不同番木瓜品种植株感染环斑花叶病毒后PAL、PPO、POD活性的变化 被引量：16

1

作者 李惠华 谢志南 +1 位作者 赖瑞云 苏明华 《亚热带植物科学》 2007年第4期1-4,共4页

对不同品种番木瓜接种环斑花叶病毒后,测定植株苯丙氨酸解氨酶(PAL)、多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)的活性变化,比较各品种的抗病性。结果表明,未接种的5个品种间PAL、PPO、POD活性差异较小,其酶活性水平次序为马来10号>蜜红3号&... 对不同品种番木瓜接种环斑花叶病毒后,测定植株苯丙氨酸解氨酶(PAL)、多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)的活性变化,比较各品种的抗病性。结果表明,未接种的5个品种间PAL、PPO、POD活性差异较小,其酶活性水平次序为马来10号>蜜红3号>马来6号>马来2号>台农2号。接种后,5个品种的PAL、PPO、POD活性明显高于各对照水平,其中马来10号变化最突出,台农2号变化最缓慢。 展开更多

关键词 番木瓜环斑花叶病 苯丙氨酸解氨酶 多酚氧化酶 过氧化物酶 抗病性

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花粉管通道法介导PRSV-CP基因dsRNA转化番木瓜 被引量：7

2

作者 魏军亚 刘德兵 +2 位作者 陈业渊 蔡群芳 周鹏 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期2159-2163,共5页

以番木瓜‘蔬罗Ⅰ号’植株为受体材料,采用花粉管通道技术将番木瓜环斑病毒外壳蛋白(PRSV-CP)基因3′-端同源序列dsRNA转入番木瓜子房中。用PCR方法对T0代种子进行了分子检测,获得53株转基因番木瓜,转化率达到8.9%;对获得的T0代转基因... 以番木瓜‘蔬罗Ⅰ号’植株为受体材料,采用花粉管通道技术将番木瓜环斑病毒外壳蛋白(PRSV-CP)基因3′-端同源序列dsRNA转入番木瓜子房中。用PCR方法对T0代种子进行了分子检测,获得53株转基因番木瓜,转化率达到8.9%;对获得的T0代转基因番木瓜进行了田间抗病性鉴定,结果表明,转基因番木瓜植株对番木瓜环斑病毒(PRSV)表现为不同程度的抗性,可以推迟发病。 展开更多

关键词 花粉管通道 DSRNA 番木瓜环斑病毒(prsv)

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转PRSV复制酶基因番木瓜食品安全性的初步评价 被引量：7

3

作者 阮小蕾 侯燕 李华平 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期381-386,共6页

应用生物信息学的方法对转基因番木瓜进行实质等同性分析。将复制酶基因与多个数据库中的花生、大豆、坚果、牛奶、鸡蛋、鱼类、贝类和小麦等8类过敏源序列进行比对分析,结果未发现连续8个相同的氨基酸,据此可初步认为转入的复制酶蛋白... 应用生物信息学的方法对转基因番木瓜进行实质等同性分析。将复制酶基因与多个数据库中的花生、大豆、坚果、牛奶、鸡蛋、鱼类、贝类和小麦等8类过敏源序列进行比对分析,结果未发现连续8个相同的氨基酸,据此可初步认为转入的复制酶蛋白不是已知的致敏源。将复制酶基因进行原核表达,并纯化复性表达蛋白,再通过模拟胃肠液消化试验,结果发现纯化的变性蛋白与复性蛋白均能在15 s内降解,表明复制酶蛋白能在人的消化系统内降解,使人体发生过敏的可能性不大。通过液相萃取法,提取转基因与非转基因番木瓜中的一种内源毒物苄基异硫氰酯(benzyl isothiocyanate,BITC),将浓缩后的样品进行气相色谱分析,结果表明BITC的含量在转基因与非转基因番木瓜中差异不显著。 展开更多

关键词 番木瓜 番木瓜环斑病毒 复制酶基因 食品安全

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VIGS介导的转复制酶基因番木瓜对PRSV的抗性 被引量：5

4

作者 阮小蕾 王加峰 李华平 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期418-422,共5页

将PCR检测呈阳性的T4代转复制酶(replicase,Rep)基因番木瓜植株在苗期接种番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)Ys株系,定期采取不同部位的叶片进行Northern blot分析。结果表明:接种PRSV之前,在植株的各部位均能检测到转基因完... 将PCR检测呈阳性的T4代转复制酶(replicase,Rep)基因番木瓜植株在苗期接种番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)Ys株系,定期采取不同部位的叶片进行Northern blot分析。结果表明:接种PRSV之前,在植株的各部位均能检测到转基因完整的Rep mRNA,但接种后不同时间在接种叶以上部位陆续出现了Rep mRNA的降解;接种后30 d内,接种叶下部第1片叶上始终未出现Rep mRNA的降解;另外,在发生mRNA降解的叶片上都能相继检测到小分子干涉RNA(short interferring RNA,si RNA)的产生。这说明转基因番木瓜的抗病性与mRNA的降解及siRNA的积累有着密切的关系。这种抗性发生在转录后水平上,是由病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)介导产生的。 展开更多

关键词 番木瓜环斑病毒 病毒诱导的基因沉默 抗病机制

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番木瓜美中红品种体胚转化体系的建立 被引量：3

5

作者 饶雪琴 李华平 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期293-296,共4页

利用已构建的番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)基因,通过农杆菌介导法,建立美中红番木瓜(Carica papaya L.)体胚的转化体系。结果表明:共培养时,当农杆菌EHA105携带pCAMBIA2300质粒时,农杆菌的浓度(OD600 nm)应小于或等于0.1... 利用已构建的番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)基因,通过农杆菌介导法,建立美中红番木瓜(Carica papaya L.)体胚的转化体系。结果表明:共培养时,当农杆菌EHA105携带pCAMBIA2300质粒时,农杆菌的浓度(OD600 nm)应小于或等于0.1,其共培养后抑制农杆菌的羧苄青霉素浓度应以750 mg/L为宜;当农杆菌EHA105携带pBI121质粒时,则农杆菌的浓度(OD600 nm)应小于或等于0.8,其共培养后抑制农杆菌的羧苄青霉素的浓度则为500 mg/L;加上滤纸处理,抗生素洗涤以及洗涤后的干燥处理,可完全抑制体胚表面的农杆菌生长。对再生的番木瓜体胚进行PCR检测,结果表明PRSV基因已转入体胚中,但还需要成苗后的进一步检测。 展开更多

关键词 番木瓜 番木瓜环斑病毒 体胚 转化

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应用现代生物技术防治番木瓜RNA病毒研究进展 被引量：4

6

作者 赵辉 贺萍萍 +2 位作者 郭静远 孔华 郭安平 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期4590-4599,共10页

植物病毒几乎都是RNA病毒,所占比例达93.9%,以番木瓜环斑病毒(papaya ringspot virus,PRSV)和番木瓜畸叶嵌纹病毒(papaya leaf-distortion mosaic virus,PLDMV)为代表的RNA病毒是番木瓜生产上的最大限制因子,不抗病的品种几乎绝产。在... 植物病毒几乎都是RNA病毒,所占比例达93.9%,以番木瓜环斑病毒(papaya ringspot virus,PRSV)和番木瓜畸叶嵌纹病毒(papaya leaf-distortion mosaic virus,PLDMV)为代表的RNA病毒是番木瓜生产上的最大限制因子,不抗病的品种几乎绝产。在物理和化学防治措施效果不佳与抗性品种缺乏的情况下,现代生物技术方法被引入番木瓜的防治工作,并取得可喜的成绩。迄今为止,被实际应用的番木瓜抗病毒基因都是来自其病毒本身的基因,这类转基因番木瓜的抗病行为主要是由RNA所诱导的后转录基因沉默(RNAmediated post-transcriptional gene silencing,PTGS)所致,亦即RNA干扰。本研究综述了现代生物技术在防治番木瓜RNA病毒上的主要成果和问题,并展望了利用最新CRISPR技术防治番木瓜RNA病毒的策略。 展开更多

关键词 番木瓜 RNA病毒 番木瓜环斑病毒 番木瓜畸叶嵌纹病毒 RNA干扰 交叉保护 CRISPR基因编辑技术 转基因技术

原文传递

基于RNAi抗PRSV番木瓜株系的培育及其分子特征验证 被引量：5

7

作者 黄静 贾瑞宗 +3 位作者 孔华 郭静远 王绪朋 郭安平 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期513-520,共8页

根据RNAi原理构建的抗海南番木瓜环斑病毒(PRSV)植物表达载体p CAMBIA2300-35S-CP-RNAi-OCS,通过基因枪法将载体导入番木瓜的愈伤组织中,经卡那霉素抗性筛选后再分化成为植株。描述转化植株的分子特征同时进行抗病毒试验分析其抗病性。... 根据RNAi原理构建的抗海南番木瓜环斑病毒(PRSV)植物表达载体p CAMBIA2300-35S-CP-RNAi-OCS,通过基因枪法将载体导入番木瓜的愈伤组织中,经卡那霉素抗性筛选后再分化成为植株。描述转化植株的分子特征同时进行抗病毒试验分析其抗病性。实验结果显示:转基因株系474为单拷贝插入的杂合子,插入位点在第7号染色体supercontig_61的717 141位置;抗病毒试验中,在接种病毒后28 d内非转基因株系1280有高浓度的病毒积累并很快表现出明显的病症,而转基因株系474基本无病毒积累且无发病症状。表明转基因株系474具有较好的PRSV抗性,有待于进一步田间试验。 展开更多

关键词 番木瓜环斑病毒 番木瓜 RNAI

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原核表达的PRSV HC-Pro基因同源dsRNA诱导番木瓜抗性的研究 被引量：3

8

作者 杨国峰 沈文涛 +2 位作者 言普 黎小瑛 周鹏 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1269-1277,共9页

利用番木瓜环斑病毒(PRSV)HC-Pro基因3′端824bp区段,通过OZ-LIC法构建了含有PDK内含子的发夹RNA编码结构,并选用pSP73和M-Jm109LacY分别作为宿主载体和宿主菌,构建了高效的同源dsRNA原核表达工程菌M-Jm109LacY/pSP73-RNAi-H824,经IPTG... 利用番木瓜环斑病毒(PRSV)HC-Pro基因3′端824bp区段,通过OZ-LIC法构建了含有PDK内含子的发夹RNA编码结构,并选用pSP73和M-Jm109LacY分别作为宿主载体和宿主菌,构建了高效的同源dsRNA原核表达工程菌M-Jm109LacY/pSP73-RNAi-H824,经IPTG诱导表达的dsRNA不被DNaseI和RNaseA降解,稳定性较好。采用喷洒dsRNA粗制品的方式对番木瓜植株进行保护性处理和治疗性处理,症状观察及ELISA、Real-time RT-PCR分析结果表明,保护性处理能有效诱发对番木瓜环斑病毒的抗性(发病率低,发病时间晚);治疗性处理(植株已接种PRSV 25d)能在处理初期引起番木瓜环斑病毒积累量发生短暂降低。 展开更多

关键词 番木瓜环斑病毒 HC-PRO DSRNA 原核表达 RNA沉默

原文传递

利用酵母同源重组系统快速构建Potyvirus病毒侵染性克隆方法 被引量：1

9

作者 赵光远 庹德财 +2 位作者 沈文涛 黎小瑛 周鹏 《生命科学研究》 CAS CSCD 2015年第6期491-496,共6页

前一个时期,虽然分子生物学技术有了相当大的进步,但在构建基因全长较大的RNA病毒时,例如马铃薯Y病毒属全长侵染性cDNA克隆或者是RNA体外转录物时,会遇到很大的困难,其cDNA转入大肠杆菌(E.coli)感受态细胞时,可能会产生对宿主菌有毒性... 前一个时期,虽然分子生物学技术有了相当大的进步,但在构建基因全长较大的RNA病毒时,例如马铃薯Y病毒属全长侵染性cDNA克隆或者是RNA体外转录物时,会遇到很大的困难,其cDNA转入大肠杆菌(E.coli)感受态细胞时,可能会产生对宿主菌有毒性的物质,从而导致非特异性重组。这些问题可以利用插入内含子等方法来解决,但这些方法大多耗时费力且成功率低。以番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)为例,介绍了在不插入内含子的情况下利用酵母同源重组系统在两周之内构建完成其侵染性克隆的方法。 展开更多

关键词 马铃薯Y病毒属 番木瓜环斑病毒 酵母同源重组 穿梭质粒 侵染性克隆

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PRSV-NIb基因同源dsRNA的原核表达及其在番木瓜叶片原生质体瞬时表达体系中诱导RNA沉默的研究

10

作者 杨国峰 沈文涛 +2 位作者 言普 黎小瑛 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2013年第6期1076-1081,共6页

为探索利用PRSV-NIb基因同源dsRNA的原核表达产物在体外防治番木瓜环斑病毒的可行性,利用较保守的PRSV-NIb基因3′端的312、501和809 bp区段分别构建了含有PDK内含子的3个发夹RNA编码结构,并选用pSP73和M-Jm109LacY分别作为宿主载体和... 为探索利用PRSV-NIb基因同源dsRNA的原核表达产物在体外防治番木瓜环斑病毒的可行性,利用较保守的PRSV-NIb基因3′端的312、501和809 bp区段分别构建了含有PDK内含子的3个发夹RNA编码结构,并选用pSP73和M-Jm109LacY分别作为宿主载体和宿主菌构建了高效的dsRNA原核表达工程菌M-Jm109LacY/pSP73-RNAi-N312、M-Jm109LacY/pSP73-RNAi-N501、M-Jm109LacY/pSP73-RNAi-N809,经IPTG诱导成功表达了dsRNA,并证明dsRNA不被DNase I和RNase A降解,稳定性较好。还利用PRSV-NIb基因构建了GFP瞬时植物融合表达载体pNIb-GFP,对经3种dsRNA和GFP瞬时融合表达载体共转化的番木瓜叶片原生质体的共聚焦显微镜观察及通过半定量RT-PCR对其中mRNA表达量的分析,结果表明融合基因NIb-GFP的表达均发生了不同程度的下调,说明dsRNA在原生质体中引发了针对同源基因的沉默。 展开更多

关键词 番木瓜环斑病毒 核内含体蛋白b DSRNA 原核表达 RNA沉默

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dsRNA介导的PRSV-CP基因3′-端同源序列瞬时表达对番木瓜环斑病毒侵染的影响 被引量：2

11

作者 魏军亚 刘德兵 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 2007年第3期78-82,共5页

体外合成我国番木瓜主产区环斑病毒外壳蛋白(PRSV-CP)基因3'-端278bp同源区段,构建包含278bp正义链、内含子(PDK内含子)及278bp反义链的RNA介导的植物表达载体p2301-CPU,直接转化根癌农杆菌EHA105。通过根癌农杆菌介导的瞬时表达法... 体外合成我国番木瓜主产区环斑病毒外壳蛋白(PRSV-CP)基因3'-端278bp同源区段,构建包含278bp正义链、内含子(PDK内含子)及278bp反义链的RNA介导的植物表达载体p2301-CPU,直接转化根癌农杆菌EHA105。通过根癌农杆菌介导的瞬时表达法,研究同源dsRNA对番木瓜环斑病毒(PRSV)侵染的干扰作用。结果表明,瞬时表达的dsRNA能够特异地干扰PRSV侵染。 展开更多

关键词 DSRNA 农杆菌浸润法 干扰 番木瓜环斑病毒

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花粉管通道技术转化番木瓜的初步研究 被引量：3

12

作者 蔡群芳 魏军亚 周鹏 《生命科学研究》 CAS CSCD 2009年第1期16-19,共4页

以番木瓜"solo Ⅱ"号植株为受体材料,用花粉管通道法进行了番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因(PRSV-CP)278bp片段的遗传转化.采用质粒DNA和农杆菌菌液两种导入液,分别处理花187和232朵,收获成熟番木瓜105和30个,座果率分别为56.15%... 以番木瓜"solo Ⅱ"号植株为受体材料,用花粉管通道法进行了番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因(PRSV-CP)278bp片段的遗传转化.采用质粒DNA和农杆菌菌液两种导入液,分别处理花187和232朵,收获成熟番木瓜105和30个,座果率分别为56.15%和12.93%,随机选择每种载体的种子100粒播种,成株率分别为61%和60%.对T1幼苗(除含空载体外)全部进行PCR检测.检测结果为质粒DNA和农杆菌菌液两种导入液转化所得的幼苗阳性率分别为50.54%和51.22%. 展开更多

关键词 番木瓜 花粉管通道法 prsv—CP基因 PCR检测

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