过量表达Wnt-1基因诱导P19细胞的神经分化 被引量：9

1

作者 杨靖 孙红 +1 位作者 边玮 景乃禾 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期289-295,共7页

Wnt-1基因在小鼠神经发育过程中起着重要作用。该基因在胚胎性癌细胞P19向神经分化过程中存在瞬时性表达。利用克隆到的Wnt－1基因转染P19细胞（Wnt－1／P19），可使细胞不经视黄酸（RA）诱导，自发向神经细胞方向分化。早期神经分化关... Wnt-1基因在小鼠神经发育过程中起着重要作用。该基因在胚胎性癌细胞P19向神经分化过程中存在瞬时性表达。利用克隆到的Wnt－1基因转染P19细胞（Wnt－1／P19），可使细胞不经视黄酸（RA）诱导，自发向神经细胞方向分化。早期神经分化关键基因MASH-1在Wnt－1／P19细胞的神经分化过程中的表达，晚于RA诱导引起的P19细胞的分化过程。 展开更多

关键词 WNT-1 反转录pCR p19细胞 过量表达 神经分化

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pEGFP-C2-GATA4真核表达载体的构建及在P19细胞中的表达 被引量：7

2

作者 张金平 王巍 +4 位作者 张雷 王慧娟 赵春芳 陈炜 赵秀军 《第四军医大学学报》 北大核心 2008年第2期134-137,共4页

目的:构建小鼠GATA4基因融合绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C2-GATA4,并检验其在P19细胞中的瞬时表达.方法:以真核表达质粒pEFSA-GATA4为模板,PCR扩增得到小鼠GATA4基因片段,将目的片段亚克隆到pEG-FP-C2载体,卡那霉素筛选阳性克隆,经... 目的:构建小鼠GATA4基因融合绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C2-GATA4,并检验其在P19细胞中的瞬时表达.方法:以真核表达质粒pEFSA-GATA4为模板,PCR扩增得到小鼠GATA4基因片段,将目的片段亚克隆到pEG-FP-C2载体,卡那霉素筛选阳性克隆,经菌落PCR、酶切鉴定和测序鉴定.将重组质粒pEGFP-C2-GATA4以脂质体法瞬时转染P19细胞,用免疫细胞化学、共聚焦扫描显微镜、PCR、免疫印记法检测GATA4在P19细胞中的表达.结果:酶切、测序结果表明将基因片段GATA4正确插入pEGFP-C2载体,并可在P19细胞中检测到GATA4基因和GATA4-EGFP融合蛋白表达.结论:成功构建真核表达质粒pEGFP-C2-GATA4,并在P19细胞瞬时表达成功,为进一步研究GATA4在心脏发育中的作用奠定了基础. 展开更多

关键词 pEGFp—C2载体 GATA4 真核表达质粒 p19细胞 转染

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外源表达Nkx2-5基因诱导P19细胞向心肌分化 被引量：7

3

作者 张金平 张雷 +4 位作者 王惠娟 王多 赵昱 尹青 赵春芳 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期725-729,共5页

目的:构建人Nkx2-5基因融合绿色荧光蛋白真核表达质粒pEGFP-N1-Nkx2-5,探讨外源性Nkx2-5基因诱导P19细胞向心肌分化的作用。方法:以真核表达质粒pEFSA-HA-Nkx2-5为模板,PCR扩增得到人Nkx2-5基因,将目的片段亚克隆到pEGFP-N1载体,鉴定正... 目的:构建人Nkx2-5基因融合绿色荧光蛋白真核表达质粒pEGFP-N1-Nkx2-5,探讨外源性Nkx2-5基因诱导P19细胞向心肌分化的作用。方法:以真核表达质粒pEFSA-HA-Nkx2-5为模板,PCR扩增得到人Nkx2-5基因,将目的片段亚克隆到pEGFP-N1载体,鉴定正确。将重组质粒pEGFP-N1-Nkx2-5以脂质体法转染P19细胞,G418筛选2周,聚集4d,贴壁培养16d。以免疫细胞化学检测desmin、α-sarcomeric actin和cardiac Troponin T(cTnT)的表达。结果:将Nkx2-5基因正确插入pEGFP-N1载体,外源表达Nkx2-5基因可使P19细胞在无诱导剂、聚集条件下表达desmin、α-sarcomeric actin和cTnT蛋白。结论:成功构建真核表达质粒pEGFP-N1-Nkx2-5,外源表达Nkx2-5基因诱导P19细胞向心肌分化。 展开更多

关键词 NKX2-5 质粒构建 p19细胞 基因转染 心肌分化

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hhlim促进DMSO诱导的P19细胞向心肌分化 被引量：4

4

作者 郑斌 温进坤 +1 位作者 韩梅 周爱儒 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第6期506-511,共6页

为了确定hhlim是否参与胚胎期的心肌分化和发育过程 ,用可表达hhlim蛋白和hhlim反义RNA的真核表达质粒转染P19胚胎干细胞 ,经G4 18筛选得到稳定表达hhlim和hhlim反义RNA的P19细胞克隆后 ,观察hhlim对P19细胞向心肌分化和发育的影响 .结... 为了确定hhlim是否参与胚胎期的心肌分化和发育过程 ,用可表达hhlim蛋白和hhlim反义RNA的真核表达质粒转染P19胚胎干细胞 ,经G4 18筛选得到稳定表达hhlim和hhlim反义RNA的P19细胞克隆后 ,观察hhlim对P19细胞向心肌分化和发育的影响 .结果显示 ,Nkx2 5和GATA 4在未被外源性hhlim基因转染的P19细胞中不表达 .DMSO刺激细胞 2天后 ,GATA 4开始表达 ,3天后Nkx2 5的表达活性显著升高 .hhlim的过表达不但有利于P19细胞的存活和生长 ,而且还可以使Nkx2 5和GATA 4的表达比对照细胞提前 1天 .反义hhlim细胞株被DMSO诱导 5天后 ,细胞仍呈集落化生长 .同时 ,Nkx2 5和GATA 4开始表达的时间明显延滞 .结果表明 ,hhlim能促进P19细胞向心肌细胞分化 ,其作用是通过促进转录因子GATA 4和Nkx2 展开更多

关键词 hhlim基因 心肌细胞 转录因子 p19细胞 分化

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Nkx2-5基因诱导P19细胞分化中心肌标志物的表达 被引量：5

5

作者 张金平 王慧娟 +5 位作者 史玉兰 王立轩 赵昱 郭艳红 赵春芳 张雷 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期2658-2662,共5页

目的研究同源框基因Nkx2-5在心肌发生中的作用。方法实验分转染组和未转染组,转染组细胞为稳定表达Nkx2-5的P19细胞,未转染组细胞为P19细胞。两组细胞悬浮培养4d,形成聚集体后贴壁培养,于贴壁培养的4、8、12、16d,免疫细胞化学检测α横... 目的研究同源框基因Nkx2-5在心肌发生中的作用。方法实验分转染组和未转染组,转染组细胞为稳定表达Nkx2-5的P19细胞,未转染组细胞为P19细胞。两组细胞悬浮培养4d,形成聚集体后贴壁培养,于贴壁培养的4、8、12、16d,免疫细胞化学检测α横纹肌肌动蛋白(α-sarcomeric actin,α-SA)和心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)的表达;RT-PCR检测GATA-4、α-肌球蛋白重链(α-myosin heavy chain,α-MHC)、心房利钠因子(atrial natriuretic factor,ANF)基因的表达。结果转染组α-SA和cTnT两种蛋白在聚集体贴壁的8、12、16d出现表达,表达量有增高趋势;16d与8d比有显著差异(P<0.01);RT-PCR结果显示:转染组GATA-4在贴壁培养的4d有表达,8、12d表达逐渐增多,16d时表达有所下降。α-MHC和ANF在贴壁培养的8d有表达,12d和16d时表达逐渐增多。统计结果表明GATA-4在8、12、16d的表达量与4d比有显著差异(P<0.05或P<0.01),α-MHC在12、16d的表达量与8d比有显著差异(P<0.05,P<0.01),ANF在16d的表达量与8d比有显著差异(P<0.01),16d表达量与12d比也有显著差异(P<0.01);未转染组结果均为阴性。结论外源表达Nkx2-5基因可诱导P19细胞逐渐表达心肌标志物。 展开更多

关键词 同源框基因 NKX2-5 p19细胞 心肌标志物

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miR-149-3p在先天性心脏病胎鼠心脏组织中的表达及其对P19细胞分化的影响

6

作者 胡丹慧 罗慧臣 刘海英 《天津医药》 CAS 北大核心 2023年第1期45-49,共5页

目的 探讨miR-149-3p在先天性心脏病(CHD)胎鼠心脏组织中的表达及其对小鼠畸胎瘤P19细胞分化的影响。方法 建立CHD室间隔缺损胎鼠模型,于妊娠第19天,HE染色观察心脏组织病理学变化,实时荧光定量PCR(qPCR)检测心脏组织中miR-149-3p和热... 目的 探讨miR-149-3p在先天性心脏病(CHD)胎鼠心脏组织中的表达及其对小鼠畸胎瘤P19细胞分化的影响。方法 建立CHD室间隔缺损胎鼠模型,于妊娠第19天,HE染色观察心脏组织病理学变化,实时荧光定量PCR(qPCR)检测心脏组织中miR-149-3p和热休克蛋白蛋白家族B成员6(HSPB6)mRNA表达水平。二甲基亚砜(DMSO)诱导P19细胞向心肌细胞分化,并收集分化第0、5、10天的细胞,qPCR检测诱导分化过程中心肌分化标志物GATA结合蛋白4(GATA4)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、心房利钠尿多肽(ANP)的mRNA表达水平以及HSPB6 mRNA和miR-149-3p表达水平。miR-149-3p过表达慢病毒和空载慢病毒感染P19细胞,DMSO诱导分化第10天,免疫荧光染色检测细胞中cTnI蛋白表达情况,qPCR检测心肌分化相关标志物mRNA表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-149-3p与HSPB6之间的靶向关系。结果 与正常组比较,CHD组胎鼠出现心脏室间隔缺损,心脏组织中miR-149-3p高表达,而HSPB6低表达(P<0.01)。P19细胞在向心肌细胞分化的过程中,GATA4、cTnT、ANP和HSPB6mRNA水平均逐渐上升,而miR-149-3p表达水平逐渐下降(P<0.05)。诱导分化第10天,miR-149-3p过表达可明显降低心肌细胞分化率,并下调GATA4、cTnT、ANP mRNA表达水平(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-149-3p可以靶向调控HSPB6表达。结论 miR-149-3p可能通过靶向下调HSPB6抑制P19细胞向心肌细胞分化。 展开更多

关键词 心脏缺损 先天性 微RNAS HSp20热休克蛋白质类 细胞分化 miR-149-3p p19细胞

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PAX3基因沉默对P19细胞向心肌样细胞分化的影响及其机制

7

作者 万朝辉 曾良 +1 位作者 李晶 雷长城 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期647-655,共9页

目的:探讨配对盒转录因子3(PAX3)基因沉默对P19细胞向心肌样细胞分化的影响,并阐明其可能作用机制。方法:采用二甲基亚砜(DMSO)诱导P19细胞向心肌样细胞分化,观察诱导分化过程中细胞形态表现,并收集诱导分化第0天(0d组)和第10天(10 d组... 目的:探讨配对盒转录因子3(PAX3)基因沉默对P19细胞向心肌样细胞分化的影响,并阐明其可能作用机制。方法:采用二甲基亚砜(DMSO)诱导P19细胞向心肌样细胞分化,观察诱导分化过程中细胞形态表现,并收集诱导分化第0天(0d组)和第10天(10 d组)的细胞。采用shPAX3慢病毒感染P19细胞,将细胞分为对照组、sh-NC组(阴性对照)和sh-PAX3组(PAX3干扰),实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测PAX3基因沉默的P19细胞构建情况。采用Notch信号激动剂Jagged1处理慢病毒感染后的P19细胞,并采用DMSO诱导分化10 d,将细胞分为DMSO组、DMSO+sh-NC组、DMSO+sh-PAX3组、DMSO+Jagged1组和DMSO+sh-PAX3+Jagged1组。RT-qPCR法检测各组细胞中GATA结合蛋白4(GATA4)、心房利钠尿多肽(ANP)、心肌肌钙蛋白(cTn)T、PAX3、Notch1、Notch胞内结构域(NICD)及Hes家族bHLH转录因子1(Hes1)mRNA表达水平。Western blotting法检测各组细胞中PAX3、Notch1、NICD和Hes1蛋白表达水平。免疫荧光染色法检测各组细胞中cTnI阳性表达情况和心肌样细胞分化率。结果:诱导分化第10天,可观察到自发性节律收缩的心肌样细胞簇。RT-qPCR和Western blotting法检测,慢病毒感染后,与对照组和sh-NC组比较,sh-PAX3组P19细胞中PAX3 mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05),表明PAX3基因沉默的P19细胞构建成功。RT-qPCR法检测,与0d组比较,10 d组细胞中GATA4、ANP和cTnT mRNA表达水平均升高(P<0.05),PAX3、Notch1、NICD和Hes1 mRNA表达水平均升高(P<0.05);与DMSO组和DMSO+sh-NC组比较,DMSO+sh-PAX3组细胞中GATA4、ANP和cTnT mRNA表达水平均降低(P<0.05),DMSO+Jagged1组细胞中GATA4、ANP和cTnT mRNA表达水平均升高(P<0.05);与DMSO+sh-PAX3组比较,DMSO+shPAX3+Jagged1组细胞中GATA4、ANP和cTnT mRNA表达水平均升高(P<0.05)。Western blotting法检测,与0d组比较,10 d组细胞中PAX3、Notch1、NICD和Hes1蛋白表达水平均升高(P<0.05);与DMSO组和DMSO+sh-NC组比较,DMSO+sh-PAX3组 展开更多

关键词 p19细胞 配对盒转录因子3 NOTCH信号通路 心肌样细胞

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P19细胞向心肌细胞分化过程中FHL1基因的表达变化 被引量：1

8

作者 郭英杰 张奇军 +2 位作者 钱玲梅 孔祥清 曹克将 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期601-604,共4页

目的:观察FHL1(Four and a half LIM domains protein1)基因在P19细胞向心肌细胞诱导分化过程中表达水平的变化,探讨FHL1基因与心肌细胞分化之间的关系。方法:P19细胞经1%二甲基亚砜(DMSO)诱导悬浮培养4天形成细胞聚集体,将聚集体用生... 目的:观察FHL1(Four and a half LIM domains protein1)基因在P19细胞向心肌细胞诱导分化过程中表达水平的变化,探讨FHL1基因与心肌细胞分化之间的关系。方法:P19细胞经1%二甲基亚砜(DMSO)诱导悬浮培养4天形成细胞聚集体,将聚集体用生长培养基黏附培养至14天,观察细胞跳动情况,用肌钙蛋白I(cTnI)抗体行Western Blot以鉴定心肌细胞分化,并采用RT-PCR、Western Blot技术在细胞分化成熟的不同时段检测P19细胞中FHL1基因mRNA和蛋白的表达水平。结果:DMSO诱导4天后,用生长培养基黏附培养至第8天,P19细胞出现自发性节律跳动的细胞团片,Western Blot检测cTnI蛋白呈阳性。FHL1基因在P19细胞向心肌细胞分化过程中,随细胞分化成熟该基因表达水平逐渐上调,Western Blot检测结果与RT-PCR检测结果基本一致。FHL1基因在分化第0～8天表达显著增高,各时间点之间差异显著(P<0.05);第8～14天表达趋于稳定,各时间点之间差异无显著性(P>0.05)。结论:FHL1基因在P19细胞向心肌细胞分化过程中表达逐渐上调,可能参与心肌细胞的分化和发育。 展开更多

关键词 FHL1基因 p19细胞 细胞分化

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P19细胞向心肌细胞分化过程中ZNF207基因的表达变化 被引量：2

9

作者 卓莉莉 龚杰 +4 位作者 周蕾 盛燕辉 杨荣 孔祥清 曹克将 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期781-784,F0002,共5页

目的:观察锌指蛋白207基因(ZNF207)在P19细胞向心肌细胞诱导分化过程中表达水平的变化,探讨ZNF207基因与心肌细胞分化之间可能的关系。方法:体外培养P19细胞,应用0.9%二甲基亚砜(DMSO)诱导其向心肌细胞分化,采用RT-PCR技术在细胞分化成... 目的:观察锌指蛋白207基因(ZNF207)在P19细胞向心肌细胞诱导分化过程中表达水平的变化,探讨ZNF207基因与心肌细胞分化之间可能的关系。方法:体外培养P19细胞,应用0.9%二甲基亚砜(DMSO)诱导其向心肌细胞分化,采用RT-PCR技术在细胞分化成熟的不同时段检测P19细胞中ZNF207基因mRNA表达水平。结果:ZNF207基因在P19细胞向心肌细胞分化的过程中均有表达,随细胞分化成熟,该基因表达水平逐渐升高。经统计学分析发现,在分化第0～2天该基因表达无差异;第2～10天表达持续性增高,各时间点之间均有差异,差异均有统计学意义(P<0.05);第10～17天该基因稳定高表达,各时间点之间无差异。结论:ZNF207基因在P19细胞向心肌细胞分化过程中表达逐渐上调,可能有利于心肌细胞的分化和发育。 展开更多

关键词 ZNF207基因 p19细胞 细胞分化

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P19细胞向心肌细胞分化过程中FABP3基因表达的变化 被引量：2

10

作者 张奇军 郭英杰 +2 位作者 钱玲梅 孔祥清 曹克将 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期590-593,I0003,共5页

目的观察脂肪酸结合蛋白（FABP3）基因在胚胎癌细胞（P19细胞）向心肌细胞诱导分化过程中表达水平的变化，探讨FABP3基因与心肌细胞分化之间的关系。方法P19细胞经1％二甲基亚砜（DMSO）诱导至第15天，用肌钙蛋白I（cTnI）抗体行蛋白质... 目的观察脂肪酸结合蛋白（FABP3）基因在胚胎癌细胞（P19细胞）向心肌细胞诱导分化过程中表达水平的变化，探讨FABP3基因与心肌细胞分化之间的关系。方法P19细胞经1％二甲基亚砜（DMSO）诱导至第15天，用肌钙蛋白I（cTnI）抗体行蛋白质斑迹法（Western blot）鉴定心肌细胞分化，并采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot技术检测FABP3基因mRNA和蛋白的表达水平。结果诱导的P19细胞于第8天出现自发性节律跳动，Western blot检测cTnI蛋白呈阳性。在P19细胞分化过程中，FABP3基因mRNA表达呈先下调（0～6d）后再逐渐上调（5～15d）的表达模式，每隔两个时间点均有显著差异（P〈0．05）；FABP3蛋白也呈现相同的表达模式，但其表达水平在0～4d间无显著差异（P〉0．05）。结论FABP3基因可能参与心肌细胞的分化。 展开更多

关键词 脂肪酸结合蛋白基因 胚胎癌细胞 细胞分化

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P19细胞心肌体外分化诱导条件的优化 被引量：2

11

作者 岳晓珊 長岡正人 +1 位作者 赤池敏宏 王钊 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2008年第2期177-180,共4页

目的 分别观察P19细胞心肌分化诱导中的几种影响因素，优化P19细胞心肌分化的诱导条件。方法使用悬滴法或96孔板悬浮培养法制备细胞聚集体（aggregates），二甲基亚砜（DMSO）为诱导剂诱导P19细胞的心肌分化。普通光学显微镜下观察跳动... 目的 分别观察P19细胞心肌分化诱导中的几种影响因素，优化P19细胞心肌分化的诱导条件。方法使用悬滴法或96孔板悬浮培养法制备细胞聚集体（aggregates），二甲基亚砜（DMSO）为诱导剂诱导P19细胞的心肌分化。普通光学显微镜下观察跳动的心肌细胞的产生来确定诱导是否成功，免疫荧光染色确认心肌特异性蛋白Troponin T的表达，RT-PCR方法检测分化诱导后心肌细胞标志基因的表达情况。结果使用96孔板悬浮培养法诱导细胞形成聚集体后转入贴壁培养阶段时细胞聚集体贴壁状态优于传统的悬滴法。DMSO的加入可以提高细胞形成聚集体后贴壁时细胞聚集体的完整性。1×10^7～2×10^8L^-1的接种浓度下心肌细胞分化诱导效率较高。在可观察到跳动的心肌细胞之前即可检测到Troponin T的表达。结论通过对细胞形成聚集体的诱导方法、诱导剂、接种浓度等因素的优化可以提高P19细胞的心肌分化效率，为开发高效心肌分化诱导法提供了条件。 展开更多

关键词 p19细胞 心肌细胞 分化

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Foxa2调控P19胚胎癌细胞心肌分化过程的分子机制 被引量：2

12

作者 朱洪 张震 +2 位作者 刘义 陈燕 谭拥军 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期356-364,共9页

目的:研究转录因子forkhead box A2(Foxa2)在P19胚胎癌细胞心肌分化过程中的作用及其分子机制。方法:运用在P19细胞胚胎小体(embryoid bodies,EBs)培养基中加入二甲亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)的方法将P19细胞诱导分化成心肌细胞,运... 目的:研究转录因子forkhead box A2(Foxa2)在P19胚胎癌细胞心肌分化过程中的作用及其分子机制。方法:运用在P19细胞胚胎小体(embryoid bodies,EBs)培养基中加入二甲亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)的方法将P19细胞诱导分化成心肌细胞,运用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)方法检测诱导分化过程中不同时间点细胞样本中胚胎性干细胞多能性相关基因(Nanog)、心肌分化相关基因[Cerberus1(Cer1)和Sonic Hedgehog(Shh)]及Foxa2的mRNA水平,用免疫荧光染色的方法检测分化成熟的心肌细胞。同时分别运用转染真核表达质粒pCMV-rFoxa2(大鼠Foxa2)和构建稳定表达绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)-rFoxa2 P19细胞株的方法以提高P19细胞中Foxa2的表达水平,采用RT-PCR和Western印迹的方法检测上述细胞样本中多能性相关基因和心肌分化相关基因的mRNA和蛋白水平,及其EBs分化体系中心肌分化相关基因的mRNA水平。结果:P19细胞经DMSO诱导后分化形成心肌细胞,并伴随有Foxa2的表达激活。转染pCMV-rFoxa2质粒能在P19细胞中瞬时高量表达rFoxa2并激活其下游Cer1的转录。运用稳定表达GFP-rFoxa2的P19细胞株增高Foxa2的表达可以抑制Nanog的表达,并激活Shh的表达,促进P19细胞EBs心肌分化,表达Cer1和心脏α肌动蛋白(actin,alpha cardiac muscle 1,Actc1)。结论:Foxa2参与P19细胞心肌分化过程,Foxa2在DMSO诱导P19细胞心肌分化过程中的作用机制可能为直接抑制Nanog的表达,并激活Cer1和Shh的表达。 展开更多

关键词 Foxa2 p19细胞 DMSO 心肌分化

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miR-20b过表达对P19细胞增殖和细胞分化的影响 被引量：2

13

作者 朱莎莎 刘雪华 +6 位作者 余章斌 朱春 李萌萌 韩树萍 胡晓山 朱金改 彭宇竹 《发育医学电子杂志》 2014年第2期87-92,共6页

目的探讨miR-20b过表达对P19细胞增殖和细胞分化的影响。方法将包含鼠miR-20b成熟序列的慢病毒载体及空载体分别感染P19细胞,通过嘌呤霉素筛选2周,建立稳定过表达鼠mR-20b的P19细胞系。用Real-time PCR的方法验证稳定细胞表达株。用CCK-... 目的探讨miR-20b过表达对P19细胞增殖和细胞分化的影响。方法将包含鼠miR-20b成熟序列的慢病毒载体及空载体分别感染P19细胞,通过嘌呤霉素筛选2周,建立稳定过表达鼠mR-20b的P19细胞系。用Real-time PCR的方法验证稳定细胞表达株。用CCK-8方法检测稳定感染miR-20b过表达慢病毒和空载体的P19细胞间细胞增殖的差别。将稳定感染的两组细胞以无血清培养液37℃孵育24小时使细胞停留于G0期,而后恢复血清培养,取不同时间点的细胞,使用流式细胞仪检测两组间细胞周期的差别,从而间接验证CCK-8的结果。以1%二甲基亚砜(DMSO)将两组稳定感染的P19细胞诱导分化为心肌细胞,Real-time PCR检测心肌分化相关标志基因的表达,并用光镜观察分化过程中的形态变化。结果建立了稳定表达miR-20b的P19细胞系,与空载体组相比,miR-20b过表达可抑制P19细胞的增殖,促进心肌分化相关标志基因的表达(P<0.05,P<0.01或P<0.001)。结论 miR-20b过表达可显著抑制P19细胞的增殖,并具有促进P19细胞向心肌细胞分化的作用。 展开更多

关键词 p19细胞 miR-20b 细胞增殖 心肌分化

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多氯联苯对P19细胞向心肌分化进程的影响 被引量：2

14

作者 王瑛 朱春 +5 位作者 余章斌 王薛洁 潘亚 彭宇竹 郭锡熔 韩树萍 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期638-641,共4页

目的探讨多氯联苯对P19细胞向心肌分化进程的影响。方法在P19细胞向心肌细胞分化的培养液中加入多氯联苯(Aroclor 1254)2.5μmol/L,同时设立阴性对照组。显微镜下连续观察P19细胞形态的变化,并采用实时荧光定量RT-PCR技术对分化过程的第... 目的探讨多氯联苯对P19细胞向心肌分化进程的影响。方法在P19细胞向心肌细胞分化的培养液中加入多氯联苯(Aroclor 1254)2.5μmol/L,同时设立阴性对照组。显微镜下连续观察P19细胞形态的变化,并采用实时荧光定量RT-PCR技术对分化过程的第0、4、10天中GATA4及Nkx2.5基因mRNA的表达水平进行检测。结果在分化全程(0～10天),实验组与对照组无细胞形态上的差别;而GATA4、Nkx2.5基因的表达量除在分化开始前(第0天)差异无统计学意义外,在分化中期(第4天)及末期(第10天),实验组中GATA4、Nkx2.5基因的相对表达量均显著低于对照组。结论多氯联苯可通过对早期心脏发育相关重要基因的表达影响心肌分化进程。 展开更多

关键词 多氯联苯 p19细胞 GATA4基因 NKX2.5基因 心肌分化

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P19细胞向神经元诱导分化的实验研究 被引量：2

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作者 吴燕 丁爱石 +4 位作者 马子敏 吴丽颖 李海生 朱玲玲 范明 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期434-436,共3页

目的　探讨P19细胞向神经元定向分化发育的可能性。　方法　经维甲酸 (RA)诱导 4d的P19细胞按神经细胞培养方法培养 12d ,分别用NSE、MAP 2和TH进行免疫组织化学染色 ,用AchE进行组织化学染色 ,鉴定分化细胞的特征。　结果　经RA诱导的... 目的　探讨P19细胞向神经元定向分化发育的可能性。　方法　经维甲酸 (RA)诱导 4d的P19细胞按神经细胞培养方法培养 12d ,分别用NSE、MAP 2和TH进行免疫组织化学染色 ,用AchE进行组织化学染色 ,鉴定分化细胞的特征。　结果　经RA诱导的P19细胞培养 12d ,大多数细胞转变为类似于神经元的形态 ,长出突起并相互联络成网。经NSE免疫组织化学显示 ,12d培养物中神经元约占 89%。P19诱导的神经元培养 12d ,神经元突起经MAP 2染色呈阳性反应。TH免疫组织化学显示 ,神经元中TH染色阳性神经元约占 0 8%。组织化学显示 ,神经元中AchE染色阳性神经元约占 71 0 9%。 展开更多

关键词 p19细胞 神经元 诱导 分化 实验研究 细胞培养

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热处理延缓维甲酸诱导P19细胞的生长及向神经元分化 被引量：1

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作者 赵永岐 吴燕 +4 位作者 丁爱石 吴丽颍 葛学铭 刘红 范明 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2004年第5期514-517,共4页

研究热环境对P19细胞生长和RA诱导的向神经元分化的影响 ,为探讨热环境刺激对神经系统发育的影响提供参考。成熟的P19细胞在热环境的条件下培养 1h后 ,消化接种至培养皿中正常培养 ,于不同时间点取样分析细胞数目。热环境处理P19细胞后... 研究热环境对P19细胞生长和RA诱导的向神经元分化的影响 ,为探讨热环境刺激对神经系统发育的影响提供参考。成熟的P19细胞在热环境的条件下培养 1h后 ,消化接种至培养皿中正常培养 ,于不同时间点取样分析细胞数目。热环境处理P19细胞后用维甲酸诱导分化 4d ,随后接种至培养皿中 ,参照神经元的原代培养方法培养12d ,用神经元抗体免疫鉴定 ,计数不同培养时间NSE、NF阳性神经元在总体细胞中的比例。结果发现接受热处理的P19细胞贴壁不良 ,生长始终缓慢 ,说明热环境刺激阻止细胞生长分裂。P19细胞经RA诱导分化后出现类似神经细胞的突起和纤维网络 ,而热环境导致P19细胞向神经元分化明显迟缓 。 展开更多

关键词 热处理 维甲酸 诱导 p19细胞 生长 向神经元分化

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p19细胞向心肌样细胞分化过程中NRD1基因表达的变化 被引量：1

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作者 王飞 钱玲梅 +1 位作者 孔祥清 曹克将 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期573-575,共3页

目的观察苯乙肼裂解酶1（NRD1）在p19细胞向心肌样细胞诱导分化过程中表达的变化。方法p19细胞经1％二甲基亚砜（DMSO）悬浮诱导培养4d，续用生长培养基贴壁培养至16d，观察细胞跳动情况，用Western blot鉴定心肌细胞肌钙蛋白I（cTnI）... 目的观察苯乙肼裂解酶1（NRD1）在p19细胞向心肌样细胞诱导分化过程中表达的变化。方法p19细胞经1％二甲基亚砜（DMSO）悬浮诱导培养4d，续用生长培养基贴壁培养至16d，观察细胞跳动情况，用Western blot鉴定心肌细胞肌钙蛋白I（cTnI），并采用RT-PCR、Western blot检测p19细胞中NRD1基因mRNA和蛋白的表达。结果p19细胞于诱导分化的第8天出现自发性节律跳动，cTnI蛋白呈阳性。NRD1基因在分化的第0-10天表达显著增高，各时间点之间差异有统计学意义（P〈0.05）；第12-16天该基因表达趋于稳定，各时间点之间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论NRD1基因在p19细胞向心肌细胞分化过程中表达逐渐上调，可能参与心肌细胞的分化和发育。 展开更多

关键词 苯乙肼裂解酶 p19细胞 心肌样细胞

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5-氮胞苷诱导外源表达Nkx2-5的P19细胞向心肌分化的研究 被引量：1

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作者 张金平 赵静 +3 位作者 王慧娟 赵秀军 赵春芳 张雷 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第18期1778-1781,共4页

目的研究在单层培养条件下,5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)诱导表达Nkx2-5的P19细胞向心肌分化的可能性和效率。方法实验分为实验组和对照组,实验组细胞为稳定表达Nkx2-5的P19细胞,对照组为P19细胞。2组细胞均在单层培养条件下,以5-aza(... 目的研究在单层培养条件下,5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)诱导表达Nkx2-5的P19细胞向心肌分化的可能性和效率。方法实验分为实验组和对照组,实验组细胞为稳定表达Nkx2-5的P19细胞,对照组为P19细胞。2组细胞均在单层培养条件下,以5-aza(1μmol/L)诱导。倒置显微镜观察细胞的生长状态;诱导4、8、12、16d,Western blot检测α-sarcomeric actin和cTnT的表达;并用免疫荧光双标检测α-sarcomeric actin和cTnT的共表达。结果实验组和对照组细胞在5-aza诱导下,生长缓慢,死亡细胞数目增多。随贴壁细胞密度增加,形成类似于聚集体贴壁生长的状态,中心细胞小、密集,周边细胞呈放射状排列,胞体长梭形,伸出突起。实验组诱导8、12、16d检测到α-sarcomeric actin和cTnT2种蛋白的表达和共表达,表达量呈增多趋势;诱导12、16d时α-sarcomerica ctin的表达量与8d比差异有统计学意义(P<0.01),诱导16d的表达量与12d比差异有统计学意义(P<0.01);cTnT在诱导12、16d的表达量与8d比差异有统计学意义(P<0.01)。对照组没有2种蛋白的表达和共表达。结论5-aza可诱导单层生长的表达Nkx2-5的P19细胞向心肌分化。 展开更多

关键词 5-az8 Nkx2—5 p19细胞 心肌分化

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FABP3对P19细胞增殖的影响及其生物信息学分析 被引量：1

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作者 沈亚卉 刘垚秋 +3 位作者 胡德亮 张奇军 孔祥清 钱玲梅 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2011年第18期2109-2111,I0001,共4页

目的探讨脂肪酸结合蛋白(FABP)3基因过表达对P19细胞分化、增殖的影响及FABP3基因的生物信息学特征。方法构建FABP3过表达载体及相应的空载体,转染P19细胞,经0.9%二甲基亚砜(DMSO)诱导分化为心肌细胞,定量PCR检测肌钙蛋白T(cTnT)和转录... 目的探讨脂肪酸结合蛋白(FABP)3基因过表达对P19细胞分化、增殖的影响及FABP3基因的生物信息学特征。方法构建FABP3过表达载体及相应的空载体,转染P19细胞,经0.9%二甲基亚砜(DMSO)诱导分化为心肌细胞,定量PCR检测肌钙蛋白T(cTnT)和转录调控因子GATA4基因的表达,MTT法检测P19细胞增殖,应用在线数据库软件分析FABP3的核苷酸基本特征、蛋白质理化性质、亚细胞定位等。结果与空载体相比,FABP3基因过表达能抑制cTnT、GATA4 mRNA表达及P19细胞增殖(P<0.05或P<0.01)。生物信息学分析显示,FABP3基因mRNA全长1097 bp,开放阅读框长402 bp,编码133个氨基酸,相对分子质量为14 858 Da,蛋白主要位于胞浆。结论 FABP3基因过表达显著抑制心肌细胞分化、增殖,生物信息学分析为进一步研究该基因奠定了基础。 展开更多

关键词 脂肪酸结合蛋白3 p19细胞 生物信息学

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p22-phox在P19细胞向心肌细胞分化前后的变化

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作者 吴继军 韩卫星 +3 位作者 刘超 陈晓蓉 王成 卢挪挪 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第1期9-12,共4页

目的探讨P19细胞向心肌细胞分化前后p22-phox水平的变化。方法贴壁培养P19细胞,取合适细胞株,应用0.9%二甲基亚砜(DMSO)诱导培养,收集诱导不同时间的细胞,通过Western blot检测其肌钙蛋白I(c Tn I)水平,以确定分化,并行Western blot检测... 目的探讨P19细胞向心肌细胞分化前后p22-phox水平的变化。方法贴壁培养P19细胞,取合适细胞株,应用0.9%二甲基亚砜(DMSO)诱导培养,收集诱导不同时间的细胞,通过Western blot检测其肌钙蛋白I(c Tn I)水平,以确定分化,并行Western blot检测P19细胞向心肌细胞分化前后细胞中p22-phox蛋白水平。结果1 P19细胞经0.9%DMSO诱导分化后,于第8天开始检测到c Tn I表达阳性,后c Tn I表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。2P19细胞向心肌细胞分化后细胞内p22-phox水平较分化前高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 p22-phox在P19细胞向心肌细胞分化后表达增加,氧化应激水平增高。 展开更多

关键词 p19细胞 心肌细胞 细胞分化 氧化应激 p22-phox

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