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Runx2参与调控Osterix启动子活性及其基因表达(英文) 被引量:21
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作者 孙冬梅 刘中博 +5 位作者 赵岩 宫振伟 李丹 王溪原 曾宪录 刘文广 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第10期957-964,共8页
尽管Runx2和Osterix都是成骨细胞分化途径中关键的转录因子,但是Runx2是否能够调控Osterix,还不为所知.研究发现,在非成骨细胞系,无论是间充质干细胞还是已分化的细胞,以及成骨细胞系中,Runx2都能诱导Osterix的表达.同时Runx2能够上调3.... 尽管Runx2和Osterix都是成骨细胞分化途径中关键的转录因子,但是Runx2是否能够调控Osterix,还不为所知.研究发现,在非成骨细胞系,无论是间充质干细胞还是已分化的细胞,以及成骨细胞系中,Runx2都能诱导Osterix的表达.同时Runx2能够上调3.2kb人的Osterix基因启动子活性.进一步实验证明,在这一段启动子中存在Runx2功能性的结合位点.因而,实验结果有力地支持了这样一个假设,即Runx2参与了Osterix基因的表达调控.瞬时转染和荧光素酶双报告分析结果显示,在非成骨细胞中,Osterix明显上调2.3kb的Ⅰ型胶原蛋白启动子活性,但Runx2却不能.这样的差别暗示,在成骨细胞分化过程中位于Runx2下游的转录因子Osterix是刺激Ⅰ型胶原蛋白基因表达所必需的. 展开更多
关键词 RUNX2 osterix 基因表达 调控
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补肾活血汤水提物调控Cbfal/RUNX2基因沉默骨髓间充质干细胞SP7/Osterix及碱性磷酸酶的表达 被引量:13
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作者 程英雄 罗毅文 +5 位作者 王斌 吴志方 沈玮 罗辉 孙世栋 黄文强 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2018年第13期1987-1992,共6页
背景:补肾活血汤可以促进骨髓间充质干细胞成骨分化,探究分子机制利于推向临床。目的:探讨补肾活血汤水提物对Cbfal/RUNX2基因沉默的骨髓间充质干细胞Osterix、碱性磷酸酶表达的影响。方法:骨髓贴壁筛选法分离和培养大鼠骨髓间充质干细... 背景:补肾活血汤可以促进骨髓间充质干细胞成骨分化,探究分子机制利于推向临床。目的:探讨补肾活血汤水提物对Cbfal/RUNX2基因沉默的骨髓间充质干细胞Osterix、碱性磷酸酶表达的影响。方法:骨髓贴壁筛选法分离和培养大鼠骨髓间充质干细胞,Cbfal/RUNX2基因沉默慢病毒转染骨髓间充质干细胞。取第3代骨髓间充质干细胞(空白对照组)、慢病毒沉默骨髓间充质干细胞(沉默组)和阴性病毒载体预处理骨髓间充质干细胞(阴性对照组),以及上述3组骨髓间充质干细胞加入100 mg/L补肾活血汤水提物干预3 d后,检测RUNX2、Osterix蛋白和mRNA表达以及碱性磷酸酶活性。结果与结论:(1)Cbfal/RUNX2基因沉默慢病毒转染效率达约90%;(2)与空白对照组和阴性对照组比较,沉默组骨髓间充质干细胞RUNX2和Osterix的蛋白及mRNA表达均下降,碱性磷酸酶活性也明显下降,差异有显著性意义(P<0.01);(3)补肾活血汤水提物干预后,沉默组骨髓间充质干细胞RUNX2、Osterix的表达和碱性磷酸酶活性明显增加,差异有显著性意义(P<0.01);(4)结果表明,补肾活血汤水提物可以促进骨髓间充质干细胞的RUNX2、Osterix表达,亦增加了碱性磷酸酶活性,从而促进骨髓间充质干细胞成骨分化。 展开更多
关键词 补肾活血汤 成骨 骨髓间充质干细胞 RUNX2 osterix 基因沉默 碱性磷酸酶 干细胞
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Runx2、Osterix转录因子过表达驱动内皮细胞成骨分化的机制探讨 被引量:10
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作者 杨光正 张文杰 +3 位作者 丁迅 张翔凯 蒋欣泉 张志愿 《上海口腔医学》 CAS CSCD 2017年第4期353-357,共5页
目的:探讨Runx2和Osterix(OSX)过表达对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)成骨分化的调控作用。方法:通过慢病毒载体,将Runx2和Osterix基因分别转染入HUVECs。通过碱性磷酸酶(ALP)染色、半定量活性检测... 目的:探讨Runx2和Osterix(OSX)过表达对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)成骨分化的调控作用。方法:通过慢病毒载体,将Runx2和Osterix基因分别转染入HUVECs。通过碱性磷酸酶(ALP)染色、半定量活性检测,探讨过表达Runx2和Osterix对HUVECs成骨分化的影响。通过RT-PCR、蛋白免疫印迹、免疫荧光染色检测成骨相关标志物Runx2、OSX、ALP、骨涎蛋白(BSP)、骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)在HUVECs中的表达。采用Graph Pad Prism 6.01软件包对数据进行统计学分析。结果:Runx2过表达有利于HUVECs的成骨分化,而Osterix过表达则无此作用。HUVECs转染Runx2过表达慢病毒后,成骨相关基因Runx2、OSX、ALP、BSP、OPN及OCN的转录水平上调,同时Runx2、OSX、OPN及OCN的蛋白表达水平亦有所上调。结论:Runx2过表达可促进HUVECs的成骨分化。 展开更多
关键词 Runx2基因 osterix基因 成骨分化 人脐静脉内皮细胞
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氟对成骨细胞Runx2和Osterix及COL I A2表达的影响 被引量:8
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作者 张亚楼 刘开泰 +1 位作者 刘继文 钟近洁 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期23-26,共4页
目的 研究氟对体外培养成骨细胞中Runx2和Osterix及对其下游基因胶原(COL)I A2表达的影响.方法 体外培养人成骨细胞,按染氟(NaF)剂量将成骨细胞分为0(对照)、0.625、1.250、2.500、5.000、10.000、20.000、40.000、80.000、160.00... 目的 研究氟对体外培养成骨细胞中Runx2和Osterix及对其下游基因胶原(COL)I A2表达的影响.方法 体外培养人成骨细胞,按染氟(NaF)剂量将成骨细胞分为0(对照)、0.625、1.250、2.500、5.000、10.000、20.000、40.000、80.000、160.000 mg/L组,培养24 h后收集细胞,提取RNA,采用荧光定量反转录聚合酶链反应[Real-time(RT)-PCR]方法检测Runx2和Osterix mRNA及下游基因COL I A2的表达.结果 成骨细胞在体外染氟培养24 h后,当NaF剂量为0.625、1.250、2.500、5.000、10.000、20.000 mg/L时,Runx2 mRNA表达水平(388.00±41.80、209.00±25.80、42.80±4.52、63.00±16.10、24.30±4.23、16.20±4.32)均高于对照组(1.00±0.12,P均<0.05);当NaF剂量为40.000、80.000、160.000、mg/L时,Runx2 mRNA表达水平(0.40±0.05、1.91±0.28、4.87±1.36)与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).当NaF剂量为1.250、2.500、5.000mg/L时,Osterix mRNA的表达水平(4.04±1.67、229.00±51.00、46.40±10.60)均高于对照组(1.00±0.42,P均<0.05);当NaF剂量为10.000、20.000、40.000、80.000、160.000 mg/L时,Osterix mRNA的表达水平(0.16±0.07、0.13±0.01、1.73±0.54、0.01±0.01、0.09±0.01)与对照组比较,差异无统计学意义(P均>0.05);当NaF剂量为0.625、1.250、2.500、5.000、10.000、20.000 mg/L时,COL I A2 mRNA的表达水平(2.27±0.89、8.03±2.31、14.20±2.75、7.66±1.34、8.96±2.30)均高于对照组(1.00±0.04,P<0.05);当剂量为160 mg/L时,COL I A2 mRNA的表达水平(0.54±0.01)低于对照组(P<0.05).结论 氟可影响成骨细胞Runx2和OsterixmRNA表达,表达水平与染氟的剂量有关.Runx2和Osterix又可以调节COLI A2 mRNA表达. 展开更多
关键词 氟化物中毒 基因表达 RUNX2 osterix 胶原Ⅰ型
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沉默Cx43基因对左归丸调控MC3T3-E1细胞Runx2、Osterix表达的影响 被引量:2
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作者 桑红灵 周安方 +1 位作者 喻小明 孙志博 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期5045-5049,共5页
目的:研究沉默Cx43基因对左归丸含药血清调控MC3T3-E1细胞成骨相关基因Runx2、Osterix表达的影响。方法:采用慢病毒介导的RNA干扰技术沉默Cx43基因,培养细胞分为正常对照(A)组、基因沉默(B)组、含药血清(C)组、中药加基因沉默(D)组。RT-... 目的:研究沉默Cx43基因对左归丸含药血清调控MC3T3-E1细胞成骨相关基因Runx2、Osterix表达的影响。方法:采用慢病毒介导的RNA干扰技术沉默Cx43基因,培养细胞分为正常对照(A)组、基因沉默(B)组、含药血清(C)组、中药加基因沉默(D)组。RT-PCR法检测培养第7、14、21天细胞Runx2、Osterix m RNA表达情况,进行组间对比。结果:左归丸含药血清可以促进MC3T3-E1细胞分化,显著增加分化中后期Runx2,尤其是Osterix m RNA的表达,A、C组比较,P<0.05或P<0.01。沉默Cx43基因导致细胞分化中后期Runx2、Osterix m RNA表达显著下降,A、B组比较,P<0.05;同时导致左归丸上述作用显著下降,C、D组比较,P<0.05。结论:沉默Cx43基因导致左归丸含药血清促MC3T3-E1细胞Runx2、Osterix m RNA表达的作用显著下降。 展开更多
关键词 连接蛋白43 基因沉默 左归丸 MC3T3-E1细胞 RUNX2 osterix
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小鼠骨髓间充质干细胞Osterix基因特异siRNA的设计和沉默作用 被引量:1
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作者 杨俊峰 薛小二 +1 位作者 张剑 黄振明 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1469-1472,共4页
目的探讨应用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)特异性抑制骨髓间充质干细胞内Osterix基因表达,筛选高效特异性siRNA。方法根据siRNA设计原则,针对Osterix基因序列特征设计Osterix特异siRNA(1-3),转染骨髓间充质干细胞,用QPCR和We... 目的探讨应用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)特异性抑制骨髓间充质干细胞内Osterix基因表达,筛选高效特异性siRNA。方法根据siRNA设计原则,针对Osterix基因序列特征设计Osterix特异siRNA(1-3),转染骨髓间充质干细胞,用QPCR和Western blot方法检测siRNA对Osterix基因的抑制效果。结果 Osterix siRNA-2可有效抑制骨髓间充质干细胞中Osterix基因的表达。随siRNA-2终浓度由50 nmol/L增加到100 nmol/L及200 nmol/L,抑制效率逐渐增强(P<0.05);siRNA-2以终浓度200 nmol/L转染后48 h抑制效果最强,72 h逐渐减弱,但仍明显抑制(P<0.05)。结论应用RNA干扰技术可抑制骨髓间充质干细胞中Osterix基因的表达,其抑制作用具有明显的时间、浓度依赖性。 展开更多
关键词 RNA干扰 osterix基因 小鼠骨髓间充质干细胞 基因沉默
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沉默HIF-1α基因对大鼠BMMSCs在牵张力作用下表达BSP和Osterix的影响 被引量:1
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作者 刘颖 杨晶 +6 位作者 李亚祯 阎潇 张强 任大鹏 杨芳 袁晓 郭庆圆 《口腔疾病防治》 2019年第5期287-292,共6页
目的探究机械牵张力作用下沉默大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)的低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)基因对骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)和Osterix表达的影响,为利用BMMSCs... 目的探究机械牵张力作用下沉默大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)的低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)基因对骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)和Osterix表达的影响,为利用BMMSCs修复骨缺损提供新的思路。方法根据大鼠HIF-1α基因设计shRNA序列,PCR扩增后克隆入p GMLV-SC1RNAi慢病毒载体。转化感受态细胞筛选阳性克隆并测序鉴定后,由293T细胞进行包装和滴度测定。转染体外培养的大鼠BMMSCs,倒置荧光显微镜观察荧光,筛选稳定沉默HIF-1α的细胞株。RNA干扰回复实验分为空白对照组、HIF-1αshRNA基因沉默组、阴性对照组、回复组4组,Western blot检测4组HIF-1α蛋白表达情况,以验证靶基因的回复效果,排除脱靶效应;使用FlexcellFX-5000T细胞应力加载系统对细胞进行机械牵张力干预,分为空白对照组、HIF-1αshRNA基因沉默组、阴性对照组,qRTPCR和Western blot检测各组BSP和Osterix的mRNA和蛋白表达水平。结果 HIF-1αshRNA慢病毒干扰载体构建成功,RNA干扰回复实验结果显示,回复组与空白细胞组HIF-1α蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05),重组慢病毒能有效沉默BMMSCs中HIF-1α。机械牵张力作用BMMSCs后,相对于空白对照组和阴性对照组,HIF-1αshRNA基因沉默组成骨相关因子BSP和Osterix的mRNA、蛋白表达均增强,差异具有统计学意义(P <0.05);空白对照组与阴性对照组间BSP和Osterix的mRNA和蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论机械牵张力作用下沉默BMMSCs中的HIF-1α可促进BSP和Osterix的表达。 展开更多
关键词 低氧诱导因子-1α 慢病毒载体 基因沉默 骨髓间充质干细胞 机械牵张力 骨涎蛋白 osterix
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锌指结构Osterix对骨骼发育影响的研究进展 被引量:1
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作者 姜宇 牛鹏飞 徐又佳 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期381-386,共6页
间充质细胞在骨化形成骨的过程中,其原基会分泌一些Hedgehog,Wnt和FGF家族和TGF-β的转录因子用于调控和起始早期骨骼相关基因的表达,研究这些早期调控因子对于研究期成骨代谢十分重要,锌指结构Osterix基因作为重要的成骨细胞特异性转... 间充质细胞在骨化形成骨的过程中,其原基会分泌一些Hedgehog,Wnt和FGF家族和TGF-β的转录因子用于调控和起始早期骨骼相关基因的表达,研究这些早期调控因子对于研究期成骨代谢十分重要,锌指结构Osterix基因作为重要的成骨细胞特异性转录因子越来越被人们重视,研究其基因的作用及其相关的机制,利于我们进一步了解成骨代谢和成骨相关性疾病:本文围绕Osterix的发现和功能,Osterix对小鼠中骨骼发育和成骨细胞的影响,Osterix对人类中骨骼的发育影响的研究以及Osterix的突变与人类骨骼疾病的关系方面进行阐述。目前相关Osterix的综述多集中关注于其对成骨细胞功能的调控。本文主要集中在于对于Osterix在动物和人体骨骼发育的影响的相关报道,进而进一步了解Osterix与人类骨骼疾病的相关的关系。本综述旨在拓展了Osterix作为成骨细胞重要调控因子对于在体的动物和人类骨骼发育的认识。 展开更多
关键词 osterix 骨骼发育 成骨代谢 基因功能
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条件性敲除Osterix基因获得先天性脊柱侧凸小鼠动物模型及表型分析 被引量:4
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作者 陈思旭 宗兆文 +3 位作者 贾敏 沈岳 赵玉峰 郭庆山 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期2169-2171,F0004,共4页
目的 通过Osterix基因敲除获得先天性脊柱侧凸动物模型及表型分析.方法 应用Cre-LoxP系统繁育成骨细胞特异性敲除Osterix基因小鼠.取4、12周龄的敲除小鼠各10只,以同龄同系野生型小鼠各10只为对照,行全身及脊柱X线摄像观察;收集脊柱标... 目的 通过Osterix基因敲除获得先天性脊柱侧凸动物模型及表型分析.方法 应用Cre-LoxP系统繁育成骨细胞特异性敲除Osterix基因小鼠.取4、12周龄的敲除小鼠各10只,以同龄同系野生型小鼠各10只为对照,行全身及脊柱X线摄像观察;收集脊柱标本行苏木素-伊红(HE)染色及抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察并检测.结果 成功获得成骨细胞特异性敲除Osterix基因小鼠,X线显示敲除小鼠中75%出现严重的脊柱侧凸,Cobb角平均值为35..HE染色显示敲除小鼠椎体生长板增宽,椎体骨量增加,TRAP染色显示腰椎中破骨细胞数量显著减少(P<0.05).结论 小鼠成骨细胞中条件性敲除Osterix基因后成功获得先天性脊柱侧凸模型,提示Osterix在先天性脊柱侧凸的发病中有重要作用. 展开更多
关键词 osterix 先天性脊柱侧凸 条件性基因敲除 模型 动物
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骨形成蛋白局部基因治疗在骨修复中的应用 被引量:1
10
作者 杨永华 易静 《国外医学(生物医学工程分册)》 2004年第4期233-237,共5页
骨形成蛋白(bonemorphogeneticproteins熏BMPs)是一组多功能的分泌性蛋白质,最主要的作用是在体内诱导异位和原位新骨、软骨及与骨组织有关的结缔组织如肌腱及韧带的形成,故可用于骨修复的局部基因治疗。本文简要介绍了目前BMP局部基因... 骨形成蛋白(bonemorphogeneticproteins熏BMPs)是一组多功能的分泌性蛋白质,最主要的作用是在体内诱导异位和原位新骨、软骨及与骨组织有关的结缔组织如肌腱及韧带的形成,故可用于骨修复的局部基因治疗。本文简要介绍了目前BMP局部基因治疗在骨修复中的应用情况,包括所用的方法、载体、载体细胞及在动物模型中的疗效。另外,还简述了两个新发现的与BMP用于骨修复有关的转录因子:Cbfal和Osterix。 展开更多
关键词 骨形成蛋白 局部基因治疗 骨修复 CBFAL osterix
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感觉神经递质降钙素基因相关肽对去势大鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨能力的影响 被引量:4
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作者 陈杰 丁宇翔 +2 位作者 刘彦普 马戈 刘伟 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2017年第13期1980-1985,共6页
背景:研究发现降钙素基因相关肽能够增强成骨细胞的生物学活性,实验拟进一步检测降钙素基因相关肽对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。目的:探讨外源性降钙素基因相关肽对去势大鼠骨髓间充质干细胞增殖、成骨能力的影响。方法:切除雌性S... 背景:研究发现降钙素基因相关肽能够增强成骨细胞的生物学活性,实验拟进一步检测降钙素基因相关肽对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。目的:探讨外源性降钙素基因相关肽对去势大鼠骨髓间充质干细胞增殖、成骨能力的影响。方法:切除雌性SD大鼠双侧卵巢建立骨质疏松模型,并通过micro-CT验证。从假手术和去势大鼠股骨中提取骨髓间充质干细胞,培养液中添加不同浓度降钙素基因相关肽,MTT法检测细胞增殖能力。对骨髓间充质干细胞进行成骨诱导,在诱导液中添加不同浓度降钙素基因相关肽,成骨诱导7 d,采用Real time RT-PCR和Western blot检测成骨特异性蛋白Runx2,Osterix的表达,成骨诱导21 d进行茜素红染色。结果与结论:(1)切除雌性大鼠双侧卵巢可成功建立骨质疏松模型;(2)不同浓度的降钙素基因相关肽可增强去势大鼠骨髓间充质干细胞的增殖及成骨分化能力,且具有剂量依赖性;(3)结果表明,降钙素基因相关肽对去势大鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化能力有直接促进作用,从而有利于骨形成。 展开更多
关键词 干细胞 骨髓干细胞 骨髓 间质干细胞 降钙素基因相关肽 骨质疏松 细胞增殖 组织工程 骨髓间充质干细胞 成骨分化 RUNX2 osterix 成骨诱导 国家自然科学基金
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