真菌植酸酶phyA基因研究进展 被引量：21

1

作者 王红宁 吴琦 +1 位作者 谢晶 刘世贵 《四川农业大学学报》 CSCD 2000年第1期84-88,共5页

植酸酶是催化植酸及植酸盐水解成肌醇和无机磷酸盐的一类酶。本文综述了真菌植酸酶 (EC 3.1.3 .8)phyA基因的研究进展 ,主要包括 :①phyA基因的分子生物学特点 ;②phyA基因组文库的构建 ;③phyA基因表达载体的构建 ;④phyA基因表达的调... 植酸酶是催化植酸及植酸盐水解成肌醇和无机磷酸盐的一类酶。本文综述了真菌植酸酶 (EC 3.1.3 .8)phyA基因的研究进展 ,主要包括 :①phyA基因的分子生物学特点 ;②phyA基因组文库的构建 ;③phyA基因表达载体的构建 ;④phyA基因表达的调控 ;⑤phyA基因克隆及表达实例。 展开更多

关键词 真菌 植酸酶 phya基因 分子生物学 基因表达

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黑曲霉N25植酸酶phyA基因在巴斯德毕赤酵母中高效表达的研究 被引量：20

2

作者 王红宁 马孟根 +2 位作者 吴琦 刘世贵 罗燕 《菌物系统》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期486-493,共8页

从黑曲霉N25(A.niger China strain)中提取出染色体DNA,根据已经测定出的植酸酶phyA基因全序列设计了一对引物,采用高保真度的聚合酶Advangage-HF扩增到了去除信号肽和内含子后约1.4kb片段,对该片段进行了克隆及序列测定。将该序列与植... 从黑曲霉N25(A.niger China strain)中提取出染色体DNA,根据已经测定出的植酸酶phyA基因全序列设计了一对引物,采用高保真度的聚合酶Advangage-HF扩增到了去除信号肽和内含子后约1.4kb片段,对该片段进行了克隆及序列测定。将该序列与植酸酶phyA基因全序列进行了比较。以此片段构建成功了pPIC9K-phyA载体(命名为pPNP-1),并转化毕赤巴斯德酵母。经G418抗性筛选、酶活性测定、Southern印迹和Western印迹,获得了高效表达的转化子PP-NP-1(23869.4u/ml)、PP-NP-2(20533.0u/ml)、PP-NP-3(35646.7u/ml),其酶活性分别是出发菌株的酶活(513.4u/ml)的46.46倍、39.99倍和69.46倍,且转化子具有很好的遗传稳定性。 展开更多

关键词 黑曲霉 植酸酶 phya基因 毕赤酵母 高效表达 转化子 载体

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黑曲霉N14植酸酶基因在巴斯德毕赤酵母中的高效表达 被引量：11

3

作者 彭远义 刘生峰 +1 位作者 李春明 周泽扬 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期967-971,共5页

从黑曲霉N14基因组DNA中扩增出植酸酶phyA基因表达片段 ,并将其克隆到pMD18 T载体中。以此片段构建了pPIC9K phyA重组表达载体 ,目的片段以正确的阅读框架插入到pPIC9K的多克隆位点EcoRⅠ和NotⅠ之间。重组表达载体经XbaⅠ线性化处理 ,... 从黑曲霉N14基因组DNA中扩增出植酸酶phyA基因表达片段 ,并将其克隆到pMD18 T载体中。以此片段构建了pPIC9K phyA重组表达载体 ,目的片段以正确的阅读框架插入到pPIC9K的多克隆位点EcoRⅠ和NotⅠ之间。重组表达载体经XbaⅠ线性化处理 ,电击转化毕赤酵母 ,经G4 18抗性筛选、酶活性测定、PCR鉴定和SDS PAGE分析 ,获得了两株产酶活性分别为 14 395 8 3u mL发酵液 (PP N14 2 2 )和 14 890 8 3u mL发酵液 (PP N14 4 4 )的高产工程菌 ,其酶活性分别是出发菌株酶活性 (4 2 2u mL)的 341 13倍和 35 2 86倍 ,重组酵母具有很好的遗传稳定性。重组植酸酶在pH值 2 5～ 3 0和 5 0～ 5 5时酶活性最高 ,且在pH4 5～ 6 5之间均有相当高的酶活性 ,最适作用温度为5 5℃。 展开更多

关键词 黑曲霉N14 植酸酶 phya基因 毕赤酵母

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高效表达黑曲霉PhyA基因改善白三叶草对有机态磷的利用 被引量：14

4

作者 韩胜芳 谷俊涛 肖凯 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期250-255,共6页

利用子叶下胚轴为外植体,通过农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)Ti质粒介导遗传转化途径,建立了高效表达黑曲霉PhyA基因的白三叶草转基因系。PCR和Southern印迹结果表明,PhyA基因已整合到转基因植株的基因组中。Northern印迹结果表明,... 利用子叶下胚轴为外植体,通过农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)Ti质粒介导遗传转化途径,建立了高效表达黑曲霉PhyA基因的白三叶草转基因系。PCR和Southern印迹结果表明,PhyA基因已整合到转基因植株的基因组中。Northern印迹结果表明,部分转基因系中的PhyA基因具有高表达水平。此外,PhyA基因表达的植酸酶在Patatin信号肽的引导下具有分泌至细胞间隙和根际的能力。与未转基因对照相比,在以植酸盐为唯一磷素供源的条件下,高表达PhyA的转基因系植株的磷素累积量、鲜重和干重显著增加。证明外源转化黑曲霉PhyA基因能显著增强白三叶草利用有机态磷的能力。 展开更多

关键词 三叶草(Trifolium repens L.) 遗传转化 phya基因 有机态磷利用

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F43Y及I354M,L358F定点突变对植酸酶热稳定性及酶活性的改善 被引量：8

5

作者 陈惠 王红宁 +3 位作者 杨婉身 赵海霞 吴琦 单志 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期516-520,共5页

对重组酵母PPNPm8的植酸酶phyAm基因进行PCR介导的定点突变,即将植酸酶43位的苯丙氨酸替换为酪氨酸(F43Y),将其354、358位的异亮氨酸、亮氨酸分别替换为甲硫氨酸和苯丙氨酸(I354M,L358F),得到了2个突变体PPNPm-1(F43Y)及PPNPm-2(I354M,L... 对重组酵母PPNPm8的植酸酶phyAm基因进行PCR介导的定点突变,即将植酸酶43位的苯丙氨酸替换为酪氨酸(F43Y),将其354、358位的异亮氨酸、亮氨酸分别替换为甲硫氨酸和苯丙氨酸(I354M,L358F),得到了2个突变体PPNPm-1(F43Y)及PPNPm-2(I354M,L358F).含突变基因的重组表达载体pPIC9kphyAm-1,pPIC9kphyAm-2在毕赤酵母GS115中表达,对表达产物进行酶活性测定及热稳定性检测.结果表明:突变体PPNPm-1最适反应温度比未突变体PPNPm8上升了3℃,75℃处理10min,热稳定性提高15%,比活力提高11%;PPNPm-2最适反应温度未改变,热稳定性比PPNPm8仅提高3%,比活力降低6.5%.对突变前后的植酸酶空间结构进行比较预测,发现突变氨基酸Tyr43与空间位置相邻的Asn416之间形成氢键,增强了酶的热稳定性. 展开更多

关键词 植酸酶 phya基因 定点突变 毕赤酵母 热稳定性

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植酸酶phyA^m基因结构延伸突变改善酶的热稳定性 被引量：12

6

作者 陈惠 王红宁 +3 位作者 杨婉身 赵海霞 吴琦 单志 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期983-987,共5页

将来源于黑曲霉N25的植酸酶基因phyAm重组于大肠杆菌表达载体pET30b(+),以重组表达载体pET30bFphyAm为模板经PCR扩增获得结构延伸突变植酸酶基因phyAe(在植酸酶基因C端增加了来源于pET30bFphyAm载体上13氨基酸残基)。含突变基因的重组... 将来源于黑曲霉N25的植酸酶基因phyAm重组于大肠杆菌表达载体pET30b(+),以重组表达载体pET30bFphyAm为模板经PCR扩增获得结构延伸突变植酸酶基因phyAe(在植酸酶基因C端增加了来源于pET30bFphyAm载体上13氨基酸残基)。含突变基因的重组表达载体pPIC9kphyAe在GS115酵母中表达。纯化的突变酶PPNPe与野生型酶PPNPm8相比:PPNPAe的最适反应温度上升了3℃,75℃处理10min,热稳定性提高21%,比活力略有提高。最适反应pH为5.6,有效pH范围pH4.6到pH6.6。比未突变酶扩大了0.4单位。 展开更多

关键词 植酸酶 延伸突变 毕赤酵母 热稳定性 最适反应pH

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植酸酶phyA基因的密码子优化及其在大豆中的表达 被引量：6

7

作者 寇莹莹 宋英今 +1 位作者 杨少辉 王洁华 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1798-1804,共7页

植酸是植物源食品中的主要抗营养成分,降低植酸含量可有效提高大豆的营养利用率。本文根据大豆密码子使用偏好性,对无花果曲霉植酸酶phyA基因进行密码子优化,人工合成了适合在大豆中表达的phyA(b)基因。以p CAMBIA3301为骨架,构建由大... 植酸是植物源食品中的主要抗营养成分,降低植酸含量可有效提高大豆的营养利用率。本文根据大豆密码子使用偏好性,对无花果曲霉植酸酶phyA基因进行密码子优化,人工合成了适合在大豆中表达的phyA(b)基因。以p CAMBIA3301为骨架,构建由大豆凝集素基因启动子和信号肽序列调控的植物表达载体pCBPS-phyA(b)。用农杆菌介导法遗传转化吉林35大豆子叶节。PCR检测表明目的基因已初步整合至大豆基因组中;bar试纸条表明所有阳性植株中均能检测到bar基因的蛋白产物;除草剂叶片涂抹显示野生型的叶片出现黄化或枯萎现象,而转基因植株叶片表现正常,具除草剂抗性;以半定量RT-PCR共筛选到13株转phyA和19株转phyA(b)阳性转基因大豆植株。通过对转基因大豆T_3种子中植酸酶活性、无机磷和植酸磷含量等检测,证明人工基因phyA(b)比phyA在大豆种子中所表达的植酸酶具有更高的活性,说明密码子优化有利于提高外源基因的表达。 展开更多

关键词 大豆 phya基因 密码子优化 遗传转化

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植酸酶产生菌黑曲霉N14的诱变选育及其基因分析 被引量：4

8

作者 彭远义 马丽苹 +2 位作者 李春明 刘生峰 周泽扬 《激光生物学报》 CAS CSCD 2005年第3期177-183,共7页

以植酸酶产生菌黑曲霉03214为出发菌株,经紫外线和亚硝基胍诱变,获得了产酶活性较出发菌株提高了22.3%,达422IU/ml发酵液的突变菌株黑曲霉N14,其最适pH值为2.5,最适温度为50℃。通过对黑曲霉N14植酸酶phyA基因进行PCR扩增,获得了一条长... 以植酸酶产生菌黑曲霉03214为出发菌株,经紫外线和亚硝基胍诱变,获得了产酶活性较出发菌株提高了22.3%,达422IU/ml发酵液的突变菌株黑曲霉N14,其最适pH值为2.5,最适温度为50℃。通过对黑曲霉N14植酸酶phyA基因进行PCR扩增,获得了一条长约1.5kb的特异性产物。以pMD18 T为载体,构建了含有目的基因片段的重组质粒。DNA序列测定表明,目的基因片段含有植酸酶phyA基因的完整序列(GenBankAccession:AY426977),phyA基因全长1506bp,其中包含一段长102bp的内含子,编码467个氨基酸,有10个潜在的糖基化位点,5'端有一编码19个氨基酸的信号肽序列。实验结果为植酸酶基因工程菌的构建奠定了基础。 展开更多

关键词 植酸酶 黑曲霉N14 诱变 phya基因 序列分析

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烟草NtPhyA基因的生物信息学分析和功能验证 被引量：1

9

作者 罗家骏 陆安彬 +5 位作者 龙本山 段丽丽 莫泽君 舒彦淇 皮凯 刘仁祥 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期674-683,共10页

低温是制约烟叶生产的重要气候因素,为研究PhyA基因在烟草(Nicotiana tabacum L.)应对低温胁迫的功能,本研究通过PCR技术克隆NtPhyA基因,利用生物信息学分析基因序列和蛋白特征;构建NtPhyA过表达载体,并对该基因进行了功能验证。结果表... 低温是制约烟叶生产的重要气候因素,为研究PhyA基因在烟草(Nicotiana tabacum L.)应对低温胁迫的功能,本研究通过PCR技术克隆NtPhyA基因,利用生物信息学分析基因序列和蛋白特征;构建NtPhyA过表达载体,并对该基因进行了功能验证。结果表明,NtPhyA基因编码区长度为2 394 bp,编码797个氨基酸,具有典型的PHY家族的PAS、 PHY和GAF motif特殊结构域;蛋白分析显示,NtPhyA蛋白属于不含信号肽的非分泌不稳定亲水性蛋白;亚细胞定位预测该蛋白定位于细胞质中,需转运至细胞核内调节下游基因。对获得的突变体进行低温处理后,与野生型相比,过表达NtPhyA基因的烟草株系脯氨酸含量更低,丙二醛含量和过氧化氢含量增高;转录组研究表明,NtPhyA过表达植株与野生型植株在细胞过程和应激响应上有所不同,能影响抗氧化物质合成和植物激素响应。结果表明,NtPhyA基因能参与烟草的抗寒响应生理过程,可作为提高烟草抗冷育种的候选基因,为深入解析NtPhyA基因参与烟草低温调控机制研究奠定了基础。 展开更多

关键词 烟草 phya基因 基因克隆 低温胁迫 功能验证

原文传递

农杆菌介导phyA基因转化玉米愈伤组织培养体系的优化 被引量：3

10

作者 徐丹丹 王丕武 +3 位作者 赵邯郸 刘双 陈昭汀 关淑艳 《湖北农业科学》 2015年第2期465-467,共3页

以根癌农杆菌(Agrobacterium)EHA105介导外源基因phy A转入玉米(Zea mays L.)自交系GS01的胚性愈伤组织,并利用除草剂(草胺磷)筛选出抗性愈伤组织,培养并获得再生植株。结果表明,菌液浓度及侵染时间显著影响愈伤组织的转化率;不同激素... 以根癌农杆菌(Agrobacterium)EHA105介导外源基因phy A转入玉米(Zea mays L.)自交系GS01的胚性愈伤组织,并利用除草剂(草胺磷)筛选出抗性愈伤组织,培养并获得再生植株。结果表明,菌液浓度及侵染时间显著影响愈伤组织的转化率;不同激素种类及配比对抗性愈伤组织再生植株的影响明显。当菌液浓度OD600 nm为0.6,侵染时间为20 min时,抗性愈伤组织的转化率最高,达到了68.7%,为玉米农杆菌转化并获得再生植株奠定了基础。 展开更多

关键词 农杆菌(Agrobacterium) 玉米(Zea mays L.)自交系 遗传转化 PHY A基因

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产植酸酶黑曲霉菌株S8的基因扩增与鉴定

11

作者 曾秀 郭万柱 +1 位作者 孔路军 王孝友 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2004年第11期10-12,44,共4页

本文主要报道了用 3种不同方法从S8黑曲霉菌丝体中提取基因组DNA ,最适方法是经改进的Vitagene试剂盒法。PCR扩增效果最好的是设计时没有去掉phyA基因内含子的引物 ,获得的特异性PCR产物长约 1.5kb。同时对PCR反应体系进行了优化。对扩... 本文主要报道了用 3种不同方法从S8黑曲霉菌丝体中提取基因组DNA ,最适方法是经改进的Vitagene试剂盒法。PCR扩增效果最好的是设计时没有去掉phyA基因内含子的引物 ,获得的特异性PCR产物长约 1.5kb。同时对PCR反应体系进行了优化。对扩增出的目的片段用 3种不同方法进行纯化回收 ,结果是PCRFragmentRe coveryKit法回收效果最好 ,其产量可达到约 10ng/ μL。根据已报道的植酸酶phyA基因序列酶切位点 ,对回收的目的片段进行酶切鉴定 ,该基因能被BamHⅠ、SalⅠ酶切 ,不能被HindⅢ、XbalⅠ、KPnⅠ酶切 ,与已知的phyA基因酶切图谱基本一致 。 展开更多

关键词 畜牧 兽医科学基础学科 植酸酶 PCR phya基因 酶切分析

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烟草PHYA基因的光温敏感性及生物学功能分析 被引量：1

12

作者 陈倩 喻奇伟 +5 位作者 郑登峰 熊晶 滕建辉 田宗林 李振华 刘仁祥 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2021年第13期4392-4400,共9页

烟草是一种对光照和温度要求都非常严格的喜光喜温作物,为了降低烟草品种对光照和温度的敏感性,扩大烟草品种的光温适应范围和种植区域。本研究克隆了NtPHYA基因,采用生物信息学方法预测了该基因在烟草上的功能,利用CRISPR/Cas9基因编... 烟草是一种对光照和温度要求都非常严格的喜光喜温作物,为了降低烟草品种对光照和温度的敏感性,扩大烟草品种的光温适应范围和种植区域。本研究克隆了NtPHYA基因,采用生物信息学方法预测了该基因在烟草上的功能,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术创制NtPHYA基因敲除突变体,分析了NtPHYA基因对烟草种子和烟苗光温敏感性及烟株生长的影响。结果表明,烟草NtPHYA与番茄SlPHYA基因的蛋白质序列相似度达92.15%,具有极为相似的理化性质,推测NtPHYA基因与番茄PHYA基因一样具有调控光温度敏感性和生长发育的功能;NtPHYA基因敲除突变体的光合色素含量、光合特性指标以及主要农艺性状均显著高于野生型,不同光温处理下突变体的NtPHYA基因表达量、种子萌发率均显著高于野生型。结果说明NtPHYA基因具有调控烟草光温度敏感性的功能,敲除NtPHYA基因能增加烟草光合色素含量、提高光合效率、促进烟株的生长,拓宽了烟草的光温适应范围和种植区域。本研究结果为解析NtPHYA基因对烟草生长发育的调控机理提供了理论参考和研究材料,对光温低敏感性烟草品种的选育具有重要的实践意义。 展开更多

关键词 烟草 phya基因 光温敏感性 突变体 功能分析

原文传递

黑曲霉Z6植酸酶基因phyA的克隆及表达

13

作者 吴远征 扈进冬 +1 位作者 李纪顺 杨合同 《生物技术》 CAS CSCD 2008年第6期18-20,共3页

目的:克隆植酸酶基因phyA,构建毕赤酵母表达载体,转化毕赤酵母,并对重组工程菌的表达产物进行初步酶学性质研究。方法:以植酸酶高产菌株─黑曲霉Z6染色体DNA为模板,PCR扩增得到植酸酶基因phyA,序列鉴定后连接到毕赤酵母穿梭载体pPIC9K上... 目的:克隆植酸酶基因phyA,构建毕赤酵母表达载体,转化毕赤酵母,并对重组工程菌的表达产物进行初步酶学性质研究。方法:以植酸酶高产菌株─黑曲霉Z6染色体DNA为模板,PCR扩增得到植酸酶基因phyA,序列鉴定后连接到毕赤酵母穿梭载体pPIC9K上,构建重组质粒pPIC9K-phyA,电击转化毕赤酵母KM71,筛选得到重组转化子。对重组工程菌表达产物进行SDS-PAGE分析和酶活性研究。结果:phyA序列分析表明该基因具有典型的植酸酶活性位点保守序列ArgHisGlyAlaArgTyrPro,与NC-BI已发表的植酸酶基因同源性较高,达到94%以上。该序列已提交GenBank,序列号为DQ318022。重组工程菌KM71-phyA7的PCR扩增证实了植酸酶基因已整合到酵母基因组中,植酸酶能有效分泌和表达,粗酶液酶活可达875U/mL。结论:植酸酶基因phyA在毕赤酵母中成功表达,为今后的定向改组奠定了基础。 展开更多

关键词 黑曲霉 植酸酶 phya基因 毕赤酵母 分泌表达

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黑曲霉植酸酶基因phyA的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：2

14

作者 闻雅男 王学英 +1 位作者 夏润玺 王媛媛 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期335-338,共4页

为获得大量、高活性植酸酶以及研究和开发新型微生物生物制剂,从自行筛选的黑曲霉中提取RNA,通过反转录合成模板cDNA,根据phyA成熟肽编码序列设计出一对引物,PCR扩增phyA,对扩增片段进行了克隆,通过限制性内切酶酶切分析、DNA测序证明p... 为获得大量、高活性植酸酶以及研究和开发新型微生物生物制剂,从自行筛选的黑曲霉中提取RNA,通过反转录合成模板cDNA,根据phyA成熟肽编码序列设计出一对引物,PCR扩增phyA,对扩增片段进行了克隆,通过限制性内切酶酶切分析、DNA测序证明phyA基因克隆成功。从pBS-T-phyA克隆中获取phyA编码序列,将其与pET28a+质粒连接,构建pET28a+-phyA重组质粒,并在大肠杆菌中获得高效表达。本研究成功克隆phyA,该基因全长1404bp,以ATG为起始密码子,TGA为终止密码子,编码467个氨基酸组成的多肽。SDS-PAGE电泳结果表明,phyA在大肠杆菌中成功表达,成熟植酸酶的分子量约为51kDa。在0.4g·L-1的IPTG的诱导下,植酸酶活性最大(1174U)。 展开更多

关键词 黑曲霉 phya基因 大肠杆菌 克隆载体 高效表达

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地衣芽孢杆菌A13重组表达黑曲霉植酸酶phyA基因的研究

15

作者 吴远征 扈进冬 +3 位作者 李红梅 李纪顺 黄玉杰 杨合同 《山东科学》 CAS 2009年第6期26-29,60,共5页

将黑曲霉Z6植酸酶phyA基因置于芽孢杆菌强启动子F1下,与大肠-芽孢杆菌穿梭表达载体pHY300PLK连接,重组质粒pHY300-F1-phyA电击转化地衣芽孢杆菌A13。筛选阳性克隆,获得重组菌株A13-F1-phyA,PCR扩增及酶切验证表明植酸酶基因已转入地衣... 将黑曲霉Z6植酸酶phyA基因置于芽孢杆菌强启动子F1下,与大肠-芽孢杆菌穿梭表达载体pHY300PLK连接,重组质粒pHY300-F1-phyA电击转化地衣芽孢杆菌A13。筛选阳性克隆,获得重组菌株A13-F1-phyA,PCR扩增及酶切验证表明植酸酶基因已转入地衣芽孢杆菌。SDS-PAGE分析和表达产物的酶活性研究证明,重组菌株中植酸酶得到了有效分泌和表达。 展开更多

关键词 地衣芽孢杆菌 植酸酶 phya基因 黑曲霉 分泌表达

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植酸酶phyA基因在解脂耶氏酵母po1h中的表达

16

作者 陈云 邹由 +1 位作者 王一丁 马立新 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期610-615,共6页

本实验通过PCR方法从毕赤酵母GS115-phyA中扩增出不含有信号肽及内含子的黑曲霉NRRL3135植酸酶phyA基因,并将其克隆到表达载体pINA1297中,得到表达载体pINA1297-phyA,利用醋酸锂转化法将线性化载体转化到解脂耶氏酵母po1h中,通过YNBcasa... 本实验通过PCR方法从毕赤酵母GS115-phyA中扩增出不含有信号肽及内含子的黑曲霉NRRL3135植酸酶phyA基因,并将其克隆到表达载体pINA1297中,得到表达载体pINA1297-phyA,利用醋酸锂转化法将线性化载体转化到解脂耶氏酵母po1h中,通过YNBcasa和PPB平板筛选出阳性表达菌株,阳性菌株在YM培养基中28℃培养6d后酶活达到最大为636.23U/mL。表达上清经SDS-PAGE分析得到表达植酸酶分子量约为130kDa,但通过去糖基化处理后其分子量变为51kDa,与理论值相符。经过酶学性质分析表明重组植酸酶最适pH为5.5,最适温度为55℃,该酶在pH2.0-8.0处理1h后仍有较高酶活,并且90℃处理10min后还有86.08%的残留酶活,其抵抗胃蛋白酶和胰蛋白酶能力也较强。 展开更多

关键词 黑曲霉 植酸酶 phya基因 解脂耶氏酵母po1h

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农杆菌介导的植酸酶基因转化棉花的研究 被引量：1

17

作者 郭彩菊 王省芬 +4 位作者 张桂寅 迟吉娜 吴立强 李志坤 马峙英 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2009年第20期68-71,共4页

为建立一种转化效率高、稳定性好的棉花农杆菌遗传转化体系,以优良的陆地棉品种晋棉14、陕724为受体材料,利用农杆菌介导的方法,将含有根特异性表达启动子的植酸酶基因(PhyA)转入供试品种的胚性愈伤中;对获得的再生植株进行PCR检测,证明... 为建立一种转化效率高、稳定性好的棉花农杆菌遗传转化体系,以优良的陆地棉品种晋棉14、陕724为受体材料,利用农杆菌介导的方法,将含有根特异性表达启动子的植酸酶基因(PhyA)转入供试品种的胚性愈伤中;对获得的再生植株进行PCR检测,证明PhyA已经被插入到棉花基因组中,晋棉14和陕724的转化效率分别为33%和8.3%;此外,还对影响农杆菌侵染棉花胚性愈伤转化效率的因素,如卡那霉素浓度、胚性愈伤组织生长状态、受体材料的基因型等进行了较为系统的比较研究。 展开更多

关键词 棉花 农杆菌介导 植酸酶基因 胚性愈伤 遗传转化

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黑曲霉3928植酸酶phy基因的克隆及全序列分析

18

作者 倪宏波 曲进 +1 位作者 石星明 徐春厚 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2006年第6期9-11,共3页

根据GenBank中已注册的黑曲霉基因序列设计了1对引物,通过PCR方法将黑曲霉phy A全基因进行扩增,获得了1条长约1.5 kb的特异性PCR产物,在PMD18 T载体中克隆了黑曲霉3928植酸酶phy A全基因,筛选到2个重组菌落(1#和2#),并进行了全序列测定... 根据GenBank中已注册的黑曲霉基因序列设计了1对引物,通过PCR方法将黑曲霉phy A全基因进行扩增,获得了1条长约1.5 kb的特异性PCR产物,在PMD18 T载体中克隆了黑曲霉3928植酸酶phy A全基因,筛选到2个重组菌落(1#和2#),并进行了全序列测定。序列分析结果表明:2个重组质粒的测序结果完全一致;克隆的片段中含有完整的phy A基因序列,全长1 506 bp,其中含有一段长102 bp的内含子;phyA基因全序列编码467个氨基酸,信号肽位于基因的5′端,长度为19个氨基酸;碱基序列与GenBank中报道的AY513749的同源性为98.87%,编码的氨基酸序列的同源性为97.21%。 展开更多

关键词 黑曲霉 植酸酶基因 PCR 序列

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人工合成的黑曲霉NRRL3135菌株植酸酶基因在毕赤酵母系统中的高效表达 被引量：41

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作者 贝锦龙 陈庄 +3 位作者 杨林 廖玲 王珣章 蒋宗勇 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期254-258,共5页

本文以黑曲霉 (Aspergillusniger)NRRL3135菌株植酸酶基因为对象 ,通过基因人工合成的方法去除了该基因的内含子与信号肽编码序列 ,换用在毕赤酵母 (Pichiapastoris)中使用频率较高的密码子以优化其表达。该人工合成植酸酶基因 (PhyA as... 本文以黑曲霉 (Aspergillusniger)NRRL3135菌株植酸酶基因为对象 ,通过基因人工合成的方法去除了该基因的内含子与信号肽编码序列 ,换用在毕赤酵母 (Pichiapastoris)中使用频率较高的密码子以优化其表达。该人工合成植酸酶基因 (PhyA as)以N端融合的方式正确插入到毕赤酵母表达载体pPICZαA。通过电击将重组表达载体整合入酵母染色体DNA中得到重组转化子。SDS PAGE结果与表达产物酶学性质研究表明植酸酶得到分泌表达 ,且与天然产物性质基本一致。筛选得若干株高产基因工程菌 ,其中SPAN Ⅲ菌株达到了在摇床培养条件下 ,每毫升发酵液产生 16 5 0 0 0u植酸酶的水平 。 展开更多

关键词 基因人工合成 植酸酶基因 phya-as 毕赤酵母表达系统

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植酸酶基因中稀有密码子的改造提高其在毕赤酵母中的表达量 被引量：22

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作者 陈惠 赵海霞 +3 位作者 王红宁 杨婉身 吴琦 倪燕 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期171-175,共5页

对来源于黑曲霉N2 5(AspergillusnigerChinaStrain)的植酸酶基因phyA进行PCR介导的定点突变 ,不改变其所编码氨基酸 ,选用毕赤酵母偏爱的密码子对该基因保守序列中第 81位和第 85位的Arg密码子进行同义突变 .构建了含正确突变的克隆载体... 对来源于黑曲霉N2 5(AspergillusnigerChinaStrain)的植酸酶基因phyA进行PCR介导的定点突变 ,不改变其所编码氨基酸 ,选用毕赤酵母偏爱的密码子对该基因保守序列中第 81位和第 85位的Arg密码子进行同义突变 .构建了含正确突变的克隆载体pUC18 phyAm 和酵母表达载体pPIC9k phyAm,电击转化毕赤酵母 ,经MM、MD平板筛选和产物的酶活性测定 ,筛选出突变与未突变高酶活酵母转化子各 2株 .这 4株转化子的Southern印迹结果表明 ,phyA基因以单交换方式单拷贝整合到酵母染色体DNA中 .表达产物的SDS PAGE分析表明 ,重组酵母中的植酸酶能有效分泌和表达 ,蛋白质分子大小为 70 15kD .转化子酶活测定结果表明 ,经密码子优化的突变重组酵母酶活力明显高于未进行优化的重组酵母转化子 .经密码子优化的突变重组酵母株PP NPm 8于麦芽汁培养基中诱导 36h后酶活力可达 4 76 0 0U/ml,其活力比未优化重组酵母株PP NP 2 (2 36 6 7U/ml)提高了约 1倍 ,且重组转化子遗传稳定性良好 . 展开更多

关键词 黑曲霉 植酸酶phya基因 定点突变 毕赤酵母 表达

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