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利用T7和PR双启动子的新型表达载体的构建及其应用 被引量：4
1
作者 孟莉 韩保光 +3 位作者 马贤凯 邹民吉 凌世淦 王嘉玺 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 1998年第4期260-264,312,共6页
目的：构建具有λＰＲ与Ｔ７双启动子的新型原核表达载体ｐＤＯＧ，以便使用同一载体研究不同诱导条件下，重组蛋白在大肠杆菌中表达、降解以及折叠的情况，从而选择最佳的诱导条件。方法：采用ｐＢＶ２２０与ｐＥＴ－３表达载体作为原... 目的：构建具有λＰＲ与Ｔ７双启动子的新型原核表达载体ｐＤＯＧ，以便使用同一载体研究不同诱导条件下，重组蛋白在大肠杆菌中表达、降解以及折叠的情况，从而选择最佳的诱导条件。方法：采用ｐＢＶ２２０与ｐＥＴ－３表达载体作为原始材料，将ｐＥＴ－３上包括Ｔ７启动子与Ｔ７ｇ－１０翻译起始序列的一段序列克隆到ｐＢＶ２２０载体λＰＲ启动子的下游，构建了双启动子表达载体ｐＤＯＧ。结果：ｐＤＯＧ载体含有λＰＲ与Ｔ７两个启动子，可以选择性地使用热诱导或在较低温度下使用化学诱导表达重组蛋白。该载体带有三个相位的多克隆位点，外源基因可以融合载体的少数几个氨基酸表达，也可以直接表达。该载体已成功地用于ＨＩＶ－１核心蛋白、人ＩＬ－６等外源基因的高效表达。 展开更多
关键词 表达载体 T7启动子 λpr启动子 大肠杆菌 构建
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HIV-1 型 gag 前体蛋白片段在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定 被引量：3
2
作者 韩保光 孟莉 +5 位作者 马贤凯 凌世淦 宋晓国 邹民吉 王鸿雁 王嘉玺 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 1997年第2期84-88,共5页
利用新型原核表达载体ｐＤＯＧ，在大肠杆菌中高效表达了人类免疫缺陷病毒１型（ＨＩＶ－１）ｇａｇ基因片段。表达载体利用λＰＲ启动子以及Ｔ７噬菌体基因１０（ｇ１０）的核糖体结合位点（ＲＢＳ）来有效起始表达基因的翻译。表达片... 利用新型原核表达载体ｐＤＯＧ，在大肠杆菌中高效表达了人类免疫缺陷病毒１型（ＨＩＶ－１）ｇａｇ基因片段。表达载体利用λＰＲ启动子以及Ｔ７噬菌体基因１０（ｇ１０）的核糖体结合位点（ＲＢＳ）来有效起始表达基因的翻译。表达片段ＰＧ１包括ｐ１７Ｃ端１３个氨基酸、整个ｐ２４以及ｐ１５Ｎ端７４个氨基酸。与ＰＧ１相比，ＰＧ２片段不含有ｐ１７序列，并缺失了ｐ２４Ｎ端７７个氨基酸。两者的表达量均占总菌体的２０％以上。重组蛋白以包涵体形式存在，在提取包涵体后，经过一步离子柱层析，可以纯化到９０％以上的纯度。ＰＧ１可被一株抗ｐ２４的单抗特异识别，而ＰＧ２则不能。纯化的重组蛋白能与ＨＩＶ－１阳性血清发生特异反应，可以用于ＨＩＶ－１抗体检测。 展开更多
关键词 GAG pr启动子 艾滋病毒 前体蛋白 大肠杆菌
原文传递
人类免疫缺陷病毒Ⅰ型Gag前体蛋白片段在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定
3
作者 韩保光 孟莉 +6 位作者 邹民吉 凌世淦 宋晓国 赵春文 段聚宝 王嘉玺 马贤凯 《生物技术通讯》 CAS 1996年第2期49-53,59,共6页
利用新型原核表达载体pDOG,在大肠杆菌中高效表达了人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)gag基因片段。表达载体利用λPR启动子以及T7g-10的RBS来有效起始表达基因的翻译。表达片段PG1包括p17C-端13个氨基酸、整个p24以及p15N-端74个氨基酸。与PG... 利用新型原核表达载体pDOG,在大肠杆菌中高效表达了人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)gag基因片段。表达载体利用λPR启动子以及T7g-10的RBS来有效起始表达基因的翻译。表达片段PG1包括p17C-端13个氨基酸、整个p24以及p15N-端74个氨基酸。与PG1相比,PG2片段不含有p17序列,并缺失了p24N-端77个氨基酸。两者的表达量均占总菌体蛋白的20％以上。重组蛋白以包涵体形式存在,在提取包涵体后,经过一步离子柱层析,可以纯化到90％以上的纯度。PG1可被一株抗p24的单抗特异识别,而PG2则不能。纯化的重组蛋白能与HIV-1阳性血清发生很强的特异反应,可以用于HIV-1抗体检测中。 展开更多
关键词 HVI-1 Gag前体蛋白 表达 纯化 鉴定 pr启动子
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罗勒烯信号传导途径各组分突变体高通量活体荧光筛选技术系统的建立 被引量：2
4
作者 徐健 李浪 +2 位作者 刘琪文 刘春林 阮颖 《中国农学通报》 2015年第14期102-107,共6页
为了高效率地发现罗勒烯信号传导途径上的各信号传递成分,本研究拟采用正向遗传学的策略,即利用EMS诱变与荧光素酶-荧光素活体荧光成像检测技术体系相结合的方法筛选突变体。为此,构建了指示基因启动子PR1pro::Luciferase和PDF1.2pro::L... 为了高效率地发现罗勒烯信号传导途径上的各信号传递成分,本研究拟采用正向遗传学的策略,即利用EMS诱变与荧光素酶-荧光素活体荧光成像检测技术体系相结合的方法筛选突变体。为此,构建了指示基因启动子PR1pro::Luciferase和PDF1.2pro::Luciferase质粒并转化拟南芥;通过抗性筛选与PCR检测,鉴定获得了T3代转基因纯合子植株。同时,购买了合适的高灵敏CCD相机、暗箱与软件,通过组装调试,成功制造了一台自制的、经济适用的活体荧光检测仪。转基因纯合植株经过茉莉酸、水杨酸或罗勒烯处理和喷施荧光底物后,放到荧光检测仪中,成功观察到了诱导后的转基因植株释放出高亮荧光,说明活体荧光成像检测系统构建成功。这些结果为进一步利用正向遗传学的方法高效筛选罗勒烯信号传导途径中各成分的突变体植株,以及阐明罗勒烯诱导的防御反应的作用机理奠定了良好基础。 展开更多
关键词 β-罗勒烯 pr1启动子 PDF1.2启动子 荧光素酶基因 活体荧光检测系统
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