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黑曲霉酸性α-淀粉酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达
被引量：
4
1
作者
曾庆梅
魏春燕
+2 位作者
靳靖
吴聪
黄博英
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2011年第17期219-224,共6页
以黑曲霉Aspergillus niger基因组DNA为模板,PCR扩增出酸性α-淀粉酶的结构基因,将此基因插入载体pPIC9K,重组质粒pPIC9K-asAA转化毕赤酵母SMD1168,并通过G418平板培养基筛选高拷贝转化子。在酵母α-Factor及AOX1基因启动子和终止信号...
以黑曲霉Aspergillus niger基因组DNA为模板,PCR扩增出酸性α-淀粉酶的结构基因,将此基因插入载体pPIC9K,重组质粒pPIC9K-asAA转化毕赤酵母SMD1168,并通过G418平板培养基筛选高拷贝转化子。在酵母α-Factor及AOX1基因启动子和终止信号的调控下,酸性α-淀粉酶大量表达并分泌到胞外,该酶的表达受甲醇的严格调控和诱导,摇瓶培养中,2%甲醇诱导培养168h后酶活力达到最大值2838U/mL。SDS-PAGE结果显示该重组酶的分子质量为58kD。该酶的最适反应pH值为4.0,在pH3.0～6.0之间酶活力基本保持稳定,最适反应温度为70℃,在工业生产常用温度50℃条件下,该酶能够长时间保持稳定,并具有较高的酶活力。重组毕赤酵母遗传稳定性良好。
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关键词
黑曲霉
酸性Α-淀粉酶
PPIC9K
毕赤酵母
smd
1168
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职称材料
深黄被孢霉Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因在毕赤氏酵母SMD1168中表达的研究
2
作者
王长远
全越
+2 位作者
沈冰蕾
姚笛
于长青
《农产品加工（下）》
2016年第7期1-3,8,共4页
引物根据△6-脂肪酸脱氢酶（D6D）基因以及酵母蛋白表达载体pGAPZctA的多克隆位点进行引物设计，并在上游插入ECoRI位点、下游插入XhoI位点，从深黄被孢霉中克隆D6D基因，构建pMD18-T-D6D载体与pGAPZtxA—D6D载体。将重组质粒线性化，...
引物根据△6-脂肪酸脱氢酶（D6D）基因以及酵母蛋白表达载体pGAPZctA的多克隆位点进行引物设计，并在上游插入ECoRI位点、下游插入XhoI位点，从深黄被孢霉中克隆D6D基因，构建pMD18-T-D6D载体与pGAPZtxA—D6D载体。将重组质粒线性化，并将其电转导入到毕赤氏酵母（PichiapastorisSMD1168）中，Zeocin抗生素筛选高拷贝转化子，对重组菌进行诱导表达。经过Tricine—SDS—PAGE分析和蛋白质免疫印迹（Westernbloting）试验，证明△6-脂肪酸脱氢酶融合蛋白具有免疫学活性。结果成功构建了重组酵母pGAPZdA—SMD1168，为利用基因工程菌生产y-亚麻酸（GLA）奠定理论基础。
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关键词
深黄被孢霉
△6-脂肪酸脱氢酶
毕赤氏酵母
smd
1168
pGAPZctA表达载体
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职称材料
毕赤氏酵母SMD1168/HuIFNα-2b分泌型表达的研究
被引量：
5
3
作者
周鹏
郭安平
+2 位作者
沈文涛
黎小瑛
梁国栋
《药物生物技术》
CAS
CSCD
2003年第5期287-291,共5页
利用毕赤氏酵母SMD1168构建huIFNα 2b分泌型高效表达工程菌株 ,以提高huIFNα 2b表达量和生物比活性 ,增强临床治疗效果和降低临床应用的毒性副作用。将克隆修饰的huIFNα 2b基因插入pGAPZα A之GAP启动子下游位点 ,构建成含α factor...
利用毕赤氏酵母SMD1168构建huIFNα 2b分泌型高效表达工程菌株 ,以提高huIFNα 2b表达量和生物比活性 ,增强临床治疗效果和降低临床应用的毒性副作用。将克隆修饰的huIFNα 2b基因插入pGAPZα A之GAP启动子下游位点 ,构建成含α factor信号肽的重组表达载体 ,转入毕赤氏酵母 (Pichiapastoris)SMD1168,构建成分泌型表达huIFNα 2b的酵母工程菌株。SDS PAGE分析表明 ,该工程菌株huIFNα 2b表达量占菌体分泌总量的 50 %以上 ,表达量为 10 0～ 12 0 μg ml;MTT法测定纯化样品的生物比活性为 6 69× 10 8IU mg蛋白～ 1 11× 10 9IU mg蛋白 ,并通过柱层析分离纯化了huIFNα 2b ,纯度达 99 7% ,回收率达 15%～ 2 0 % ;Westernblotting分析表明表达的huIFNα 2b具有与天然huIFNα
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关键词
毕赤氏酵母
smd
1168
Α-2B干扰素
分泌型表达
毒性
副作用
临床治疗
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职称材料
题名
黑曲霉酸性α-淀粉酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达
被引量：
4
1
作者
曾庆梅
魏春燕
靳靖
吴聪
黄博英
机构
合肥工业大学农产品生物化工教育部工程研究中心
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2011年第17期219-224,共6页
基金
国家自然科学基金项目(30871739
31071556)
国家"863"计划项目(2011AA100801)
文摘
以黑曲霉Aspergillus niger基因组DNA为模板,PCR扩增出酸性α-淀粉酶的结构基因,将此基因插入载体pPIC9K,重组质粒pPIC9K-asAA转化毕赤酵母SMD1168,并通过G418平板培养基筛选高拷贝转化子。在酵母α-Factor及AOX1基因启动子和终止信号的调控下,酸性α-淀粉酶大量表达并分泌到胞外,该酶的表达受甲醇的严格调控和诱导,摇瓶培养中,2%甲醇诱导培养168h后酶活力达到最大值2838U/mL。SDS-PAGE结果显示该重组酶的分子质量为58kD。该酶的最适反应pH值为4.0,在pH3.0～6.0之间酶活力基本保持稳定,最适反应温度为70℃,在工业生产常用温度50℃条件下,该酶能够长时间保持稳定,并具有较高的酶活力。重组毕赤酵母遗传稳定性良好。
关键词
黑曲霉
酸性Α-淀粉酶
PPIC9K
毕赤酵母
smd
1168
Keywords
Aspergillus
niger
acid-stable
α-amylase
pPIC9K
pichia
pastoris
smd
1168
分类号
Q814.4 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
深黄被孢霉Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因在毕赤氏酵母SMD1168中表达的研究
2
作者
王长远
全越
沈冰蕾
姚笛
于长青
机构
黑龙江八一农垦大学食品学院
出处
《农产品加工（下）》
2016年第7期1-3,8,共4页
基金
黑龙江省农垦总局科技攻关项目(HNK125A-04-16)
文摘
引物根据△6-脂肪酸脱氢酶（D6D）基因以及酵母蛋白表达载体pGAPZctA的多克隆位点进行引物设计，并在上游插入ECoRI位点、下游插入XhoI位点，从深黄被孢霉中克隆D6D基因，构建pMD18-T-D6D载体与pGAPZtxA—D6D载体。将重组质粒线性化，并将其电转导入到毕赤氏酵母（PichiapastorisSMD1168）中，Zeocin抗生素筛选高拷贝转化子，对重组菌进行诱导表达。经过Tricine—SDS—PAGE分析和蛋白质免疫印迹（Westernbloting）试验，证明△6-脂肪酸脱氢酶融合蛋白具有免疫学活性。结果成功构建了重组酵母pGAPZdA—SMD1168，为利用基因工程菌生产y-亚麻酸（GLA）奠定理论基础。
关键词
深黄被孢霉
△6-脂肪酸脱氢酶
毕赤氏酵母
smd
1168
pGAPZctA表达载体
Keywords
Mortieralla
isabellina
△6-fatty
acid
desaturase
pichia
pastoris
smd
1168
expression
vector
pGAPZ
ct
A
分类号
TS201.2 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
毕赤氏酵母SMD1168/HuIFNα-2b分泌型表达的研究
被引量：
5
3
作者
周鹏
郭安平
沈文涛
黎小瑛
梁国栋
机构
中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室
海南国栋药物研究所
出处
《药物生物技术》
CAS
CSCD
2003年第5期287-291,共5页
文摘
利用毕赤氏酵母SMD1168构建huIFNα 2b分泌型高效表达工程菌株 ,以提高huIFNα 2b表达量和生物比活性 ,增强临床治疗效果和降低临床应用的毒性副作用。将克隆修饰的huIFNα 2b基因插入pGAPZα A之GAP启动子下游位点 ,构建成含α factor信号肽的重组表达载体 ,转入毕赤氏酵母 (Pichiapastoris)SMD1168,构建成分泌型表达huIFNα 2b的酵母工程菌株。SDS PAGE分析表明 ,该工程菌株huIFNα 2b表达量占菌体分泌总量的 50 %以上 ,表达量为 10 0～ 12 0 μg ml;MTT法测定纯化样品的生物比活性为 6 69× 10 8IU mg蛋白～ 1 11× 10 9IU mg蛋白 ,并通过柱层析分离纯化了huIFNα 2b ,纯度达 99 7% ,回收率达 15%～ 2 0 % ;Westernblotting分析表明表达的huIFNα 2b具有与天然huIFNα
关键词
毕赤氏酵母
smd
1168
Α-2B干扰素
分泌型表达
毒性
副作用
临床治疗
Keywords
pichia
.
pastoris
smd
1168
,
huIFNα
2b,
Secretory
expression
分类号
R978.7 [医药卫生—药品]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
黑曲霉酸性α-淀粉酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达
曾庆梅
魏春燕
靳靖
吴聪
黄博英
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2011
4
下载PDF
职称材料
2
深黄被孢霉Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因在毕赤氏酵母SMD1168中表达的研究
王长远
全越
沈冰蕾
姚笛
于长青
《农产品加工（下）》
2016
0
下载PDF
职称材料
3
毕赤氏酵母SMD1168/HuIFNα-2b分泌型表达的研究
周鹏
郭安平
沈文涛
黎小瑛
梁国栋
《药物生物技术》
CAS
CSCD
2003
5
下载PDF
职称材料
已选择
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