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题名鸟分枝杆菌PhoP功能分析及其基因突变株的构建
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作者
何时义
丁峰山
王爱妍
付鑫
杨东君
凌敏
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机构
广西医科大学生物化学与分子生物学教研室广西高校生物分子医学研究重点实验室
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出处
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第9期1966-1972,共7页
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基金
国家自然科学基金项目(No.81260245)~~
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文摘
【目的】对鸟分枝杆菌PhoP的功能进行分析及构建PhoP基因突变株,为深入研究PhoP的调控机制打下基础。【方法】利用PCR扩增出鸟分枝杆菌PhoP DNA结合区(PhoPC)编码序列,与表达载体p GEX-4T-3连接后,转化入大肠杆菌BL21(DE3)中表达GST-PhoPC融合蛋白。用凝血酶去除GST标签,制备PhoPC蛋白;利用PCR扩增出鸟分枝杆菌PhoP基因及其下游基因MAV0127、PhoU和Amt的启动子片段,采用凝胶迁移率移动试验(EMSA)分别检测PhoPC与PhoP、MAV0127、PhoU和Amt的启动子结合的情况。通过PCR扩增PhoP基因上、下游片段,构建PhoP基因缺失性同源核苷酸片段,与自杀质粒p GMB151连接后,通过电转化导入鸟分枝杆菌进行同源交换,利用PCR筛选出PhoP基因缺失突变株。【结果】EMSA结果显示,鸟分枝杆菌PhoP能与PhoP、MAV0127及Amt基因启动子结合,不能与PhoU结合。通过PCR和序列分析证实基因突变株的PhoP基因缺失了309个碱基。【结论】PhoP不仅可调控其下游基因MAV0127和Amt的转录水平,还可调控其自身基因的转录,但不参与调节PhoU二元调控系统。构建了PhoP基因缺失突变株,为进一步研究其在鸟分枝杆菌的调控功能奠定了基础。
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关键词
鸟分枝杆菌
phop
凝胶迁移率移动试验
phop基因突变株
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Keywords
Mycobacterium avium
phop
EMSA
phop gene deletion mutation
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分类号
R440
[医药卫生—诊断学]
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