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靶向过氧化物酶体增殖子活化受体-γ基因siRNA腺病毒载体的构建与鉴定 被引量:4
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作者 王义生 王少华 +5 位作者 李月白 赵国强 张弛 李振伟 殷力 刘宏建 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期656-657,共2页
目的构建、鉴定靶向过氧化物酶体增殖子活化受体-γ(PPAR-γ)基因的siRNA腺病毒载体。方法遵循siRNA片段的设计原则,依据GenBank中PPAR吖基因(AF013266)的序列,设计3个特异性靶序列(36~54位、73~91位和404~422位);体外合成... 目的构建、鉴定靶向过氧化物酶体增殖子活化受体-γ(PPAR-γ)基因的siRNA腺病毒载体。方法遵循siRNA片段的设计原则,依据GenBank中PPAR吖基因(AF013266)的序列,设计3个特异性靶序列(36~54位、73~91位和404~422位);体外合成对应发卡样DNA片段,经退火后,将其克隆入pSIREN.Shuttle载体,通过PCR和I-CeuI和PI-SceI酶切鉴定后,再亚克隆入pAdeno-X腺病毒载体。对插入序列进行DNA序列分析。结果发卡样siRNA单链DNA寡核苷酸退火后,电泳可见明亮靶条带;PCR扩增和酶切鉴定得到阳性克隆pSIREN-Shuttle—siPPAR-γ1、pSIREN-Shuttle—siPPARγ-2和pSIREN-Shuttle—siPPARγ-3。亚克隆重组腺病毒载体pAdeno—X.siPPAR^t-1、pAdeno—X-siPPARγ-2和pAdenc-X—siPPARγ-3,经测序鉴定证实插入DNA序列与设计完全一致。结论成功构建3个靶向PPARγ基因的siRNA重组腺病毒载体,为进一步的基因治疗研究奠定了实验基础。 展开更多
关键词 RNA干扰 过氧化物酶体增殖子活化受体-γ 腺病毒载体
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