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左卡尼汀对大鼠单侧输尿管梗阻肾间质纤维化的影响 被引量：1
1
作者 熊鹰 李世文 +1 位作者 卢童 汪涛 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1129-1131,共3页
目的观察左卡尼汀（Lc）对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾间质纤维化的影响，探讨治疗UUO时配对盒基因-2（PAX2）、仪．平滑肌肌动蛋白（01．SMA）、转化生长因子-β1（TGF-β1）的表达及意义。方法将36只SD大鼠分为3组：假手术组（Sham）... 目的观察左卡尼汀（Lc）对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾间质纤维化的影响，探讨治疗UUO时配对盒基因-2（PAX2）、仪．平滑肌肌动蛋白（01．SMA）、转化生长因子-β1（TGF-β1）的表达及意义。方法将36只SD大鼠分为3组：假手术组（Sham）、UUO组（uuo）、左卡尼汀组（LC）。各组分别在第7、14天后取肾组织检测a-SMA、PAX2、TGF-β1表达。结果LC组中鼠肾组织PAX2mRNA水平较UUO组明显降低（P〈0．05），但比Sham组高（P〈0．05）。免疫组织化学结果示各组大鼠肾组织PAX2蛋白水平差异有统计学意义（P〈0．05），第7天平均吸光度（A）值分别为UUO组0．5547±0．0593、LC组0．4225±0．0298、Sham组0．2556-4-0．0359。第14天平均4值分别为：UUO组0．6376±0．0448、LC组0．4731±O．0342、Sham组0．2480±0．0256。第7、14天鼠肾组织中仅-SMA和TGF-β1蛋白表达水平均提示：Lc组较UUO组明显降低（P〈0．05），但比Sham组高（P〈0．05）。结论LC对肾小管纤维化及肾损伤有明显的保护作用，同时可抑制PAX2的再表达，并降低d—SMA、TGF-β1表达水平，可降低肾小管纤维化程度，减少肾小管细胞凋亡。 展开更多
关键词 左卡尼汀 单侧输尿管梗阻 配对盒基因-2 A-平滑肌肌动蛋白 转化生长因子-Β1
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WNT4基因沉默对PAX2诱导肾小管上皮细胞间充质转分化的影响 被引量：5
2
作者 李里 南晓娟 吴玉斌 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期720-725,I0002,I0003,共8页
目的:观察体外转染配对盒基因2(PAX2)对WNT4通路的激活作用及WNT4通路对PAX2诱导转分化的作用,探讨PAX2转分化机制。方法:应用脂质体介导将重组质粒pEGFP-PAX2转染入体外培养的大鼠肾小管上皮细胞,经G418筛选,建立稳定表达PAX2细胞系。... 目的:观察体外转染配对盒基因2(PAX2)对WNT4通路的激活作用及WNT4通路对PAX2诱导转分化的作用,探讨PAX2转分化机制。方法:应用脂质体介导将重组质粒pEGFP-PAX2转染入体外培养的大鼠肾小管上皮细胞,经G418筛选,建立稳定表达PAX2细胞系。细胞分为稳定转染PAX2组、空载组和对照组。Western blotting法和实时荧光定量(Real-time)PCR法检测各组细胞WNT4和β-catenin表达。应用靶向WNT4基因的siRNA沉默稳定转染PAX2细胞的WNT4,应用荧光显微镜观察转染效率,进行沉默鉴定筛选出最佳干扰链。将最佳干扰链WNT4siRNA转染至稳定转染PAX2细胞。在沉默24、48、72和96h应用Westernblotting法和Real-time PCR法检测β-catenin、正常肾小管上皮细胞表型标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)和成纤维细胞表型标志物α-肌动蛋白(α-SMA)表达,同时筛选出沉默最佳时间点。应用免疫组织化学染色法检测沉默最佳时间点组E-cadherin和α-SMA蛋白表达。结果:Western blotting和Real-time PCR检测,稳定转染PAX2细胞组WNT4和β-catenin蛋白及mRNA表达水平较空载组和对照组明显增加(P<0.05)。阴性siRNA转染入稳定转染PAX2细胞24h后荧光显微镜观察,转染效率为47.46%±4.48%。3条WNT4干扰链分别转染至稳定转染PAX2细胞,Real-time PCR和Western blotting结果显示第3干扰链沉默效果最佳,WNT4mRNA表达抑制率为66.9%±3.8%(P<0.05);WNT4蛋白表达抑制率为63.7%±2.5%(P<0.05)。将最佳干扰链转染至稳定转染PAX2细胞,干扰24、48、72和96h后,各时间点细胞中的β-catenin mRNA及蛋白表达水平较对照组下调,72h组下调明显(P<0.05);各时间点细胞中E-cadherin mRNA及蛋白表达水平较对照组明显上调,72h组上调明显(P<0.05);各时间点细胞中α-SMA mRNA及蛋白表达水平较对照组明显下调,72h下调明显(P<0.05)。结论:PAX2转染至肾小管上皮细胞后激活了WNT4通路,PAX2在体外诱导正常肾小管上皮细胞间充质转分化可能� 展开更多
关键词 WNT4 配对盒基因2 肾小管上皮细胞 转分化 RNA干扰
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WIF-1阻断WNT通路对PAX2诱导的肾小管上皮细胞间充质转分化作用的影响 被引量：2
3
作者 李里 宫亮 吴玉斌 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期816-820,共5页
目的体外转染配对盒基因2(PAX2)观察其对WNT通路的激活作用,应用WIF-1阻断WNT信号通路后观察WNT通路对PAX2基因诱导转分化的作用,探讨PAX2基因转分化机制。方法应用脂质体介导将重组质粒pEGFP-PAX2转染入体外培养的大鼠肾小管上皮细胞,... 目的体外转染配对盒基因2(PAX2)观察其对WNT通路的激活作用,应用WIF-1阻断WNT信号通路后观察WNT通路对PAX2基因诱导转分化的作用,探讨PAX2基因转分化机制。方法应用脂质体介导将重组质粒pEGFP-PAX2转染入体外培养的大鼠肾小管上皮细胞,经G418筛选建立稳定表达PAX2细胞系,将实验细胞分为转染组、空载组和对照组,采用Western blot和实时PCR对各组进行WNT通路分子WNT4及β-catenin表达检测。加入WIF-1至稳定转染PAX2细胞中,分为WIF-1 5μg/mL组、WIF-1 10μg/mL组、WIF-1 15μg/mL组及稳转组。加药后48 h收集细胞,应用免疫荧光法、Western blot和实时PCR检测β-catenin、正常肾小管上皮细胞表型标志物E钙黏蛋白(E-cadherin)和成纤维细胞表型标志物α-肌动蛋白(α-SMA)表达。结果 Western blot和实时PCR结果显示,转染组WNT4和β-catenin蛋白和mRNA表达水平较空载组及对照组明显增加(P<0.05)。免疫荧光法、Western blot和实时PCR结果显示,WIF-1 5μg/mL组、WIF-1 10μg/mL组和WIF-1 15μg/mL组β-catenin和α-SMA蛋白及mRNA表达较稳转组下调(P<0.05),WIF-1 15μg/mL组下降明显,各浓度WIF-1组E-cadherin蛋白及mRNA较稳转组明显上调(P<0.05),WIF-1 15μg/mL组明显。结论 PAX2基因可以在体外肾小管上皮细胞激活WNT通路。应用WIF-1阻断WNT通路后出现转分化逆转。推测PAX2基因可能通过WNT通路诱导上皮细胞间充质转分化。 展开更多
关键词 配对盒基因2 肾小管上皮细胞 转分化 WNT抑制因子1
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配对盒基因2对正常肾小管上皮细胞间充质转分化的诱导作用 被引量：1
4
作者 李里 南晓娟 吴玉斌 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期565-569,F0003,共6页
目的:观察体外转染配对盒基因2(PAX2)对肾小管上皮细胞表型标志物的影响,探讨PAX2诱导转分化的作用,为肾纤维化治疗提供依据。方法:正常肾小管上皮细胞株NRK52E分为对照组、空载组(转染pGC-Fu空质粒)和转染组(采用脂质体转染法将pGC-FU-... 目的:观察体外转染配对盒基因2(PAX2)对肾小管上皮细胞表型标志物的影响,探讨PAX2诱导转分化的作用,为肾纤维化治疗提供依据。方法:正常肾小管上皮细胞株NRK52E分为对照组、空载组(转染pGC-Fu空质粒)和转染组(采用脂质体转染法将pGC-FU-GFP-PAX2质粒转染至细胞中)。转染72h后应用倒置相差显微镜观察各组细胞形态,应用Western blotting法和Real-time PCR法检测PAX2蛋白和mRNA表达水平;转染72h后应用免疫组织化学法、Western blotting法和Real-time PCR法检测各组细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α-肌动蛋白(α-SMA)及其mRNA表达水平。结果:pGC-FU-GFP-PAX2转染72h后,转染组细胞绿色荧光强度较对照组明显增强,且肾小管上皮细胞的形态伸长;Western blotting法检测,转染组PAX2蛋白表达水平明显高于空载组和对照组(P<0.05);Real-time PCR检测,转染组细胞的PAX2mRNA表达水平明显高于空载组和对照组(P<0.05);转染组细胞中的E-cadherin染色较空载组和对照组明显减弱;α-SMA染色较空载组和对照组明显增强。Western blotting法检测,转染组细胞中E-cadherin表达水平明显低于空载组和对照组(P<0.05);α-SMA表达水平明显高于空载组和对照组(P<0.05);Real-time PCR检测,转染组细胞中E-cadherin mRNA表达水平明显低于空载组和对照组(P<0.05);α-SMA mRNA表达水平明显高于空载组和对照组(P<0.05)。结论:PAX2转染正常肾小管上皮细胞后E-cadherin表达减少,α-SMA表达增加,PAX2可能在体外诱导正常肾小管上皮细胞间充质转分化。 展开更多
关键词 配对盒基因2 肾小管上皮细胞 转分化 转染
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成对框基因2蛋白在C57BL/6J小鼠脑发育进程中的表达 被引量：1
5
作者 丁彩云 蔚洪恩 周党侠 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2022年第6期545-550,共6页
目的 研究正常C57BL/6J小鼠脑发育进程中的组织形态学变化以及成对框基因2(Pax2)蛋白在胚胎期和出生后脑组织中的表达规律。方法 取C57BL/6J小鼠胚胎期11.5 d、13.5 d、15.5 d的胎鼠头部和胚胎期17.5 d、出生后0 d、7 d、14 d和30 d小... 目的 研究正常C57BL/6J小鼠脑发育进程中的组织形态学变化以及成对框基因2(Pax2)蛋白在胚胎期和出生后脑组织中的表达规律。方法 取C57BL/6J小鼠胚胎期11.5 d、13.5 d、15.5 d的胎鼠头部和胚胎期17.5 d、出生后0 d、7 d、14 d和30 d小鼠的全脑组织进行石蜡包埋,连续矢状位切片后进行HE染色和免疫组织化学染色。结果 胚胎期11.5d可见小鼠完整的5个脑泡结构,15.5 d大脑皮质出现5层结构,小脑皮质外颗粒层明显可见。出生后各脑区按照时空顺序继续发育,到P30大脑皮质和小脑皮质均发育成熟出现典型的结构特征。Pax2蛋白在脑组织中的表达主要定位于细胞核和神经纤维上,在胚胎期的表达主要集中在脑桥延髓部位且呈弥漫性表达,E13.5达到高峰,出生后在脑桥延髓的表达逐渐减弱,但在小脑中的表达较胚胎期增强;E13.5时在小脑内开始少量表达,P7时达到高峰,P14后表达量逐渐降低;Pax2蛋白在外颗粒层中于E17.5时开始表达,出生后主要在内颗粒层和髓质中强烈表达,到P30时表达减弱,仅分布在内颗粒层中。结论 小鼠脑发育在一定的时空顺序下,经历了一个复杂的过程。Pax2蛋白在小鼠脑组织中的表达呈现出一定的时空变化规律,可能参与小鼠脑桥延髓早期区域化的建立和小脑的发育过程。 展开更多
关键词 成对框基因2 脑发育 免疫组化染色 小鼠
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卵巢浆液性腺癌组织中全长配对盒基因2蛋白表达及其预后意义的研究 被引量：1
6
作者 徐金峰 刘琦 +2 位作者 马爱清 刘冲 石群立 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2012年第7期734-737,共4页
目的全长配对盒基因2(paired box gene 2,PAX2)是卵巢上皮癌最常见的基因变异位点之一。文中通过检测PAX2蛋白在卵巢浆液性腺癌(ovary serous adenocarcinoma,OSAC)中的表达,探讨其与临床病理参数和预后的相关性及意义。方法应用免疫组... 目的全长配对盒基因2(paired box gene 2,PAX2)是卵巢上皮癌最常见的基因变异位点之一。文中通过检测PAX2蛋白在卵巢浆液性腺癌(ovary serous adenocarcinoma,OSAC)中的表达,探讨其与临床病理参数和预后的相关性及意义。方法应用免疫组织化学方法测定60例卵巢浆液性腺癌组织标本中PAX2蛋白的表达,用spearman相关系数检验PAX2蛋白表达水平与部分临床病理参数及之间的相关性,并结合随访结果进行生存分析。结果 60例卵巢浆液性腺癌组织中PAX2蛋白阳性表达率为36.7%。PAX2蛋白表达与病理分级及FIGO分期呈负相关(P<0.05),与患者年龄、肿瘤复发及大小无关(P>0.05)。Cox单因素分析及Kaplan-Meier分析显示卵巢浆液性腺癌患者的预后与PAX2蛋白表达正相关(P<0.05),与FIGO分期及病理分级负相关(P<0.05)。结论 PAX2蛋白高表达提示肿瘤恶性程度低,并有可能成为临床评估卵巢癌患者预后的指标。 展开更多
关键词 全长配对盒基因2 卵巢浆液性腺癌 免疫组织化学 预后
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