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saRNA在转录水平激活人膀胱癌细胞p21^(WAF1/CIP1)的表达研究 被引量：5
1
作者 胡嘏 陈忠 +7 位作者 吴嘉 张勇 王骥 郭小林 徐华 李龙承 杨为民 叶章群 《现代泌尿生殖肿瘤杂志》 2012年第3期165-168,173,共5页
目的探讨小激活RNA-dsP21-322上调人膀胱癌细胞系T24中抑癌基因p21WAF1/CIP1(p21)表达的效应。进一步分析dsP21-322是否还可上调p21前体mRNA的表达,以及增强RNA聚合酶Ⅱ蛋白与dsP21-322靶向的p21启动子区的联系。方法合成靶向p21启动子... 目的探讨小激活RNA-dsP21-322上调人膀胱癌细胞系T24中抑癌基因p21WAF1/CIP1(p21)表达的效应。进一步分析dsP21-322是否还可上调p21前体mRNA的表达,以及增强RNA聚合酶Ⅱ蛋白与dsP21-322靶向的p21启动子区的联系。方法合成靶向p21启动子区的小激活RNA序列dsP21-322及阴性对照(dsControl),并分别转染至T24细胞,RT-qPCR和WesternBlot分别检测p21mRNA、前体mRNA和蛋白表达的变化。ChIP检测RNA聚合酶Ⅱ蛋白与dsP21-322靶向的p21启动子富集的改变。结果 RT-qPCR和WesternBlot结果显示,dsP21-322可以明显上调T24细胞系中p21成熟mRNA、前体mRNA及p21蛋白的表达,且与dsControl相比,差异均有统计学意义(P<0.001)。此外,dsP21-322的转染可以明显增强RNA聚合酶Ⅱ蛋白与dsP21-322靶向的p21启动子区的联系。结论 dsP21-322上调抑癌基因p21表达是发生在转录水平的基因调控过程,这一特征的发现为后续RNA激活机制的研究提供了部分理论依据。 展开更多
关键词 RNA激活 小激活RNA p21前体mRNA RNA聚合酶Ⅱ p21启动子
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靶向p21基因saRNA抑制肝癌细胞生长实验研究 被引量：6
2
作者 杨哲 朱勇 赵瑞 《中华实用诊断与治疗杂志》 2015年第2期132-135,共4页
目的探讨RNA激活p21对肝癌HepG2、Hep3b和SMMC-7721细胞生长和侵袭力的影响。方法化学合成靶向p21的saRNA、阴性对照dsRNA,将其转染肝癌细胞系HepG2、Hep3b和SMMC-7721。每个细胞系分为3组,分别为p21-322组、阴性对照组和空白对照组,每... 目的探讨RNA激活p21对肝癌HepG2、Hep3b和SMMC-7721细胞生长和侵袭力的影响。方法化学合成靶向p21的saRNA、阴性对照dsRNA,将其转染肝癌细胞系HepG2、Hep3b和SMMC-7721。每个细胞系分为3组,分别为p21-322组、阴性对照组和空白对照组,每组复3孔;p21-322组和阴性对照组分别采用p21-322saRNA和阴性对照dsRNA进行转染,空白对照组不干预。转染后72h,采用RT-PCR和Western blot检测各组细胞中的p21 mRNA和P21蛋白表达水平,采用MTT法检测细胞生长情况及划痕实验观察细胞侵袭能力的变化。结果HepG2、Hep3b和SMMC-7721细胞p21-322组p21mRNA相对表达水平分别为23.43±2.29、16.87±1.61、31.77±5.06,P21蛋白相对表达水平分别为55.93±12.66、32.91±5.17、24.96±6.81;空白对照组分别为3.53±0.07、2.39±0.02、5.70±0.89,3.21±0.03、2.91±0.14、4.15±0.12;阴性对照组分别为3.87±0.97、2.57±0.71、5.87±1.73,3.11±0.70、3.01±0.97、5.13±2.14;p21-322组p21mRNA和蛋白相对表达水平明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.01),空白对照组与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);细胞转染后第6天时HepG2、Hep3b、SMMC-7721细胞p21-322转染组细胞平均生长抑制率分别为41%、48%和52%;HepG2细胞p21-322组24h后空白区域占原划痕区域面积的百分比((76±11)%)明显高于空白对照组((13±6)%)和阴性对照组((17±8)%)(P<0.01),阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论靶向p21的RNAa能抑制肝癌细胞的生长和侵袭力,p21可作为一个具有肝癌治疗应用价值的靶基因。 展开更多
关键词 RNA激活 肝癌 p21启动子
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含人P21启动子双荧光素酶基因载体的构建 被引量：4
3
作者 陈荣誉 郑文岭 +2 位作者 吴清华 张宝 马文丽 《热带医学杂志》 CAS 2011年第3期243-245,F0004,共4页
目的构建带有EGFP标记含人P21启动子的双荧光素酶报告基因载体。方法从人血白细胞DNA中克隆P21启动子,用于控制firefly荧光素酶的表达;renilla荧光素酶基因和EGFP基因用IRES连接,在CMV启动子控制下表达;上述元件和基因克隆至载体pLL3.7... 目的构建带有EGFP标记含人P21启动子的双荧光素酶报告基因载体。方法从人血白细胞DNA中克隆P21启动子,用于控制firefly荧光素酶的表达;renilla荧光素酶基因和EGFP基因用IRES连接,在CMV启动子控制下表达;上述元件和基因克隆至载体pLL3.7中,应用酶切和测序的方法进行鉴定正确后转染至293FT细胞观察EGFP表达。结果经酶切、测序证实成功构建了带有EGFP标记的含人P21启动子的双荧光素酶报告基因的载体,并成功表达EGFP。结论含人P21启动子的双荧光素酶报告基因的载体成功构建,为下一步的药物筛选打下基础。 展开更多
关键词 双荧光素酶报告基因 P21启动子 EGFP
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含p21启动子的荧光素酶报告基因的构建和活性测定 被引量：2
4
作者 姜艳超 丁丽华 +6 位作者 杨智洪 胡建民 李杰萍 张浩 袁斌 李熔 叶棋浓 《生物技术通讯》 CAS 2007年第3期395-397,共3页
目的:克隆p21基因的启动子,插入荧光素酶报告基因载体中,并检测其活性。方法:采用PCR技术从人乳腺癌细胞系MCF-7基因组中扩增出p21启动子,插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,确定所扩增的DNA序列,在293T细胞中检测其活性。结果:测... 目的:克隆p21基因的启动子,插入荧光素酶报告基因载体中,并检测其活性。方法:采用PCR技术从人乳腺癌细胞系MCF-7基因组中扩增出p21启动子,插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,确定所扩增的DNA序列,在293T细胞中检测其活性。结果:测序结果表明扩增的p21启动子序列正确,活性实验表明构建的报告基因具有启动子活性,雌激素受体(ER)α能以剂量依赖的方式升高p21报告基因的转录。结论:克隆了p21启动子,为ERα共调节子的功能研究提供了重要基础。 展开更多
关键词 p21启动子 荧光素酶报告基因 转录活性
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p53激活抗肿瘤药物应用p21途径双荧光素酶报告系统筛选初步研究 被引量：1
5
作者 吴清华 陈荣誉 +4 位作者 邓治亮 张宝 石嵘 马文丽 郑文岭 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2013年第20期1565-1568,共4页
目的:构建含人p21启动子的双荧光素酶报告载体,感染肿瘤细胞后用于检测p53激活的抗肿瘤药物筛选。方法:从人血白细胞DNA中克隆p21启动子,用于控制Firefly荧光素酶的表达;Renilla荧光素酶基因和EGFP基因与IRES相连,在CMV启动子控制下表达... 目的:构建含人p21启动子的双荧光素酶报告载体,感染肿瘤细胞后用于检测p53激活的抗肿瘤药物筛选。方法:从人血白细胞DNA中克隆p21启动子,用于控制Firefly荧光素酶的表达;Renilla荧光素酶基因和EGFP基因与IRES相连,在CMV启动子控制下表达;将上述元件和基因克隆至载体pLL3.7中,应用酶切和测序反应验证后再转染至U251和Eca109肿瘤细胞建立细胞检测模型。结果:成功构建含人p21启动子、大小约13kb的pLL3.7-Dluc重组质粒,经LipofecttamineTM转染后用于细胞药物筛选;采用MTT方法对8种不同药物对U251和Eca109细胞处理后进行IC50检测,其中姜黄素和丹参酮ⅡA在U251肿瘤细胞中的IC50分别为20和8μg/mL,Eca109细胞的IC50分别为12和25μg/mL;药物作用转染后U251细胞48h后作荧光素酶检测,计算F/R值并SPSS 13.0分析,姜黄素和丹参酮ⅡA的P值分别为0.003和0.024,药物作用后荧光检测结果显著;该实验在Eca109细胞模型中姜黄素和丹参酮ⅡA取得了一致性的结果,P值分别为0.001和0.015。人参皂苷Rb1与阴性对照组相比差异有统计学意义,P=0.022。结论:通过p21途径检测双荧光素酶基因的表达状况,提示姜黄素、丹参酮ⅡA和人参皂苷Rb1三种药物在U251和Eca109肿瘤细胞中具有使p53活性增加的功能。 展开更多
关键词 p21启动子 p53激活 药物筛选 双荧光素酶报告系统 抗肿瘤活性 姜黄素 丹参酮 人参皂苷
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saRNA调控p21基因表达对肝癌细胞的抑制作用 被引量：1
6
作者 庄菊花 夏伟 +2 位作者 倪晶 胡翠华 钱雷行 《临床和实验医学杂志》 2016年第10期929-933,共5页
目的探讨RNA激活p21对肝癌Hep G2、Hep 3b和SMMC-7721细胞生长和侵袭力的影响。方法化学合成靶向p21的saRNA,将其转染肝癌细胞系Hep G2、Hep 3b和SMMC-7721,利用荧光定量RT-PCR和免疫印迹检测细胞中的p21表达水平,并MTT法检测细胞生长... 目的探讨RNA激活p21对肝癌Hep G2、Hep 3b和SMMC-7721细胞生长和侵袭力的影响。方法化学合成靶向p21的saRNA,将其转染肝癌细胞系Hep G2、Hep 3b和SMMC-7721,利用荧光定量RT-PCR和免疫印迹检测细胞中的p21表达水平,并MTT法检测细胞生长情况及划痕实验观察细胞侵袭能力的变化。结果 Hep G2、Hep3b和SMMC-7721细胞的p21 mRNA分别较对照组升高了6.6、7.1、6.1倍,p21蛋白表达水平分别升高了17.4、11.4、6.7倍。细胞转染后48 h时的细胞增长平均抑制率分别为47%、53%和55%;划痕实验显示转染组细胞迁移能力显著低于对照组(P<0.01)。结论靶向p21的RNAa能抑制肝癌细胞的生长和侵袭力,p21可作为一个具有肝癌治疗应用价值的靶基因。 展开更多
关键词 肝癌细胞 RNA激活 p21启动子
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