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猪环状病毒2型的PCR检测方法的建立及应用 被引量：65
1
作者 曹胜波 陈焕春 +3 位作者 肖少波 何启盖 徐引弟 刘军发 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期53-56,共4页
根据国外已发表的猪环状病毒 2型 (PCV 2 )的全基因组序列 ,设计一对 2型特异性引物 ,对可疑病料进行PCR扩增。将扩增产物连接到pMD 18 T载体上并克隆到大肠杆菌DH5α中 ,经提取质粒进行PCR、酶切、测序鉴定 ,证明扩增出了PCV 2的目的... 根据国外已发表的猪环状病毒 2型 (PCV 2 )的全基因组序列 ,设计一对 2型特异性引物 ,对可疑病料进行PCR扩增。将扩增产物连接到pMD 18 T载体上并克隆到大肠杆菌DH5α中 ,经提取质粒进行PCR、酶切、测序鉴定 ,证明扩增出了PCV 2的目的片段。将测序结果与GenBank收录的PCV 2序列进行比较 ,发现同源性均在90 %以上。用该PCR方法在 43份可疑病料中检测到了 12份PCV 2阳性病料 。 展开更多
关键词 猪环状病毒2型 检测方法 聚合酶链反应
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中国人丙型肝炎病毒基因组的一级结构及其变异 被引量：73
2
作者 毕胜利 白宪鹤 +4 位作者 丛勉尔 田厚文 孙得贵 H.S.Margolis 刘崇柏 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第2期114-127,共14页
自河北省固安县和上海市的两份急性丙型肝炎病人血清分离丙型肝炎病毒RNA,纯化后经反转录和聚合酶链反应(PCR)获得覆盖病毒基因组全长的cDNA片段。通过对河北株丙型肝炎病毒基因全部cDNA序列的分析,以及对上海株丙型肝炎病毒部分重要区... 自河北省固安县和上海市的两份急性丙型肝炎病人血清分离丙型肝炎病毒RNA,纯化后经反转录和聚合酶链反应(PCR)获得覆盖病毒基因组全长的cDNA片段。通过对河北株丙型肝炎病毒基因全部cDNA序列的分析,以及对上海株丙型肝炎病毒部分重要区域cDNA序列的分析,确定了中国人丙型肝炎病毒基因cDNA的一级结构和变异趋势。实验结果表明,中国人丙型肝炎病毒的基因结构同日本与美国研究人员最初分离的丙型肝炎病毒基因结构相似。以中国河北株与日本HCV-J株比较,病毒基因有771个核苷酸不同,两者同源性为91.8％;氨基酸残基有174个不同,其同源性为94.3％。与美国HCV-1株相比,中国河北株有2011个棱苷酸发生变化,同源性为78.6％;氨基酸残基有458个发生变化,同源性为84.9％。河北与上海两株比较的结果发现,各区域变异程度大小不同,以E2基因区最高,NS3—NS4,NS5高度保守。总体水平上分析,我国的两株丙型肝炎病毒基因虽有变异,但总变异率很低,并且变异主要发生在结构基因区域。而与国外丙型肝炎病毒相比,变异则贯穿于全基因。表明中国丙型肝炎病毒基因组在核苷酸水平上有一定的共同特征。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 聚合酶链反应 结构
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PCR制备地高辛标记的探针检测禽流感病毒核酸 被引量：37
3
作者 黄庚明 辛朝安 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2001年第12期3-7,共5页
用聚合酶链反应 (PCR)技术 ,制备了广东禽流感无致病力分离株 A/goose/China/2 4/96 (H7N3 )核蛋白基因片段(NPc)的地高辛标记的 c DNA探针。建立并优化了检测禽流感病毒核酸的探针杂交法 ,探针杂交法能鉴别出非免疫鸡胚和SPF鸡胚尿囊... 用聚合酶链反应 (PCR)技术 ,制备了广东禽流感无致病力分离株 A/goose/China/2 4/96 (H7N3 )核蛋白基因片段(NPc)的地高辛标记的 c DNA探针。建立并优化了检测禽流感病毒核酸的探针杂交法 ,探针杂交法能鉴别出非免疫鸡胚和SPF鸡胚尿囊液中的病毒 ,攻毒后第 3天的 SPF和非免疫鸡泄殖腔拭子中 AIV的最大检出率为 1/10 ,对临床样品中的 AIV的最大检出率为 1/7,而直接 HA和 HI法及 AGP试验检不出临床样品的 AIV。该探针具有较好的特异性和敏感性 ,为从分子水平探讨 AIV的发病机理、临床早期快速诊断提供了新的研究手段。 展开更多
关键词 地高辛标记 pcr探针 禽流感病毒 核酸检测 禽流感
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乙型肝炎病毒感染者HLADRB基因分型及其相关性研究 被引量：34
4
作者 刘建平 林辉 宋建勇 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期354-356,共3页
目的探索乙肝病毒(HBV)感染者HLA DRB基因频率及其与疾病的相关性。方法用PCR SSP对重庆地区汉族乙肝患者40例和正常人120名进行HLA DRB基因分型 ,结合临床病型与HBV复制状态作相关性分析。结果重庆地区汉族正常人以DR2(15)、DR5(12)、D... 目的探索乙肝病毒(HBV)感染者HLA DRB基因频率及其与疾病的相关性。方法用PCR SSP对重庆地区汉族乙肝患者40例和正常人120名进行HLA DRB基因分型 ,结合临床病型与HBV复制状态作相关性分析。结果重庆地区汉族正常人以DR2(15)、DR5(12)、DR9 位点常见 ,乙肝患者与之比较DR3 基因频率明显增高(P<0.05) ,DR5(12)、DR7 基因频率也有增高 ,均见于慢性乙肝和肝硬化 ,相对危险度DR3 为2.4,DR7 为2.0。DR7基因多见于HBV高复制状态 ,相对危险度为2.4。结论HLA DR3 基因与重庆地区汉族慢性乙肝和肝硬化相关 ,DR7 与HBV高复制状态有关 ;免疫遗传因素参与慢性乙肝的发病机制。 展开更多
关键词 基因分型 乙型肝炎 HBV HLA-DRB
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聚合酶链式反应技术在肾综合征出血热病毒基因分型中的应用 被引量：38
5
作者 李盈盈 杭长寿 +1 位作者 刘旭 宋干 《中华实验和临床病毒学杂志》 CSCD 1994年第1期20-25,共6页
用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法对２５株国内外病毒进行分型。病毒ＲＮＡ逆转录成ｃＤＮＡ后，用Ⅰ型（ＨＡＮ）和Ⅱ型（Ｒ２２）两种分型引物进行体外扩增。产物经凝胶电泳、核苷酸序列分析和打点杂交等技术证实其特异性。结果表明，Ⅰ... 用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法对２５株国内外病毒进行分型。病毒ＲＮＡ逆转录成ｃＤＮＡ后，用Ⅰ型（ＨＡＮ）和Ⅱ型（Ｒ２２）两种分型引物进行体外扩增。产物经凝胶电泳、核苷酸序列分析和打点杂交等技术证实其特异性。结果表明，Ⅰ型引物仅扩增野鼠型病毒ｃＤＮＡ；Ⅱ型引物也只扩增家鼠型病毒，无交叉反应。扩增片段的大小与预计一致。两种引物和探针可将２５株病毒明确地分为两种基因型，与血清学分型结果完全吻合。 展开更多
关键词 肾综合征 出血热病毒 pcr 基因
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北江河水中抗生素抗性基因污染初步研究 被引量：40
6
作者 邹世春 朱春敬 +3 位作者 贺竹梅 栾天罡 徐维海 张干 《生态毒理学报》 CAS CSCD 2009年第5期655-660,共6页
环境中细菌的耐药性,尤其是对抗生素的耐药性已成为影响生态环境的重要因素.论文采用抗生素抗性平板法调查了北江河水中四环素、红霉素及磺胺类这3类抗生素耐药性细菌的存在,采用定性PCR及荧光定量PCR方法分别研究了该水域sul1和sul2这... 环境中细菌的耐药性,尤其是对抗生素的耐药性已成为影响生态环境的重要因素.论文采用抗生素抗性平板法调查了北江河水中四环素、红霉素及磺胺类这3类抗生素耐药性细菌的存在,采用定性PCR及荧光定量PCR方法分别研究了该水域sul1和sul2这2种磺胺类抗生素抗性基因（ARGs）的存在和含量水平.结果表明,所采集北江水域的9个样品中有5个对四环素有耐药性,7个对红霉素有耐药性,8个对磺胺二甲嘧啶有耐药性;定性PCR实验并经基因测序结果证实,5个样品含有sul1,4个样品含有sul2.进一步的PCR定量分析结果显示,7个样品中均检出sul1和sul2磺胺抗性基因,它们与内对照基因16S-rRNA表达量比值分别在10-2.56~10-0.52及10-3.25~10-1.24范围内,该结果显著高于美国科罗拉多州北部河流的研究结果.此外,数据分析也发现,sul1和sul2磺胺抗性基因的含量水平与该区域水中磺胺含量分布具有一定的相关性,表明外源性抗生素对河流的污染是诱导抗性基因的重要因素. 展开更多
关键词 抗生素抗性基因 耐药性 聚合酶链反应(pcr) 荧光定量pcr 北江 珠三角
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应用聚合酶链反应对我国不同来源肾综合征出血热病霉的型别分析 被引量：39
7
作者 姚智慧 俞永新 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第2期128-135,共8页
应用聚合酶链反应（ＰＣＲ），对分离自不同地区、不同宿主来源的２６株肾综合征出血热病毒进行了分型，其中包括４个型别的国际标准株，用异硫氰酸胍－酚－氯仿方法从感染的Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞中提取总ＲＮＡ，设计了５对寡核苷酸引物... 应用聚合酶链反应（ＰＣＲ），对分离自不同地区、不同宿主来源的２６株肾综合征出血热病毒进行了分型，其中包括４个型别的国际标准株，用异硫氰酸胍－酚－氯仿方法从感染的Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞中提取总ＲＮＡ，设计了５对寡核苷酸引物，一对为汉坦病毒特异性引物；４对为不同型特异性引物。ＰＣＲ分型表明，２６株中除１株Ｒｒ可同时被汉坦（ＨＹＮ）和Ｓｅｏｕｌ（ＳＥＯ）两型特异性引物扩增外，其余２５株分别只被４个型别引物中的一个所扩增，依次为ＨＴＮ１６株，ＳＥＯ７株，Ｐｕｕｍａｌａ（ＰＵＵ）１株，ＰｒｏｓｐｅｃｔＨｉｌｌ（ＰＨ）１株。ＰＣＲ分型的结果与空斑减少中和试验完全一致，表明ＰＣＲ可以对肾综合征出血热病毒准成分型。应用限制性内切酶分析了扩增产物，结果与理论基本一致，证实了扩增产物的特异性。 展开更多
关键词 肾病综合征 出血热 聚合酶链反应
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血浆EB病毒游离DNA检测对监测鼻咽癌患者预后的意义 被引量：30
8
作者 曹素梅 闵华庆 +6 位作者 高劲松 洪明晃 肖锡宾 张昌卿 刘晓东 张爱兰 郭翔 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第3期302-306,共5页
背景与目的:有报道,测定血浆中的EB病毒游离DNA(EBV-DNA)的拷贝数可作为诊断及监测鼻咽癌患者病情变化的手段之一。本研究旨在评价血浆EBV-DNA检测在鼻咽癌患者预后监测上的价值,并进一步与VCA/IgA、EA/IgA进行比较。方法:比较鼻咽癌放... 背景与目的:有报道,测定血浆中的EB病毒游离DNA(EBV-DNA)的拷贝数可作为诊断及监测鼻咽癌患者病情变化的手段之一。本研究旨在评价血浆EBV-DNA检测在鼻咽癌患者预后监测上的价值,并进一步与VCA/IgA、EA/IgA进行比较。方法:比较鼻咽癌放疗后30例远处转移患者、22例局部复发患者、24例无瘤生存者血浆中EBV-DNA、VCA/IgA、EA/IgA水平。分别应用荧光定量PCR方法检测血浆EBV-DNA水平,免疫酶法检测VCA/IgA、EA/IgA;前瞻性观察20例初诊鼻咽癌患者放疗前、放疗剂量达40Gy时及放疗结束时上述指标的变化。结果:放疗后各组不同预后患者的血浆EBV-DNA含量的中位数有显著性差异,远处转移组为135100copies/ml(四分线区域5525～1003750copies/ml)>局部复发组的20500(四分线区域0～58500copies/ml)>无瘤生存组的0copy/ml(四分线区域0～0copy/ml),P均<0.05。远处转移组的血浆EBV-DNA水平高者较多,当阳性标准为1000000copies/ml时,诊断远处转移组的敏感性为27.3%,而诊断局部复发组的敏感性为0.0%,特异性均为100.0%。在初诊患者放疗前、放疗剂量达40Gy时及放疗结束时,EBV-DNA水平逐渐降低,平均含量分别为32050copies/ml(四分线区域3880～317750copies/ml)、0copy/ml(四分线区域0～14375copies/ml)。 展开更多
关键词 EB病毒 DNA 鼻咽肿瘤 聚合酶链反应 预后
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PCR法快速检测鸭疫里氏杆菌的研究 被引量：26
9
作者 杨建远 邓舜洲 何后军 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期439-442,共4页
根据Gen-Bank中25株鸭疫里氏杆菌(RA)的外膜蛋白A(OmpA)基因序列,在其高度保守区设计了一对特异性引物,成功地建立了鸭疫里氏杆菌的快速、准确PCR检测方法。RA参考菌株J04(2型)、J07(JX1型)均能扩增出671bp的特异性目的条带,而对鸭源大... 根据Gen-Bank中25株鸭疫里氏杆菌(RA)的外膜蛋白A(OmpA)基因序列,在其高度保守区设计了一对特异性引物,成功地建立了鸭疫里氏杆菌的快速、准确PCR检测方法。RA参考菌株J04(2型)、J07(JX1型)均能扩增出671bp的特异性目的条带,而对鸭源大肠杆菌、鸭源多杀性巴氏杆菌、鸭源沙门氏菌、鸭源葡萄球菌的扩增结果均为阴性。PCR产物经EcoRI酶切鉴定得494bp和177bp两个预期条带。最低检出基因组DNA浓度为800fg。用全菌体进行PCR时,本实验室分离鉴定的60株RA均能够扩增出特异性目的条带。25份临床疑似病例的分离菌株的PCR扩增阳性率与生化鉴定率完全一致。该方法表明能从病料组织培养8h的混合菌群中快速、准确地检测到RA,可用于RA的快速诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 鸭疫里氏杆菌 快速检测 pcr法 pcr检测方法 多杀性巴氏杆菌 流行病学调查 特异性引物 pcr产物 DNA浓度 pcr扩增 基因序列 外膜蛋白 大肠杆菌 沙门氏菌 葡萄球菌 酶切鉴定 分离鉴定 生化鉴定 分离菌株 疑似病例 组织培养
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牛奶样品中志贺氏菌的快速PCR检测技术研究 被引量：27
10
作者 胡建华 李洁莉 +1 位作者 马兆飞 陆玲 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第8期433-437,共5页
建立牛奶中快速检测志贺氏菌的有效方法。根据GenBank公布的志贺氏菌ipaH基因的保守序列设计特异性引物,筛选合适的DNA模板制备方法,采用快速常规PCR和定量实时PCR结合,对培养液中及牛奶阳性样品中的志贺氏菌进行检测,检测敏感度可达到2... 建立牛奶中快速检测志贺氏菌的有效方法。根据GenBank公布的志贺氏菌ipaH基因的保守序列设计特异性引物,筛选合适的DNA模板制备方法,采用快速常规PCR和定量实时PCR结合,对培养液中及牛奶阳性样品中的志贺氏菌进行检测,检测敏感度可达到2CFU/ml,检出时间小于20h。新建的PCR方法具有特异性好,灵敏度高等特点,适用于快速、准确检测牛奶中志贺氏菌的需要。 展开更多
关键词 pcr:志贺氏菌 ipaH:牛奶 REAL-TIME pcr
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柑桔黄龙病病原DNA片段的克隆及序列分析 被引量：28
11
作者 孔维文 邓晓玲 +1 位作者 梁志慧 唐伟文 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期71-75,共5页
本研究利用聚合酶链式反应技术 (PCR) ,合成了中国柑桔黄龙病病原的一段 DNA片段。将此片段插入到 p UC18的 Eco RI位点 ,并转化进大肠杆菌 (Escherichia coli)的 DH5α菌株中。通过 PCR鉴定 ,限制性内切酶 (Eco RI)酶切分析及核苷酸序... 本研究利用聚合酶链式反应技术 (PCR) ,合成了中国柑桔黄龙病病原的一段 DNA片段。将此片段插入到 p UC18的 Eco RI位点 ,并转化进大肠杆菌 (Escherichia coli)的 DH5α菌株中。通过 PCR鉴定 ,限制性内切酶 (Eco RI)酶切分析及核苷酸序列分析 ,均表明克隆成功。序列分析结果显示 ,克隆片段与已知相应序列间同源性达 98.6 %。该研究为制备柑桔黄龙病病原 DNA分子探针奠定了基础。 展开更多
关键词 柑桔黄龙病 克隆 序列分析 pcr技术 病原
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快速检测柑桔黄龙病病原的研究 被引量：26
12
作者 邓晓玲 梁志慧 唐伟文 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期1-4,共4页
应用ＰＣＲ技术对柑桔黄龙病病原ＤＮＡ进行体外扩增，可建立一套快速、准确、有效的检测该病原的方法研究结果表明：ＰＣＲ技术对柑桔黄龙病病原的检测具有很强的特异性，只有感染了黄龙病病原的样品，ＰＣＲ才呈阳性反应文章报道... 应用ＰＣＲ技术对柑桔黄龙病病原ＤＮＡ进行体外扩增，可建立一套快速、准确、有效的检测该病原的方法研究结果表明：ＰＣＲ技术对柑桔黄龙病病原的检测具有很强的特异性，只有感染了黄龙病病原的样品，ＰＣＲ才呈阳性反应文章报道了应用ＰＣＲ技术能检测已带病但尚未显症状的柑桔黄龙病病株该检测技术可以对柑桔黄龙病进行早期诊断，及早地控制带病苗木的传播。 展开更多
关键词 柑桔 黄龙病 pcr 检测
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海南省汉、黎族人群缺失型α-地中海贫血的研究 被引量：31
13
作者 周代锋 王政 +2 位作者 蔡兰洁 王小英 蔡望伟 《中国热带医学》 CAS 2006年第9期1549-1551,共3页
目的研究海南省汉、黎族人群中东南亚型缺失(--SEA)、右侧缺失(-α3.7)和左侧缺失(-α4.2)三种α-地中海贫血缺失突变的携带率、基因频率及基因型的分布特点。方法应用聚合酶链反应(PCR)技术直接筛查海南省汉、黎族人群中的东南亚型缺失... 目的研究海南省汉、黎族人群中东南亚型缺失(--SEA)、右侧缺失(-α3.7)和左侧缺失(-α4.2)三种α-地中海贫血缺失突变的携带率、基因频率及基因型的分布特点。方法应用聚合酶链反应(PCR)技术直接筛查海南省汉、黎族人群中的东南亚型缺失(--SEA)、右侧缺失(-α3.7)和左侧缺失(-α4.2)三种α-地中海贫血缺失突变。结果在197例海南汉族人中检出25例α-地中海贫血携带者,携带率为12.69%;三种α-地中海贫血缺失突变的基因频率为0.0635,其中--SEA、-α3.7和-α4.2的基因频率分别为0.0127、0.0305、0.0203,共发现--SEA/αα、-α3.7/αα和-α4.2/αα三种基因型,其中--SEA/αα5例,-α3.7/αα12例,-α4.2/αα8例。在201例海南黎族人中检出114例α-地中海贫血携带者,携带率为56.72%,三种α-地中海贫血缺失突变的基因频率为0.3607,其中--SEA、-α3.7和-α4.2的基因频率分别为0.3607、0.0075、0.1891,共发现--SEA/αα、-α3.7/αα、-α3.7/-α3.7、-α3.7/-α4.2、-α4.2/αα、和-α4.2/-α4.2六种基因型,其中--SEA/αα3例,-α3.7/αα39例,-α3.7/-α3.76例,-α3.7/-α4.218例,-α4.2/αα38例,-α4.2/-α4.210例。结论海南省汉、黎族人群是α-地中海贫血的高发群体。 展开更多
关键词 地中海贫血 聚合酶链反应(pcr) 少数民族 海南省
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三角叶滨藜甜菜碱醛脱氢酶(BADH)基因的克隆及序列分析 被引量：26
14
作者 何晓兰 侯喜林 +3 位作者 吴纪中 刘桂华 钦佩 朱卫民 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期15-19,共5页
以藜科植物山菠菜甜菜碱醛脱氢酶 (BADH)基因的保守区设计引物 ,通过RT PCR技术 ,从三角叶滨藜cDNA中分离了两个BADH基因片段BADH3 和BADH5,并利用巢式PCR、cRACE以及 3′ RACE获得全长BADH3 。测序结果表明 ,BADH3 和BADH5之间的核苷... 以藜科植物山菠菜甜菜碱醛脱氢酶 (BADH)基因的保守区设计引物 ,通过RT PCR技术 ,从三角叶滨藜cDNA中分离了两个BADH基因片段BADH3 和BADH5,并利用巢式PCR、cRACE以及 3′ RACE获得全长BADH3 。测序结果表明 ,BADH3 和BADH5之间的核苷酸同源性为 81 % ,其推测的氨基酸序列同源性 80 %。全长BADH3 核苷酸序列长 1 81 5bp ,79～ 1 5 78bp为一个开放阅读框架 ,推测的氨基酸序列全长 5 0 0个氨基酸残基 ,相对分子质量为 5 4 70 0 ,pI为 5 5。其核苷酸序列和推测的氨基酸序列与山菠菜同源性分别为 95 %和 93%。由三角叶滨藜 3′端部分BADH基因的克隆gBADH1 和gBADH2 推测的外显子序列分别与BADH5和BADH3 完全一致 ,且gBADH1 和gBADH2 的内含子插入位置和大小有较大差异。表明三角叶滨藜BADH基因是一个多基因家族 ,至少存在 展开更多
关键词 三角叶滨藜 甜菜碱醛脱氢酶 基因克隆 序列分析 RT-pcr技术
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肉类掺假鉴别技术研究进展 被引量：31
15
作者 王守云 袁明美 +2 位作者 封聪 冯雪松 姜泓 《肉类研究》 北大核心 2017年第4期56-61,共6页
随着现代分析检测技术的发展,肉类掺假鉴别技术也得到了长足的发展,主要包括感官鉴定技术、酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)技术、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术及生物质谱技术等。在这些... 随着现代分析检测技术的发展,肉类掺假鉴别技术也得到了长足的发展,主要包括感官鉴定技术、酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)技术、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术及生物质谱技术等。在这些技术中,感官鉴定技术操作简单,但准确度还有待改进。ELISA技术已有商品化试剂盒,由于受蛋白活性的影响,使其应用范围受到限制。PCR技术具有检测灵敏度高、结果重复性好等优势,但操作繁琐耗时。生物质谱技术通过多肽鉴定肉类掺假成为了一个新的发展方向。本文综述了现阶段常见肉类成分的检测技术,并对各种肉类掺假鉴别技术进行总结与分析,期望为肉类食品安全监测提供理论参考。 展开更多
关键词 肉类掺假 鉴别技术 感官鉴定技术 酶联免疫吸附 聚合酶链式反应 生物质谱
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利用PCR法鉴定产SLT-IIe大肠杆菌 被引量：24
16
作者 徐建生 成大荣 +1 位作者 董国雄 李俊宝 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第5期339-340,共2页
类志贺氏菌毒素Ⅱ型变异体（ Ｓｈｉｇａｌｉｋｅ Ｔｏｘｉｎ Ⅱ Ｖａｒｉａｎｔ， Ｓ Ｌ ＴⅡｖ ｏｒ Ｓ Ｌ ＴⅡｅ），是仔猪水肿病的主要致病因子。根据 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ 基因序列，合成一对针对 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ 操纵子基... 类志贺氏菌毒素Ⅱ型变异体（ Ｓｈｉｇａｌｉｋｅ Ｔｏｘｉｎ Ⅱ Ｖａｒｉａｎｔ， Ｓ Ｌ ＴⅡｖ ｏｒ Ｓ Ｌ ＴⅡｅ），是仔猪水肿病的主要致病因子。根据 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ 基因序列，合成一对针对 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ 操纵子基因保守区的寡核苷酸引物，建立了聚合酶链式反应（ Ｐ Ｃ Ｒ）扩增方法。通过对产 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ 毒素大肠杆菌菌株 Ｔ Ｂ１、产 Ｓ Ｌ ＴⅡ毒素大肠杆菌菌株 ９３３ Ｗ 和产 Ｓ Ｌ ＴⅠ毒素大肠杆菌菌株 Ｈ３０ 的试验，结果表明用所设计的引物建立的 Ｐ Ｃ Ｒ方法可特异性鉴定产 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ 大肠杆菌。用此法对本实验室从患水肿病仔猪肠道分离的 １５ 株大肠杆菌进行了鉴定，结果可从 １５ 个菌株的 １２ 株中扩增到 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ 的特异性保守序列基因片段，而其它菌株未见此保守序列的基因片段。 展开更多
关键词 猪 水肿病 大肠杆菌 SLT-Ⅱe 特异序列 pcr
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RT-PCR检测猪瘟病毒初探 被引量：24
17
作者 罗廷荣 波丹 +7 位作者 黄宪高 梁家权 刘芳 黄伟坚 秦爱珍 温荣辉 陆芹章 余克伦 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 2001年第1期17-20,共4页
本研究建立了反转录聚合酶链反应 ( RT PCR)技术检测猪瘟病毒 ( Hog Cholera Virus,HCV)方法。合成的二对引物 HCV 1 / HCV 2和 HCV A1 / HCV A2成功地扩增兔化弱毒株、法国株和石门株的核酸 ,并对采自博白县 3个、贵港市 1个和武宣县 ... 本研究建立了反转录聚合酶链反应 ( RT PCR)技术检测猪瘟病毒 ( Hog Cholera Virus,HCV)方法。合成的二对引物 HCV 1 / HCV 2和 HCV A1 / HCV A2成功地扩增兔化弱毒株、法国株和石门株的核酸 ,并对采自博白县 3个、贵港市 1个和武宣县 1个猪场共 1 3份病料进行检测。结果从博白县和贵港市的 1 1份材料中检测到 HCV的核酸。 展开更多
关键词 反转录-聚合酶链反应 猪瘟病毒 检测
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重庆地区婴幼儿轮状病毒腹泻VP7型别分析 被引量：22
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作者 张静 王宁遂 +1 位作者 邓兵 朱静 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期300-303,共4页
目的　研究重庆地区 1998～ 2 0 0 0年度秋冬季婴幼儿轮状病毒腹泻分子流行病学。方法　采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)扩增婴幼儿腹泻便样中的编码轮状病毒VP7蛋白的全基因片段 (10 6 2bp) ,再用巢式 聚合酶链反应 (net PCR)对扩... 目的　研究重庆地区 1998～ 2 0 0 0年度秋冬季婴幼儿轮状病毒腹泻分子流行病学。方法　采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)扩增婴幼儿腹泻便样中的编码轮状病毒VP7蛋白的全基因片段 (10 6 2bp) ,再用巢式 聚合酶链反应 (net PCR)对扩增得到的VP7基因进行分型。同时利用核苷酸序列分析方法进行分型。结果　在 1998～ 1999年度 130例婴幼儿腹泻便样中VP7基因阳性者 5 0例 (38.46 % ) ,其中G1型占 88% (4 4/5 0 ) ,G3型占 8% (4 /5 0 ) ,混合型占 4% (2 /5 0 ) ,均为G1+G3型 ;而 1999～ 2 0 0 0年度轮状病毒流行季节采集的 112份标本中VP7基因扩增阳性者 38例(33.93% ) ,其中G3型占 78.95 % (30 /38) ,G1型占 13.16 % (5 /38) ,混合型占 7.89% (3/38) ,均为G1+G3型。核苷酸序列分型结果与PCR分型结果一致。结论　重庆地区 1998～ 1999年度轮状病毒流行季节中流行的轮状病毒以G1型为主 ,而 1999～ 2 0 0 0年度轮状病毒流行季节中G3型为主 。 展开更多
关键词 轮状病毒 婴幼儿腹泻 VP7型别 聚合酶链反应 RT-pcr
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产生大环聚酮类天然产物放线菌的分子筛选研究 被引量：20
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作者 徐平 李文均 +5 位作者 张永光 唐蜀昆 高惠英 徐丽华 贺秉坤 姜成林 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期321-324,375,共5页
目的　建立一套简便、快速、高效的大环聚酮类化合物产生菌基因筛选体系 ,为聚酮类药物筛选搭建一个新的技术平台 ;认识 PKS- I基因在不同环境放线菌群中的分布规律 ,为新药筛选中微生物资源的定向分离提供依据。方法　通过对大环聚酮... 目的　建立一套简便、快速、高效的大环聚酮类化合物产生菌基因筛选体系 ,为聚酮类药物筛选搭建一个新的技术平台 ;认识 PKS- I基因在不同环境放线菌群中的分布规律 ,为新药筛选中微生物资源的定向分离提供依据。方法　通过对大环聚酮类化合物生物合成途径所用的 I型聚酮合成酶氨基酸和核苷酸序列的同源性比较分析 ,设计了一对引物用于扩增 KS/ AT功能域约 1.6 kb目的基因片段 ,依据放线菌基因组中 I型 PKS合成酶基因的存在与否标定可能的大环聚酮类天然产物产生菌。结果　利用建立的大环聚酮类化合物产生菌基因筛选体系对 98株嗜碱放线菌、99株链霉菌、46株嗜盐放线菌和 75 7株稀有放线菌进行了筛选 ,研究表明嗜碱放线菌、链霉菌、嗜盐放线菌和稀有放线菌 I型聚酮合成酶基因的阳性率分别为 2 6 .5 %、2 0 .4%、15 .2 %和 9.35 %。结论　利用组合放线菌基因组 DNA快速提取技术和 PKS- I基因兼并引物 PCR扩增技术建立了快速、简便、高效的大环聚酮类化合物产生菌基因筛选体系 ,并对不同环境条件的放线菌菌群的PKS- I基因分布进行了研究 ,结果不仅表明了放线菌 PKS I聚酮合成酶分布的广泛性 ,而且表明极端环境放线菌 ,尤其是嗜碱放线菌是大环聚酮类化合物潜在的丰富资源 ,为新药筛选有效菌源的确定提供了? 展开更多
关键词 聚酮合成酶 大环聚酮类化合物 聚合酶链反应 极端环境 分子筛选 放线菌
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甘薯丛枝病植原体的PCR检测 被引量：12
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作者 兰平 李文凤 +1 位作者 朱水芳 王振镒 《植物学通报》 CSCD 北大核心 2001年第2期210-215,共6页
以报道的植原体 (Phytoplasma) 1 6SrDNA基因保守序列为依据 ,设计合成了两对引物对R1 6mF2 /R1 6mR2 和R1 6F2 /R1 6R2 ,以甘薯丛枝病 (SPWB)带病植株的叶脉中提取的DNA为模板 ,应用聚合酶链式反应(PCR)技术和巢式PCR(Nested_PCR)技术... 以报道的植原体 (Phytoplasma) 1 6SrDNA基因保守序列为依据 ,设计合成了两对引物对R1 6mF2 /R1 6mR2 和R1 6F2 /R1 6R2 ,以甘薯丛枝病 (SPWB)带病植株的叶脉中提取的DNA为模板 ,应用聚合酶链式反应(PCR)技术和巢式PCR(Nested_PCR)技术对甘薯丛枝病病原进行分子检测。结果表明PCR扩增出了 1 .5kb的特异片段 ,在PCR基础上的巢式PCR扩增出了 1 .2kb的特异片段。灵敏度实验显示该方法所需PCR模板DNA量为 0 .1 0 73ng/μl,在PCR基础上的巢式PCR可以将灵敏度提高约 1 0 0 0 0倍 ,所需模板DNA仅为 0 .0 1 0 73pg/μl,在甘薯丛枝病的检测中是一种快速、灵敏、可靠的方法。 展开更多
关键词 甘薯 植原体 取合酶链式反应 巢式pcr 丛枝病原检测
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