漆酶基因lac1338在大肠杆菌中的表达条件优化及其染料降解作用 被引量：6

1

作者 冯娟 覃炎锋 李荷 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1076-1081,共6页

在摇瓶水平上,采用单因素试验方法,对已构建好的表达漆酶蛋白HIS-Lac1338的工程菌BL21(DE3)/p ET32a(+)-lac1338的诱导表达条件进行优化,以期提高蛋白产量,降低生产成本.研究了培养温度、诱导时间、异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度、铜离... 在摇瓶水平上,采用单因素试验方法,对已构建好的表达漆酶蛋白HIS-Lac1338的工程菌BL21(DE3)/p ET32a(+)-lac1338的诱导表达条件进行优化,以期提高蛋白产量,降低生产成本.研究了培养温度、诱导时间、异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度、铜离子(Cu2+)浓度等不同条件对HIS-Lac1338表达量和活性的影响.通过聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDSPAGE)分析确定最佳表达条件,用酶标仪测其酶活性.结果显示,温度为30℃,初始菌体浓度D600 nm为1.6,加终浓度为0.2 mmol/L的IPTG及终浓度0.5 mmol/L的Cu2+,培养16 h,融合蛋白表达量提高了约2.5倍,为450 mg/L,是已报道的最高表达量;以2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)为底物测纯酶的比酶活为22.8 U/mg.染料降解作用显示其对刚果红和靛红有95%以上的降解能力.研究表明,工程菌BL21(DE3)/p ET32a(+)-lac1338产漆酶量高且大部分为可溶性蛋白,可以快速生产,具有较好的应用价值. 展开更多

关键词 漆酶 大肠杆菌 表达条件优化 染料降解

原文传递

双酶共表达的条件优化及其硫辛酸中间体制备

2

作者 魏婷 姜灵 杨胜利 《发酵科技通讯》 CAS 2024年第4期197-202,共6页

为解决酶法制备硫辛酸关键手性中间体(R)-8-氯-6羟基辛酸乙酯中的辅酶循环再生问题,将羰基还原酶基因Cat_(S126A/R129Q/V194A)和葡萄糖脱氢酶GDH基因构建在同一质粒中,成功构建了3种单质粒共表达载体,筛选出最佳单质粒共表达载体pETDUE... 为解决酶法制备硫辛酸关键手性中间体(R)-8-氯-6羟基辛酸乙酯中的辅酶循环再生问题,将羰基还原酶基因Cat_(S126A/R129Q/V194A)和葡萄糖脱氢酶GDH基因构建在同一质粒中,成功构建了3种单质粒共表达载体,筛选出最佳单质粒共表达载体pETDUET。研究了2个酶在双启动子双表达载体中的顺序,考察了反应中的关键酶Cat_(S126A/R129Q/V194A),选择E.coli BL21(DE3)/pETDUET-GDH-Cat_(S126A/R129Q/V194A)作为生物催化剂。优化该表达系统的表达条件,结果表明:E.coli BL21(DE3)/pETDUET-GDH-Cat_(S126A/R129Q/V194A)的最适诱导温度为25℃,最适诱导剂IPTG浓度为0.1 mmol/L,最适诱导OD_(600)为3.0。优化后的比酶活达20.8 U/mg(湿细胞),较优化前提高了64%。在此基础上,以共表达优化条件下培养的重组菌为催化剂,以8-氯-6-氧代辛酸乙酯(ECOO)为底物,开展100 mL反应体系研究。研究结果表明:质量浓度为100 g/L的重组菌可以在6 h内将220 g/L的ECOO还原成(R)-8-氯-6-羟基辛酸乙酯((R)-ECHO),收率达96%,ee为98%。 展开更多

关键词 生物催化 共表达 表达条件优化

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鼠抗人DCP单克隆抗体的类型转换与表达

3

作者 廖凯 张智萍 +1 位作者 丁笠 张新跃 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS 北大核心 2024年第3期72-81,共10页

为建立抗体类型转换和表达体系,以最新制备的1株IgM类抗体——鼠抗人DCP单克隆抗体7C2为研究对象,首先从7C2杂交瘤细胞中克隆IgM轻重链可变区,再将IgM可变区序列与鼠IgG1恒定区序列融合克隆至真核表达载体,并转入293细胞系中。利用蛋白... 为建立抗体类型转换和表达体系,以最新制备的1株IgM类抗体——鼠抗人DCP单克隆抗体7C2为研究对象,首先从7C2杂交瘤细胞中克隆IgM轻重链可变区,再将IgM可变区序列与鼠IgG1恒定区序列融合克隆至真核表达载体,并转入293细胞系中。利用蛋白质免疫印迹技术,成功检测到IgG1抗体在细胞内的表达并分泌至培养上清。在进一步优化密码子、宿主细胞和信号肽等影响抗体表达的因素后,建立了双质粒瞬转和基于双顺反子表达方式的稳转表达体系,可用于将鼠源IgM类抗体转换为IgG类抗体并进行表达。该研究为拓展非IgG类抗体的应用范围提供重要途径,同时为提高重组抗体在真核体系中的表达效率提供参考。 展开更多

关键词 单克隆抗体 基因工程 抗体类型转换 表达条件优化

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PD0721单链抗体的体外原核表达条件优化及蛋白质鉴定 被引量：3

4

作者 张煜彬 叶路芬 +6 位作者 吴忠秀 薛维娜 何彬 杨畅 李勇军 王永林 刘亭 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期42-49,共8页

为了构建抗表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(epidermal growth factor receptor variant typeⅢ,EGFRvⅢ)的单链抗体PD0721的大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统,作者研究了PD0721重组蛋白在大肠杆菌BL21中的最佳表达条件,并建立相应的重... 为了构建抗表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(epidermal growth factor receptor variant typeⅢ,EGFRvⅢ)的单链抗体PD0721的大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统,作者研究了PD0721重组蛋白在大肠杆菌BL21中的最佳表达条件,并建立相应的重组蛋白质纯化方法。首先构建重组表达质粒PD0721-pET-22b(+)并转化至大肠杆菌BL21中,再利用SDS-PAGE研究不同诱导剂IPTG浓度、不同诱导温度、不同诱导时间和不同菌体浓度对PD0721重组蛋白表达的影响。利用镍柱亲和层析开发PD0721重组蛋白的纯化方法,并使用蛋白质印迹法以及N端测序法对纯化后的蛋白质进行鉴定。菌落PCR及琼脂糖凝胶电泳表明,PD0721-pET-22b(+)重组质粒及PD0721重组大肠杆菌BL21构建成功.PD0721重组蛋白在体外原核表达的最佳诱导剂浓度为0.6μmol/L,最佳温度为15℃,最佳诱导时间为12 h,最佳菌体浓度OD600约为0.6。经过Ni2+柱亲和层析后,当咪唑的浓度为150 mmol/L,可以得到纯度较高的PD0721重组蛋白。SDS-PAGE电泳和Western Blotting结果表明,重组蛋白质产物的相对分子质量约为31000,与理论相对分子质量一致,蛋白质的N端测序也与设计序列一致。作者成功构建了抗EGFRvⅢ抗体PD0721重组蛋白的体外原核表达体系,优化了最佳表达条件,并提供了纯化重组PD0721蛋白的可行方法。 展开更多

关键词 大肠杆菌表达系统 EGFRvⅢ 表达条件优化 亲和层析 蛋白质印迹法

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嗜水气单胞菌外膜蛋白OmpK的原核表达、抗原性分析及抗血浆杀菌作用研究 被引量：3

5

作者 荣娜 康超 +3 位作者 孙薇 简思杰 伍娜娜 刘祥 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2021年第6期1359-1366,共8页

【目的】本文研究了淡水养殖主要病原菌嗜水气单胞菌外膜蛋白OmpK的免疫学功能,为相关疫苗开发奠定理论基础。【方法】采用生物信息学分析OmpK蛋白的理化性质、结构与功能;利用分子克隆构建OmpK蛋白表达菌株,结合L_(9)^(3~4)正交实验确... 【目的】本文研究了淡水养殖主要病原菌嗜水气单胞菌外膜蛋白OmpK的免疫学功能,为相关疫苗开发奠定理论基础。【方法】采用生物信息学分析OmpK蛋白的理化性质、结构与功能;利用分子克隆构建OmpK蛋白表达菌株,结合L_(9)^(3~4)正交实验确定其最佳诱导表达条件,通过包涵体洗涤和SDS-PAGE电泳切胶纯化OmpK蛋白;Western blot检测抗血清特异性与效价,ELISA检测OmpK蛋白抗血清对嗜水气单胞菌的体外识别;Western blot分析OmpK蛋白抵抗鱼血浆的杀菌作用。【结果】OmpK为亲水性蛋白,二级结构以无规则卷曲为主,三级结构呈桶状,在气单胞菌属间同源性较高,进化相对保守;成功构建OmpK表达菌株,并获得较高纯度的OmpK蛋白,其最佳表达条件为:诱导时菌液浓度OD_(600)=1.0,IPTG浓度为0.5 mmol/L,28℃诱导8 h;Western blot验证OmpK蛋白抗血清特异性较好,且效价达到1∶1600,ELISA显示OmpK蛋白抗血清与嗜水气单胞菌存在体外相互作用;Western blot发现OmpK蛋白可通过表达下调实现抵抗鱼血浆的杀菌作用。【结论】原核表达的OmpK蛋白,可刺激机体产生特异性抗体,与嗜水气单胞菌存在体外相互作用。此外,OmpK蛋白可有效抵抗鱼血浆对嗜水气单胞菌的杀菌作用。本研究为嗜水气单胞菌OmpK蛋白的免疫作用研究与疫苗的开发奠定基础。 展开更多

关键词 嗜水气单胞菌 外膜蛋白OmpK 多克隆抗血清 抗原性 血浆杀菌作用

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人跨膜蛋白39A原核表达载体构建、条件优化及可溶性表达 被引量：2

6

作者 李向茸 马瑞仙 +4 位作者 李倩 王兴陇 李生军 张海霞 冯若飞 《基础医学与临床》 CSCD 2019年第7期932-936,共5页

目的构建人跨膜蛋白39A基因(TMEM39A)的原核表达载体,优化表达条件并获得可溶性表达的TMEM39A。方法以HEK293细胞的总RNA为模板,反转录PCR扩增TMEM39A,构建其原核表达载体pGEX-6P-1-TMEM39A,并在不同温度、IPTG浓度、A600nm值及时间条... 目的构建人跨膜蛋白39A基因(TMEM39A)的原核表达载体,优化表达条件并获得可溶性表达的TMEM39A。方法以HEK293细胞的总RNA为模板,反转录PCR扩增TMEM39A,构建其原核表达载体pGEX-6P-1-TMEM39A,并在不同温度、IPTG浓度、A600nm值及时间条件进行诱导表达,然后利用上述获得的最佳诱导条件进行大量表达,分析其可溶性和抗原性。结果重组表达载体pGEX-6P-1-TMEM39A与GenBank中的TMEM39A(登录号:BC021277.2)的核苷酸序列同源性为99.9%,氨基酸序列同源性为100%。重组蛋白GST-TMEM39A在69和60 ku处出现两条特异性条带,采用单因素方法对不同温度、IPTG浓度、A600nm值及时间进行分析得出GST-TMEM39A的最佳诱导条件为25℃、A600nm值为0.6~0.8、IPTG浓度为0.1 mmol/L诱导9 h;在此基础上进行大量表达,并以可溶性形式获得了TMEM39A与GST蛋白的融合表达。结论成功构建了TMEM39A的原核表达载体,确定了GST-TMEM39A的最佳表达条件并实现其的可溶性表达,为后续纯化TMEM39A、制备抗体开展功能研究奠定物质基础,并为深入探讨TMEM39A与许多疾病或病毒的关系提供科学依据。 展开更多

关键词 跨膜蛋白39A 条件优化 融合蛋白 可溶性表达

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杂合抗菌肽MgJ基因在毕赤酵母中表达条件的优化 被引量：2

7

作者 尹佳 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第11期162-166,共5页

为确定杂合抗菌肽MgJ基因的最佳诱导表达条件,将构建好的重组表达载体p PICZαA-MgJ经SacⅠ线性化处理,电转入巴斯德毕赤酵母GS115,利用抗生素Zeocin筛选阳性克隆,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增验证,甲醇诱导表达... 为确定杂合抗菌肽MgJ基因的最佳诱导表达条件,将构建好的重组表达载体p PICZαA-MgJ经SacⅠ线性化处理,电转入巴斯德毕赤酵母GS115,利用抗生素Zeocin筛选阳性克隆,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增验证,甲醇诱导表达。优化杂合抗菌肽MgJ诱导剂浓度、诱导时间、诱导温度、初始菌体浓度表达条件。结果表明杂合抗菌肽MgJ的最佳表达条件为:28℃、250 r/min诱导培养,每24 h添加体积分数0.5%的甲醇,诱导时间120 h,MgJ表达量可达11.9 mg/L。纯化后获得的表达产物MgJ对S.aureus ATCC 29213有较好的抑菌活性,最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)为10μg/m L。 展开更多

关键词 杂合抗菌肽MgJ 毕赤酵母 表达条件优化

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米根霉脂肪酶在毕赤酵母中表达条件的优化及其高密度发酵 被引量：1

8

作者 何晓云 李迅 +2 位作者 时号 李治林 王飞 《南京林业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期117-122,共6页

从pH、甲醇浓度、诱导时间、诱导温度和培养基氮源等方面对表达重组脂肪酶的毕赤酵母的摇瓶诱导培养条件进行了优化,研究了毕赤酵母在10 L发酵罐中表达脂肪酶的高密度发酵。结果表明:摇瓶诱导培养时,pH适宜范围为5.5～6.0,甲醇适宜质量... 从pH、甲醇浓度、诱导时间、诱导温度和培养基氮源等方面对表达重组脂肪酶的毕赤酵母的摇瓶诱导培养条件进行了优化,研究了毕赤酵母在10 L发酵罐中表达脂肪酶的高密度发酵。结果表明:摇瓶诱导培养时,pH适宜范围为5.5～6.0,甲醇适宜质量分数为1%,诱导最佳时间为96 h,诱导适宜温度为28～30℃,可以用2%玉米浆粉替代传统的酵母浸提物和蛋白胨作为氮源。在10 L发酵罐高密度发酵中,以恒溶氧反馈调控补加甘油和梯度补加甲醇诱导的分批补料方式,每升发酵液中菌体干质量达到120.1 g,总蛋白质量达到2.5 g。经甲醇诱导54 h后,最高酶活达564μmol/(min.mL),约为摇瓶培养最高酶活的2倍。 展开更多

关键词 米根霉脂肪酶 毕赤酵母 优化条件 高密度发酵

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谷氨酸棒杆菌表达大肠杆菌来源海藻糖酶 被引量：1

9

作者 满在伟 崔慧慧 +3 位作者 李锦 张迎阳 张建波 张建涛 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2022年第24期181-187,共7页

对谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum,C.glutamicum)表达大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)来源海藻糖酶进行研究。构建重组C.glutamicum菌株Cgtrl表达E.coli BL21来源海藻糖酶。菌株Cgtrl海藻糖酶最适表达条件:诱导剂异丙基-β... 对谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum,C.glutamicum)表达大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)来源海藻糖酶进行研究。构建重组C.glutamicum菌株Cgtrl表达E.coli BL21来源海藻糖酶。菌株Cgtrl海藻糖酶最适表达条件:诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)添加量为0.5 mmol/L,诱导温度为22℃,诱导时间为12 h。在最适表达条件下重组海藻糖酶酶活为9.1 U/mL。重组海藻糖酶酶学性质研究表明,未经纯化的重组海藻糖酶具有较好的底物特异性能,专一性水解海藻糖,海藻糖水解率在96%以上,低温条件下稳定性较好,能够长时间低温保存,最适作用温度为45℃,最适作用pH值为6.6。 展开更多

关键词 谷氨酸棒杆菌 大肠杆菌 海藻糖酶 表达条件优化 酶学性质

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玉米谷氨酰胺酶基因在毕赤酵母中表达条件的优化

10

作者 韩秀娥 秦兰霞 +1 位作者 邵红 任浩威 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第4期76-82,共7页

为确定玉米谷氨酰胺转氨酶基因在毕赤酵母中的最佳诱导表达条件,将构建好的重组表达载体pPIC9K-TGZ经Sac I线性化处理,电转入巴斯德毕赤酵母GS115,利用抗生素Zeocin筛选阳性克隆,聚合酶链式反应扩增验证,甲醇诱导表达。通过正交试验确... 为确定玉米谷氨酰胺转氨酶基因在毕赤酵母中的最佳诱导表达条件,将构建好的重组表达载体pPIC9K-TGZ经Sac I线性化处理,电转入巴斯德毕赤酵母GS115,利用抗生素Zeocin筛选阳性克隆,聚合酶链式反应扩增验证,甲醇诱导表达。通过正交试验确定工程菌最佳表达条件:表达培养基BMMY,诱导表达时间96 h,初始表达pH值6.0,菌体起始诱导OD_(600nm)值4.0,诱导温度24℃,甲醇添加量0.6%(体积分数)、甲醇流加时间间隔12 h/次,诱导48 h后每24 h添加1 g/L甘油。采用优化的条件得到培养基上清的最高酶活达7.51 U/mL。 展开更多

关键词 玉米 谷氨酰胺转氨酶 毕赤酵母 表达 表达条件优化

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大肠杆菌基因工程菌诱导表达重组琼胶酶rAga0917的条件优化

11

作者 陈梦仟 郭帅 +2 位作者 孙朋洋 张鹏 王燕 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期3434-3439,共6页

琼胶酶可催化长链琼脂糖分子内糖苷键水解产生具有生物活性的琼胶寡糖。琼胶酶具有重要的科研和应用价值,从而对琼胶酶的研究也日益增多。为获得基因工程菌株BL21（DE3）ply Ss-p ET28a（＋）-Aga0917重组琼胶酶r Aga0917的高效表达条件... 琼胶酶可催化长链琼脂糖分子内糖苷键水解产生具有生物活性的琼胶寡糖。琼胶酶具有重要的科研和应用价值,从而对琼胶酶的研究也日益增多。为获得基因工程菌株BL21（DE3）ply Ss-p ET28a（＋）-Aga0917重组琼胶酶r Aga0917的高效表达条件,本研究通过单因素实验及正交设计探索了种龄、诱导剂浓度、诱导时机、诱导温度和诱导时间对基因工程菌株表达的r Aga0917酶活力的影响。单因素实验结果显示,种龄6 h、诱导剂终浓度0.05 mmol/L、诱导时机4 h、诱导温度25℃、诱导时间16 h时酶活力最高;正交设计结果显示,r Aga0917的最优表达条件组合为：种龄6 h、诱导时机4 h、诱导剂终浓度0.1 mmol/L、诱导温度16℃。对正交设计结果的直观分析和方差分析结果均表明,四个因素对异源表达目的蛋白琼胶酶酶活力影响的顺序为：诱导时机〉诱导温度〉种龄〉诱导剂终浓度。 展开更多

关键词 琼胶酶 表达条件优化 单因素实验 正交设计 酶活力

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呼吸道合胞病毒融合前F蛋白分泌表达条件的优化和建立

12

作者 陈玥如 赵忆宁 +3 位作者 唐悦 王剑 王宇 李雄雄 《微生物学免疫学进展》 CAS 2022年第4期5-9,共5页

目的通过表达条件的优化,提高融合前呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)F蛋白在HEK 293F细胞中的表达。方法将优化后的融合前RSV F基因片段插入到pLexm载体中,构建重组表达质粒,通过瞬时转染的方式将重组质粒转入HEK293F... 目的通过表达条件的优化,提高融合前呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)F蛋白在HEK 293F细胞中的表达。方法将优化后的融合前RSV F基因片段插入到pLexm载体中,构建重组表达质粒,通过瞬时转染的方式将重组质粒转入HEK293F细胞中进行表达。对转染试剂线性化聚乙烯亚胺(polyethylenimine linear,PEI)与重组质粒的比例、添加丙戊酸钠(valproic acid sodium salt,VPA)的浓度以及收获时间进行摸索和优化,通过Western blot和ELISA检测目标蛋白的表达量,确定目标蛋白在HEK293F细胞中的最佳表达条件。结果成功构建了含有融合前RSV F基因的重组表达质粒,并确定在重组质粒质量浓度为3.0μg/mL,DNA∶PEI为1∶0.5,在转染后24 h添加终浓度为4 mmol/L的VPA,转染后第6天收获目的蛋白的表达量最多。结论成功构建了含有融合前RSV F基因的高效分泌表达载体,确定了目标蛋白在HEK293F细胞中的最佳表达条件,为研究融合前RSV F蛋白的特性奠定了基础。 展开更多

关键词 呼吸道合胞病毒 融合前RSV F蛋白 瞬时转染 条件优化

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抗IgE单链抗体在大肠杆菌中可溶性高效表达条件的研究 被引量：5

13

作者 刘启刚 代云见 +2 位作者 张勇侠 王保成 王明蓉 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期23-28,共6页

目的:以抗IgE单链抗体(anti-IgE scFv)为研究对象,以大肠杆菌周质高效表达可溶性单链抗体为目标,研究不同宿主细胞、培养基及培养条件对可溶性单链抗体表达产量的影响。方法:构建Rosetta(DE3)、BL21(DE3)和SoluBL21(DE3)三种大肠杆菌工... 目的:以抗IgE单链抗体(anti-IgE scFv)为研究对象,以大肠杆菌周质高效表达可溶性单链抗体为目标,研究不同宿主细胞、培养基及培养条件对可溶性单链抗体表达产量的影响。方法:构建Rosetta(DE3)、BL21(DE3)和SoluBL21(DE3)三种大肠杆菌工程菌,研究不同碳源、氮源、培养基配方和培养条件对可溶性抗IgE单链抗体产量的影响。结果:携带抗IgE单链抗体基因的pET-IgE26质粒在新型宿主SoluBL21(DE3)中的表达产量明显优于传统的Rosetta(DE3)和BL21(DE3)宿主菌。经碳氮源筛选、培养基和培养条件的优化,确定SoluBL21(DE3)工程菌高效表达可溶性重组抗体的最佳培养基为:以M9培养基为基础,添加0.5%葡萄糖、0.6%酪蛋白胨和0.02%微量元素。最佳的培养条件为:以LB为种子培养基,37℃过夜培养至OD600为3.0左右,以5%接种量接种于最佳发酵培养基中;接种后细胞生长条件:37℃,260r/min,培养3.5h;细胞诱导培养条件:当OD600为1.5～1.8时,降温至25℃,添加0.1mmol/L IPTG,220r/min继续培养16h。经抗原ELISA检测,抗IgE单链抗体的可溶性表达量比原始对照组提高了5倍。结论:通过对宿主细胞类型的筛选、培养基及培养条件的优化,可以显著提高重组单链抗体在大肠杆菌周质空间内的表达产量。该研究结果不仅为规模化制备抗IgE单链抗体提供了技术支持,同时为大肠杆菌生产重组小分子抗体提供了有价值的参考。 展开更多

关键词 可溶性抗体产量IgE单链抗体 大肠杆菌 表达条件优化

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产气荚膜梭菌β_2-β_1毒素融合基因在大肠杆菌中高效表达条件的优化 被引量：1

14

作者 曾瑾 王玉炯 +1 位作者 邓光存 高蔚丰 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2008年第6期800-804,共5页

本研究在已获得产气荚膜梭菌β2-β1毒素融合基因表达载体,并在BL21(DE3)中成功表达的基础上,研究了以乳糖为诱导剂在不同条件下对β2-β1重组蛋白诱导表达的影响,并对其表达条件进行了优化。结果表明,重组菌株BL21(DE3)(pXETB2B1)在37... 本研究在已获得产气荚膜梭菌β2-β1毒素融合基因表达载体,并在BL21(DE3)中成功表达的基础上,研究了以乳糖为诱导剂在不同条件下对β2-β1重组蛋白诱导表达的影响,并对其表达条件进行了优化。结果表明,重组菌株BL21(DE3)(pXETB2B1)在37℃、菌体诱导密度OD600为1.0、乳糖诱导浓度为0.1 g/L时诱导5 h,目的蛋白的表达效果最好,乳糖则以分批添加的方式为佳。 展开更多

关键词 产气荚膜梭菌 融合蛋白 表达条件优化

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重组人谷氧还蛋白1在大肠杆菌中表达条件的优化、纯化及活性检测 被引量：1

15

作者 刘莹莹 邹朝霞 +2 位作者 周宏博 吴莉芳 房绍红 《生命科学研究》 CAS CSCD 2006年第3期228-232,共5页

为进一步研究谷氧还蛋白1(Grx1)的生物学功能及作用机制,将已构建的pRSETA-Grx1融合蛋白表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中表达,并优化表达条件,用SDS-PAGE和凝胶影像分析.结果表明,当菌体密度OD600为1.0时开始诱导,加入终浓度0.5mmol/... 为进一步研究谷氧还蛋白1(Grx1)的生物学功能及作用机制,将已构建的pRSETA-Grx1融合蛋白表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中表达,并优化表达条件,用SDS-PAGE和凝胶影像分析.结果表明,当菌体密度OD600为1.0时开始诱导,加入终浓度0.5mmol/LIPTG,37℃,110±5r/min振荡培养5h,重组蛋白为可溶性,表达量达30%以上.用Ni-NTA树脂亲和层析纯化重组蛋白,获得蛋白质纯度达90%以上;W estern印迹结果表明,该蛋白具有免疫活性;MTT结果显示,终浓度为10mg/LGrx1重组蛋白具有保护细胞抵御500μmol/LH2O2作用(P<0.01). 展开更多

关键词 pRSETA—Grx1 表达条件优化 纯化

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