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类猪圆环病毒因子P1感染对外周血单个核细胞Toll样受体mRNA转录的影响 被引量：4
1
作者 温立斌 何孔旺 +4 位作者 杨汉春 郭容利 钟书霖 俞正玉 茅爱华 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2010年第6期9-13,共5页
采用实时定量反转录多聚酶链反应方法,检测健康对照组及类圆环病毒因子P1感染组的猪外周血单个核细胞中TLRs mRNA的表达。结果表明,病毒感染后3 d,除TLR2和TLR10外,其余TLRs mRNA表达皆下调。此后不同时相感染组的TLRs mRNA表达水平基... 采用实时定量反转录多聚酶链反应方法,检测健康对照组及类圆环病毒因子P1感染组的猪外周血单个核细胞中TLRs mRNA的表达。结果表明,病毒感染后3 d,除TLR2和TLR10外,其余TLRs mRNA表达皆下调。此后不同时相感染组的TLRs mRNA表达水平基本都处于恢复、上调地位。具有明显变化的表现为感染后第24天和第40天,TLR2 mRNA的表达显著上调(P<0.05);此外,感染后第31天和第40天的TLR9 mRNA表达也呈现上调趋势(P<0.1)。结果提示,TLR2和TLR9介导的炎性反应可能在P1识别及其致病机制中起重要作用。 展开更多
关键词 类猪圆环病毒因子 TOLL样受体 外周血单个核细胞 实时定量PCR
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鹰嘴豆芽素A通过PPARα/γ抑制脂多糖诱导猪外周血单个核细胞炎性细胞因子的分泌 被引量：3
2
作者 邱龙 林一平 +3 位作者 林臻桢 林丽钦 戴爱玲 杨小燕 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期876-879,共4页
目的:研究鹰嘴豆芽素A对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导猪外周血单个核细胞分泌炎性细胞因子的影响。方法:用鹰嘴豆芽素A(50,100μmol/L)处理猪外周血单个核细胞,采用ELISA方法检测其对LPS刺激后细胞分泌肿瘤坏死因子(Tumor necros... 目的:研究鹰嘴豆芽素A对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导猪外周血单个核细胞分泌炎性细胞因子的影响。方法:用鹰嘴豆芽素A(50,100μmol/L)处理猪外周血单个核细胞,采用ELISA方法检测其对LPS刺激后细胞分泌肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素6(Interleukin-6,IL-6)的影响,并用RT-PCR法检测这些细胞因子mRNA的表达,用Western blot法检测核因子κB(Nuclear factorκB,NF-κB)由细胞浆移位至细胞核内情况以判断NF-κB活性变化;同时分别用过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)α的拮抗剂MK886和PPARγ的拮抗剂GW9662与鹰嘴豆芽素A共同处理猪外周血单个核细胞,观察鹰嘴豆芽素A在PPARα或PPARγ的活性被抑制时对NF-κB活性的影响。结果:鹰嘴豆芽素A能显著降低LPS诱导猪外周血单个核细胞的TNF-α、IL-6的分泌和mRNA的表达;同时鹰嘴豆芽素A显著抑制了LPS诱导猪外周血单个核细胞NF-κB的激活,而此抑制作用均被MK886或GW9662减弱。结论:鹰嘴豆芽素A可通过PPARα和PPARγ抑制LPS诱导猪外周血单个核细胞NF-κB的活化,从而下调LPS诱导的TNF-α、IL-6的生成。 展开更多
关键词 鹰嘴豆芽素A 猪外周血单个核细胞 过氧化物酶体增殖物激活受体 核因子ΚB 肿瘤坏死因子α 白介素6
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猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5重组蛋白对外周血单个核细胞功能的影响
3
作者 乌吉斯古楞 刘亭岐 +4 位作者 韩宇 宋前进 刘建奇 关平原 宋庆庆 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期854-859,共6页
为了研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5重组蛋白(rGP5)对猪外周血单个核细胞(PBMC)功能的影响,本研究选取PRRSV-PC疫苗株中的ORF5基因片段,对其进行原核表达并纯化,结果显示rGP5以可溶性和包涵体两种形式表达,分子质量约为30 ku;将... 为了研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5重组蛋白(rGP5)对猪外周血单个核细胞(PBMC)功能的影响,本研究选取PRRSV-PC疫苗株中的ORF5基因片段,对其进行原核表达并纯化,结果显示rGP5以可溶性和包涵体两种形式表达,分子质量约为30 ku;将该纯化蛋白免疫大耳白兔,按常规方法制备抗血清并进行酶联免疫吸附试验(ELISA),结果显示,纯化后的rGP5可以与PRRSV阳性血清特异性结合;制备的兔抗rGP5多克隆抗体效价高达1.64 000,可用于后续试验。无菌采集PRRSV阴性猪外周血并分离PBMC,加入终浓度为10μg/mL的rGP5体外培养后,采用间接免疫荧光试验(IFA)检测重组蛋白与PBMC的结合,结果显示rGP5与PBMC共培养1 h后,PBMC出现红色荧光,表明r GP5可以结合PBMC。进一步采用不同浓度的rGP5体外刺激猪PBMC,利用ELISA方法检测淋巴细胞中IL-10、IFN-γ、TGF-β1及TNF-α的分泌水平,同时采用CCK-8细胞增殖检测试剂盒测定rGP5对PBMC增殖的影响,以及不同浓度的rGP5刺激PBMC分泌NO的情况,结果显示,不同浓度的rGP5均显著促进PBMC细胞因子IL-10、IFN-γ和TNF-α的分泌(p<0.05);同时rGP5能够促进PBMC增殖(p<0.05),也能增加NO分泌(p<0.05),上述结果表明GP5是PRRSV重要的抗原,发挥着重要的免疫作用。本实验首次研究了rGP5对猪PBMC免疫功能的影响,揭示PRRSV影响宿主免疫反应的具体机制,有助于阐明PRRSV与宿主细胞相互作用的分子基础,为进一步研究其免疫保护性提供了实验依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5蛋白 外周血单个核细胞 细胞因子
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猪圆环病毒2型对外周血单核细胞中PD-1,PD-L1和IL-21转录水平的影响
4
作者 朱艳平 何勇 +7 位作者 刘佳 朗梦圆 岳锋 郭东光 李鹏 孙丽莎 马广飞 王选年 《动物医学进展》 北大核心 2021年第8期14-20,共7页
用猪圆环病毒2型(PCV2)体外感染外周血单核细胞,建立荧光定量PCR方法检测PCV2的病毒载量;同时,在PCV2感染后12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72h收集细胞,抽提RNA进行反转录,检测PD-1、PD-L1和IL-21的转录水平变化,分析评价PCV2感染对PD-... 用猪圆环病毒2型(PCV2)体外感染外周血单核细胞,建立荧光定量PCR方法检测PCV2的病毒载量;同时,在PCV2感染后12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72h收集细胞,抽提RNA进行反转录,检测PD-1、PD-L1和IL-21的转录水平变化,分析评价PCV2感染对PD-1、PD-L1和IL-21的转录水平变化的影响。结果显示,PD-1在感染外周血单核细胞后72 h显著升高,达到峰值;PD-L1在感染后转录水平都显著升高,48 h达到峰值;IL-21在感染后48 h转录水平最低。结果表明,PCV2不仅能够在体外感染外周血单核细胞,而且随着病毒载量的增加,导致PD-1、PD-L1和IL-21的转录水平显著升高。以上结果表明,PCV2感染导致PD-1、PD-L1和IL-21的转录水平升高,通过激活PD-1/PD-L1通路,从而抑制IL-21的转录水平;相反,IL-21刺激PD-1、PD-L1的转录水平升高。研究结果为探索PCV2的致病机制和控制PCV2的感染提供了理论基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 猪外周血单核细胞 PD-1 PD-L1 白细胞介素21 转录水平
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