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布氏杆菌PCR检测方法的建立 被引量:19
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作者 王胜昌 邵伟娟 +1 位作者 谢建云 高诚 《上海实验动物科学》 2003年第3期154-156,162,共4页
根据编码31-kDa布氏杆菌蛋白的基因(BSCP31),设计两对引物。对布氏杆菌R型(粗糙型)抗原及S型(光滑型)抗原、大肠杆菌、溶血性链球菌、嗜肺巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、螺旋杆菌、绿脓杆菌分别采用两种提取、纯化DNA的方法,并以纯化的各细... 根据编码31-kDa布氏杆菌蛋白的基因(BSCP31),设计两对引物。对布氏杆菌R型(粗糙型)抗原及S型(光滑型)抗原、大肠杆菌、溶血性链球菌、嗜肺巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、螺旋杆菌、绿脓杆菌分别采用两种提取、纯化DNA的方法,并以纯化的各细菌DNA为模板,分别进行内、外引物PCR反应及套式PCR反应,反应时以灭菌超纯水作为空白对照。结果显示:进行内、外引物PCR反应和套式PCR反应时,布氏杆菌R型及S型均出现预期的扩增带594bp、460bp及460bp,且套式扩增后条带亮度明显增强,而作为验证PCR特异性或对照的大肠杆菌、溶血性链球菌、嗜肺巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、螺旋杆菌、绿脓杆菌、灭菌超纯水均无扩增带。验证敏感性时用外引物对布氏杆菌R型、S型DNA进行扩增后,最低可检测到1pg的布氏杆菌DNA。 展开更多
关键词 布氏杆菌 pcr检测 抗原 粗糙型 光滑型
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江苏某奶牛场健康奶牛体内产志贺毒素大肠杆菌的分离鉴定及其对小鼠致病性的研究 被引量:12
2
作者 薛涛 顾丛丛 +4 位作者 高崧 焦新安 周琼 张文俊 刘秀梵 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期830-837,共8页
通过对江苏省某奶牛场连续6个月的定群、定畜跟踪调查,获得产志贺毒素大肠杆菌(STEC)在该牛场分布的广泛性、持续性和血清型多样化的资料,并对一些重要血清型分离株作致病性的鉴定。基于本实验室已经建立的多重PCR方法对stx1、stx2、eae... 通过对江苏省某奶牛场连续6个月的定群、定畜跟踪调查,获得产志贺毒素大肠杆菌(STEC)在该牛场分布的广泛性、持续性和血清型多样化的资料,并对一些重要血清型分离株作致病性的鉴定。基于本实验室已经建立的多重PCR方法对stx1、stx2、eaeA、ehxA共4个基因进行检测,对检测出的阳性样品,非O157STEC采用多重PCR结合CT-SMAC平板的分离方法,而O157STEC通过免疫磁珠结合O157显色平板的分离方法。结果表明,该奶牛场STEC的初筛率为16.1%(112/696),分离率为11.1%(77/696)。分离株属于35种O血清型和60种O∶H血清型。该场的优势血清型为O4、O26和O93,O157在该场存在,但并非优势血清型。77个分离株中,stx2基因的检出率为68.8%,远远高于其它毒力基因,如stx1(19.5%)、eaeA(11.7%)和ehxA(20.8%)。该场分离到一些O157和O26血清型的菌株,对小鼠具有较强的致病性。奶牛是STEC的天然宿主,可健康带菌。除了O157STEC外,非O157STEC中一些高致病力菌株对人类的健康也存在威胁。 展开更多
关键词 产志贺毒素大肠杆菌 奶牛 多重pcr O抗原 H抗原 毒力基因
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Detection of carcinoembryonic antigen mRNA in peritoneal washes from gastric cancer patients and its clinical significance 被引量:9
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作者 Yan-Song Zhang Jun Xu +5 位作者 Guang-Hua Luo Rong-Chao Wang Jiang Zhu Xiao-Ying Zhang Peter Nilsson-Ehle Ning Xu 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2006年第9期1408-1411,共4页
AIM: To establish a more sensitive method for detection of free cancer cells in peritoneal washes from gastric cancer patients during surgery and to evaluate its clinical significance. METHODS: The carcinoembryonic ... AIM: To establish a more sensitive method for detection of free cancer cells in peritoneal washes from gastric cancer patients during surgery and to evaluate its clinical significance. METHODS: The carcinoembryonic antigen (CEA) mRNA levels in peritoneal washes from 65 cases of gastric cancer were detected by real-time RT-PCR. Peritoneal lavage cytology (PLC) was applied simultaneously to detection of free cancer cells. Negative controls included peritoneal washes from 5 cases of benign gastric disease and blood samples from 5 adult healthy volunteers. RESULTS: There was no CEA mRNA in peritoneal washes from benign gastric disease patients and in blood of adult healthy volunteers. The positive percentage of free cancer cells detected by real-time RT-PCR was 47.7% and only 22.3% by PLC. The positive rate of CEA mRNA was significantly related with serosa invasion between peritoneal metastasis and stage of gastric cancer. CONCLUSION: Real-time RT-PCR is a sensitive and rapid method for the detection of free cancer cells in peritoneal washes. The presence of free cancer cells in peritoneal washes is related to the Pathologic stage of gastric cancer. 展开更多
关键词 Real-time RT-pcr Peritoneal washes Gastric cancer Carcinoembryonic antigen
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江苏某地健康绵羊群产志贺毒素大肠杆菌体内分离株的分子流行病学及致病力 被引量:8
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作者 顾丛丛 薛涛 +3 位作者 徐婷婷 高崧 焦新安 刘秀梵 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期676-683,共8页
【目的】探讨江苏某羊场健康绵羊体内产志贺毒素大肠杆菌的带菌和流行情况,同时就分离株的致病力和对Vero细胞的毒性作用作了研究。【方法】基于本实验室已经建立的EHEC O157:H7 EDL933W株的stx1、stx2、eaeA、hlyA四个基因的多重PCR检... 【目的】探讨江苏某羊场健康绵羊体内产志贺毒素大肠杆菌的带菌和流行情况,同时就分离株的致病力和对Vero细胞的毒性作用作了研究。【方法】基于本实验室已经建立的EHEC O157:H7 EDL933W株的stx1、stx2、eaeA、hlyA四个基因的多重PCR检测并配合选择性增菌、平板筛选等方法对STEC进行分离鉴定。【结果】在为期6个月的连续跟踪调查中,共分离到STEC菌株107株,分离率为19.4%(107/550)。分离株属于41种O血清型、62种O:H血清型,未定型(ONT)有22株,粗糙型(OR)1株。其中属于绵羊STEC的优势血清型有O5(2株)、O91(1株)、O103(1株)。本文检测到的优势血清型为O93,stx2阳性菌株的分离率较stx1阳性菌株的分离率高,LD50测定结果表明分离株对小鼠致病力不高,受试的3个分离株均不能致小鼠死亡。对107株stx阳性分离株噬菌斑试验表明,71株阳性菌株携带噬菌体(66.3%,71/109)。受试分离株进行Vero细胞毒性试验,其中有一个菌株stx基因阳性但不能使Vero细胞产生病变。【结论】绵羊是STEC的天然宿主,可健康带菌。虽然STEC分离株对小鼠的致病力较弱,但不能排除其对人类安全的威胁。STEC携带志贺毒素基因并不意味着一定表达志贺毒素,需对志贺毒素的表达及调控机理做进一步的研究。 展开更多
关键词 产志贺毒素大肠杆菌 pcr O抗原 H抗原 半数致死量 VERO细胞
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五重PCR检测大肠杆菌O157∶H7菌体抗原和毒素基因 被引量:7
5
作者 薄清如 周志江 +8 位作者 吴小伦 徐海聂 黄云君 冯家望 王小玉 黄建珍 陈静静 潘文波 廖秀云 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期169-172,共4页
针对 O1 5 7∶H7大肠杆菌 O抗原抗血清同多种细菌有交叉反应 ,而单一毒素基因并不是 O1 5 7∶ H7所独有这一特点 ,建立了五重和四重 PCR方法 ,同时检测大肠杆菌 O1 5 7∶ H7的 O抗原、H抗原和 4种毒素基因 ,可在较短的时间内检测、鉴定... 针对 O1 5 7∶H7大肠杆菌 O抗原抗血清同多种细菌有交叉反应 ,而单一毒素基因并不是 O1 5 7∶ H7所独有这一特点 ,建立了五重和四重 PCR方法 ,同时检测大肠杆菌 O1 5 7∶ H7的 O抗原、H抗原和 4种毒素基因 ,可在较短的时间内检测、鉴定大肠杆菌 O1 5 7∶ H7,并有较高的特异性 ,解决了传统细菌检测方法耗时长、灵敏度低 。 展开更多
关键词 大肠杆菌 菌体抗原 毒素基因 多重pcr技术
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HBsAg、HBeAg滴度与HBV-DNA水平的关系 被引量:8
6
作者 邵伟 童福易 阮翠娟 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2003年第5期475-476,共2页
目的 探讨HBsAg、HBeAg滴度与HBV_DNA的关系 ,为临床诊治提供有益参考。方法 采用免疫发光和荧光定量聚合酶链反应技术分别检测了 2 0例血清中的HBsAg、HBeAg和HBV_DNA。结果 HBsAg滴度与HBV_DNA水平呈正的直线相关关系(rs=0 87,t=8... 目的 探讨HBsAg、HBeAg滴度与HBV_DNA的关系 ,为临床诊治提供有益参考。方法 采用免疫发光和荧光定量聚合酶链反应技术分别检测了 2 0例血清中的HBsAg、HBeAg和HBV_DNA。结果 HBsAg滴度与HBV_DNA水平呈正的直线相关关系(rs=0 87,t=8 7,P <0 0 0 1) ;HBeAg滴度与HBV_DNA水平呈正的相关关系 (re=0 2 4,t=1 0 9,P >0 0 5) ,而不一定呈直线相关。结论 HBsAg、HBeAg的滴度与HBV_DNA水平相关。通过检测HBsAg。 展开更多
关键词 HBsAg HBEAG HBV-DNA FQ—pcr 乙型肝炎病毒 病毒复制 诊断
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轮状病毒VP4基因的克隆与核苷酸序列分析 被引量:7
7
作者 王鹏雁 陈创夫 +3 位作者 余兴龙 徐兴然 涂长春 张高轩 《动物科学与动物医学》 2002年第5期25-28,共4页
用反转录聚合酶链式反应 (RT- PCR)技术 ,从轮状病毒感染的细胞中扩增了 816 bp的 VP4片段中抗原表位区。通过 T4 DNA连接酶将其直接连接于克隆载体质粒 p GEM- T上 ,转化至受体菌 DH5 α中。提取质粒经 PCR扩增、酶切鉴定 ,证明重组质... 用反转录聚合酶链式反应 (RT- PCR)技术 ,从轮状病毒感染的细胞中扩增了 816 bp的 VP4片段中抗原表位区。通过 T4 DNA连接酶将其直接连接于克隆载体质粒 p GEM- T上 ,转化至受体菌 DH5 α中。提取质粒经 PCR扩增、酶切鉴定 ,证明重组质粒 p T- V4中含有轮状病毒的 VP4基因片段。经核苷酸序列分析 ,表明克隆了轮状病毒主要保护性抗原 展开更多
关键词 核苷酸序列分析 轮状病毒 保护性抗原 VP4基因 基因克隆 RT-pcr 非细菌性腹泻 基因工程疫苗
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沙门氏菌常见H抗原特异相的PCR快速检测 被引量:6
8
作者 刘华伟 马立农 +1 位作者 郭蔼光 邱立 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期38-41,共4页
运用PCR技术检测沙门氏菌常见的H抗原特异相,甲型副伤寒、猪霍乱、鼠伤寒等常见危害人和动物的沙门氏菌因H抗原差异而分别获得特异性扩增。此技术具有快速简便、敏感性高和特异性强等优点,值得在对常见危害人和动物的沙门氏菌的快速检... 运用PCR技术检测沙门氏菌常见的H抗原特异相,甲型副伤寒、猪霍乱、鼠伤寒等常见危害人和动物的沙门氏菌因H抗原差异而分别获得特异性扩增。此技术具有快速简便、敏感性高和特异性强等优点,值得在对常见危害人和动物的沙门氏菌的快速检测中推广应用。 展开更多
关键词 沙门氏菌 H抗原 pcr 快速检测
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腹腔冲洗液和腹膜组织检测胃癌腹腔微转移的临床意义 被引量:5
9
作者 王夫景 高岩 +3 位作者 黄跃南 佟佰峰 张秀云 杨维良 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第17期2148-2150,共3页
目的:运用细胞学及RT-PCR方法对胃癌患者术中腹腔冲洗液、腹膜组织进行检测,以探讨对预测胃癌腹腔微转移的意义.方法:胃癌68例和胃良性病变5例,收集患者术中腹腔冲洗液,并同时切除少量大网膜、腹膜作为对照.用RT-PCR方法测定冲洗液中游... 目的:运用细胞学及RT-PCR方法对胃癌患者术中腹腔冲洗液、腹膜组织进行检测,以探讨对预测胃癌腹腔微转移的意义.方法:胃癌68例和胃良性病变5例,收集患者术中腹腔冲洗液,并同时切除少量大网膜、腹膜作为对照.用RT-PCR方法测定冲洗液中游离细胞的CEAmRNA表达,同时作冲洗液细胞学检查(PLC).结果:腹腔冲洗液和腹膜组织中的CEAmRNA的阳性率分别为36.8%(25/68),和38.2%(26/68),皆高于腹腔冲洗液细胞学25.0%(17/68).CEAmRNA的阳性率与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、浆膜侵犯深度呈正相关.结论:CEART-PCR方法对于检测腹腔微量游离癌细胞较PLC有更高的灵敏度和特异性,是一种检测胃癌腹腔微转移的有效方法. 展开更多
关键词 RT-pcr CEA 胃癌 腹膜转移 腹腔冲洗液 细胞学检查
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人癌胚抗原单链抗体基因的构建和筛选 被引量:6
10
作者 章美云 孔健 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1996年第5期470-474,共5页
从分泌抗癌胚抗原(carcinoembryoniantigen,CEA)单抗的杂交瘤细胞株C50中提取总RNA,逆转录成cDNA,PCR扩增分别得到抗体轻、重链可变区基因,再利用两对PCR引物合成和扩增得到全单链抗体... 从分泌抗癌胚抗原(carcinoembryoniantigen,CEA)单抗的杂交瘤细胞株C50中提取总RNA,逆转录成cDNA,PCR扩增分别得到抗体轻、重链可变区基因,再利用两对PCR引物合成和扩增得到全单链抗体基因.将含轻、重链可变区序列的DNA片段克隆于含噬菌体基因Ⅲ的噬菌粒pCANTAB5.重组克隆在噬菌体表面表达基因Ⅲ与单链抗体的融合蛋白.表达具抗原结合活性的单链抗体的重组噬菌体可以通过亲和筛选的方法筛选得到并富集.利用该方法我们可以从许多分泌不同抗体的杂交瘤细胞RNA中快速克隆和筛选功能性抗体可变区基因. 展开更多
关键词 癌胚抗原 抗体基因 制备
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五指山小型猪近交系白细胞抗原Ⅰ类3基因的研究 被引量:5
11
作者 孙俊丽 牟玉莲 +2 位作者 刘小林 冯书堂 王素荣 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期2053-2061,共9页
【目的】为探讨五指山小型猪(WZSP)近交系群体中SLAⅠ3(SLA-3)位点等位基因分布结构及其特性。【方法】利用4对引物,采用RT-PCR扩增了32头WZSPSLA-3基因部分外显子1、外显子2和大部分外显子3序列。根据家系和扩增结果,选择8头个体的PCR... 【目的】为探讨五指山小型猪(WZSP)近交系群体中SLAⅠ3(SLA-3)位点等位基因分布结构及其特性。【方法】利用4对引物,采用RT-PCR扩增了32头WZSPSLA-3基因部分外显子1、外显子2和大部分外显子3序列。根据家系和扩增结果,选择8头个体的PCR产物克隆测序。【结果】获得9个不同的核苷酸序列。与GenBank中所用SLA-3基因的核苷酸序列及其编码的氨基酸序列进行比较分析,确定这9个序列均为SLA-3位点上的新等位基因,但这些等位基因间核苷酸变异很少;氨基酸序列比较发现猪和人之间有很高的保守性。同时,构建了23个SLA-3的等位基因和1个HLA-A等位基因核苷酸序列的系统树。【结论】WZSP在SLA-3位点和其它猪品种有明显的差异,拥有其独特的遗传资源。从分子水平为WZSPSLA-3基因的分子分型及特异单倍体猪的培育和异种器官移植实验用动物的研究提供理论依据。 展开更多
关键词 五指山小型猪近交系 白细胞抗原 经典SLAⅠ3基因 RT-pcr
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可溶性抗CD47单抗对人树突细胞分化与功能的影响 被引量:2
12
作者 林茂芳 俞静 严力行 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期709-712,共4页
目的探讨抗CD4 7可溶性单抗B6H12对树突细胞分化及功能的影响。方法利用rhGM CSF、IL 4、细菌脂多糖 (LPS)组合在体外诱导人外周血单核细胞为树突细胞 ,并在培养体系中添加单抗B6H12。以透射电镜观察树突细胞形态 ,流式细胞术分析树突... 目的探讨抗CD4 7可溶性单抗B6H12对树突细胞分化及功能的影响。方法利用rhGM CSF、IL 4、细菌脂多糖 (LPS)组合在体外诱导人外周血单核细胞为树突细胞 ,并在培养体系中添加单抗B6H12。以透射电镜观察树突细胞形态 ,流式细胞术分析树突细胞膜表面分子表达。半定量RT PCR法及ELISA法分别检测树突细胞IL 12mRNA表达水平及蛋白质含量。Brdu ELISA法检测树突细胞刺激同种异型淋巴细胞增殖能力。结果树突细胞膜表面有CD4 7高表达 (94 %~ 98% )。B6H12单抗处理的树突细胞组与未加B6H12单抗组比较 ,CD80 + 细胞为 (6 8.14± 7.4 1) %vs(89.17± 8.5 9) % ;CD86 + 细胞为 (6 7.33± 4 .71) %vs(87.2 7± 3.5 6 ) % ;CD83+ 细胞为 (40 .0 8± 14 .80 ) %vs(72 .77± 8.6 8) % ;CD1a+ 细胞为 (6 6 .4 5± 4 .0 6 ) %vs(95 .93± 3.0 3) % ,HLA DR+ 细胞为 (40 .6 7± 13.4 8) %vs(98.97± 1.0 1) %。B6H12单抗显著地下调树突细胞IL 12mRNA及IL 12 P70 表达水平 (P <0 .0 5 ) ,且Brdu掺入量也显著的降低 (P <0 .0 1)。结论 可溶性CD4 7单抗能影响人树突细胞向成熟分化 ,并抑制其功能。 展开更多
关键词 树突细胞 单抗 CD4 抗C IL—12 抗B 分化 RNA 表达水平 RT—pcr
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呼吸型鸡传染性支气管炎病毒的抗原定位与动态分布 被引量:4
13
作者 祝玉卿 曾祥伟 +1 位作者 张芳 魏萍 《现代畜牧兽医》 2005年第4期6-8,共3页
应用间接免疫荧光抗体(IF)和RT-PCR法对人工感染IBV-M41株的SPF鸡不同脏器中的病毒进行了跟踪检测.结果在感染后24 h气管中最早出现特异性荧光,感染后第3 d肺脏和肾脏出现特异性荧光,感染后第5d肝脏、脾脏、法氏囊、直肠等脏器也不同程... 应用间接免疫荧光抗体(IF)和RT-PCR法对人工感染IBV-M41株的SPF鸡不同脏器中的病毒进行了跟踪检测.结果在感染后24 h气管中最早出现特异性荧光,感染后第3 d肺脏和肾脏出现特异性荧光,感染后第5d肝脏、脾脏、法氏囊、直肠等脏器也不同程度的出现特异性荧光.特异性荧光在气管中最强,持续时间也最长,可达14d或更长;在肺脏和肾脏可持续3~5d;而在其他器官持续1~3d.试验结果表明气管、肺脏、肾脏都是M41株病毒增殖的场所,但随感染时间的延长,病毒最终定位于主要的靶器官气管.IFA和RT-PCR方法均可以对IBV抗原定位,相对来说IFA法更直观,而RT-PCR更灵敏. 展开更多
关键词 鸡传染性支气管炎病毒 抗原定位 动态分布 呼吸型 RT-pcr方法 RT-pcr 特异性 跟踪检测 SPF鸡 人工感染 荧光抗体 间接免疫 持续时间 试验结果 病毒增殖 感染时间 肾脏 肺脏 法氏囊 可持续 M41 靶器官 IBV IFA 脏器 肝脏
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肺癌组织中黑色素瘤抗原-3基因mRNA的表达 被引量:4
14
作者 吴逸明 巴月 +3 位作者 赵国强 李志远 何维微 张振中 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2002年第2期153-156,共4页
目的 :检测肺癌组织中黑色素瘤抗原 3基因 (MAGE 3)mRNA的表达。方法 :用逆转录 套式聚合酶链反应 (RT PCR)对 31例肺癌患者癌组织和相应癌旁组织MAGE 3mRNA表达情况进行测定 ;PE 377DNA测序仪对 5例10个RT PCR扩增产物中的目的基因... 目的 :检测肺癌组织中黑色素瘤抗原 3基因 (MAGE 3)mRNA的表达。方法 :用逆转录 套式聚合酶链反应 (RT PCR)对 31例肺癌患者癌组织和相应癌旁组织MAGE 3mRNA表达情况进行测定 ;PE 377DNA测序仪对 5例10个RT PCR扩增产物中的目的基因片段进行DNA序列测定。结果 :31例肺癌患者癌组织中 2 6例表达MAGE 3mRNA ,阳性率为 83.9% ;相应的癌旁组织均未表达。DNA序列测定证明PCR扩增产物中目的基因片段均为MAGE 3cDNA序列 ,所测 5例样本中 4例样本有 2个相同位置的碱基发生了点突变 ,导致一个氨基酸残基改变。结论 :①MAGE 3mRNA在肺癌中呈高比例表达 ,提示此抗原有可能作为肺癌患者免疫治疗的靶抗原 ;②我国肺癌患者中存在MAGE 展开更多
关键词 MAGE-3 MRNA 肺肿瘤 肿瘤抗原 基因表达 RT-pcr
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HIV检验技术的研究进展 被引量:4
15
作者 宋兴华 姜世辉 向华国 《实用医技杂志》 2006年第14期2393-2395,共3页
艾滋病是由人类免疫缺陷病毒(HIV)感染引起的一种严重威胁人类身体健康的疾病。为有效遏止HIV的蔓延,除寻求更加有效的疫苗和治疗药物外,HIV早期诊断十分重要,其早期诊断主要靠实验诊断,包括病原学、免疫学、分子生物学等。
关键词 人类免疫缺陷病毒 聚合酶链反应 抗原
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柔嫩艾美耳球虫ZJ株5401基因的克隆和序列分析 被引量:2
16
作者 杜爱芳 王素华 索勋 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期592-596,共5页
利用RT PCR方法扩增出了柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)ZJ(浙江)株的子孢子表面抗原5401基因。把这一基因片段克隆到PGEM T克隆载体上,得到的阳性克隆经PCR鉴定及酶切分析,结果表明重组子(pGEM T 5401)中含有5401基因,该序列全长为864bp,序... 利用RT PCR方法扩增出了柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)ZJ(浙江)株的子孢子表面抗原5401基因。把这一基因片段克隆到PGEM T克隆载体上,得到的阳性克隆经PCR鉴定及酶切分析,结果表明重组子(pGEM T 5401)中含有5401基因,该序列全长为864bp,序列本身是一个开放阅读框,将克隆得到的基因与国外报道的5401基因比较,有两个碱基发生有义突变,引起两个氨基酸发生突变,核苷酸同源性为99 8%,氨基酸同源性为99 3%。克隆出的5401基因可以用于将来重组疫苗的研究。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 RT—pcr ZJ株 5401基因 克隆 序列分析 E.TENELLA 子孢子 表面抗原 重组子 碱基 氨基酸 突变 核苷酸 同源性 疫苗
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PCR-SSP方法对西北地区回族NA抗原基因分型 被引量:4
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作者 刘孟黎 郭菊莲 +8 位作者 蒋冬玲 兰炯采 陈强 胡荣华 郭一鸣 孟庆宝 武大林 刘忠 胡宗煌 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期220-221,共2页
目的:通过NA基因分型,了解中国西北地区回族人群NA基因多态性。方法:用PCR-SSP方法对115名健康、无血缘关系个体进行NA 基因分型。结果:在研究对象中NA1 基因频率为0.5696,NA2 基因频率为0.4304。结论:在我国西北地区回族中,NA杂合子多... 目的:通过NA基因分型,了解中国西北地区回族人群NA基因多态性。方法:用PCR-SSP方法对115名健康、无血缘关系个体进行NA 基因分型。结果:在研究对象中NA1 基因频率为0.5696,NA2 基因频率为0.4304。结论:在我国西北地区回族中,NA杂合子多于纯合子,NA1 展开更多
关键词 中性粒细胞 NA抗原 pcr-SSP 基因分型
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定量RT-PCR方法检测大肠癌外周血CEAmRNA方法及临床应用 被引量:4
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作者 郝立强 孟荣贵 +1 位作者 张卫 戴建新 《大肠肛门病外科杂志》 2001年第1期8-10,共3页
目的 :介绍定量巢式反转录聚合酶链反应 (Nested- RT- PCR)检测大肠癌外周血 CEAm RNA方法及其临床应用 ,提高大肠癌及其转移的早期诊断率。方法 :用竞争性 Nested- RT- PCR方法检测了 10例大肠癌患者术前和术后外周血 CEAm RNA并进行... 目的 :介绍定量巢式反转录聚合酶链反应 (Nested- RT- PCR)检测大肠癌外周血 CEAm RNA方法及其临床应用 ,提高大肠癌及其转移的早期诊断率。方法 :用竞争性 Nested- RT- PCR方法检测了 10例大肠癌患者术前和术后外周血 CEAm RNA并进行定量。结果 :成功建立了定量 Nested- RT- PCR技术检测 CEAm RNA方法。 10例标本中 8例为阳性 ,并且随着治疗的进展 ,CEAm RNA的量也逐渐变化。结论 :定量巢式反转录聚合酶链反应检测技术检测大肠癌患者外周血 CEAm RNA的方法稳定可靠 ,可进行量化。 展开更多
关键词 大肠癌 癌胚抗原 CEAMRNA 肿瘤转移 RT-pcr
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夹心免疫-PCR检测旋毛虫循环抗原的研究(英文) 被引量:2
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作者 李辉 许汴利 +2 位作者 赵旭东 邓艳 蔺西萌 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第9期769-775,共7页
目的建立以多抗为捕获抗体和单抗为检测抗体的夹心免疫-PCR检测旋毛虫循环抗原。方法利用杂交瘤技术制备抗旋毛虫单抗;旋毛虫抗原免疫家兔,分离纯化兔血清,制备兔抗旋毛虫多抗。多抗作为捕获抗体包被酶标板,单抗为检测抗体,选择适宜多... 目的建立以多抗为捕获抗体和单抗为检测抗体的夹心免疫-PCR检测旋毛虫循环抗原。方法利用杂交瘤技术制备抗旋毛虫单抗;旋毛虫抗原免疫家兔,分离纯化兔血清,制备兔抗旋毛虫多抗。多抗作为捕获抗体包被酶标板,单抗为检测抗体,选择适宜多抗和单抗浓度,建立夹心ELISA方法,再利用亲和素和生物素的高结合力连接起标记了生物素的抗体和DNA片段,将抗原抗体特异反应的免疫技术同无限扩增DNA片段的基因检测技术结合,利用PCR反应对DNA片段的扩增能力,提高检测灵敏度。结果制备了兔抗旋毛虫多抗,间接ELISA法筛选出与多种寄生虫抗原无交叉反应的单抗F4C6,夹心ELISA检测旋毛虫抗原最低浓度为0.05μg/ml,免疫PCR方法检测最低浓度为0.1ng/ml。结论首次建立夹心免疫-PCR检测旋毛虫抗原的方法,检测旋毛虫抗原的灵敏度高于传统ELISA方法104倍。 展开更多
关键词 旋毛虫病 循环抗原 ELISA IMMUNO-pcr
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REV感染肉种鸡后动态病理学观察与抗原分布及检测 被引量:3
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作者 朱国 刁秀国 +3 位作者 成子强 王桂花 孟祥凯 高婷婷 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1065-1069,共5页
用网状内皮组织增生病病毒(REV)人工接种1日龄肉种鸡,定期剖杀,通过病理组织学观察病变特征及肿瘤的发生发展;用免疫组化、PCR检测抗原与病毒在体内各器官的分布规律;超薄切片观察肿瘤细胞、病毒的形态。结果显示,肝脏、脾脏、胸腺、法... 用网状内皮组织增生病病毒(REV)人工接种1日龄肉种鸡,定期剖杀,通过病理组织学观察病变特征及肿瘤的发生发展;用免疫组化、PCR检测抗原与病毒在体内各器官的分布规律;超薄切片观察肿瘤细胞、病毒的形态。结果显示,肝脏、脾脏、胸腺、法氏囊较早出现明显的肿瘤增生灶,在这些器官内免疫组化阳性信号出现最早,且信号最强,在5周龄时,心肌、腺胃、肺、肾、骨髓等器官才开始出现阳性信号,但呈中度的阳性反应,9周龄后阳性信号开始减弱。肝脏、脾脏、胸腺、法氏囊、骨髓扩增出REV的LTR基因片段,超薄切片显示病毒多分布在胞浆内和细胞间隙内。研究发现病变明显的组织中,阳性反应较强,肿瘤细胞增生明显,即强阳性反应的组织器官易形成肿瘤转移灶及肿瘤结节,同时,抗原最早出现在这些器官说明其中可能存在REV的靶细胞。虽然阳性信号在腺胃出现较晚,但90%以上的腺胃肿大说明腺胃也是REV的主要侵害器官。 展开更多
关键词 网状内皮组织增生病病毒 病理组织学 抗原分布 pcr 电镜观察
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