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里氏木霉木聚糖酶XYN II基因在毕赤酵母中的分泌表达 被引量:6
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作者 欧阳嘉 王向明 +2 位作者 张清 严明 许琳 《林产化学与工业》 EI CAS CSCD 2007年第5期83-88,共6页
采用RT—PCR方法克隆到里氏木霉RutC-30木聚糖酶(XYNⅡ)的cDNA序列。测序结果表明,XYNⅡ的cDNA基因开放阅读框长度为669bp,编码223个氨基酸,N端1~19个氨基酸为潜在的信号肽序列,删去潜在信号肽序列,将里氏木霉木聚糖酶的基因(... 采用RT—PCR方法克隆到里氏木霉RutC-30木聚糖酶(XYNⅡ)的cDNA序列。测序结果表明,XYNⅡ的cDNA基因开放阅读框长度为669bp,编码223个氨基酸,N端1~19个氨基酸为潜在的信号肽序列,删去潜在信号肽序列,将里氏木霉木聚糖酶的基因(xynⅡ)构建到巴斯德毕赤酵母分泌表达载体pPIC9K上,线性化后电击转化到巴斯德毕赤酵母中,经G418筛选和PCR鉴定后的转化子用1%的甲醇进行诱导,对重组木聚糖酶活检测显示该基因能在毕赤酵母中表达有生物活性的XYNⅡ并分泌到胞外。发酵液中的酶活在诱导培养60h达到1.45IU/mL,最适酶解温度为50℃,最适pH值为6.0。 展开更多
关键词 里氏木霉 木聚糖酶 毕赤酵母 分泌表达
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禽传染性支气管炎病毒M基因在毕赤酵母中表达与蛋白反应活性检测 被引量:5
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作者 廖娟 王红宁 +1 位作者 田浪 张毅 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1373-1376,1381,共5页
将禽传染性支气管炎病毒(IBV)M基因克隆到毕赤巴斯?表达载体pPIC9K中,构建了重组表达载体pPIC9K-M,电击转化毕赤巴斯?酵母GS115,经MD和MM平板筛选和PCR鉴定后,采用G418抗性梯度筛选得到高拷贝重组菌株GS115/pPIC9K-M His+Mut+,重组菌株... 将禽传染性支气管炎病毒(IBV)M基因克隆到毕赤巴斯?表达载体pPIC9K中,构建了重组表达载体pPIC9K-M,电击转化毕赤巴斯?酵母GS115,经MD和MM平板筛选和PCR鉴定后,采用G418抗性梯度筛选得到高拷贝重组菌株GS115/pPIC9K-M His+Mut+,重组菌株用1%的甲醇诱导分泌表达,并对表达产物进行SDS-PAGE、Western-blot分析。结果表明,IBV M基因在毕赤酵母中成功获得了表达,表达蛋白的相对分子质量约为33 000,能与IBV阳性血清特异性结合。将表达蛋白初步纯化后作为包被抗原,ELISA检测结果显示表达蛋白与特异性抗体反应良好,表明表达的M蛋白生物学活性良好。本研究表达的IBV M蛋白可作为制备IB诊断抗原的基础材料,对IB的防治有重要理论和实用价值。 展开更多
关键词 禽传染性支气管炎病毒 M基因 毕赤酵母 分泌表达 活性检测
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禽传染性支气管炎病毒S1基因在毕赤酵母中的表达 被引量:1
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作者 余祖华 王红宁 +2 位作者 周生 黄勇 柳萍 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期799-802,共4页
根据GenBank已公布的传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)株S1基因序列及pPIC9K表达载体序列,设计1对IBV S1基因表达片段的PCR引物,用RT-PCR方法扩增出长度为1 566 bp IBV S1基因表达片段,5′端不含信号肽序列,3′端... 根据GenBank已公布的传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)株S1基因序列及pPIC9K表达载体序列,设计1对IBV S1基因表达片段的PCR引物,用RT-PCR方法扩增出长度为1 566 bp IBV S1基因表达片段,5′端不含信号肽序列,3′端添加了终止密码子。用限制性内切酶SnaB和Not将S1基因和载体pPIC9K酶切回收后连接,构建了重组表达载体pPIC9K-S1。用限制性内切酶Bgl将表达质粒pPIC9K-S1线性化,然后用电转化的方法导入毕赤酵母GS115,在MD平板上生长的转化子经过PCR鉴定和表型筛选后,获得了整合型阳性重组菌株GS115/pPIC9K-S1 His+Muts。将重组菌株在1%甲醇中进行诱导分泌表达,并对表达产物进行SDS-PAGE、Western blot分析。结果显示,IBV S1基因在毕赤酵母中成功获得了表达,表达蛋白的分子量约为76 000,能与IBV阳性血清特异性结合,表达的蛋白占上清中总蛋白量的12.5%。 展开更多
关键词 禽传染性支气管炎病毒 S1基因 毕赤酵母 分泌表达
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