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利用RNA介导的抗病性获得抗2种病毒的转基因烟草 被引量:17
1
作者 白庆荣 朱俊华 +3 位作者 刘晓玲 朱常香 宋云枝 温孚江 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期148-154,共7页
RNA介导的病毒抗性(RMVR)是近年发展起来的一种新的植物抗病毒基因工程策略,具有抗病性强、抗性持久、生物安全性高等特点。利用该策略培育多抗病毒植株具有广阔的应用前景和重要的实践意义。本研究将非翻译的马铃薯X病毒的衣壳蛋白(PVX... RNA介导的病毒抗性(RMVR)是近年发展起来的一种新的植物抗病毒基因工程策略,具有抗病性强、抗性持久、生物安全性高等特点。利用该策略培育多抗病毒植株具有广阔的应用前景和重要的实践意义。本研究将非翻译的马铃薯X病毒的衣壳蛋白(PVX-CP)基因和非翻译的马铃薯Y病毒的衣壳蛋白(PVY-CP)基因组成嵌合基因,构建植物表达载体pROKXY,利用农杆菌介导法转化烟草NC89,获得6株对PVX和PVY的混合侵染表现为免疫的转基因植株。分子分析表明,这种抗性为RNA介导的病毒抗性。这一研究结果为利用RMVR进行植物多抗病毒育种提供了重要数据和资料。 展开更多
关键词 RNA介导的病毒抗性 马铃薯x病毒 马铃薯Y病毒坏死株系 嵌合基因 转基因烟草
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马铃薯X病毒CP基因的原核表达及特异性抗血清的制备 被引量:17
2
作者 吴兴泉 陈士华 +2 位作者 吴祖建 林奇英 谢联辉 《郑州工程学院学报》 CAS 北大核心 2003年第2期25-28,共4页
依据马铃薯X病毒(PotatovirusX,PVX)外壳蛋白(CP)基因序列(711bp)设计合成了两对引物,通过RT-PCR扩增得到长0.7bp的目的片段.将目的片段转入大肠杆菌,酶切鉴定证明得到了含有目的片段的重组子,测定序列结果与其他PVX分离物CP基因序列比... 依据马铃薯X病毒(PotatovirusX,PVX)外壳蛋白(CP)基因序列(711bp)设计合成了两对引物,通过RT-PCR扩增得到长0.7bp的目的片段.将目的片段转入大肠杆菌,酶切鉴定证明得到了含有目的片段的重组子,测定序列结果与其他PVX分离物CP基因序列比较,发现其核苷酸同源性最高可达99%左右,证明此病毒为PVX.构建了含PVXCP基因的融合蛋白原核表达载体,并在大肠杆菌中得到表达,SDS-PAGE测定该融合蛋白GST-XCP的相对分子质量为52000.Westemblot分析结果显示,GST-XCP与PVX抗血清有很强的免疫反应,表明GST-XCP有天然状态下病毒核衣壳蛋白的抗原性.制备了GST-XCP抗血清,并利用此抗血清建立了PVX的间接ELISA检测方法,检测灵敏度为1mg鲜重的病株叶片. 展开更多
关键词 马铃薯 x病毒 外壳蛋白基因序列 抗血清 原核表达 病毒病 病毒检测
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马铃薯病毒一步法RT-PCR诊断研究 被引量:11
3
作者 关翠萍 张鹤龄 +3 位作者 门福义 宋艳茹 蒙美莲 陈正华 《内蒙古大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期178-185,共8页
运用一步法RT-PCR对马铃薯和烟草中的马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒和马铃薯卷叶病毒进行了检测,实验表明:对酚-SDS方法提取的病毒核酸进行扩增,一步法RT-PCR检测到的扩增产物的灵敏度较两步法RT-PCR的高100倍左右.两种提取方法对比,用一步... 运用一步法RT-PCR对马铃薯和烟草中的马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒和马铃薯卷叶病毒进行了检测,实验表明:对酚-SDS方法提取的病毒核酸进行扩增,一步法RT-PCR检测到的扩增产物的灵敏度较两步法RT-PCR的高100倍左右.两种提取方法对比,用一步法RT-PCR进行扩增,检测到的PEG法扩增产物的灵敏度较酚-SDS法扩增产物的灵敏度高3倍.建立了快速、简便、灵敏度高、特异性强的马铃薯病毒一步法RT-PCR检测技术. 展开更多
关键词 马铃薯x病毒 马铃薯Y病毒 马铃薯卷叶病毒 反转录-聚合酶链式反应 诊断
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一个马铃薯X病毒分离物的外壳蛋白基因序列分析与株系鉴定 被引量:15
4
作者 曲静 朱常香 +2 位作者 温孚江 郭兴启 宋云枝 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期358-364,共7页
对山东省侵染马铃薯的一个马铃薯X病毒(PVX)分离物PVX-SD_1的外壳蛋白(CP)基因进行了克隆和序列分析。以提纯的病毒RNA为模板,应用RTPCR扩增目的基因,通过常规的基因克隆法将扩增的CP基因导入pUC19载体,测序。结果表明,PVX-SD_1的CP基因... 对山东省侵染马铃薯的一个马铃薯X病毒(PVX)分离物PVX-SD_1的外壳蛋白(CP)基因进行了克隆和序列分析。以提纯的病毒RNA为模板,应用RTPCR扩增目的基因,通过常规的基因克隆法将扩增的CP基因导入pUC19载体,测序。结果表明,PVX-SD_1的CP基因长719bp,可编码248个氨基酸;与Gen-Bank中报道的15个有代表性的株系或分离物相比较,核苷酸同源性在80.1%~99.7%,氨基酸同源性在89.8%~100%;与欧洲株系UK_3仅1个核苷酸不同,同源性为99.7%,氨基酸同源性达100%,表明它们可能为同一株系,属于X^3细。 展开更多
关键词 马铃薯 x病毒分离物 外壳蛋白基因 序列分析
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马铃薯X病毒外壳蛋白基因的cDNA克隆和全序列测定 被引量:10
5
作者 王春香 高谦 +1 位作者 潘乃穟 陈章良 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1991年第5期363-369,T001,共8页
从感病的烟草叶片中分离纯化了马铃薯X病毒(PVX)。用人工合成的寡核苷酸作为引物,合成了cDNA并克隆到Bluescript载体上。通过分子杂交鉴定、限制性内切酶图谱分析和DNA全序列测定,证明克隆了完整的马铃薯X病毒的外壳蛋白基因。测定的cDN... 从感病的烟草叶片中分离纯化了马铃薯X病毒(PVX)。用人工合成的寡核苷酸作为引物,合成了cDNA并克隆到Bluescript载体上。通过分子杂交鉴定、限制性内切酶图谱分析和DNA全序列测定,证明克隆了完整的马铃薯X病毒的外壳蛋白基因。测定的cDNA序列与国外发表的PVX外壳蛋白基因的序列相比较,发现有很高的同源率。并将外壳蛋白基因转入马铃薯中,获得了在卡那选择培养基上生长的马铃薯幼苗。 展开更多
关键词 马铃薯x病毒 外壳蛋白基因
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导致云南马铃薯品种中甸红退化的PVX分离物提纯及鉴定 被引量:15
6
作者 张仲凯 魏春红 +3 位作者 丁铭 方琦 彭潞波 李毅 《西南农业学报》 CSCD 2003年第1期78-81,共4页
对引起云南马铃薯品种中甸红退化的病毒分离物进行了纯化 ,应用酶联免疫吸附测定 (ELISA)和免疫电镜技术 (ISEM )检测鉴定了分离纯化的病毒样品 ,鉴定为马铃薯X病毒 (PotatovirusX ,PVX)的分离株。经ELISA和ISEM复合检测筛选 ,用组织培... 对引起云南马铃薯品种中甸红退化的病毒分离物进行了纯化 ,应用酶联免疫吸附测定 (ELISA)和免疫电镜技术 (ISEM )检测鉴定了分离纯化的病毒样品 ,鉴定为马铃薯X病毒 (PotatovirusX ,PVX)的分离株。经ELISA和ISEM复合检测筛选 ,用组织培养法得到了侵染中甸红的PVX分离物标准毒株。应用电镜技术检测了PVX在寄主植株中的分布 ,结果呈系统侵染。 展开更多
关键词 马铃薯品种 中甸红 PVx 分离纯化 鉴定
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PVY/PVX协生作用对病毒浓度及寄主细胞超微结构的影响 被引量:12
7
作者 郭兴启 冯炘 +2 位作者 李向东 郭恒俊 李照会 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期281-286,T003,T004,共8页
以烟草品种三生烟 (N .tabacumcv .Samsun)为测试寄主 ,采用酶联免疫检测实验 (TAS ELISA)和电镜观察的方法 ,在温室条件下研究了马铃薯Y病毒 (PVY)和马铃薯X病毒 (PVX)复合侵染所引起的寄主症状和病毒浓度变化的特点、不同条件下复合... 以烟草品种三生烟 (N .tabacumcv .Samsun)为测试寄主 ,采用酶联免疫检测实验 (TAS ELISA)和电镜观察的方法 ,在温室条件下研究了马铃薯Y病毒 (PVY)和马铃薯X病毒 (PVX)复合侵染所引起的寄主症状和病毒浓度变化的特点、不同条件下复合侵染时病毒浓度的变化规律以及复合侵染对寄主细胞超微结构的影响。结果表明 ,PVY/PVX在烟草植株内发生了协生作用 ,PVY是协生病毒 ,PVX是被协生病毒。与单独侵染相比 ,PVY和PVX的复合侵染使烟草植株症状明显加重。PVY在复合侵染植株中的浓度与在单独侵染植株中相比 ,没有明显的变化 ,而PVX在复合侵染植株中的浓度明显高于在单独侵染植株中的浓度。这种现象不受PVY株系、处理季节和接种次序的影响。但是 ,不同PVY株系、不同处理季节或不同接种次序对PVY/PVX协生作用中PVX浓度的影响程度存在着一定的差异。电镜观察表明 ,与不接种病毒或单独侵染的植株相比 ,受复合侵染的烟草叶片细胞超微结构发生了明显的病理学变化。细胞肿胀 ,叶绿体、线粒体等细胞器受到严重损伤 ,细胞质内有风轮状、薄片状的内含体 ,由于在细胞质中常常有大量纤维状的PVX病毒粒子聚集体存在 ,这意味着PVX浓度的增加可能是在复合侵染的细胞中病毒大量繁殖的结果。 展开更多
关键词 Y病毒 协生作用 细胞病理学 马铃薯Y病毒 马铃薯x病毒
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马铃薯X病毒25kD运动蛋白基因和外壳蛋白基因介导的抗病性研究 被引量:9
8
作者 刘晓玲 宋云枝 +3 位作者 刘红梅 温孚江 朱常香 白庆荣 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期827-832,共6页
以马铃薯X病毒(potatovirusX,PVX)的RNA为模板,应用反转录聚合酶链式反应(RT PCR)方法分别扩增出长度为681bp的非翻译马铃薯X病毒25kD运动蛋白基因(PVX p25)和长度为714bp的非翻译马铃薯X病毒外壳蛋白基因(PVX CP)。并分别构建植物表达... 以马铃薯X病毒(potatovirusX,PVX)的RNA为模板,应用反转录聚合酶链式反应(RT PCR)方法分别扩增出长度为681bp的非翻译马铃薯X病毒25kD运动蛋白基因(PVX p25)和长度为714bp的非翻译马铃薯X病毒外壳蛋白基因(PVX CP)。并分别构建植物表达载体pROKⅡp25和pROKⅡCP。利用农杆菌介导方法转化烟草NC89。经卡那霉素筛选、PCR检测,共获得转非翻译PVX p25的转基因植株78株,转非翻译PVX CP的转基因植株83株。抗病性试验表明,转非翻译PVX p25的78株中有31株对PVX的侵染表现高度抗病,抗性比例为39.7%;转非翻译PVX CP的83株中有11株对PVX的侵染表现高度抗病,抗性比例为13.3%。分子生物学检测和抗病性分析表明,抗病性均为RNA介导的病毒抗性。研究结果初步证明,转非翻译PVX p25可以更有效地获得抗PVX转基因植株。 展开更多
关键词 马铃薯x病毒 运动蛋白 外壳蛋白 RNA介导的病毒抗性
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诱导烟草早花的PVX-FT系统的建立 被引量:9
9
作者 高玉龙 肖炳光 Ralph E Dewey 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第6期102-105,共4页
FT(Flowering locus T)基因是控制植物开花的关键基因,而PVX(Potato virus X)载体能够使外源基因在植物体内高水平瞬时表达。本文构建了拟南芥FT基因PVX病毒瞬时表达载体,通过农杆菌渗滤感染不同类型烟草品种,使拟南芥FT基因在烟草中瞬... FT(Flowering locus T)基因是控制植物开花的关键基因,而PVX(Potato virus X)载体能够使外源基因在植物体内高水平瞬时表达。本文构建了拟南芥FT基因PVX病毒瞬时表达载体,通过农杆菌渗滤感染不同类型烟草品种,使拟南芥FT基因在烟草中瞬时表达。结果表明,该系统能够诱导烤烟品种K326、云烟87和红花大金元,香料烟品种TEVB及白肋烟品种TN90早花,应用于烟草育种,可缩短育种进程。 展开更多
关键词 烟草 早花 马羚素x病毒载体 FT基因
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马铃薯抗晚疫病基因R8、RB和抗病毒病基因Rx1、Ry_(adg)的多重PCR检测 被引量:6
10
作者 刘程 王世尧 +7 位作者 史伟玲 宋玉浩 蒋锐 赵勇 莫世春 吕典秋 王季春 刘勋 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期389-396,共8页
在218份马铃薯材料中筛查晚疫病持久抗性基因RB和R8标记的基础上,进一步筛查了马铃薯X病毒(PVX)和马铃薯Y病毒(PVY)极端抗性基因Rx1和Ry_(adg)的标记。利用筛查出的含有Rx1和RB标记的‘德薯3号’和含有Ry_(adg)和R8标记的P182马铃薯资... 在218份马铃薯材料中筛查晚疫病持久抗性基因RB和R8标记的基础上,进一步筛查了马铃薯X病毒(PVX)和马铃薯Y病毒(PVY)极端抗性基因Rx1和Ry_(adg)的标记。利用筛查出的含有Rx1和RB标记的‘德薯3号’和含有Ry_(adg)和R8标记的P182马铃薯资源材料混合DNA为模板,选择已报道的Rx1和Ry_(adg)的标记引物,并根据RB和R8序列设计特异引物,同时设计马铃薯GBSS基因特异引物为内参监控PCR反应体系有效扩增,对多重PCR延伸温度、引物组合浓度等进行优化,建立了同时检测4个抗病基因的多重PCR方法。应用该方法对选育品系样品进行筛查,鉴定到聚合上述4个抗性基因的材料4份。本研究中建立的多重PCR检测体系用于分子标记辅助选择,为马铃薯晚疫病和病毒病多抗基因聚合育种提供了简单、高效的技术方法并为多抗性基因聚合新品种选育创制新资源。 展开更多
关键词 马铃薯 晚疫病 马铃薯Y病毒 马铃薯x病毒 多重PCR
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利用CRISPR/Cas13a编辑技术获得马铃薯抗PVX植株
11
作者 涂振 钟子旸 +5 位作者 陈汝豪 杨曼华 詹晓慧 陈家茹 马恢 聂碧华 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期211-218,共8页
为探究利用CRISPR/Cas13a系统获得抗马铃薯X病毒(potato virus X,PVX)马铃薯的可行性,通过设计靶向PVX中TGBp1基因的小向导RNA(small guide RNA,sgRNA),构建CRISPR/Cas13a基因编辑载体,以马铃薯栽培种Désirée为受体材料进行... 为探究利用CRISPR/Cas13a系统获得抗马铃薯X病毒(potato virus X,PVX)马铃薯的可行性,通过设计靶向PVX中TGBp1基因的小向导RNA(small guide RNA,sgRNA),构建CRISPR/Cas13a基因编辑载体,以马铃薯栽培种Désirée为受体材料进行稳定遗传转化,并通过机械摩擦接种法鉴定转基因植株对PVX的抗性。结果显示,成功构建了靶向PVX的PVX-Cas13a载体,并获得了表达Cas13a的转基因马铃薯植株,对其中3个高表达Cas13a的株系进行PVX抗性鉴定,发现在接种PVX 10~20 d后,转基因植株系统叶上无明显发病症状,且PVX积累量均显著低于未接种PVX对照。表明靶向PVX的CRISPR/Cas13a系统能够有效抑制该病毒的积累,这为马铃薯抗PVX育种提供了一条有效策略。 展开更多
关键词 马铃薯 基因编辑 CRISPR/Cas13a 马铃薯x病毒 抗性鉴定
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Evaluation of potential RNA-interference-target genes to control cotton mealybug, Phenacoccus solenopsis (Hemiptera: Pseudococcuidae) 被引量:5
12
作者 Arif M. Khan Muhammad Ashfaq +2 位作者 Azhar A. Khan Muhammad T. Naseem Shahid Mansoor 《Insect Science》 SCIE CAS CSCD 2018年第5期778-786,共9页
RNA interference (RNAi) of vital insect genes is a potential tool for targeted pest control. However, selection of the right target genes is a challenge because the RNAi efficacy is known to vary among insect specie... RNA interference (RNAi) of vital insect genes is a potential tool for targeted pest control. However, selection of the right target genes is a challenge because the RNAi efficacy is known to vary among insect species. Cotton mealybug, Phenacoccus solenopsis, is a phloem-feeding economically important crop pest. We evaluated the RNAi of 2 vital genes, Bursicon (PsBur) and V-ATPase (Ps V-ATPase) as potential targets in P. solenopsis for its control. PCR fragments of PsBur and PsV-ATPase were amplified using cDNA synthesized from the total RNA. The PCR amplicons were cloned into Potato virus X (PVX) to develop recombinant PVX for the inoculation ofNicotiana tabacum plants for bioassays with healthy P. solenopsis. Reverse-transcription-polymerase chain reaction (RT- PCR) was used to validate the expression oftransgenes in the recombinant-PVX-inoculated plants (treated), and suppression of the target genes in the mealybugs exposed to them. The RT-PCR confirmed the expression of transgenes in the treated plants. Mealybug individuals on treated plants either died or showed physical deformities. Further, the population of mealybug was significantly reduced by feeding on N. tabacum expressing RNAi triggers against PsBur and Ps V-A TPase. The results conclude that RNAi is activated in P. solenopsis by feeding on N. tabacum expressing RNAi triggering elements of PsBur and Ps V-ATPase genes through recombinant PVX vector. Further, V-ATPase and Bursicon genes are potential targets for RNAi-mediated control ofP. solenopsis. 展开更多
关键词 insect control phloem feeders potato virus x RT-PCR transgenic crops
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马铃薯X病毒贵州分离物的分子鉴定 被引量:6
13
作者 姚东校 洪鲲 +2 位作者 杨立昌 乙引 万晴姣 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第13期139-141,F0003,共4页
从贵州威宁县染病马铃薯植株中分离得到马铃薯X病毒贵州分离物(PVX—GZ),采用RT—PCR扩增并克隆了该分离物的外壳蛋白基因(CP)。经测序,该CP基因长714bp,编码237个氨基酸残基,分子量25-2ku;与19种已报道的PVX各地分离物的同源... 从贵州威宁县染病马铃薯植株中分离得到马铃薯X病毒贵州分离物(PVX—GZ),采用RT—PCR扩增并克隆了该分离物的外壳蛋白基因(CP)。经测序,该CP基因长714bp,编码237个氨基酸残基,分子量25-2ku;与19种已报道的PVX各地分离物的同源性相比,其核苷酸和氨基酸序列分别在78.6%~97.5%和84.8%-99.6%之间,其中,与两种典型的PVXX。株系(荷兰分离物X3和英国分离物UK3)的基因序列同源性达97.1%以上。结合寄主鉴别结果,判断该分离物属PVX的X3株系。 展开更多
关键词 马铃薯x病毒 外壳蛋白 亲缘分析
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马铃薯X病毒云南分离物单克隆抗体的制备及其检测应用 被引量:3
14
作者 吴建祥 周雪平 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期608-612,共5页
用马铃薯X病毒(Potato virusX,PVX)免疫的BALB/C鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选克隆,获得2株能稳定传代并分泌抗PVX单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞2B12和4E7,并分别制备它们的单抗腹水.2株单克隆抗体腹水间接ELISA效价在10-6以上... 用马铃薯X病毒(Potato virusX,PVX)免疫的BALB/C鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选克隆,获得2株能稳定传代并分泌抗PVX单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞2B12和4E7,并分别制备它们的单抗腹水.2株单克隆抗体腹水间接ELISA效价在10-6以上,2B12和4E7的抗体类型及亚类均为IgG1,轻链均为κ链.利用这些单克隆抗体建立了抗原包被的间接ELISA(ACP-ELISA)检测PVX的方法.病叶经1∶600倍稀释、提纯PVX病毒浓度为2 ng/mL(每孔的病毒绝对量为0.2 ng)时,该方法仍能检测到病毒.利用ACP-ELISA方法测定了田间样品,发现PVX在马铃薯上发病很普遍. 展开更多
关键词 马铃薯x病毒 单克隆抗体 ACP—ELISA
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马铃薯X病毒外壳蛋白基因在转基因烟草植株中的表达及抗病 被引量:5
15
作者 王春香 杨美珠 +1 位作者 潘乃穟 陈章良 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1993年第11期819-824,共6页
通过根癌农杆菌介导的叶盘法,将马铃薯X病毒外壳蛋白基因导入烟草细胞并获得大量再生的转基因烟草植株。经胭脂碱检测、酶联免疫分析和Western blot分析,证明已获得了具有马铃薯X病毒外壳蛋白基因表达的转基因烟草。用... 通过根癌农杆菌介导的叶盘法,将马铃薯X病毒外壳蛋白基因导入烟草细胞并获得大量再生的转基因烟草植株。经胭脂碱检测、酶联免疫分析和Western blot分析,证明已获得了具有马铃薯X病毒外壳蛋白基因表达的转基因烟草。用2μg/ml的PVX磨擦接种烟草,8天后进行观察,发现对照植株开始发病,而转基因烟草植株在20后才开始发病,有的转基因烟草植株在整个生长期中都不得病。 展开更多
关键词 马铃薯x病毒 外壳蛋白基因 烟草
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智能聪配施壳寡糖和褐藻寡糖对烟草生长和病毒抗性的影响 被引量:1
16
作者 张晓英 王胜 +3 位作者 王洪凤 王珊珊 王庆彬 石磊 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期41-46,74,共7页
智能聪(ZNC)是宛氏拟青霉Paecilomyces variotii的提取物,前期研究证明其具有促进植物生长,提高作物产量、品质和抗病的能力。为了进一步提高产品应用效果,本研究将智能聪分别与壳寡糖和褐藻寡糖复配,评价其对烟草生长和病毒病抗性的影... 智能聪(ZNC)是宛氏拟青霉Paecilomyces variotii的提取物,前期研究证明其具有促进植物生长,提高作物产量、品质和抗病的能力。为了进一步提高产品应用效果,本研究将智能聪分别与壳寡糖和褐藻寡糖复配,评价其对烟草生长和病毒病抗性的影响。结果表明,智能聪与壳寡糖或褐藻寡糖复配后的促生效果和对马铃薯X病毒(potato virus X,PVX)的抑制作用优于单剂,其中促生效果最佳的为0.05μg/mL智能聪与12μg/mL褐藻寡糖复配,处理后烟草株高、根长、侧根数、鲜重和干重分别比单施褐藻寡糖增加26.31%、20.41%、23.20%、23.60%和31.03%;对PVX病毒抑制作用最好的是0.05μg/mL智能聪与30μg/mL壳寡糖复配,对PVX抑制率为71.26%。研究结果可为防治烟草花叶病的药剂复配选择提供依据。 展开更多
关键词 马铃薯x病毒 智能聪 促生 抗病 壳寡糖 褐藻寡糖
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马铃薯X病毒黑龙江分离物外壳蛋白基因克隆与序列分析 被引量:5
17
作者 张威 白艳菊 +5 位作者 申宇 高艳玲 范国权 耿宏伟 王魏 孟宪欣 《黑龙江农业科学》 2010年第8期1-5,共5页
马铃薯X病毒(Potatovirus X,PVX)是重要的马铃薯病毒之一,几乎分布于全国所有马铃薯种植区域,严重影响马铃薯的产量和品质。对其建立RT—PCR分子检测体系以及对其外壳蛋白(CP)基因进行序列分析尤为重要。根据已报道的PVX的核苷... 马铃薯X病毒(Potatovirus X,PVX)是重要的马铃薯病毒之一,几乎分布于全国所有马铃薯种植区域,严重影响马铃薯的产量和品质。对其建立RT—PCR分子检测体系以及对其外壳蛋白(CP)基因进行序列分析尤为重要。根据已报道的PVX的核苷酸序列设计合成1对引物,以带毒植株总RNA为模板,应用RT—PCR方法,克隆了PVX黑龙江分离物(P2)全长CP基因序列。序列分析表明:P2CP基因全长711bp,编码237个氨基酸残基,与GenBank中17个不同分离物的CP核苷酸序列同源性为75.5%~96.3%,氨基酸序列同源性为89.4%~99.2%。依据PVX CP氨基酸序列建立系统进化树,将PVX不同分离物划分为两大类群,P2与PVX中国分离物亲缘关系较近,同属于类型Ⅱ,表现一定的地域相关性。同时,应用该RT—PCR分子检测体系进行马铃薯样品检测。 展开更多
关键词 马铃薯x病毒 外壳蛋白 核苷酸 序列分析 亲缘关系
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复合侵染的马铃薯花叶病病原诊断 被引量:3
18
作者 宋西娇 谢礼 +3 位作者 宣裕吉 王芳 严成其 陈剑平 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第1期99-105,共7页
2015年在浙江宁波发现感病马铃薯植株具有马铃薯花叶病的典型症状,即植株矮化,叶片花叶、皱缩。透射电镜负染色发现,其叶片中含有长度约600~900和400 nm的线状病毒粒子。超薄切片发现,病毒主要集中在叶肉细胞,产生的内含体包括病毒样粒... 2015年在浙江宁波发现感病马铃薯植株具有马铃薯花叶病的典型症状,即植株矮化,叶片花叶、皱缩。透射电镜负染色发现,其叶片中含有长度约600~900和400 nm的线状病毒粒子。超薄切片发现,病毒主要集中在叶肉细胞,产生的内含体包括病毒样粒子聚集体、串珠-片层内含体和柱状内含体。串珠-片层内含体代表马铃薯X属特征,柱状内含体代表马铃薯Y属特征,表明可能存在复合侵染,并且2种不同病毒引起的内含体被发现于同一细胞。使用马铃薯Y属病毒通用引物以及针对马铃薯X病毒设计的特异性引物进行RT-PCR扩增及测序,明确其为马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)和马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)复合侵染。 展开更多
关键词 马铃薯花叶病 马铃薯x病毒 马铃薯Y病毒 复合侵染 病原诊断
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兼抗黄瓜花叶病毒和马铃薯X病毒弱毒疫苗的创制
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作者 刘春菊 杜传印 +5 位作者 魏军 刘宏 李斐 方敏 于成明 原雪峰 《中国烟草科学》 CSCD 北大核心 2023年第1期44-50,共7页
黄瓜花叶病毒(CMV)和马铃薯X病毒(PVX)在烟草中普遍存在、危害严重,对烟草产业健康发展有重大影响。为预防田间烟草上黄瓜花叶病毒和马铃薯X病毒,需要构建能够同时预防CMV和PVX的弱毒疫苗。本研究首先构建了CMV RNA2的2b蛋白提前终止突... 黄瓜花叶病毒(CMV)和马铃薯X病毒(PVX)在烟草中普遍存在、危害严重,对烟草产业健康发展有重大影响。为预防田间烟草上黄瓜花叶病毒和马铃薯X病毒,需要构建能够同时预防CMV和PVX的弱毒疫苗。本研究首先构建了CMV RNA2的2b蛋白提前终止突变体pCB301-CMVFny-R2-2bPT,在此突变体中插入200 bp的PVX保守序列(5890-6089)获得突变体质粒pCB301-CMVFny-R2-2bPT-PVX5890-6089。该突变体质粒与含野生型CMVFny RNA1和CMVFny RNA3的质粒等量混合后通过农杆菌浸润方法分别接种中烟100、红花大金元和林烟草,接种后烟草症状与野生型CMVFny-RNA1+RNA2+RNA3混合接种烟草症状相比显示弱侵染性。疫苗遗传稳定性检测证实疫苗载体中插入的PVX 200 bp保守片段稳定存在,CMV和PVX强毒株系攻毒试验表明该弱毒疫苗在中烟100上对CMV和PVX同时具备交叉保护作用。 展开更多
关键词 交叉保护 黄瓜花叶病毒 马铃薯x病毒 弱毒疫苗
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利用马铃薯X病毒表达载体在植物中表达非洲猪瘟病毒p30蛋白
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作者 武晓云 范馨月 +6 位作者 栾雅梦 柴孟竹 姜雪 杨英帅 王宇婷 郭亚婷 程晓非 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期21-27,78,共8页
由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的非洲猪瘟疫病(ASF)具有极高发病率和致死率,是我国一类动物疫病,对我国养猪产业造成重大威胁和巨大经济损失。p30蛋白是ASFV最主要结构蛋白之一,具有强烈免疫原性,是ASFV疫苗研发... 由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的非洲猪瘟疫病(ASF)具有极高发病率和致死率,是我国一类动物疫病,对我国养猪产业造成重大威胁和巨大经济损失。p30蛋白是ASFV最主要结构蛋白之一,具有强烈免疫原性,是ASFV疫苗研发重要靶标。利用马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)侵染性克隆,构建表达p30蛋白重组PVX载体,通过农杆菌浸润法验证在模式植物本氏烟中表达p30蛋白可行性。结果表明,重组PVX载体接种本氏烟后5 d,植株系统叶片出现花叶症状;接种11 d后,植株系统叶片明显坏死。RT-PCR和Western blot检测表明p30蛋白在本氏烟中成功表达。研究结果为进一步规模化生产植物源p30蛋白奠定坚实基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 p30蛋白 马铃薯x病毒 植物表达
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