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红松ISSR-PCR实验系统影响因素 被引量：103
1
作者 冯富娟 王凤友 刘彤 《植物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期326-331,共6页
本文探讨了红松(Pinus koraiensis Sieb. et Zucc.) ISSR实验中的各种影响因素,分别对红松的鲜叶、干叶、胚和胚乳4种材料进行了DNA的提取和PCR扩增,证明4种取样方式都是可行的。另外分析了模板的纯度和浓度、dNTP浓度以及TaqDNA聚合酶... 本文探讨了红松(Pinus koraiensis Sieb. et Zucc.) ISSR实验中的各种影响因素,分别对红松的鲜叶、干叶、胚和胚乳4种材料进行了DNA的提取和PCR扩增,证明4种取样方式都是可行的。另外分析了模板的纯度和浓度、dNTP浓度以及TaqDNA聚合酶的浓度等对ISSR-PCR扩增的影响;尝试了不同的退火温度、延伸时间和循环次数, 筛选出17个扩增稳定且多态性丰富的ISSR引物;建立了红松ISSR的最佳反应体系,为进行红松种群间遗传分化的研究奠定基础。 展开更多
关键词 红松 ISSR-pcr 种群 遗传分化
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正交设计优化落叶松ISSR-PCR反应体系 被引量：45
2
作者 林萍 张含国 谢运海 《生物技术》 CAS CSCD 2005年第5期34-37,共4页
该文利用正交试验设计的方法,对落叶松ISSR-PCR反应的5因素4水平进行试验,试验结果运用MINITAB软件进行分析,建立了落叶松ISSR-PCR反应的最佳体系,即在20μl反应体系中,模板50-200 ng,0.5μmol/L的引物,1×反应缓冲液,dNTP为0.15mmo... 该文利用正交试验设计的方法,对落叶松ISSR-PCR反应的5因素4水平进行试验,试验结果运用MINITAB软件进行分析,建立了落叶松ISSR-PCR反应的最佳体系,即在20μl反应体系中,模板50-200 ng,0.5μmol/L的引物,1×反应缓冲液,dNTP为0.15mmol/L-0.2mmol/L,1U的TaqDNA聚合酶,Mg2+2.0mmol/L-2.5 mmol/L。并进一步进行梯度退火试验,找到了最适的落叶松ISSR退火温度为56.4℃。 展开更多
关键词 落叶松 ISSR-pcr 正交设计 反应体系
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牡丹SCoT分子标记正交优化及引物筛选 被引量：44
3
作者 侯小改 王娟 +3 位作者 贾甜 张钰乾 侯娟 李嘉珏 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2011年第5期92-96,共5页
以牡丹基因组DNA为模板,采用L16(45)正交试验设计对影响目标起始密码子多态性-聚合酶链式反应(SCoT-PCR)的五因素(Taq酶用量、Mg2+浓度、模板DNA用量、dNTPs浓度和引物浓度)进行优化试验,建立了优化的牡丹SCoT-PCR反应体系:Mg2+2.50 mmo... 以牡丹基因组DNA为模板,采用L16(45)正交试验设计对影响目标起始密码子多态性-聚合酶链式反应(SCoT-PCR)的五因素(Taq酶用量、Mg2+浓度、模板DNA用量、dNTPs浓度和引物浓度)进行优化试验,建立了优化的牡丹SCoT-PCR反应体系:Mg2+2.50 mmol/L、dNTPs 0.25 mmol/L、引物0.60μmol/L、Taq DNA聚合酶0.50 U、模板DNA 1.00 ng/μL,1×PCR-Buffer,总体积20.00μL。比较各因素对扩增反应的结果,其中以Mg2+浓度的影响最大,DNA模板用量的影响最小。运用牡丹17个品种验证了该体系稳定可靠,并从36个SCoT引物中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的24个引物。这一体系的建立及多态性引物的筛选为今后利用SCoT标记技术对牡丹进行相关研究提供了科学依据。 展开更多
关键词 牡丹 SCoT-pcr 反应体系 正交设计 引物筛选
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正交设计优化大豆SSR-PCR反应体系及引物筛选 被引量：28
4
作者 苏辉 李志刚 宋书宏 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第2期99-102,共4页
以大豆(Glycine maxL.)为材料,研究了PCR反应体系的主要成分对大豆SSR扩增结果的影响,并确定影响SSR扩增结果的各因素的最佳用量。以CTAB法提取的大豆叶片DNA为模板,应用L16(44)正交设计对影响大豆SSR-PCR的主要参数进行优化,建立适合大... 以大豆(Glycine maxL.)为材料,研究了PCR反应体系的主要成分对大豆SSR扩增结果的影响,并确定影响SSR扩增结果的各因素的最佳用量。以CTAB法提取的大豆叶片DNA为模板,应用L16(44)正交设计对影响大豆SSR-PCR的主要参数进行优化,建立适合大豆SSR-PCR反应的最佳体系。结果表明:各因素不同水平浓度对PCR反应结果均有显著影响。大豆SSR-PCR优化反应体系为:2.0μL10×PCRBuffer,30 ng模板DNA,150μmol/LdNTP,0.4μmol/LSSR引物,1.5 UTaqDNA聚合酶,2.0 mmol/L Mg2+,加ddH2O至终体积20.0μL。优化的PCR扩增程序为:94℃预变性5 min,94℃变性30 s,50℃退火1 min,72℃延伸1 min,共35个循环,72℃延伸5 min,4℃保存。同时选用200对大豆引物对2份材料进行扩增,筛选出条带清晰,多态性好的引物74对,用于大豆SSR标记的进一步研究。 展开更多
关键词 大豆 SSR-pcr 正交设计 体系优化 引物筛选
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乌拉尔甘草ISSR-PCR反应体系优化研究 被引量：24
5
作者 佟汉文 孙群 +3 位作者 吴波 丁自勉 孙宝启 王建华 《中国农学通报》 CSCD 2005年第4期70-74,共5页
甘草是中国最大宗的药材之一,具有重要的药用、生态及工业价值。利用ISSR技术对甘草种质资源的遗传多样性进行深入研究,对甘草物种生物多样性的保护及新品种培育具有重要意义。研究了影响甘草ISSR-PCR扩增效果的一些因素,实验结果表明:... 甘草是中国最大宗的药材之一,具有重要的药用、生态及工业价值。利用ISSR技术对甘草种质资源的遗传多样性进行深入研究,对甘草物种生物多样性的保护及新品种培育具有重要意义。研究了影响甘草ISSR-PCR扩增效果的一些因素,实验结果表明:最适宜用于甘草ISSR+PCR分析的反应条件为:20μl反应体系中,1×TaqDNA聚合酶配套缓冲液(10mmol/LTris-HCL,pH9.0,50mmol/LKCL,0.1%TritonX_100,2.0mmol/LMg2+),0.8UnitTaqDNA聚合酶,0.4μmol/L引物,200μmol/LdNTP,10ng模板DNA。 展开更多
关键词 ISSR pcr反应体系 乌拉尔甘草 优化研究 TAQDNA聚合酶 遗传多样性 SSR技术 新品种培育 生物多样性 pcr分析 模板DNA 工业价值 种质资源 扩增效果 反应条件 DNTP HCL 缓冲液 mol 药材
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刺梨及其近缘种PCR实验体系的建立与优化 被引量：23
6
作者 文晓鹏 2邓秀新 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期35-39,共5页
以刺梨及其近缘种月季为试材,进行了RAPD-PCR实验参数的确立和优化试验。结果表明,刺梨及月季25μL反应体系的最优组成为2.5μL10×反应缓冲液,2mmol/LMg2+,0.2mmol/LdNTP,1.6mg/L模板DNA,0.4μmol/L随机引物和1.2UTaqDNA多聚酶。经... 以刺梨及其近缘种月季为试材,进行了RAPD-PCR实验参数的确立和优化试验。结果表明,刺梨及月季25μL反应体系的最优组成为2.5μL10×反应缓冲液,2mmol/LMg2+,0.2mmol/LdNTP,1.6mg/L模板DNA,0.4μmol/L随机引物和1.2UTaqDNA多聚酶。经PCR扩增验证,此反应体系亦适宜于刺梨的部分近缘种,可有效用于RAPD分析;通过将退火温度提高至50℃或采用“Touchdown”扩增程序,并在50μL反应体系中适当增加特异引物对浓度(1.0μmol/L),模板DNA(4.0mg/L)和TaqDNA多聚酶(3.0U/管)的使用量,建立起适合于刺梨特异DNA片段检测及回收的特异PCR扩增实验体系,为刺梨的分子克隆奠定了技术基础。 展开更多
关键词 刺梨 近缘种 pcr扩增 实验体系
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鸭茅SSR-PCR反应体系优化及引物筛选 被引量：25
7
作者 谢文刚 张新全 +2 位作者 彭燕 马啸 曾兵 《分子植物育种》 CAS CSCD 2008年第2期381-386,共6页
应用L16（44）正交设计对影响鸭茅SSR-PCR的主要参数进行优化,建立适于鸭茅的SSR反应体系和扩增程序。在15μL体系中各反应的最适合含量为：50ng模板DNA,240μmol/LdNTP,0.4μmol/LSSR引物,1.0UTaqDNA聚合酶,1.5μL10×PCRBuffer,2.... 应用L16（44）正交设计对影响鸭茅SSR-PCR的主要参数进行优化,建立适于鸭茅的SSR反应体系和扩增程序。在15μL体系中各反应的最适合含量为：50ng模板DNA,240μmol/LdNTP,0.4μmol/LSSR引物,1.0UTaqDNA聚合酶,1.5μL10×PCRBuffer,2.5mmol/LMgCl2。PCR适宜扩增程序为：94℃预变性4min,94℃变性30s,52℃复性30s,72℃延伸1min,共35个循环,72℃延伸10min,4℃保存。并对引物最适合退火温度进行优化,最终确定引物退火温度为48～52℃。同时选用100对鸭茅引物对4份材料进行扩增,筛选出条带清晰,多态性好的引物30对。用于鸭茅SSR标记的进一步研究。 展开更多
关键词 鸭茅 SSR-pcr 体系优化 引物筛选
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正交设计优化星星草ISSR-PCR反应体系研究 被引量：21
8
作者 沙伟 滕兆岩 倪红伟 《中国草地学报》 CSCD 2006年第6期52-55,102,共5页
采用正交设计法优化适合于星星草的ISSR体系,对影响ISSR—PCR的多个因素,包括引物浓度、Taq酶的用量、Mg2+和dNTP浓度进行了比较、优化;同时又对DNA模板浓度,PCR扩增程序中的退火温度及循环次数进行了筛选。结果确定了星星草ISSR—PCR... 采用正交设计法优化适合于星星草的ISSR体系,对影响ISSR—PCR的多个因素,包括引物浓度、Taq酶的用量、Mg2+和dNTP浓度进行了比较、优化;同时又对DNA模板浓度,PCR扩增程序中的退火温度及循环次数进行了筛选。结果确定了星星草ISSR—PCR反应体系的最佳方案为:PCR扩增程序,94℃预变性5min;进行40个循环的94℃变性45s,55℃复性45 s,72℃延伸2 min;72℃延伸10 min,4℃保存。20μl反应体系包括10%buffer 2μl、模板DNA60ng、dNTP 100μmol/L、TaqDNA聚合酶1.5U、引物0.8mmol/L、Mg2+2.0mmol/L。 展开更多
关键词 星星草 ISSR 正交设计 pcr反应 体系优化
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传统中药金钱草ISSR-PCR反应体系的正交优化研究 被引量：25
9
作者 任风鸣 胡开治 +4 位作者 刘燕琴 焦雁翔 刘杰 罗敏 全健 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期2233-2238,共6页
建立稳定、可靠的金钱草ISSR-PCR反应体系,为金钱草遗传多样性分析、优良品种选育、药材分子鉴定奠定基础。该研究在7水平单因素实验的基础上,采用L16(45)正交试验设计,应用SPSS 19.0进行方差分析,对影响反应体系的5个主要因素在4个水... 建立稳定、可靠的金钱草ISSR-PCR反应体系,为金钱草遗传多样性分析、优良品种选育、药材分子鉴定奠定基础。该研究在7水平单因素实验的基础上,采用L16(45)正交试验设计,应用SPSS 19.0进行方差分析,对影响反应体系的5个主要因素在4个水平上进行优化。利用优化的反应体系,筛选引物最适退火温度,以23份不同产地金钱草材料检测体系稳定性。结果显示模板DNA,引物,dNTP,Mg2+,Taq酶5个因素对金钱草ISSR-PCR反应结果均有极显著影响,影响大小依次为引物>Taq酶>模板DNA>Mg2+>dNTP,确定最优反应体系为总体积25μL,模板DNA 60 ng,引物0.3μmol·L-1,dNTP 0.2mmol·L-1,Mg2+1.8 mmol·L-1,Taq酶1.25 U。经不同产地样品检测,该优化体系稳定、可靠。该研究为其他物种ISSRPCR体系的优化提供参考。 展开更多
关键词 金钱草 正交设计 ISSR—pcr 体系优化
原文传递
牡丹ISSR-PCR反应体系正交优化设计 被引量：18
10
作者 王佳 胡永红 张启翔 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2006年第24期6465-6466,6484,共3页
以“凤丹(”Paeonia ostii)基因组DNA为模板,采用正交试验设计方法,研究牡丹ISSR反应体系的影响因素,建立了适合牡丹的ISSR反应体系及程序。10 lμ反应体系为:1×反应缓冲液,2.5 mmo1/LMg2+,0.4 mmo1/LdNTPs,1.0 UTaq聚合酶,0.75μm... 以“凤丹(”Paeonia ostii)基因组DNA为模板,采用正交试验设计方法,研究牡丹ISSR反应体系的影响因素,建立了适合牡丹的ISSR反应体系及程序。10 lμ反应体系为:1×反应缓冲液,2.5 mmo1/LMg2+,0.4 mmo1/LdNTPs,1.0 UTaq聚合酶,0.75μmol/L引物,10～20 ng模板DNA。反应程序为:94℃预变性3 min;94℃变性45 s,45～60(℃不同引物退火温度各异)复性45 s,72℃延伸90 s,35个循环;72℃延伸7 min;4℃保存。通过梯度退火试验,确定不同引物的退火温度。 展开更多
关键词 牡丹 ISSR-pcr 正交设计 反应体系
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药用菊花SSR-PCR反应体系优化及引物筛选 被引量：21
11
作者 何仁锋 冯尚国 +4 位作者 陈喆 沈晓霞 沈宇峰 王志安 王慧中 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期367-378,共12页
为进一步开发利用药用菊花种质资源和开展分子标记辅助选择育种,本研究利用L25（56）正交设计对影响药用菊花SSR-PCR反应的模板DNA、Mg2＋、d NTPs、Taq酶、引物等5个因素进行优化,并对SSR引物进行筛选。结果建立了药用菊花SSR-PCR最佳... 为进一步开发利用药用菊花种质资源和开展分子标记辅助选择育种,本研究利用L25（56）正交设计对影响药用菊花SSR-PCR反应的模板DNA、Mg2＋、d NTPs、Taq酶、引物等5个因素进行优化,并对SSR引物进行筛选。结果建立了药用菊花SSR-PCR最佳反应体系（20μL）：模板DNA 60 ng,正、反向引物0.25μmol/L,d NTPs 0.3 mmol/L,Mg2＋3.0 mmol/L,Taq酶1.5 U。运用优化后的反应体系,从136对引物中成功筛选出了扩增条带清晰、多态性丰富的SSR引物57对,大多数条带大小集中在100~500 bp,不同引物扩增的条带数为5~15条。优化的SSR-PCR反应体系在多个药用菊花品种遗传多样性研究中得到了验证,获得了稳定性、重复性良好和多态性丰富的扩增图谱。该体系的建立可为今后利用SSR标记对药用菊花种质鉴定、遗传多样性分析、系统发育研究、遗传图谱构建、基因定位和分子标记辅助育种等研究提供了依据。 展开更多
关键词 药用植物 菊花 正交设计 SSR-pcr 体系优化 引物筛选
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8种柱花草属牧草SSR-PCR反应体系优化及引物筛选 被引量：20
12
作者 张龙 丁西朋 +2 位作者 严琳玲 胡珊娜 白昌军 《草业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期232-242,共11页
柱花草(Stylosanthes)是优良的豆科牧草,叶片中含有大量的多糖多酚,本研究利用改良CTAB法抽提柱花草叶片中总DNA。通过正交试验设计L16(45),确立了柱花草SSR-PCR最佳反应体系:20μL体系中1μL 50ng·μL-1模板DNA,1.6μL 5μmol... 柱花草(Stylosanthes)是优良的豆科牧草,叶片中含有大量的多糖多酚,本研究利用改良CTAB法抽提柱花草叶片中总DNA。通过正交试验设计L16(45),确立了柱花草SSR-PCR最佳反应体系:20μL体系中1μL 50ng·μL-1模板DNA,1.6μL 5μmol·L-1引物,1.6μL 10mol·L-1dNTPs,1.2μL 25mol·L-1 Mg2+,0.3μL 5U·μL-1 Taq聚合酶,2μL 10×PCR Buffer(Mg2+free),剩余用ddH2O补足。扩增反应程序为94℃变性40s,Tm(不同退火温度)退火时间40s,72℃延伸45s,循环数35个。利用优化体系对来自7种柱花草的123对SSR引物在8个不同种柱花草中进行转移,共筛选出44对引物在8种柱花草中都能有效扩增,并从中筛选出26对在8个不同种柱花草中富含多态性引物,为今后利用SSR标记对柱花草属的指纹图谱构建、遗传多样性分析、分子育种和品种鉴定与保护等工作提供重要依据。 展开更多
关键词 柱花草 改进CTAB法 SSR-pcr 体系优化 引物筛选
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正交设计优化狗牙根SSR-PCR反应体系 被引量：19
13
作者 王志勇 郭海林 刘建秀 《分子植物育种》 CAS CSCD 2007年第F11期201-206,共6页
以SDS法提取的狗牙根(Cynodon spp.)叶片DNA为模板,应用正交试验设计,从Mg^(2+)、dNTP、引物和DNA聚合酶4种因素三个水平,对SSR扩增效果进行研究,并通过比较不同浓度模板DNA的浓度对PCR扩增的影响,确立适合狗牙根SSR-PCR反应的最佳体系... 以SDS法提取的狗牙根(Cynodon spp.)叶片DNA为模板,应用正交试验设计,从Mg^(2+)、dNTP、引物和DNA聚合酶4种因素三个水平,对SSR扩增效果进行研究,并通过比较不同浓度模板DNA的浓度对PCR扩增的影响,确立适合狗牙根SSR-PCR反应的最佳体系。结果表明:各因素不同水平浓度对PCR反应结果均有显著影响,狗牙根SSR-PCR优化反应体系为:10×buffer、60 ng模板DNA、Mg^(2+)2.5 mmol/L、dNTP 200μmol/L、primer 0.8μmol/L和Taq DNA聚合酶0.5U,总体积10μL。运用该体系对包括三种10份优良坪用型狗牙根进行了检验,证明该体系稳定可靠。这一优化体系的建立为今后利用SSR标记技术进行狗牙根遗传多样性研究、种质资源鉴定以及亲缘关系分析等提供依据。 展开更多
关键词 狗牙根 SSR-pcr 正交设计 体系优化
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油茶SRAP标记的PCR体系建立与优化 被引量：20
14
作者 祝全东 张党权 +7 位作者 李晓云 杨书斌 韩欣 宋志丹 刘作梅 赵倩 谢晓敏 邝先松 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期57-62,共6页
油茶是我国主要的木本食用油料树种,拟建立油茶新型SRAP标记(序列相关扩增多态性)的优化PCR体系。以油茶优良品种的总DNA为材料,分析了影响油茶SRAP-PCR的主要参数,包括模板DNA量、引物浓度、dNTPs、Mg2+浓度、TaqDNA聚合酶用量、退火温... 油茶是我国主要的木本食用油料树种,拟建立油茶新型SRAP标记(序列相关扩增多态性)的优化PCR体系。以油茶优良品种的总DNA为材料,分析了影响油茶SRAP-PCR的主要参数,包括模板DNA量、引物浓度、dNTPs、Mg2+浓度、TaqDNA聚合酶用量、退火温度6个因素的影响,建立了适合油茶SRAP-PCR的优化体系为:20μL的PCR反应体系中,2.0μL 10×PCR buffer,2.0 mmol/L Mg2+,225μmol/L dNTPs,0.6μmol/L引物,30 ng模板DNA和0.75 U Taq DNA聚合酶;最佳PCR循环条件为:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,35℃复性1 min,72℃延伸1 min,5循环;94℃变性1 min,52℃复性1 min,72℃延伸1 min,35循环;最后72℃延伸10 min;4℃保存。本研究结果可为今后利用SRAP这一新型标记技术进行油茶分子遗传学与标记辅助选择育种研究打下基础。 展开更多
关键词 经济林学 油茶 分子标记 SRAP pcr 体系优化
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珍稀濒危植物香果树ISSR-PCR反应体系的筛选与优化 被引量：17
15
作者 李钧敏 金则新 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期458-461,共4页
以珍稀濒危植物香果树(Emm enopterys henryi)基因组DNA为研究对象,测试了ISSR-PCR反应体系的最适退火温度,并通过对反应体系中的Mg2+、dNTP浓度、模板DNA含量,TaqDNA聚合酶量、BSA浓度、引物浓度的筛选和优化,获得了香果树ISSR分析较... 以珍稀濒危植物香果树(Emm enopterys henryi)基因组DNA为研究对象,测试了ISSR-PCR反应体系的最适退火温度,并通过对反应体系中的Mg2+、dNTP浓度、模板DNA含量,TaqDNA聚合酶量、BSA浓度、引物浓度的筛选和优化,获得了香果树ISSR分析较适宜的扩增条件是:10μL PCR反应体积,1×Taq酶配套缓冲液(10mmol.L-1Tris.HC l pH9.0,50 mmol.L-1KC l,0.1%Triton X-100),2.0 mmol.L-1MgC l2,0.75 UTaq酶,10 ng模板DNA,12 pmol引物;dATP、dCTP、dGTP、dTTP各0.2 mmol.L-1,2 mg.mL-1牛血清白蛋白。香果树的合适退火温度为48.5℃。 展开更多
关键词 香果树 ISSR-pcr 反应体系 优化
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东兴金花茶SSR-PCR反应体系的优化及引物筛选 被引量：18
16
作者 唐健民 陈宗游 +3 位作者 韦霄 史艳财 柴胜丰 孔德鑫 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期398-404,共7页
采用L16（45）正交设计试验对东兴金花茶SSR-PCR反应的五因素（Mg^2＋,dNTPs,引物,Taq酶和模板DNA浓度）四水平进行了优化试验,然后利用优化后的反应体系,将31对同属植物SSR引物（4对茶树,7对山茶和20对金花茶引物）运用于东兴金花茶材... 采用L16（45）正交设计试验对东兴金花茶SSR-PCR反应的五因素（Mg^2＋,dNTPs,引物,Taq酶和模板DNA浓度）四水平进行了优化试验,然后利用优化后的反应体系,将31对同属植物SSR引物（4对茶树,7对山茶和20对金花茶引物）运用于东兴金花茶材料上,筛选适宜东兴金花茶遗传分析的SSR引物。结果表明,东兴金花茶最佳反应体系（15μL）及扩增条件为：Mg^2＋1.50 mmol/L、dNTP 0.30 mmol/L、引物0.40μmol/L、Taq酶0.75 U、模板DNA 40.00 ng;最佳扩增程序为：94℃预变性5 min;94℃变性30 s,58℃退火30 s（因引物而异,该温度为引物CN10的退火温度）,72℃延伸40 s,共36个循环;72℃最后延伸10 min。山茶属的不同植物之间可以共享部分SSR引物信息,东兴金花茶获得了9对能扩增出条带清晰且具有多态性的引物,引物最适退货温度为54-60℃,观测杂合度（HO）和期望杂合度（HE）分别为0.433-1.000和0.391-0.932。本试验为下一步进行的东兴金花茶遗传多样性分析、遗传图谱的构建等研究奠定了基础。 展开更多
关键词 东兴金花茶 SSR-pcr 体系优化 引物筛选
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丹参ISSR-PCR反应体系的建立与正交优化 被引量：18
17
作者 李嵘 王喆之 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期599-603,共5页
利用正交试验设计的方法,从引物浓度、Taq DNA聚合酶浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度4种因素3个水平,对丹参ISSR-PCR反应体系进行优化分析,并在此基础上对模板DNA浓度、PCR反应过程中的退火温度进行梯度检测。结果表明:20μL ISSR-PCR反应体... 利用正交试验设计的方法,从引物浓度、Taq DNA聚合酶浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度4种因素3个水平,对丹参ISSR-PCR反应体系进行优化分析,并在此基础上对模板DNA浓度、PCR反应过程中的退火温度进行梯度检测。结果表明:20μL ISSR-PCR反应体系中各因素的最佳浓度为1×PCR buffer、200μmol/L dNTP、1.0μmol/L引物、1.5mmol/L Mg2+和1 U Taq DNA聚合酶,最佳模板DNA浓度为20～60ng,引物UBC 835的最佳退火温度为51.7℃。 展开更多
关键词 丹参 ISSR-pcr 反应体系 正交优化
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中国樱桃的PCR-RFLP分析 被引量：13
18
作者 曹东伟 蔡宇良 +1 位作者 杨娟 赵桂仿 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第5期173-178,共6页
采用三因素五水平正交组合设计,探讨了野生中国樱桃的PCR-RFLP扩增条件及限制性内切酶酶切反应体系,并用PCR-RFLP技术对中国樱桃进行了分子亲缘地理学研究。结果表明,利用42种引物/酶组合,在13个中国樱桃居群中检测出多态位点比率为99.4... 采用三因素五水平正交组合设计,探讨了野生中国樱桃的PCR-RFLP扩增条件及限制性内切酶酶切反应体系,并用PCR-RFLP技术对中国樱桃进行了分子亲缘地理学研究。结果表明,利用42种引物/酶组合,在13个中国樱桃居群中检测出多态位点比率为99.48%;在所有酶切片段中,发现了5种cpDNA单倍型(H1、H2、H3、H4、H5);根据单倍型的地理分布格局,将所研究的中国樱桃居群划分为4个地理单元,地理单元间的基因分化系数(GST)值为0.397,cpDNA基因流(Nm)为0.758;中国樱桃cpDNA总的遗传多样性(Ht)为0.166,地理单元内的cpD-NA遗传多样性(Hs)为0.005。分析结果说明,当第四纪冰川来临时,中国樱桃向南迁移并避难于云南省东南部山区、秦岭南坡及大巴山的东部等地区;当冰期结束、气候缓和时,避难于云南省东南部山区的中国樱桃分别向东北、西北方向回迁,避难于大巴山东段的中国樱桃则向东北方向迁移,形成现今的分布格局。 展开更多
关键词 pcr-RFLP 樱桃 反应体系 亲缘地理学
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苦瓜ISSR扩增条件优化的研究 被引量：14
19
作者 宣朴 邓婧 +2 位作者 陈新 尹春蓉 陈放 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期215-217,168,共4页
本文对ISSR-PCR扩增苦瓜基因组DNA的主要影响因子进行了筛选和分析。试验结果表明，25μl的反应体系中采用20～30ng的模板DNA、1μmol/L ISSR引物、1U Tag DNA聚合酶，以及48℃～52℃的复性温度为苦瓜ISSR-PCR扩增条件的最佳选择。苦瓜I... 本文对ISSR-PCR扩增苦瓜基因组DNA的主要影响因子进行了筛选和分析。试验结果表明，25μl的反应体系中采用20～30ng的模板DNA、1μmol/L ISSR引物、1U Tag DNA聚合酶，以及48℃～52℃的复性温度为苦瓜ISSR-PCR扩增条件的最佳选择。苦瓜ISSR-PCR扩增条件的优化为进行苦瓜种群间遗传分化的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 苦瓜 ISSR 影响因子 pcr 反应体系
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油茶SSR-PCR反应体系的优化研究 被引量：17
20
作者 范小宁 林萍 张盛周 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第23期14098-14102,共5页
[目的]优化油茶(Camellia oleifera)SSR-PCR反应体系。[方法]应用改良CTAB法提取油茶基因组DNA,采用L16(45)正交设计试验,对影响油茶SSR-PCR反应体系的5个因素(Taq聚合酶浓度、模板浓度、dNTPs浓度、引物浓度和Mg2+浓度)在4水平上进行... [目的]优化油茶(Camellia oleifera)SSR-PCR反应体系。[方法]应用改良CTAB法提取油茶基因组DNA,采用L16(45)正交设计试验,对影响油茶SSR-PCR反应体系的5个因素(Taq聚合酶浓度、模板浓度、dNTPs浓度、引物浓度和Mg2+浓度)在4水平上进行筛选。PCR结果经统计分析软件DPS分析,并对退火温度进行了摸索,确立了油茶SSR-PCR的优化体系。[结果]油茶SSR-PCR的优化体系总体积为20μl,包括Taq聚合酶量为1.0 U/20μl,模板浓度75 ng/20μl,dNTPs浓度为0.15 mmol/L,引物浓度为0.40μmol/L,Mg2+浓度为1.50 mmol/L,退火温度为50℃。[结论]该研究确定的优化体系可以为油茶资源遗传多样性分析奠定技术基础。 展开更多
关键词 油茶 SSR-pcr 正交设计 体系优化
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