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牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因的克隆与序列分析 被引量：8
1
作者 金春梅 许应天 +2 位作者 张守发 鲁承 于龙政 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期112-114,119,共4页
为分析吉林省流行的牛瑟氏泰勒虫基因序列,根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因序列设计合成一对引物,用PCR方法扩增出牛瑟氏泰勒虫的基因片段,并成功地将该基因纯化后克隆到pGEM-TEasy载体上,将经EcoRⅠ酶切鉴定和PCR鉴定... 为分析吉林省流行的牛瑟氏泰勒虫基因序列,根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因序列设计合成一对引物,用PCR方法扩增出牛瑟氏泰勒虫的基因片段,并成功地将该基因纯化后克隆到pGEM-TEasy载体上,将经EcoRⅠ酶切鉴定和PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序。结果表明克隆的基因片段长度为868bp,编码283个氨基酸,有2个潜在的糖基化位点。核苷酸同源性分析表明,该基因片段与韩国株(AF521557)、日本株(AB016280)、俄罗斯株(AB016279)的核苷酸序列同源性分别为99.4%、88.0%、88.1%。 展开更多
关键词 牛瑟氏泰勒虫 p33表面蛋白 克隆 序列分析
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奶牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因的克隆及序列分析 被引量：2
2
作者 曹世诺 于龙政 +3 位作者 薛书江 贾立军 柴方红 张守发 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2008年第3期15-17,共3页
研究根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白的基因序列设计合成1对引物,用PCR方法扩增出了牛瑟氏泰勒虫的基因片段,将该基因纯化后连接到pMD18-T载体上,进行序列测定和分析,并用此方法对延边某奶牛场10头奶牛进行了检测。结果表明... 研究根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白的基因序列设计合成1对引物,用PCR方法扩增出了牛瑟氏泰勒虫的基因片段,将该基因纯化后连接到pMD18-T载体上,进行序列测定和分析,并用此方法对延边某奶牛场10头奶牛进行了检测。结果表明:10份样品中9份为阳性,所扩增的目的基因核苷酸长为868bp,共编码283个氨基酸;该段基因片段与牛泰勒虫韩国株核苷酸序列同源性为99·4%,氨基酸同源性为99·3%。 展开更多
关键词 牛瑟氏泰勒虫 p33表面蛋白基因序列 克隆 序列分析
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牛瑟氏泰勒虫环介导等温扩增检测方法的建立 被引量：7
3
作者 王中光 张守发 +4 位作者 曹世诺 贾立军 薛书江 田万年 王暖成 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期108-111,共4页
为建立快捷、灵敏的牛瑟氏泰勒虫(T.sergenti)检测方法,本研究以感染牛T.sergenti的阳性血液为试验材料,建立了牛T.sergenti P33表面蛋白基因环介导等温扩增(LAMP)检测技术,并优化了LAMP的各反应条件,进行了敏感性和特异性试验。结果显... 为建立快捷、灵敏的牛瑟氏泰勒虫(T.sergenti)检测方法,本研究以感染牛T.sergenti的阳性血液为试验材料,建立了牛T.sergenti P33表面蛋白基因环介导等温扩增(LAMP)检测技术,并优化了LAMP的各反应条件,进行了敏感性和特异性试验。结果显示,扩增产物经显色、电泳、酶切鉴定后,LAMP方法扩增牛T.sergenti产物检测管显色后呈阳性反应,最低检测量为2.3fg/μL模板DNA,比普通PCR高10倍,牛T.sergenti LAMP产物电泳后呈特征性梯状条带,而弓形虫等对照组均无扩增条带。说明本研究建立的LAMP方法具有灵敏、特异、快速等优点,适合于牛T.sergenti的检测。 展开更多
关键词 牛瑟氏泰勒虫 p33表面蛋白基因 环介导等温扩增技术
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牛瑟氏泰勒虫P23和P33表面蛋白双基因融合表达载体的构建及原核表达 被引量：4
4
作者 曹世诺 于龙政 +3 位作者 薛书江 贾立军 周末 张守发 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期866-869,874,共5页
为探索牛瑟氏泰勒虫的表面蛋白基因融合产物作为双价疫苗的可行性,以牛瑟氏泰勒虫基因组DNA为模板,通过重叠延伸拼接聚合酶链式反应(SOE-PCR)把P23和P33表面蛋白基因连接一起,2个基因之间插入一个linker(Gly4Ser)3,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶... 为探索牛瑟氏泰勒虫的表面蛋白基因融合产物作为双价疫苗的可行性,以牛瑟氏泰勒虫基因组DNA为模板,通过重叠延伸拼接聚合酶链式反应(SOE-PCR)把P23和P33表面蛋白基因连接一起,2个基因之间插入一个linker(Gly4Ser)3,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,获得1151bp的双基因融合片段,克隆于表达质粒pGEX-4T-1中,构建了双基因重组表达载体pGEX-4T-P23-P33,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,表达出预期大小70.0ku的融合蛋白。Western blot检测结果显示,该蛋白与牛瑟氏泰勒虫抗血清呈阳性反应,表明融合蛋白具有反应原性,为进一步研究此融合蛋白作为疫苗候选成分提供了理论依据。 展开更多
关键词 牛瑟氏泰勒虫 p23表面蛋白基因 p33表面蛋白基因 融合基因表达
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牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因的克隆与原核表达 被引量：2
5
作者 李春花 张西臣 +1 位作者 张守发 许应天 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期292-295,共4页
本研究根据GenBank牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因设计1对引物,利用全血基因组DNA提取试剂盒提取牛瑟氏泰勒虫全血基因组DNA,PCR扩增得到了大小为786 bp的基因片断,测序分析证明,它与已报道序列的核苷酸同源性可达99%。将该基因与pET-28a... 本研究根据GenBank牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因设计1对引物,利用全血基因组DNA提取试剂盒提取牛瑟氏泰勒虫全血基因组DNA,PCR扩增得到了大小为786 bp的基因片断,测序分析证明,它与已报道序列的核苷酸同源性可达99%。将该基因与pET-28a(+)载体进行连接,经酶切和PCR鉴定,证明成功构建了含有目的基因片段的重组表达载体pET-28a-P33。将此质粒转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)中,用IPTG进行诱导。结果证实,该基因在大肠杆菌中用IPTG诱导4 h时表达量达到高峰,表达产物为分子质量约30.3 ku的融合蛋白,其表达量占菌体总蛋白的43%,以包涵体形式存在;Western blotting试验证明,表达蛋白P33可被牛瑟氏泰勒虫阳性血清所识别,表明该融合蛋白具有较好的反应原性。 展开更多
关键词 牛瑟氏泰勒虫 p33表面蛋白基因 原核表达
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牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
6
作者 曹世诺 于龙政 +3 位作者 薛书江 周末 刘廷 张守发 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1136-1139,共4页
应用PCR方法扩增了牛瑟氏泰勒虫吉林株P33表面蛋白基因片段,并将扩增产物与pMD18-T载体连接,重组质粒经PCR、双酶切鉴定后测序;构建P33重组pGEX-4T-3表达载体,转化大肠杆菌BL-21,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE、免疫印记分析。结果显示... 应用PCR方法扩增了牛瑟氏泰勒虫吉林株P33表面蛋白基因片段,并将扩增产物与pMD18-T载体连接,重组质粒经PCR、双酶切鉴定后测序;构建P33重组pGEX-4T-3表达载体,转化大肠杆菌BL-21,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE、免疫印记分析。结果显示,获得P33基因完整开放阅读框长868 bp,编码292个氨基酸,与中国株同源性为99.1%;表达的融合蛋白相对分子质量为59 000,能被牛瑟氏泰勒虫阳性血清识别,表明该融合蛋白具有较好的免疫原性。 展开更多
关键词 牛瑟氏泰勒虫 p33表面蛋白基因 克隆 表达
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