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人骨髓间充质干细胞表型转化为汗腺细胞的体外研究 被引量：17
1
作者 李海红 付小兵 +3 位作者 欧阳云淑 周岗 陈伟 孙同柱 《中华创伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期81-86,共6页
目的研究体外人骨髓间充质干细胞(MSCs)和汗腺细胞(SGCs)直接和间接共培养条件下骨髓间充质干细胞的表型转化及其机制。方法体外分别分离培养、扩增并鉴定MSCs和汗腺细胞。将培养的MSCs和经47℃高温处理造成热休克的SGCs直接和间接共培... 目的研究体外人骨髓间充质干细胞(MSCs)和汗腺细胞(SGCs)直接和间接共培养条件下骨髓间充质干细胞的表型转化及其机制。方法体外分别分离培养、扩增并鉴定MSCs和汗腺细胞。将培养的MSCs和经47℃高温处理造成热休克的SGCs直接和间接共培养,1周后,采用免疫细胞化学染色法和流式细胞仪法检测共培养体系中MSCs的表型改变,W estern b lot测定细胞外信号调节激酶(ERK)和磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)表达。结果MSCs和SGCs均呈克隆样生长,MSCs表达CD44、CD105和CD29,不表达CD34、CEA、CK19和CK7;SGCs表达CEA、CK19、CK8和CK7。MSCs与经高温损伤后的SGCs共培养1周后,部分MSCs呈汗腺细胞表型,间接共培养结果示各组MSCs均表达水平相当的ERK,但pERK水平表达不同。结论成人MSCs和热休克的SGCs直接和间接共培养均可诱导MSCs向SGCs表型转化,pERK途径参与这一过程。 展开更多
关键词 干细胞 细胞 汗腺 Ca(2+)-calmodulin dependent protein KINASE 表型转化
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人骨髓间充质干细胞向汗腺样细胞诱导分化的研究 被引量：6
2
作者 陈艳 赵洪良 +3 位作者 谭志军 赵焕军 张翠萍 付小兵 《感染．炎症．修复》 2014年第2期76-78,F0002,共4页
目的:观察体外热休克汗腺细胞(SGCs)和人骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)共培养体系中BMMSCs的形态和表型变化,为进一步表观遗传学表达谱的检测及汗腺诱导关键转录因子的研究提供实验基础。方法:体外分离、培养、扩增人BM-MSCs和SGCs,成骨和... 目的:观察体外热休克汗腺细胞(SGCs)和人骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)共培养体系中BMMSCs的形态和表型变化,为进一步表观遗传学表达谱的检测及汗腺诱导关键转录因子的研究提供实验基础。方法:体外分离、培养、扩增人BM-MSCs和SGCs,成骨和成脂诱导分化以鉴定BM—MSCs的分化功能。在Transwell间接共培养体系中,培养的BM-MSCs和经47℃高温处理造成热休克的SGCs在Transwell板中间接共培养;在Transwell+诱导因子共培养体系中,上室的BM-MSCs培养基中添加了汗腺诱导因子(无汗性外胚叶发育不良蛋白、重组人表皮生长因子和胰岛素-转铁蛋白-亚硒酸钠)。监测共培养过程中BM-MSCs的细胞形态变化,免疫荧光法检测诱导后BM-MSCs的表型改变。结果:经与热休克SGCs共培养诱导10 d后,部分BM-MSCs有由长梭形变为扁平状多边形的趋势,且局部细胞间连接紧密成片。BM-MSCs诱导前不表达CEA和CK19;BMMSCs诱导后,Transwell间接共培养体系部分细胞CEA和CKl9表达阳性,Transwell+诱导因子共培养体系CEA和CK19阳性细胞数明显多于Transwell间接共培养体系。结论:热休克汗腺细胞与BM-MSCs在Transwell间接培养以及相关汗腺诱导因子的共培养体系下,BM-MSCs呈现向SGCs诱导分化趋势。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 汗腺 共培养 表型转化
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原代培养鼠肺成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白的表达 被引量：2
3
作者 杨敬平 孙德俊 +1 位作者 李姝楠 高丽 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期339-343,共5页
目的:观察原代培养大鼠肺成纤维细胞(FB)中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况。方法:24只雌性Wistar大鼠,随机分为正常组和模型组,气管内注入博莱霉素A2(BLM-A2)(5mg/kg)建立大鼠肺间质纤维化(PF)模型,正常组气管内注入等量生理盐水... 目的:观察原代培养大鼠肺成纤维细胞(FB)中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况。方法:24只雌性Wistar大鼠,随机分为正常组和模型组,气管内注入博莱霉素A2(BLM-A2)(5mg/kg)建立大鼠肺间质纤维化(PF)模型,正常组气管内注入等量生理盐水。实验周期第28d腹主动脉放血法处死,肺组织HE染色和透射电镜检查。体外原代培养FB,传3～5代后流式细胞术检测α-SMA表达的细胞阳性率。结果:HE染色28d模型组大片肺泡结构破坏,肺泡腔消失,有成纤维细胞灶形成,电镜观察肺组织超微结构发生改变,肺间质中可见胞浆内有微丝样结构的MF。流式细胞分析结果:正常组α-SMA表达的细胞阳性率为95.5%±4.68%,模型组α-SMA表达的细胞阳性率为96.2%±2.14%,与正常组相比P>0.05。结论:原代培养的大鼠肺FB中α-SMA的阳性表达率正常组和模型组均显著增高,体外培养的大鼠肺FB传3～5代后可能有部分已经转化为肌纤维母细胞(MF)。 展开更多
关键词 Α-SMA 成纤维细胞 原代培养 表型转化
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缬沙坦对梗阻性肾病大鼠肾脏α-SMA、MCP-1表达的影响 被引量：1
4
作者 李增明 丁跃玲 《白求恩军医学院学报》 2010年第2期92-94,共3页
目的观察单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)肾病模型大鼠肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)的表达特点、意义和缬沙坦干预... 目的观察单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)肾病模型大鼠肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)的表达特点、意义和缬沙坦干预治疗的影响。方法以UUO制作肾病模型,以α-SMA及MCP-1等为观察指标,采用免疫组化、病理图像分析等方法,进行阳性表达定位、蛋白表达半定量分析。结果UUO模型组大鼠肾小管间质α-SMA表达明显,蛋白表达半定量分析明显高于对照组(P<0.01),MCP-1也表达明显,蛋白表达半定量分析明显高于对照组(P<0.01);缬沙坦组明显低于模型组(P<0.01)。结论UUO肾病模型中肾小管间质存在细胞表型转化现象,缬沙坦能抑制MCP-1的生成,限制炎症反应的放大过程;减轻α-SMA的表达,抑制肾小管间质细胞表型转化。 展开更多
关键词 单侧输尿管结扎 缬沙坦 表型转化 半定量分析
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肾络通对阿霉素肾病大鼠细胞表型转化的影响 被引量：8
5
作者 丁跃玲 赵玉庸 +1 位作者 陈志强 丁英均 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期28-30,共3页
目的肾络通对阿霉素诱导的肾病大鼠细胞表型转化的影响。方法单侧肾切除加重复阿霉素尾静脉注射制作肾病模型,以αSMA、FN、LN等为观察指标,采用免疫组化、病理图像分析和流式细胞检测等方法,进行阳性表达细胞定位和半定量及蛋白表达定... 目的肾络通对阿霉素诱导的肾病大鼠细胞表型转化的影响。方法单侧肾切除加重复阿霉素尾静脉注射制作肾病模型,以αSMA、FN、LN等为观察指标,采用免疫组化、病理图像分析和流式细胞检测等方法,进行阳性表达细胞定位和半定量及蛋白表达定量分析。结果阿霉素肾病模型组大鼠肾小管间质有αSMA明显表达,阳性细胞率和蛋白表达定量分析明显高于假手术组,且伴有FN、LN在肾小管间质和肾小球的大量沉积,肾络通组各项指标较模型组为低。结论肾络通能抑制肾小管上皮细胞表型转化,减少FN、LN等细胞外基质的沉积。 展开更多
关键词 细胞表型转化 肾病大鼠 肾络通 肾小管间质 流式细胞检测 病理图像分析 肾病模型 定量分析 蛋白表达 阿霉素诱导 尾静脉注射 单侧肾切除 α-SMA 肾小管上皮 细胞外基质 观察指标 免疫组化 细胞定位 阳性表达 FN LN 半定量
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阿霉素肾病大鼠α-SMA表达特点及缬沙坦的干预治疗 被引量：6
6
作者 丁跃玲 丁英钧 赵玉庸 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期730-733,共4页
目的观察阿霉素诱导的肾病模型大鼠肾脏αSMA、FN、LN的表达特点、意义和缬沙坦干预治疗的影响。方法单侧肾切除加重复阿霉素尾静脉注射制作肾病模型,以αSMA、FN、LN等为观察指标,采用免疫组化、病理图像分析和流式细胞检测等方法,进... 目的观察阿霉素诱导的肾病模型大鼠肾脏αSMA、FN、LN的表达特点、意义和缬沙坦干预治疗的影响。方法单侧肾切除加重复阿霉素尾静脉注射制作肾病模型,以αSMA、FN、LN等为观察指标,采用免疫组化、病理图像分析和流式细胞检测等方法,进行阳性表达定位、半定量和蛋白表达定量分析。结果阿霉素肾病模型组大鼠肾小管间质αSMA表达明显,阳性细胞率和蛋白表达半定量分析明显高于假手术组(P<0.01),且伴有FN、LN在肾小管间质和肾小球的大量沉积,缬沙坦组明显低于模型组(P<0.01)。结论阿霉素肾病模型中肾小管间质存在细胞表型转化现象,缬沙坦能抑制肾小管间质细胞表型转化,同时,减少FN、LN等细胞外基质的沉积。 展开更多
关键词 阿霉素肾病 缬沙坦 细胞表型转化 定量分析
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五味子基于miR-124调控TLR4通路介导小胶质细胞表型转化机制 被引量：1
7
作者 杨云方 张悦 +3 位作者 彭景 吴博 贾英 颜廷旭 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期377-385,共9页
探讨五味子基于microRNA-124(miR-124)调控Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)通路介导小胶质细胞表型转化的作用机制。利用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激BV2细胞建立模型,不同剂量五味子提取物(Schisandra Chinensis extrac... 探讨五味子基于microRNA-124(miR-124)调控Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)通路介导小胶质细胞表型转化的作用机制。利用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激BV2细胞建立模型,不同剂量五味子提取物(Schisandra Chinensis extract,SCE)处理细胞;miR-124抑制剂(miR-124 inhibitor)和阴性对照序列(NC inhibitor)转染至BV2细胞后用SCE处理细胞。MTT法检测细胞活性;NO试剂盒检测NO释放量;ELISA检测白细胞介素-10(interleukin-10,IL^(-1)0)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量;免疫荧光染色法检测小胶质细胞标志物离子钙结合接头分子-1(ionized calcium binding adapter molecule-1,IBA-1)、精氨酸酶-1(arginase-1,Arg-1)及下游核转录因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)核移位的影响;Western blot检测NF-κB p65、IBA-1、Arg-1、TLR4、骨髓分化蛋白88(myeloid differentiation primary factor 88,MyD88)、核因子抑制蛋白-α(nuclear factor inhibitor protein-α,IκB-α)、IκB激酶-α(inhibitor of nuclear factor-kappa B kinases-α,IKK-α)、IL-10、TNF-α等蛋白的表达。质量浓度为31.25~250μg·mL^(-1)的SCE对于细胞活性无明显影响;SCE作用后,NO释放受到抑制(P<0.001,P<0.01),IL-10释放水平升高(P<0.05),而TNF-α释放水平降低(P<0.001),同时抑制TNF-α、IBA-1、TLR4、MyD88蛋白的表达(P<0.01,P<0.001),升高IL-10、Arg-1、NF-κB p65、IKK-α蛋白表达(P<0.001,P<0.01,P<0.05),SCE还能够促进miR-124的表达(P<0.01);转染miR-124 inhibitor后,TNF-α释放量升高(P<0.001),IL-10释放量减少(P<0.05),TNF-α、IBA-1的mRNA和蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01,P<0.001),IL-10、Arg-1 mRNA和蛋白表达降低(P<0.001,P<0.01),同时抑制TLR4、MyD88的激活作用减弱。SCE可能通过上调miR-124抑制TLR4信号通路的激活从而抑制小胶质细胞M1极化,促进小胶质细胞M2极化。 展开更多
关键词 五味子提取物 miR-124 脂多糖 BV2细胞 TLR4通路 小胶质细胞表型转化
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