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影响多重PCR扩增效果的因素 被引量:130
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作者 黄银花 胡晓湘 +4 位作者 徐慰倬 高宇 冯继东 孙汉 李宁 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期65-68,共4页
不同循环参数、PCR缓冲液及反应体积的对比实验表明,循环参数中退火温度和时间、延伸时间及PCR缓冲液的成分影响多重PCR的扩增效果,而反应体积、循环次数对其扩增效果影响较小。
关键词 多重pcr 扩增效果 循环效果 pcr缓冲液 反应体积
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正交设计优化落叶松ISSR-PCR反应体系 被引量:45
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作者 林萍 张含国 谢运海 《生物技术》 CAS CSCD 2005年第5期34-37,共4页
该文利用正交试验设计的方法,对落叶松ISSR-PCR反应的5因素4水平进行试验,试验结果运用MINITAB软件进行分析,建立了落叶松ISSR-PCR反应的最佳体系,即在20μl反应体系中,模板50-200 ng,0.5μmol/L的引物,1×反应缓冲液,dNTP为0.15mmo... 该文利用正交试验设计的方法,对落叶松ISSR-PCR反应的5因素4水平进行试验,试验结果运用MINITAB软件进行分析,建立了落叶松ISSR-PCR反应的最佳体系,即在20μl反应体系中,模板50-200 ng,0.5μmol/L的引物,1×反应缓冲液,dNTP为0.15mmol/L-0.2mmol/L,1U的TaqDNA聚合酶,Mg2+2.0mmol/L-2.5 mmol/L。并进一步进行梯度退火试验,找到了最适的落叶松ISSR退火温度为56.4℃。 展开更多
关键词 落叶松 ISSR-pcr 正交设计 反应体系
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面向生物工程实验的微操作机器人 被引量:36
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作者 卢桂章 张建勋 赵新 《南开大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期42-46,共5页
本文讨论了一台面向生物工程应用的微操作机器人系统的结构、功能和关键技术.首先,给出了它的硬件体系结构和逻辑结构,它由传感系统,控制系统和操作系统组成.其中传感系统由显微镜和CCD摄象系统组成.其次,对微操作机器人系统... 本文讨论了一台面向生物工程应用的微操作机器人系统的结构、功能和关键技术.首先,给出了它的硬件体系结构和逻辑结构,它由传感系统,控制系统和操作系统组成.其中传感系统由显微镜和CCD摄象系统组成.其次,对微操作机器人系统的关键技术进行详细讨论.显微视觉是最主要的一项技术,基于此技术完成了两项功能,即微针的纵向定位和自动寻针.最后,给出了微操作机器人在生物PCR反应实验中的一个成功的应用实例,证明了上述系统的有效性. 展开更多
关键词 微操作机器人 pcr反应 生物工程 实验
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牡丹SCoT分子标记正交优化及引物筛选 被引量:44
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作者 侯小改 王娟 +3 位作者 贾甜 张钰乾 侯娟 李嘉珏 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2011年第5期92-96,共5页
以牡丹基因组DNA为模板,采用L16(45)正交试验设计对影响目标起始密码子多态性-聚合酶链式反应(SCoT-PCR)的五因素(Taq酶用量、Mg2+浓度、模板DNA用量、dNTPs浓度和引物浓度)进行优化试验,建立了优化的牡丹SCoT-PCR反应体系:Mg2+2.50 mmo... 以牡丹基因组DNA为模板,采用L16(45)正交试验设计对影响目标起始密码子多态性-聚合酶链式反应(SCoT-PCR)的五因素(Taq酶用量、Mg2+浓度、模板DNA用量、dNTPs浓度和引物浓度)进行优化试验,建立了优化的牡丹SCoT-PCR反应体系:Mg2+2.50 mmol/L、dNTPs 0.25 mmol/L、引物0.60μmol/L、Taq DNA聚合酶0.50 U、模板DNA 1.00 ng/μL,1×PCR-Buffer,总体积20.00μL。比较各因素对扩增反应的结果,其中以Mg2+浓度的影响最大,DNA模板用量的影响最小。运用牡丹17个品种验证了该体系稳定可靠,并从36个SCoT引物中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的24个引物。这一体系的建立及多态性引物的筛选为今后利用SCoT标记技术对牡丹进行相关研究提供了科学依据。 展开更多
关键词 牡丹 SCoT-pcr 反应体系 正交设计 引物筛选
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应用PCR-DGGE研究冷却猪肉贮藏过程中的优势菌 被引量:25
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作者 李苗云 周光宏 徐幸莲 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2008年第9期185-189,共5页
【目的】研究冷却猪肉贮藏过程中优势细菌的分布,为研究冷却猪肉防腐剂和延长货架期提供参考。【方法】分别选择3个不同企业,取宰后24h的猪背长肌,于4℃托盘包装,分别贮藏2,4,6d提取细菌总DNA,对细菌16S rDNA的V6~V8区段进行PC... 【目的】研究冷却猪肉贮藏过程中优势细菌的分布,为研究冷却猪肉防腐剂和延长货架期提供参考。【方法】分别选择3个不同企业,取宰后24h的猪背长肌,于4℃托盘包装,分别贮藏2,4,6d提取细菌总DNA,对细菌16S rDNA的V6~V8区段进行PCR扩增,扩增产物进行变性梯度凝胶电泳(DGGE),对DGGE图谱进行微生物多样性分析,并对主要条带进行测序分析。【结果】对4℃贮藏的冷却猪肉DGGE图谱上的主要条带进行测序分析,获得6种不同的细菌。热杀索丝菌(Brochothrix thermosphacta)(条带1)在贮藏4d的样品中,A5没有相应条带,在贮藏6d的样品中,A7、A8上的条带不占优势,在其他样品中均以优势菌的形式出现;气单胞菌(Aeromonas.sp)所对应的条带3在贮藏4和6d的样品中都较亮,与贮藏2d的样品相比,在贮藏4d之前有所增加,于贮藏6d时趋于稳定,是优势菌之一;假单胞菌(Pseudomonas.sp)所对应的条带4一直较亮,并呈持续增加趋势,是主要的优势菌之一;葡萄球菌(Staphylococcus.sp)所对应的条带5在贮藏2d内条带不清晰,贮藏到6d时条带清晰明亮;莫拉氏菌(Moraxella.sp)(条带2)和节杆菌(Arthrobacter.sp)(条带6)所对应的条带一直不是很亮。【结论】假单胞菌、热杀索丝菌、气单胞菌(Aeromonas.sp)是冷却猪肉贮藏过程中的优势菌;葡萄球菌一旦存在,将逐步发展成优势菌。 展开更多
关键词 冷却猪肉 优势菌 变性梯度凝胶电泳 pcr扩增
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哈蜜瓜种子带细菌性果斑病菌检测技术的研究 被引量:22
6
作者 任毓忠 李晖 +2 位作者 李国英 王晓东 万刚 《植物检疫》 北大核心 2004年第2期65-68,共4页
哈蜜瓜细菌性果斑病是世界性的检疫对象之一 ,主要以种子带菌进行远距离传播 ,本文通过温室育苗、室内分离和PCR(聚合酶链式反应 )技术对哈蜜瓜种子带菌情况和主要带菌部位进行了检验 ,结果表明 :3种方法都可以对种子带菌情况进行检测 ... 哈蜜瓜细菌性果斑病是世界性的检疫对象之一 ,主要以种子带菌进行远距离传播 ,本文通过温室育苗、室内分离和PCR(聚合酶链式反应 )技术对哈蜜瓜种子带菌情况和主要带菌部位进行了检验 ,结果表明 :3种方法都可以对种子带菌情况进行检测 ,分离检测和PCR检测还可以确定种子的带菌部位 ,PCR技术具有特异性强、灵敏度高、检测时间短等特点。另外检测结果也表明种子带菌以种皮为主 ,种仁的带菌量较少。 展开更多
关键词 哈蜜瓜 种子 细菌性果斑病 检测技术 pcr技术 检疫
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正交设计优化星星草ISSR-PCR反应体系研究 被引量:21
7
作者 沙伟 滕兆岩 倪红伟 《中国草地学报》 CSCD 2006年第6期52-55,102,共5页
采用正交设计法优化适合于星星草的ISSR体系,对影响ISSR—PCR的多个因素,包括引物浓度、Taq酶的用量、Mg2+和dNTP浓度进行了比较、优化;同时又对DNA模板浓度,PCR扩增程序中的退火温度及循环次数进行了筛选。结果确定了星星草ISSR—PCR... 采用正交设计法优化适合于星星草的ISSR体系,对影响ISSR—PCR的多个因素,包括引物浓度、Taq酶的用量、Mg2+和dNTP浓度进行了比较、优化;同时又对DNA模板浓度,PCR扩增程序中的退火温度及循环次数进行了筛选。结果确定了星星草ISSR—PCR反应体系的最佳方案为:PCR扩增程序,94℃预变性5min;进行40个循环的94℃变性45s,55℃复性45 s,72℃延伸2 min;72℃延伸10 min,4℃保存。20μl反应体系包括10%buffer 2μl、模板DNA60ng、dNTP 100μmol/L、TaqDNA聚合酶1.5U、引物0.8mmol/L、Mg2+2.0mmol/L。 展开更多
关键词 星星草 ISSR 正交设计 pcr反应 体系优化
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一种高活性人新型TNF的研制 被引量:22
8
作者 刘丽 田生礼 +3 位作者 冯彪 王国志 谢宝树 冷爱军 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第4期254-258,共5页
肿瘤坏死因子(TNF)除抗肿瘤活性外,还具有其它广泛的生物学活性,但因其严重的毒副作用极大地限制了它的临床应用。在TNP结构与功能关系研究的基础上,该文作者利用PCR技术构建了一种新型人TNF的编码基因,并使其在大肠... 肿瘤坏死因子(TNF)除抗肿瘤活性外,还具有其它广泛的生物学活性,但因其严重的毒副作用极大地限制了它的临床应用。在TNP结构与功能关系研究的基础上,该文作者利用PCR技术构建了一种新型人TNF的编码基因,并使其在大肠杆菌中进行了高效表达。活性测定结果表明,新型TNF对L929细胞的细胞毒活性较天然型人TNP增高了约714倍。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子 突变体 pcr 高活性
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猪多杀性巴氏杆菌PCR检测方法的建立及其应用 被引量:18
9
作者 唐先春 吴斌 陈焕春 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2004年第2期46-48,共3页
设计了 1对用以检测猪多杀性巴氏杆菌的引物。对临床送检的有肺炎症状或萎缩性鼻炎症状的发病猪的病料进行细菌培养 ,然后挑菌做PCR ,同时对可疑菌落纯化培养后做生化鉴定。结果 ,从不同省 (市 )的送检病料中分离鉴定出 6 6株多杀性巴... 设计了 1对用以检测猪多杀性巴氏杆菌的引物。对临床送检的有肺炎症状或萎缩性鼻炎症状的发病猪的病料进行细菌培养 ,然后挑菌做PCR ,同时对可疑菌落纯化培养后做生化鉴定。结果 ,从不同省 (市 )的送检病料中分离鉴定出 6 6株多杀性巴氏杆菌 ,PCR检测结果与生化鉴定结果完全符合 ;该引物对其他 6种猪的常见呼吸道病原菌的扩增结果均为阴性 ;该PCR检测方法能检出CFU为 10 3/mL的巴氏杆菌模板。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 pcr 生化鉴定
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牡丹ISSR-PCR反应体系正交优化设计 被引量:18
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作者 王佳 胡永红 张启翔 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2006年第24期6465-6466,6484,共3页
以“凤丹(”Paeonia ostii)基因组DNA为模板,采用正交试验设计方法,研究牡丹ISSR反应体系的影响因素,建立了适合牡丹的ISSR反应体系及程序。10 lμ反应体系为:1×反应缓冲液,2.5 mmo1/LMg2+,0.4 mmo1/LdNTPs,1.0 UTaq聚合酶,0.75μm... 以“凤丹(”Paeonia ostii)基因组DNA为模板,采用正交试验设计方法,研究牡丹ISSR反应体系的影响因素,建立了适合牡丹的ISSR反应体系及程序。10 lμ反应体系为:1×反应缓冲液,2.5 mmo1/LMg2+,0.4 mmo1/LdNTPs,1.0 UTaq聚合酶,0.75μmol/L引物,10~20 ng模板DNA。反应程序为:94℃预变性3 min;94℃变性45 s,45~60(℃不同引物退火温度各异)复性45 s,72℃延伸90 s,35个循环;72℃延伸7 min;4℃保存。通过梯度退火试验,确定不同引物的退火温度。 展开更多
关键词 牡丹 ISSR-pcr 正交设计 反应体系
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病原微生物检测技术进展 被引量:20
11
作者 云云 汪长中 吴璇 《安徽医药》 CAS 2013年第3期501-503,共3页
病原微生物种类繁多,变异迅速,快速鉴定病原微生物的检验技术也在不断发展前进着。目前,应用比较广泛的病原微生物检测方法主要有直接涂片镜检、分离培养、生化反应、血清学反应、核酸分子杂交、基因芯片、多聚酶链反应等,该文对这些检... 病原微生物种类繁多,变异迅速,快速鉴定病原微生物的检验技术也在不断发展前进着。目前,应用比较广泛的病原微生物检测方法主要有直接涂片镜检、分离培养、生化反应、血清学反应、核酸分子杂交、基因芯片、多聚酶链反应等,该文对这些检测技术进展做一综述。 展开更多
关键词 病原微生物 血清学反应 pcr 基因芯片
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珍稀濒危植物香果树ISSR-PCR反应体系的筛选与优化 被引量:17
12
作者 李钧敏 金则新 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期458-461,共4页
以珍稀濒危植物香果树(Emm enopterys henryi)基因组DNA为研究对象,测试了ISSR-PCR反应体系的最适退火温度,并通过对反应体系中的Mg2+、dNTP浓度、模板DNA含量,TaqDNA聚合酶量、BSA浓度、引物浓度的筛选和优化,获得了香果树ISSR分析较... 以珍稀濒危植物香果树(Emm enopterys henryi)基因组DNA为研究对象,测试了ISSR-PCR反应体系的最适退火温度,并通过对反应体系中的Mg2+、dNTP浓度、模板DNA含量,TaqDNA聚合酶量、BSA浓度、引物浓度的筛选和优化,获得了香果树ISSR分析较适宜的扩增条件是:10μL PCR反应体积,1×Taq酶配套缓冲液(10mmol.L-1Tris.HC l pH9.0,50 mmol.L-1KC l,0.1%Triton X-100),2.0 mmol.L-1MgC l2,0.75 UTaq酶,10 ng模板DNA,12 pmol引物;dATP、dCTP、dGTP、dTTP各0.2 mmol.L-1,2 mg.mL-1牛血清白蛋白。香果树的合适退火温度为48.5℃。 展开更多
关键词 香果树 ISSR-pcr 反应体系 优化
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胡枝子属ISSR-PCR反应体系的建立与优化 被引量:16
13
作者 赵杨 陈晓阳 +1 位作者 李桐森 胡冬南 《西南林学院学报》 CAS 2006年第2期6-9,23,共5页
在利用ISSR技术对胡枝子属种质资源遗传多样性进行研究的实验过程中,对影响PCR扩增效果的一些因素如DNA的提取、模板DNA质量浓度、Taq酶用量、引物用量、dNTP的用量以及退火温度等指标进行筛选和优化,筛选优化出可用于胡枝子属ISSR-PCR... 在利用ISSR技术对胡枝子属种质资源遗传多样性进行研究的实验过程中,对影响PCR扩增效果的一些因素如DNA的提取、模板DNA质量浓度、Taq酶用量、引物用量、dNTP的用量以及退火温度等指标进行筛选和优化,筛选优化出可用于胡枝子属ISSR-PCR分析较适宜的PCR反应条件:Taq酶1.0 U,2μL的10×Buffer(200 mM Tris-HC l;200 mM KC l;100 mM(NH4)2SO4;15 mM MgC l2),模板DNA 40 ng,dNTP 0.2 m mol/L,引物0.2μmol/L. 展开更多
关键词 胡枝子属 ISSR-pcr 反应体系
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中国樱桃的PCR-RFLP分析 被引量:13
14
作者 曹东伟 蔡宇良 +1 位作者 杨娟 赵桂仿 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2007年第5期173-178,共6页
采用三因素五水平正交组合设计,探讨了野生中国樱桃的PCR-RFLP扩增条件及限制性内切酶酶切反应体系,并用PCR-RFLP技术对中国樱桃进行了分子亲缘地理学研究。结果表明,利用42种引物/酶组合,在13个中国樱桃居群中检测出多态位点比率为99.4... 采用三因素五水平正交组合设计,探讨了野生中国樱桃的PCR-RFLP扩增条件及限制性内切酶酶切反应体系,并用PCR-RFLP技术对中国樱桃进行了分子亲缘地理学研究。结果表明,利用42种引物/酶组合,在13个中国樱桃居群中检测出多态位点比率为99.48%;在所有酶切片段中,发现了5种cpDNA单倍型(H1、H2、H3、H4、H5);根据单倍型的地理分布格局,将所研究的中国樱桃居群划分为4个地理单元,地理单元间的基因分化系数(GST)值为0.397,cpDNA基因流(Nm)为0.758;中国樱桃cpDNA总的遗传多样性(Ht)为0.166,地理单元内的cpD-NA遗传多样性(Hs)为0.005。分析结果说明,当第四纪冰川来临时,中国樱桃向南迁移并避难于云南省东南部山区、秦岭南坡及大巴山的东部等地区;当冰期结束、气候缓和时,避难于云南省东南部山区的中国樱桃分别向东北、西北方向回迁,避难于大巴山东段的中国樱桃则向东北方向迁移,形成现今的分布格局。 展开更多
关键词 pcr-RFLP 樱桃 反应体系 亲缘地理学
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苦瓜ISSR扩增条件优化的研究 被引量:14
15
作者 宣朴 邓婧 +2 位作者 陈新 尹春蓉 陈放 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期215-217,168,共4页
本文对ISSR-PCR扩增苦瓜基因组DNA的主要影响因子进行了筛选和分析。试验结果表明,25μl的反应体系中采用20~30ng的模板DNA、1μmol/L ISSR引物、1U Tag DNA聚合酶,以及48℃~52℃的复性温度为苦瓜ISSR-PCR扩增条件的最佳选择。苦瓜I... 本文对ISSR-PCR扩增苦瓜基因组DNA的主要影响因子进行了筛选和分析。试验结果表明,25μl的反应体系中采用20~30ng的模板DNA、1μmol/L ISSR引物、1U Tag DNA聚合酶,以及48℃~52℃的复性温度为苦瓜ISSR-PCR扩增条件的最佳选择。苦瓜ISSR-PCR扩增条件的优化为进行苦瓜种群间遗传分化的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 苦瓜 ISSR 影响因子 pcr 反应体系
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针茅属植物基因组DNA提取方法的研究 被引量:11
16
作者 韩冰 赵萌莉 +1 位作者 张红梅 索培芬 《内蒙古农业大学学报(自然科学版)》 CAS 2002年第4期32-35,共4页
 植物体内所含的蛋白质、酚类、单宁、色素及多糖等物质影响Tag酶的聚合效率,是使PCR扩增反应失败的主要因素。本研究以针茅属植物为材料,对CTAB法、SDS法、简易提取法和高盐沉淀法提取的针茅DNA进行了比较研究,结果表明:CTAB法适合于...  植物体内所含的蛋白质、酚类、单宁、色素及多糖等物质影响Tag酶的聚合效率,是使PCR扩增反应失败的主要因素。本研究以针茅属植物为材料,对CTAB法、SDS法、简易提取法和高盐沉淀法提取的针茅DNA进行了比较研究,结果表明:CTAB法适合于针茅属植物基因组DNA的提取,采用这种方法提取的DNA能很好的用于PCR扩增。 展开更多
关键词 针茅属植物 DNA提取 pcr扩增
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实时荧光定量PCR定量方法研究进展 被引量:17
17
作者 廉红霞 高腾云 +2 位作者 傅彤 孙宇 李改英 《江西农业学报》 CAS 2010年第10期128-129,132,共3页
实时荧光定量PCR以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点而成为了分子生物学研究中的重要工具,综述了实时荧光定量PCR技术及其定量方法的研究进展,并展望了其应用前景。
关键词 实时荧光定量 pcr技术 定量方法 研究进展 POLYMERASE CHAIN reaction QUANTITATIVE Real-time Method of 分子生物学研究 应用前景 特异性强 灵敏度高 封闭反应 重复性 速度 工具
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利用正交设计建立与优化北美驼绒藜ISSR-PCR反应体系 被引量:14
18
作者 雷雪峰 易津 侯丽丽 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期693-697,共5页
利用正交试验设计的方法,对北美驼绒藜ISSR-PCR反应的5因素(Taq酶、dNTP、引物、Mg2+和模板DNA)4水平进行试验,试验结果运用MINITAB软件进行分析,建立了适合北美驼绒藜的既稳定又谱带多的ISSR-PCR最佳反应体系,即20μL的反应体系中含有1... 利用正交试验设计的方法,对北美驼绒藜ISSR-PCR反应的5因素(Taq酶、dNTP、引物、Mg2+和模板DNA)4水平进行试验,试验结果运用MINITAB软件进行分析,建立了适合北美驼绒藜的既稳定又谱带多的ISSR-PCR最佳反应体系,即20μL的反应体系中含有1×buffer,1.5UTaq酶,0.2mmol.L-1dNTP,0.5μmol.L-1引物,2.5mmol.L-1Mg2+和10ng模板DNA。这一优化的ISSR-PCR反应体系的建立,为今后利用ISSR技术进行驼绒藜属植物种质资源分类、遗传图谱构建和遗传变异奠定了技术基础。 展开更多
关键词 正交设计 北美驼绒藜 ISSR-pcr 反应体系
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绣球SSR-PCR反应体系的建立与优化 被引量:15
19
作者 贾新平 孙晓波 +3 位作者 梁丽建 邓衍明 苏家乐 周建涛 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2016年第4期68-73,共6页
为了建立适合绣球的SSR-PCR反应体系,采用正交设计L25(56)对影响SSR-PCR反应体系的5个主要因素(Mg2+、d NTPs、引物、DNA模板和Taq聚合酶)在5个水平上进行优化,筛选出每个因素的最佳水平,建立适合绣球的SSR-PCR反应体系。结果表明,20μL... 为了建立适合绣球的SSR-PCR反应体系,采用正交设计L25(56)对影响SSR-PCR反应体系的5个主要因素(Mg2+、d NTPs、引物、DNA模板和Taq聚合酶)在5个水平上进行优化,筛选出每个因素的最佳水平,建立适合绣球的SSR-PCR反应体系。结果表明,20μL的SSR-PCR反应体系中,DNA模板用量为60 ng,Mg2+浓度为1.5 mmol/L,d NTPs浓度为0.3 mmol/L,引物浓度为0.4μmol/L,Taq聚合酶用量为0.8 U。扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,最佳温度退火40 s,72℃1 min,33个循环;72℃延伸10 min,4℃保存。选用10个绣球品种对建立的SSR-PCR反应体系进行验证,结果表明该体系具有较好的稳定性和通用性。建立和优化的绣球SSR-PCR反应体系,为应用SSR分子标记技术开展绣球属植物遗传育种研究提供了理论依据和技术参考。 展开更多
关键词 绣球 SSR-pcr 正交设计 反应体系
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银杏ISSR-PCR扩增反应体系的优化 被引量:14
20
作者 曹福亮 王国霞 +1 位作者 李广平 花喆斌 《浙江林学院学报》 CSCD 北大核心 2008年第2期186-190,共5页
为了对影响银杏戗ngkobiloba简单序列重复区间扩增-聚合酶链式反应(ISSR-PCR)扩增反应体系的因素进行优化,采用[SSR-PCR扩增技术和UVP凝胶电泳成像技术对模扳DNA浓度、Taq酶用量、引物用量、dNTP的用量以及退火温度等因素进行筛选和... 为了对影响银杏戗ngkobiloba简单序列重复区间扩增-聚合酶链式反应(ISSR-PCR)扩增反应体系的因素进行优化,采用[SSR-PCR扩增技术和UVP凝胶电泳成像技术对模扳DNA浓度、Taq酶用量、引物用量、dNTP的用量以及退火温度等因素进行筛选和优化筛选优化后的反应条件:Taq酶0.3μg,2μL10×Buffer(含15mmol·L^-1 MgCl2),模板DNA40ng,dNTP0.2mmol·L^-1,引物0.5μmol·L^-1,Mg^2+,5nmol·L^-1。PCR扩增程序:94℃变性5min,然后进行38个循环:94℃变性30S,48~53℃(根据引物而定)退火30s,72℃延伸1min;最后72℃延伸10min,4℃终止反应。上述反应条件可广泛应用于银杏的遗传多样性分析、遗传育种和转基因等方面的研究。 展开更多
关键词 林木育种学 银杏 ISSR-pcr 反应体系
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