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鹅类新城疫病原研究 被引量：28
1
作者 李文良 卞汝霖 +2 位作者 冯太兰 葛存芳 温广宝 《畜牧与兽医》 北大核心 1999年第2期1-3,共3页
用鹅胚分别从扬州地区附近两地患病鹅群的病鹅肝、脾中分离到2株病毒，电镜观察病毒颗粒大小不等，形态不一，具有囊膜和纤突结构，病毒粒子大小100～300nm。两毒株能凝集鸡和人O型红细胞，并为鹅康复血清所抑制，对鹅、鸡及鹅胚、鸡胚... 用鹅胚分别从扬州地区附近两地患病鹅群的病鹅肝、脾中分离到2株病毒，电镜观察病毒颗粒大小不等，形态不一，具有囊膜和纤突结构，病毒粒子大小100～300nm。两毒株能凝集鸡和人O型红细胞，并为鹅康复血清所抑制，对鹅、鸡及鹅胚、鸡胚、鸭胚都有致病力，但对鸭无致病力，人工感染健康鹅可复制出与自然病例一致的病状，病毒对鹅胚LD（50）为10(10.4），MDT67．4h，鹅的LD（50）为10(7.5)。用鸡新城疫Ⅰ系苗对该鹅病有良好预防效果。根据病毒鉴定、临床表现及免疫效果将该病暂定为鹅类新城疫。 展开更多
关键词 鹅 病毒 类新城疫
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GPI锚定蛋白介导嵌合新城疫病毒样颗粒的组装 被引量：6
2
作者 李金斗 钱晶 +7 位作者 丁佳欣 徐小洪 秦岭松 黄蕾 武淑婷 丁伟 尹仁福 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期969-975,共7页
当前嵌合病毒样颗粒(chimeric VLPs,cVLPs)策略主要基于融合序列的基因转染水平,但该方法存在多基因表达操控困难、锚定蛋白无法定量等问题。糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol,GPI)是一种蛋白与细胞膜结合的方式,改造的GPI... 当前嵌合病毒样颗粒(chimeric VLPs,cVLPs)策略主要基于融合序列的基因转染水平,但该方法存在多基因表达操控困难、锚定蛋白无法定量等问题。糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol,GPI)是一种蛋白与细胞膜结合的方式,改造的GPI锚定蛋白可以被定量嵌合至真核细胞膜表面。因此,本研究以可溶性蛋白、Ⅰ型跨膜蛋白、Ⅱ型跨膜蛋白为嵌合对象,以GPI锚定方式将外源蛋白嵌合至新城疫病毒样颗粒(NDV VLPs)表面。流式细胞术检测可见GPI锚定蛋白可锚定至各真核细胞表面,并且与孵育时间呈正相关性;各组装GPI-cVLPs在电镜观察下具有完整的病毒粒子结构,与野生型NDV相似;经Western blot检测分析各GPI-cVLPs与NDV阳性血清和His单抗发生反应。综上,该GPI锚定策略能有效将外源蛋白嵌合至NDV VLPs,可为NDV VLP载体平台的应用奠定基础。 展开更多
关键词 GPI锚定蛋白 嵌合 新城疫病毒样颗粒 组装
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基因Ⅱ、Ⅶ型二价新城疫病毒样颗粒的制备和鉴定 被引量：6
3
作者 丁佳欣 李金斗 +8 位作者 刘亚林 张国军 姜翠翠 徐小洪 钱晶 于喜冰 吴金 尹仁福 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1858-1863,共6页
将基因Ⅶ型新城疫NA-1株F、HN基因的胞外域与基因Ⅱ型新城疫Lasota株F、HN基因的胞内域及跨膜域进行融合,并命名为rNA-1 F/HN。利用昆虫杆状病毒表达系统构建含有新城疫LaSota株M、F、HN等3个结构基因及rNA-1F、rNA-1 HN基因的重组杆状... 将基因Ⅶ型新城疫NA-1株F、HN基因的胞外域与基因Ⅱ型新城疫Lasota株F、HN基因的胞内域及跨膜域进行融合,并命名为rNA-1 F/HN。利用昆虫杆状病毒表达系统构建含有新城疫LaSota株M、F、HN等3个结构基因及rNA-1F、rNA-1 HN基因的重组杆状病毒rBV-LaSota M、rBV-LaSota F、rBV-rNA-1 F、rBV-LaSota HN、rBV-rNA-1 HN。将几种重组杆状病毒共感染Sf9细胞96h后收取上清,经超速离心及蔗糖密度离心纯化病毒样粒子（virus-like particles,VLPs）,并利用Western blot方法和透射电子显微镜技术检测,结果显示目的蛋白均正确表达且组装成与野生型NDV形态大小相似的VLPs。结果表明：成功制备了新城疫标准疫苗株（LaSota株）及流行强毒株（NA-1株）二价NDV VLPs,为当前新城疫的防控提供新策略。 展开更多
关键词 新城疫病毒(NDV)样颗粒 基因Ⅱ型NDV 基因Ⅶ型NDV 昆虫杆状病毒表达系统
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布鲁菌二联BCSP31-L7/L12-IL-2嵌合病毒样颗粒疫苗候选株的构建与鉴定 被引量：1
4
作者 邹映雪 黄天鸿 +6 位作者 冯嘉轩 丁佳欣 陈铭桦 陈凯楠 郭春红 张頔 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期865-871,共7页
布鲁菌病的传统疫苗存在接种后干扰血清学诊断及可能出现毒力返强等缺点,严重干扰疫病监测,影响疫病净化。因此,本研究基于新城疫病毒样颗粒(ND virus like particles,ND VLPs)载体平台,利用昆虫杆状病毒表达系统和GPI锚定策略,以免疫... 布鲁菌病的传统疫苗存在接种后干扰血清学诊断及可能出现毒力返强等缺点,严重干扰疫病监测,影响疫病净化。因此,本研究基于新城疫病毒样颗粒(ND virus like particles,ND VLPs)载体平台,利用昆虫杆状病毒表达系统和GPI锚定策略,以免疫增强因子IL-2、高保守性的保护性抗原蛋白L7/L12(来源猪种S2株)和羊种BCSP31蛋白(来源羊种M5株)为靶点,构建绿色、安全的布鲁菌二联嵌合型病毒样颗粒新型疫苗候选株(BCSP31-L7/L12-IL-2 cVLPs)。PCR及免疫荧光结果表明成功构建了表达IL-2和L7/L12蛋白的重组杆状病毒,Western blot结果显示该cVLPs各组分蛋白正确表达,透射电镜观察可见表面展示纤突结构、大小约为100 nm的粒子,表明布鲁菌二联嵌合型病毒样颗粒BCSP31-L7/L12-IL-2 cVLPs构建成功。 展开更多
关键词 布鲁菌 新城疫病毒样颗粒载体 二联嵌合型病毒样颗粒疫苗 L7/L12蛋白 BCSP31蛋白
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绵羊痘P32蛋白嵌合型病毒样颗粒的构建及免疫原性评价 被引量：3
5
作者 田静 李金斗 +4 位作者 丁伟 丁佳欣 徐小洪 高丰 尹仁福 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1721-1727,共7页
基于病毒样颗粒生产平台,以绵羊痘病毒P32蛋白为研究靶点,通过GPI锚定策略将P32蛋白锚定至新城疫病毒样颗粒囊膜表面制备嵌合型病毒样颗粒cVLP-P32。透射电镜可见近圆形的病毒粒子上布满纤突,Western blot结果显示各组分蛋白均正确表达... 基于病毒样颗粒生产平台,以绵羊痘病毒P32蛋白为研究靶点,通过GPI锚定策略将P32蛋白锚定至新城疫病毒样颗粒囊膜表面制备嵌合型病毒样颗粒cVLP-P32。透射电镜可见近圆形的病毒粒子上布满纤突,Western blot结果显示各组分蛋白均正确表达。随后以BALB/c小鼠和绵羊为试验动物,评价cVLP-P32的免疫原性,ELISA结果显示cVLP-P32能够诱导小鼠及绵羊产生较高滴度的特异性抗体;流式细胞术分析结果显示,与可溶性GPI-P32蛋白相比,cVLP-P32可诱导小鼠激发更强的CD3^+CD4^+T及CD3^+CD8^+T细胞免疫应答。 展开更多
关键词 绵羊痘 P32 新城疫病毒样颗粒 免疫原性评价
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嵌合布鲁菌BCSP31病毒样颗粒的免疫效果评价 被引量：2
6
作者 李金斗 丁佳欣 +7 位作者 徐小洪 钱晶 张頔 费亦东 王玮琦 钦琪 尹仁福 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期655-660,共6页
新城疫病毒样颗粒已开发成一种高效递送外源蛋白的载体平台。本研究在小鼠模型中开展了嵌合布鲁菌BCSP31病毒样颗粒(BCSP31-cVLPs)免疫原性及其保护效力评价。体内试验数据表明,BCSP31-cVLPs能有效激活脾脏中树突状细胞,进而促进初始型C... 新城疫病毒样颗粒已开发成一种高效递送外源蛋白的载体平台。本研究在小鼠模型中开展了嵌合布鲁菌BCSP31病毒样颗粒(BCSP31-cVLPs)免疫原性及其保护效力评价。体内试验数据表明,BCSP31-cVLPs能有效激活脾脏中树突状细胞,进而促进初始型CD3^+CD4^+ T的活化。ELISA法检测小鼠血清结果表明,BCSP31-cVLPs可刺激机体产生针对重组BCSP31蛋白的特异性抗体水平,且呈剂量依赖性。流式细胞术检测结果显示,BCSP31-cVLPs可激活T细胞并使其分化。攻毒结果表明,BCSP31-cVLPs具有与疫苗株M5相当的免疫保护效力。本研究为新型布鲁菌疫苗的研制提供了数据支撑,并扩展了新城疫病毒样颗粒疫苗载体平台的应用。 展开更多
关键词 新城疫病毒样颗粒 布鲁菌 BCSP31蛋白 树突状细胞 免疫效果
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