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PERK/ATF4/CHOP信号通路在饱和脂肪酸诱导肝细胞脂毒性凋亡中的作用 被引量：6
1
作者 曹洁 姚隆 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第8期811-818,共8页
目的研究在饱和脂肪酸软脂酸钠诱导肝细胞脂毒性凋亡过程中,蛋白激酶R样内质网激酶(PKR-like ER kinase,PERK)/活化转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)/C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)信号通路的作用,... 目的研究在饱和脂肪酸软脂酸钠诱导肝细胞脂毒性凋亡过程中,蛋白激酶R样内质网激酶(PKR-like ER kinase,PERK)/活化转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)/C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)信号通路的作用,对参与饱和脂肪酸诱导肝细胞脂毒性凋亡的主要UPR信号通路进行探讨。方法MTT法筛选不同浓度(0、36、72、108、144、180μmol/L)软脂酸钠作用L02和HepG2细胞株的最佳浓度后,将细胞分为正常对照组和模型组(软脂酸钠108μmol/L),甘油三酯试剂盒检测细胞内甘油三酯含量,流式细胞术Annexin V-PE/7-AAD双染检测细胞凋亡率,Western blot法检测Bip、t-PERK、磷酸化PERK(p-PERK)、ATF4、CHOP蛋白的表达。将PERK shRNA转染L02和HepG2细胞沉默PERK基因,以Control shRNA作为对照,将细胞分为Control shRNA、Control shRNA+软脂酸钠、PERK shRNA、PERK shRNA+软脂酸钠组,Western blot法检测t-PERK、ATF4、CHOP蛋白的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果软脂酸钠成功诱导建立肝细胞脂变模型。在体外实验中,软脂酸钠能够诱导肝细胞发生脂肪变性以及脂变肝细胞凋亡,细胞凋亡率随软脂酸钠诱导时间延长而增加,与对照组相比,模型组48 h细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。软脂酸钠诱导L02和HepG2细胞0、12、24、48 h,各时间点Bip、p-PERK、ATF4和CHOP蛋白的表达呈时间依赖性增加(P<0.05)。在使用和不使用软脂酸钠诱导下,PERK shRNA组细胞t-PERK蛋白表达水平显著低于Control shRNA组(P<0.05);软脂酸钠诱导下,与Control shRNA组相比,PERK shRNA组细胞ATF4和CHOP蛋白表达水平显著降低,细胞凋亡率也明显降低(P均<0.05)。结论饱和脂肪酸能够诱导脂变肝细胞凋亡,并且启动过度内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ER stress),激活PERK/ATF4/CHOP信号通路。阻断PERK通路能够在一定程度上抑制脂变肝细胞凋亡,提示ER stress UPR信号途径PERK/ATF4/CHOP参� 展开更多
关键词 非酒精性脂肪性肝病 内质网应激 脂毒性凋亡 软脂酸钠 蛋白激酶R样内质网激酶
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糖络宁对DPN大鼠和雪旺细胞内质网应激PERK通路的影响 被引量：11
2
作者 高变娥 姚伟洁 +4 位作者 杨鑫伟 史浩田 朱笳悦 刘仁慧 许利平 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期115-123,共9页
目的：观察糖络宁对糖尿病周围神经病变（DPN）大鼠和雪旺细胞内质网应激RNA依赖的蛋白激酶样内质网激酶（PERK）通路相关蛋白和mRNA表达的影响。方法：60只SD雄性大鼠,除空白组外,其余各组大鼠采用高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素... 目的：观察糖络宁对糖尿病周围神经病变（DPN）大鼠和雪旺细胞内质网应激RNA依赖的蛋白激酶样内质网激酶（PERK）通路相关蛋白和mRNA表达的影响。方法：60只SD雄性大鼠,除空白组外,其余各组大鼠采用高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素（STZ,35 mg·kg^-1）复制DPN大鼠模型,随机分为模型组,氧化三甲胺组,糖络宁低、高剂量组,连续给药12周。采用苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠坐骨神经病理学改变,免疫荧光染色法检测大鼠坐骨神经中p-PERK,磷酸化的真核翻译起始因子2a（p-eIF2a）和转录活化因子4（ATF4）蛋白的表达;建立高糖诱导的雪旺细胞模型,分为25 mmol·L^-1葡萄糖组（control）,150 mmol·L^-1葡萄糖组（model）,150 mmol·L^-1葡萄糖＋0.1%,1%和10%糖络宁组,分别干预24,48 h。采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）法检测细胞中PERK,核转录因子E2相关因子2（Nrf2）,血红素加氧酶-1（HO-1）,B淋巴细胞瘤-2相关的X蛋白（Bax）和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）mRNA表达水平。结果：坐骨神经病理学改变：空白组大鼠坐骨神经有髓神经纤维的髓鞘结构完整致密,形态规则,排列整齐。模型组出现严重脱髓鞘现象,结构松散,形态不规则,排列紊乱。糖络宁组有轻微脱髓鞘现象,结构近似完整,形态近似规则。经积分吸光度统计,与空白组相比,模型组明显降低（P〈0.01）;雪旺细胞PERK,Nrf2,HO-1,Caspase-3和Bax mRNA表达水平,与空白组比较,同时相的模型组中PERK,Bax和Caspase-3 mRNA的表达明显升高（P〈0.05,P〈0.01）,与模型组比较,同时相的糖络宁3个含药血清剂量组中以上3个指标表达明显降低（P〈0.05,P〈0.01）,而Nrf2和HO-1 mRNA的表达明显升高（P〈0.05,P〈0.01）;坐骨神经中p-PERK,p-eIF2a和ATF4蛋白表达,与空白组比较,模型组蛋白表达量显著增加（P〈0.01）;与模型组比较,糖络宁组蛋白表达量显 展开更多
关键词 糖络宁 糖尿病周围神经病变 内质网应激 RNA依赖的蛋白激酶样内质网激酶 雪旺细胞
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