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兰州地方分离PCV毒株ORF2阅读框的测序分析与原核表达鉴定
被引量：
1
1
作者
傅昱
郝晓芳
+3 位作者
卢曾军
孙普
胡永浩
刘在新
《湖南农业科学》
2010年第4期23-27,共5页
根据GenBank中发表的PCV1和PCV2的ORF2基因序列,设计合成了一对共用引物,用PCR的方法从兰州本地病料中分离出毒株,通过PK-15的增殖,扩增出ORF2序列,测序分析后发现分离毒株序列与PCV1的ORF2序列同源性达到99.1%～99.4%。根据GenBank中P...
根据GenBank中发表的PCV1和PCV2的ORF2基因序列,设计合成了一对共用引物,用PCR的方法从兰州本地病料中分离出毒株,通过PK-15的增殖,扩增出ORF2序列,测序分析后发现分离毒株序列与PCV1的ORF2序列同源性达到99.1%～99.4%。根据GenBank中PCV2的ORF2序列对目的序列进行了改造、优化和合成后,目的序列和pET-32a载体连接,转化BL21(DE3)细胞后,挑取阳性克隆。对鉴定后的融合质粒用IPTG诱导,裂解液经过SDS-PAGE分析、纯化操作和Western-Bloting分析,表明改造合成ORF2序列在大肠杆菌中得到了表达,并能被PCV2阳性血清所识别。
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关键词
PCV
分离鉴定
orf
2
基因优化
克隆
表达
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职称材料
题名
兰州地方分离PCV毒株ORF2阅读框的测序分析与原核表达鉴定
被引量：
1
1
作者
傅昱
郝晓芳
卢曾军
孙普
胡永浩
刘在新
机构
甘肃农业大学动物医学院
中国农业科学院兰州兽医研究所
出处
《湖南农业科学》
2010年第4期23-27,共5页
基金
国家支撑计划(2006BAD06A12)
国家"973"项目(2005CB523201)
文摘
根据GenBank中发表的PCV1和PCV2的ORF2基因序列,设计合成了一对共用引物,用PCR的方法从兰州本地病料中分离出毒株,通过PK-15的增殖,扩增出ORF2序列,测序分析后发现分离毒株序列与PCV1的ORF2序列同源性达到99.1%～99.4%。根据GenBank中PCV2的ORF2序列对目的序列进行了改造、优化和合成后,目的序列和pET-32a载体连接,转化BL21(DE3)细胞后,挑取阳性克隆。对鉴定后的融合质粒用IPTG诱导,裂解液经过SDS-PAGE分析、纯化操作和Western-Bloting分析,表明改造合成ORF2序列在大肠杆菌中得到了表达,并能被PCV2阳性血清所识别。
关键词
PCV
分离鉴定
orf
2
基因优化
克隆
表达
Keywords
porcine
circovirus（PCV）
isolation
and
identification
orf
2
gene
optimization
clone
expression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
兰州地方分离PCV毒株ORF2阅读框的测序分析与原核表达鉴定
傅昱
郝晓芳
卢曾军
孙普
胡永浩
刘在新
《湖南农业科学》
2010
1
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职称材料
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引证文献
统计分析
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