特异性细胞免疫反应,产生高水平的IFN-γ。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 AG85A ESAT-6 异源初免-加强免疫

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IL-12联合结核杆菌DNA疫苗初免-BCG加强免疫的免疫效果观察 被引量：2

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作者 高蕾 鲍朗 +2 位作者 郝牧 章乐 秦紫芳 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期535-539,共5页

目的研究并比较IL-12联合结核分枝杆菌(TB)DNA(Ag85A和ESAT-6)疫苗初免-BCG加强免疫的应答效果。方法将小鼠随机分成PBS阴性对照组和4组免疫组:BCG组、DNA(Ag85A和ESAT-6)初免-BCG异源加强组、DNA+IL-12初免-BCG异源加强组和DNA初免-BCG... 目的研究并比较IL-12联合结核分枝杆菌(TB)DNA(Ag85A和ESAT-6)疫苗初免-BCG加强免疫的应答效果。方法将小鼠随机分成PBS阴性对照组和4组免疫组:BCG组、DNA(Ag85A和ESAT-6)初免-BCG异源加强组、DNA+IL-12初免-BCG异源加强组和DNA初免-BCG+IL-12异源加强组。末次免疫后4、6、8周分别测定血清总IgG水平,同时分离小鼠脾细胞,进行淋巴细胞增殖实验(流式细胞仪检测),测定脾细胞培养上清中IFN-γ分泌水平,并检测小鼠脾脏淋巴细胞表型。结果4组免疫组体外经TB纯蛋白衍生物(TB-PPD)刺激后均检测到特异性IgG抗体产生,且抗体水平在末次免疫后4～8周逐渐增加,4组平均效价为1∶80,1∶120、1∶160、1∶160,各组抗体水平增加无明显差异(P>0.05);小鼠脾细胞体外经TB-PPD刺激后,4组免疫组均能产生特异性淋巴细胞增殖并诱生较强的IFN-γ反应,且DNA+IL-12/BCG和DNA/BCG+IL-12组特异性淋巴细胞增殖活性和IFN-γ分泌水平均明显强于BCG,DNA/BCG组(P<0.05),但DNA+IL-12/BCG和DNA/BCG+IL-12组间差异不明显;4组免疫组小鼠CD4+、CD8+T淋巴细胞较PBS组有较大升高(P<0.05),且DNA+IL-12/BCG和DNA/BCG+IL-12组CD4+、CD8+T淋巴细胞百分比大于BCG以及DNA/BCG组(P<0.05)。结论IL-12联合DNA疫苗初免-BCG加强的免疫策略较BCG免疫以及单纯的DNA疫苗初免-BCG加强免疫能在小鼠体内诱导更强的特异性细胞免疫反应,产生高水平的IFN-γ。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 AG85A ESAT-6 IL-12 异源初免-加强免疫

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结核分枝杆菌融合蛋白亚单位疫苗对BCG初始免疫的加强效应及保护效力 被引量：1

15

作者 李青 傅林锋 +5 位作者 王秉翔 姜雯雯 于红娟 雒彧 张颖 祝秉东 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第3期280-285,共6页

目的探讨结核分枝杆菌融合蛋白亚单位疫苗对BCG初始免疫的加强效应及保护效力。方法将Ag85B、Ag85B-Mpt64190-198-HspX(AMH)、Ag85B-Mpt64190-198-Mtb8.4(AMM)以及AMH+AMM蛋白分别与佐剂二甲基三十六烷基铵(DDA)和卡介苗多糖核酸(BCG-P... 目的探讨结核分枝杆菌融合蛋白亚单位疫苗对BCG初始免疫的加强效应及保护效力。方法将Ag85B、Ag85B-Mpt64190-198-HspX(AMH)、Ag85B-Mpt64190-198-Mtb8.4(AMM)以及AMH+AMM蛋白分别与佐剂二甲基三十六烷基铵(DDA)和卡介苗多糖核酸(BCG-PSN)混合,制备亚单位疫苗。第0周用BCG皮下免疫C57BL/6小鼠,第8、10周分别用各蛋白疫苗皮下加强免疫,以PBS和BCG(仅免疫1次)作为对照。末次免疫后4周,采血检测血清抗体水平,并分离脾淋巴细胞,检测分泌IFNγ的水平;末次免疫后12周,经尾静脉注射H37Rv株,6周后取肺,进行菌落计数,抗酸及HE染色观察。结果各亚单位疫苗加强组诱导产生的特异性抗Ag85BIgG抗体水平均明显高于BCG组;融合蛋白疫苗加强组免疫小鼠脾细胞经Ag85B和PPD刺激后,产生分泌IFNγ的淋巴细胞数明显多于BCG组;融合蛋白加强组免疫小鼠肺组织结核结节面积与BCG组比较,差异无统计学意义;仅AMM+AMH加强组免疫小鼠肺组织菌落计数明显低于BCG组,其抗酸染色阳性细菌数明显低于PBS、BCG及AMH、Ag85B加强组。结论AMH和AMM疫苗联合加强BCG免疫,能诱导小鼠特异性的细胞免疫和体液免疫应答,具有较强的免疫原性,可增强BCG的保护效力。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 融合蛋白 亚单位疫苗 初始-强化免疫策略

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CVB3腺病毒载体疫苗Ad／MDC—VP1与DNA疫苗联合应用的免疫效果 被引量：6

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作者 闫立景 李剑 +7 位作者 温婵 李嘉 蓝佳明 揣侠 高志云 张永红 金玉怀 王永祥 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期533-537,共5页

目的构建重组腺病毒Ad／MDC—VP1，观察Ad／MDC-VPl与DNA疫苗联合应用的免疫效果。方法构建、包装重组腺病毒Ad／MDC—VP1并检测目的蛋白的表达。BALB／c小鼠随机分为Ad／MDC—VPl、pcDNA3／MDC—VP1、pcDNA3／MDC-VP1＋Ad／MDC—VP1和P... 目的构建重组腺病毒Ad／MDC—VP1，观察Ad／MDC-VPl与DNA疫苗联合应用的免疫效果。方法构建、包装重组腺病毒Ad／MDC—VP1并检测目的蛋白的表达。BALB／c小鼠随机分为Ad／MDC—VPl、pcDNA3／MDC—VP1、pcDNA3／MDC-VP1＋Ad／MDC—VP1和PBS4组，肌肉注射免疫小鼠。用ELISA法和微量中和试验法分别检测血清柯萨奇病毒B3（CVB3）VP1 IgG和中和抗体滴度；CCK-8法检测淋巴细胞增殖活性和特异性CTL杀伤活性；用致死量CVB3攻击小鼠后，检测血中病毒滴度并观察小鼠的存活率。结果成功构建并包装了重组腺病毒Ad／MDC-VPI，检测到目的蛋白的表达。pcDNA3／MDC．VP1＋Ad／MDC—VP1组血清CVB3VP1IgG滴度、淋巴细胞增殖指数、CTL杀伤酒生和对小鼠的保护率明显高于其他各组（P〈0．05），血清病毒滴度低于其他各组（P〈0．05）。结论Ad／MDC—VP1与DNA疫苗联合应用能显著提高小鼠细胞和体液免疫应答。 展开更多

关键词 柯萨奇病毒B3 腺病毒载体疫苗 DNA疫苗 prime—boost免疫策略

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rAd/MDC-VP1初免pcDNA3/MDC-VP1加强策略抗CVB3的免疫效果研究 被引量：3

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作者 闫立景 高志云 +5 位作者 李剑 蓝佳明 金玉怀 谢立新 揣侠 王永祥 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期228-231,共4页

目的:应用柯萨奇病毒B3(CVB3)腺病毒载体疫苗rAd/MDC-VP1初免,核酸疫苗pcDNA3/MDC-VP1加强免疫的策略免疫小鼠,观察其免疫效果。方法:BALB/c小鼠随机分为A～D 4组,分别肌肉注射PBS、rAd/MDC-VP1、pcD-NA3/MDC-VP1、rAd/MDC-VP1+pcDNA3/M... 目的:应用柯萨奇病毒B3(CVB3)腺病毒载体疫苗rAd/MDC-VP1初免,核酸疫苗pcDNA3/MDC-VP1加强免疫的策略免疫小鼠,观察其免疫效果。方法:BALB/c小鼠随机分为A～D 4组,分别肌肉注射PBS、rAd/MDC-VP1、pcD-NA3/MDC-VP1、rAd/MDC-VP1+pcDNA3/MDC-VP1,用ELISA和微量中和试验法分别检测CVB3 VP1特异性IgG和中和抗体滴度,CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖活性和特异性CTL杀伤活性;用致死量的CVB3攻击小鼠后,检测小鼠血中病毒滴度并观察动物的存活情况。结果:D组CVB3 IgG、非特异性淋巴细胞增殖活性及特异性CTL杀伤活性明显高于其他各组(P<0.05);CVB3攻击后,D组小鼠血中病毒滴度较其他各组显著降低,生存率为41.67%,明显高于其他各组(P<0.05)。结论:rAd/MDC-VP1初免pcDNA3/MDC-VP1加强的免疫策略能显著提高小鼠细胞和体液免疫水平,提高致死量病毒攻击后的保护率。 展开更多

关键词 柯萨奇病毒B3 初免-加强免疫策略 小鼠

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新疆出血热病毒糖蛋白多表位嵌合肽基因的免疫原性研究 被引量：1

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作者 美丽排提·玉素甫 王颖 +3 位作者 阿布力米提·莫明 李轶杰 张渝疆 孙素荣 《国际生物医学工程杂志》 CAS 2022年第1期15-23,共9页

目的探讨新疆出血热病毒(XHFV)糖蛋白的2个抗原优势区(GcⅠ和GcⅡ)以不同嵌合策略以及不同免疫方式诱导小鼠免疫应答的效果。方法以在5’’端加入或不加鼠白细胞介素-2(IL-2)信号肽与通用型辅助性T细胞(Th)表位为不同设计策略,将GcⅠ、G... 目的探讨新疆出血热病毒(XHFV)糖蛋白的2个抗原优势区(GcⅠ和GcⅡ)以不同嵌合策略以及不同免疫方式诱导小鼠免疫应答的效果。方法以在5’’端加入或不加鼠白细胞介素-2(IL-2)信号肽与通用型辅助性T细胞(Th)表位为不同设计策略,将GcⅠ、GcⅡ及GcⅠ上已鉴定出来的表位(Gc^(233~248)、Gc^(241~256)和Gc^(281~296))分别进行融合并构建至真核表达载体pVAX1与原核表达载体pET-28a上。采用间接免疫荧光法检测重组真核质粒的体外表达效果后进行大量提取,将重组原核质粒转化大肠杆菌BL21进行诱导表达及纯化。通过基因免疫、蛋白免疫和DNA初免-蛋白加强免疫(联合免疫)3种方式免疫BALB/c小鼠,酶联免疫吸附测定法检测小鼠体内IgG抗体水平以及小鼠脾细胞培养上清中IL-4和干扰素-γ(IFN-γ)的含量,噻唑蓝比色法检测小鼠脾T淋巴细胞的增殖情况。结果双酶切及测序结果表明8种重组质粒构建成功。荧光显微镜下可见构建的重组真核质粒在体外细胞均能成功表达。3次免疫小鼠后,各实验组的小鼠血清IgG抗体水平和刺激指数均明显高于对照组(均P<0.01)。Th2型细胞因子IL-4与Th1型细胞因子IFN-γ的质量浓度检测结果表明,联合免疫组引起的免疫应答偏向Th1型。结论成功构建了XHFV糖蛋白的多表位嵌合疫苗且靶抗原在小鼠体内可有效表达,各免疫组与对照组相比均激发了较强的体液免疫及细胞免疫应答,其中pVAX1-ST(GcⅠe+GcⅡ)联合重组蛋白r(GcⅠe+GcⅡ)的免疫效果最好,有望作为XHFV的新型候选疫苗。 展开更多

关键词 新疆出血热病毒 糖蛋白 多表位疫苗 DNA初免-蛋白加强免疫策略

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