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通过G418处理离体纯化小鼠胰腺上皮细胞 被引量：4
1
作者 李丹 冯锐成 +3 位作者 张丽新 郭方琪 梁洋 滕春波 《现代生物医学进展》 CAS 2011年第12期2242-2246,共5页
目的:探索一种能有效去除成纤维细胞,筛选有较强增殖能力上皮细胞的方法。方法:本研究利用成纤维细胞对G418敏感的特性,在成体小鼠胰腺细胞分离后,采用悬浮细胞直接接种到含30μg/mL G418的培养基中,或细胞贴壁生长汇合至50-70%后用30至... 目的:探索一种能有效去除成纤维细胞,筛选有较强增殖能力上皮细胞的方法。方法:本研究利用成纤维细胞对G418敏感的特性,在成体小鼠胰腺细胞分离后,采用悬浮细胞直接接种到含30μg/mL G418的培养基中,或细胞贴壁生长汇合至50-70%后用30至100μg/mL之间不同浓度G418处理24h、48h或72h两种方案进行上皮细胞的纯化。结果:在直接接种法培养处理中,存活的大部分细胞为成纤维细胞,上皮细胞的生长受到抑制,无法得到纯化的胰腺上皮集落;而在细胞贴壁生长汇合至50-70%后经G418处理,成纤维细胞随着处理浓度的增加死亡率也在逐渐上升,其中50μg/mL G418处理72小时对去除成纤维细胞效果最佳。结论:G418处理能够有效去除成纤维细胞,分离纯化出一群在离体条件下具有强增殖能力、形成大上皮细胞集落的细胞。该分离纯化方法为今后进一步研究成体胰腺干/祖细胞增殖与分化调控机制等问题奠定基础。 展开更多
关键词 G418 成纤维细胞 胰腺上皮细胞
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胰腺上皮细胞可能成为胰岛β细胞再生的新来源
2
作者 曹书义 袁莉 《国际内分泌代谢杂志》 2015年第2期114-116,共3页
促进β细胞再生,维持功能性β细胞的数量,是治疗糖尿病的根本.胰腺上皮细胞包括β细胞、导管细胞、腺泡细胞及α细胞.研究表明,与多能干细胞相比,这些成体细胞具有更明显的优势,可能通过不同途径重新生成β细胞从而实现β细胞的再生.已... 促进β细胞再生,维持功能性β细胞的数量,是治疗糖尿病的根本.胰腺上皮细胞包括β细胞、导管细胞、腺泡细胞及α细胞.研究表明,与多能干细胞相比,这些成体细胞具有更明显的优势,可能通过不同途径重新生成β细胞从而实现β细胞的再生.已分化的β细胞可以被诱导增殖或者退回至祖细胞状态重新分化为β细胞.而在胰腺受损、代谢应激、基因操作等条件下,其他胰腺上皮细胞可能直接转分化为β细胞或者成为内分泌兼性祖细胞再分化为β细胞. 展开更多
关键词 糖尿病 胰腺上皮细胞 胰岛Β细胞 再生
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通过整体消化法分离具有集落形成能力的胰腺上皮样细胞
3
作者 梁杰 孔德麟 +3 位作者 梁洋 李丹 冯锐成 滕春波 《现代生物医学进展》 CAS 2014年第12期2247-2250,2258,共5页
目的:胰腺上皮细胞能诱导成表达胰岛素的细胞,成为细胞替代疗法治疗糖尿病的重要来源。胰腺细胞的分离多采用机械剪切后胶原酶消化,本文在以往研究基础上,探索一种能分离得到更纯净的胰腺上皮样细胞的新方法。方法:本研究采用胰腺整体... 目的:胰腺上皮细胞能诱导成表达胰岛素的细胞,成为细胞替代疗法治疗糖尿病的重要来源。胰腺细胞的分离多采用机械剪切后胶原酶消化,本文在以往研究基础上,探索一种能分离得到更纯净的胰腺上皮样细胞的新方法。方法:本研究采用胰腺整体消化的方法,将成体小鼠整个胰腺取下,摘除系膜及大的血管,置于胶原酶中消化20min,用PBS吹打胰腺组织,得到的细胞悬液,离心后去除上清与细胞碎片,用培养基重悬实质细胞,接种于6 cm培养皿中,培养7-10天后得到单细胞集落。结果:整体消化法不剪碎胰腺组织,从而避免多种胰腺细胞的参与,得到较为纯净的胰腺上皮细胞悬液,细胞总体数量小于部分消化法,但是单细胞比率远远高于部分消化法,得到的细胞集落更纯净,不需要去除成纤维细胞,方便筛选及进一步扩大培养。结论:整体消化法能够分离纯化出一群在离体条件下具有强增殖能力、形成大的上皮样集落的细胞。该分离方法方便、快捷,为今后进一步研究成体胰腺干细胞增殖与分化调控机制等问题奠定基础。 展开更多
关键词 整体消化法 胰腺上皮样细胞 成纤维细胞
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昆明小鼠胰腺导管上皮细胞的原代和传代培养 被引量：2
4
作者 赵艳艳 秦贵军 +1 位作者 张颖辉 罗方 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2007年第6期1096-1099,共4页
目的:建立能够在体外长期培养胰腺导管上皮细胞的方法。方法:成年昆明小鼠,颈椎脱臼法处死,取胰腺组织,以Ⅴ型胶原酶消化,400目滤网过滤,分离胰腺导管上皮细胞,用添加有各种生长因子的DMEM/F12培养基培养,待细胞达到90%以上汇合时以胰... 目的:建立能够在体外长期培养胰腺导管上皮细胞的方法。方法:成年昆明小鼠,颈椎脱臼法处死,取胰腺组织,以Ⅴ型胶原酶消化,400目滤网过滤,分离胰腺导管上皮细胞,用添加有各种生长因子的DMEM/F12培养基培养,待细胞达到90%以上汇合时以胰酶消化传代。在不同时间点取样,于普通光镜和相差显微镜下观察细胞形态学变化;采用免疫细胞化学方法检测细胞角蛋白-19(CK-19)的表达情况;并行双硫腙(DTZ)染色。结果:原代及传代培养的细胞具有上皮样细胞的典型特征,CK-19染色阳性,DTZ染色阴性,可初步鉴定为胰腺导管上皮细胞。结论:所建立的原代和传代培养方法,适宜于小鼠胰腺导管上皮细胞的体外生长。 展开更多
关键词 原代培养 传代培养 胰腺导管上皮细胞 小鼠
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SD大鼠胰腺导管上皮细胞培养技术的研究 被引量：1
5
作者 龙爱梅 李富荣 +1 位作者 李路 齐晖 《江西医学院学报》 2005年第6期40-42,53,共4页
目的分离纯化SD大鼠胰腺导管上皮细胞,为将其转分化为胰岛细胞提供细胞来源。方法用酶消化法培养SD大鼠胰腺导管上皮细胞,观察细胞增殖动态,用CK-19进行免疫组化鉴定。结果胰腺导管上皮细胞可在体外有效扩增,有效去除成纤维细胞是扩增... 目的分离纯化SD大鼠胰腺导管上皮细胞,为将其转分化为胰岛细胞提供细胞来源。方法用酶消化法培养SD大鼠胰腺导管上皮细胞,观察细胞增殖动态,用CK-19进行免疫组化鉴定。结果胰腺导管上皮细胞可在体外有效扩增,有效去除成纤维细胞是扩增的关键。结论低血清培养和反复贴壁法可获得较纯的胰腺导管上皮细胞。 展开更多
关键词 胰腺导管上皮细胞 培养技术 糖尿病 胰岛细胞移植 动物 实验 大鼠
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线粒体钙单向转运体相关钙超载调控钙调蛋白对雨蛙肽诱导胰腺导管上皮细胞微丝骨架的影响
6
作者 雷宇 罗尹翔 +4 位作者 吴润泽 苏尚华 吴家实 苏明佳 杨慧莹 《医学研究与战创伤救治》 CAS 北大核心 2023年第11期1121-1126,共6页
目的 通过体外细胞研究探讨线粒体钙单向转运体(MCU)相关钙超载通过调控钙调蛋白(CaM)对雨蛙肽诱导的胰腺导管上皮细胞微丝骨架的影响。方法 使用10^(-7)mol/L雨蛙肽及10^(-5)mol/L MCU抑制剂钌红(RR)干预人胰腺导管上皮细胞(HPDE6-C7)2... 目的 通过体外细胞研究探讨线粒体钙单向转运体(MCU)相关钙超载通过调控钙调蛋白(CaM)对雨蛙肽诱导的胰腺导管上皮细胞微丝骨架的影响。方法 使用10^(-7)mol/L雨蛙肽及10^(-5)mol/L MCU抑制剂钌红(RR)干预人胰腺导管上皮细胞(HPDE6-C7)24 h,将细胞分为:Control组、雨蛙肽组、RR组、雨蛙肽+RR组。Western blot法检测细胞内MCU及CaM蛋白表达,荧光探针法检测细胞内游离Ca^(2+),免疫荧光双标法检测细胞内线粒体Ca^(2+),微丝染色法观察细胞微丝骨架结构。结果 雨蛙肽组与Control组比较,MCU及CaM蛋白表达、细胞质及线粒体内Ca^(2+)含量升高(P<0.05),细胞微丝骨架破坏;雨蛙肽+RR组与雨蛙肽组比较,MCU及CaM蛋白表达、胞质Ca^(2+)及线粒体内Ca^(2+)含量降低(P<0.05),细胞微丝骨架破坏减轻。结论 MCU相关钙超载可能通过激活CaM促进雨蛙肽诱导的胰腺导管上皮细胞微丝骨架的破坏。 展开更多
关键词 线粒体钙单向转运体相关钙超载 钙调蛋白 雨蛙肽 胰腺导管上皮细胞 微丝骨架
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角质细胞生长因子促进大鼠胰腺导管上皮细胞体外增殖 被引量：1
7
作者 吴刚 张晓健 白光 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2012年第11期1279-1283,共5页
目的探讨不同浓度的角质细胞生长因子(KGF)对大鼠胰腺导管上皮细胞增殖的影响,寻求最佳浓度。方法免疫细胞化学染色及RT-PCR方法鉴定SD大鼠胰腺导管上皮细胞;不同浓度的KGF刺激胰腺导管上皮细胞增殖,寻求最佳浓度。结果大鼠胰腺导管上... 目的探讨不同浓度的角质细胞生长因子(KGF)对大鼠胰腺导管上皮细胞增殖的影响,寻求最佳浓度。方法免疫细胞化学染色及RT-PCR方法鉴定SD大鼠胰腺导管上皮细胞;不同浓度的KGF刺激胰腺导管上皮细胞增殖,寻求最佳浓度。结果大鼠胰腺导管上皮细胞表达Nestin和CK19,不表达Insulin及Glucagon;不同浓度KGF刺激胰腺导管上皮细胞2 d后,细胞均有不同程度增殖,20μg/L KGF作用2 d时,细胞数为0.35±0.03,显著高于对照组的0.27±0.02(P<0.01)。结论 KGF在本实验的剂量范围内可促进胰腺导管上皮细胞增殖,20μg/L为促进增殖的最佳浓度。 展开更多
关键词 胰腺导管上皮细胞 角质细胞生长因子 增殖 糖尿病
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氧化应激对人胰腺导管上皮细胞增殖的影响
8
作者 戴欣欣 郝建宇 《北京医学》 CAS 2014年第1期1-4,F0003,共5页
目的探讨氧化应激对人胰腺导管上皮细胞增殖的影响。方法不同浓度过氧化氢(H2O2)作用于人胰腺导管上皮细胞6～48 h,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞光密度(OD),绘制细胞生长曲线,计算细胞存活率;采用碘化丙啶(PI)单染色法检测细... 目的探讨氧化应激对人胰腺导管上皮细胞增殖的影响。方法不同浓度过氧化氢(H2O2)作用于人胰腺导管上皮细胞6～48 h,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞光密度(OD),绘制细胞生长曲线,计算细胞存活率;采用碘化丙啶(PI)单染色法检测细胞周期,计算细胞增殖指数(proliferation index,PI’)。结果细胞处理6 h,H2O2300μmol/L组存活率下降[(79.10±9.21)%vs.(100.00±14.84)%,P<0.05]。12 h H2O2300μmol/L组OD值降低(0.277±0.022 vs.0.309±0.015;P<0.05),存活率明显下降[(56.90±29.91)%vs.(100.00±20.91)%,P<0.01]。24h H2O2100、200、300μmol/L组OD值明显降低(0.493±0.011,0.434±0.029,0.373±0.014 vs.0.529±0.011;P<0.01),存活率明显下降[(87.95±3.73)%,(67.61±9.87)%,(46.84±4.76)%vs.(100.00±3.85)%;P<0.01],PI’明显降低[(25.50±1.81)%,(25.20±1.80)%,(21.11±1.78)%vs.(32.20±2.33)%;P<0.01]。48 h H2O225μmol/L组OD值明显升高(0.683±0.014 vs.0.587±0.024,P<0.01),存活率明显升高[(127.39±3.99)%vs.(100.00±6.72)%;P<0.01],H2O225、50μmol/L组PI’明显升高[(44.20±4.75)%,(40.50±2.67)%vs.(35.40±1.25)%;P<0.01];而H2O2100、200、300μmol/L组OD值明显降低(0.533±0.011,0.440±0.018,0.376±0.003 vs.0.587±0.024;P<0.01),存活率明显下降[(84.74±3.08)%,(58.20±5.10)%,(39.87±0.71)%vs.(100.00±6.72)%;P<0.01],PI’明显降低[(24.30±1.83)%,(21.97±1.82)%,(16.94±3.55)%vs.(35.40±1.25)%;P<0.01]。结论低浓度H2O2显著促进人胰腺导管上皮细胞增殖,呈时效及量效关系;反之,高浓度H2O2抑制细胞增殖。 展开更多
关键词 氧化应激 人胰腺导管上皮细胞 增殖 过氧化氢
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