目的研究靶向沉默Notch1基因对人非小细胞肺癌干细胞增殖和凋亡的影响。方法选取人肺癌A549细胞和SPC-A-1细胞,分为空白对照组、Nc-shRNA组和Notch1-shRNA组,Nc-shRNA组为阴性对照RNAi慢病毒组,Notch1-shRNA组为Notch1抑制RNAi慢病毒组...目的研究靶向沉默Notch1基因对人非小细胞肺癌干细胞增殖和凋亡的影响。方法选取人肺癌A549细胞和SPC-A-1细胞,分为空白对照组、Nc-shRNA组和Notch1-shRNA组,Nc-shRNA组为阴性对照RNAi慢病毒组,Notch1-shRNA组为Notch1抑制RNAi慢病毒组。采用慢病毒介导的shRNA干扰技术靶向沉默Notch1基因,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blotting验证Notch1基因的沉默效果;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和成球实验检测细胞增殖能力;采用Annexin V/7-AAD 双染法检测细胞凋亡情况;采用Western blotting检测增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)以及Notch1下游基因Hes-1的表达情况。结果 qRT-PCR结果显示A549细胞和SPC-A-1细胞中空白对照组、Nc-shRNA组和Notch1-shRNA组Notch1相对表达量分别为1.000±0.000、0.937±0.025、0.490±0.036和1.000±0.000、1.077±0.070、0.373±0.038,差异均具有统计学意义(F=359.707,P<0.001;F=210.455,P<0.001),进一步两两比较,两种细胞中Notch1-shRNA组Notch1相对表达量明显低于Nc-shRNA组(均P<0.05);Western blotting检测A549细胞和SPC-A-1细胞中Notch1蛋白表达的结果与mRNA结果一致。MTT实验显示A549细胞球空白对照组、Nc-shRNA组和Notch1-shRNA组在24 hA值分别为0.209±0.005、0.219±0.009、0.159±0.006,48 h A值分别为0.293±0.004、0.302±0.004、0.205±0.005,72 h A值分别为0.450±0.003、0.430±0.012、0.348±0.017,差异均具有统计学意义(F=79.487,P<0.001;F=508.664,P<0.001;F=57.156,P<0.001),进一步两两比较,24、48、72 h Notch1-shRNA组增殖能力明显低于Nc-shRNA组(均P<0.05);SPC-A-1细胞球空白对照组、Nc-shRNA组和Notch1-shRNA组在48 h A值为0.438±0.022、0.412±0.015、0.364±0.010,72 h A值为0.540±0.016、0.519±0.009、0.438±0.019,差异均具有统计学意义(F=15.667,P=0.004;F=37.299,P<0.001),进一步两两比较,48、72 h Notch1-shRNA组增殖能力明显低于Nc-shRNA组(均P<0.05)。空白对照组、Nc-shRNA组和Notch1-shRNA组A549细胞成�展开更多
文摘目的研究靶向沉默Notch1基因对人非小细胞肺癌干细胞增殖和凋亡的影响。方法选取人肺癌A549细胞和SPC-A-1细胞,分为空白对照组、Nc-shRNA组和Notch1-shRNA组,Nc-shRNA组为阴性对照RNAi慢病毒组,Notch1-shRNA组为Notch1抑制RNAi慢病毒组。采用慢病毒介导的shRNA干扰技术靶向沉默Notch1基因,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blotting验证Notch1基因的沉默效果;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和成球实验检测细胞增殖能力;采用Annexin V/7-AAD 双染法检测细胞凋亡情况;采用Western blotting检测增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)以及Notch1下游基因Hes-1的表达情况。结果 qRT-PCR结果显示A549细胞和SPC-A-1细胞中空白对照组、Nc-shRNA组和Notch1-shRNA组Notch1相对表达量分别为1.000±0.000、0.937±0.025、0.490±0.036和1.000±0.000、1.077±0.070、0.373±0.038,差异均具有统计学意义(F=359.707,P<0.001;F=210.455,P<0.001),进一步两两比较,两种细胞中Notch1-shRNA组Notch1相对表达量明显低于Nc-shRNA组(均P<0.05);Western blotting检测A549细胞和SPC-A-1细胞中Notch1蛋白表达的结果与mRNA结果一致。MTT实验显示A549细胞球空白对照组、Nc-shRNA组和Notch1-shRNA组在24 hA值分别为0.209±0.005、0.219±0.009、0.159±0.006,48 h A值分别为0.293±0.004、0.302±0.004、0.205±0.005,72 h A值分别为0.450±0.003、0.430±0.012、0.348±0.017,差异均具有统计学意义(F=79.487,P<0.001;F=508.664,P<0.001;F=57.156,P<0.001),进一步两两比较,24、48、72 h Notch1-shRNA组增殖能力明显低于Nc-shRNA组(均P<0.05);SPC-A-1细胞球空白对照组、Nc-shRNA组和Notch1-shRNA组在48 h A值为0.438±0.022、0.412±0.015、0.364±0.010,72 h A值为0.540±0.016、0.519±0.009、0.438±0.019,差异均具有统计学意义(F=15.667,P=0.004;F=37.299,P<0.001),进一步两两比较,48、72 h Notch1-shRNA组增殖能力明显低于Nc-shRNA组(均P<0.05)。空白对照组、Nc-shRNA组和Notch1-shRNA组A549细胞成�
