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Pathogenicity of an FAdV-4 isolate to chickens and its genomic analysis 被引量:12
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作者 Kai-kun MO Chen-fei LYU +6 位作者 Shang-shang CAO Xia LI Gang XING Yan YAN Xiao-juan ZHENG Min LIAO Ji-yong ZHOU 《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》 SCIE CAS CSCD 2019年第9期740-755,共16页
Fowl adenovirus serotype 4(FAdV-4)strain SD1511 was isolated from chickens with severe inclusion body hepatitis and hydropericardium syndrome in Shandong Province,China.The isolate was cultured in primary chicken embr... Fowl adenovirus serotype 4(FAdV-4)strain SD1511 was isolated from chickens with severe inclusion body hepatitis and hydropericardium syndrome in Shandong Province,China.The isolate was cultured in primary chicken embryo kidney cells.A study of pathogenicity indicated that SD1511 readily infected 7–35-d-old chickens by intramuscular injection and intranasal and oral routes,causing 50%–100%mortality.The 35-d-old chickens suffered more severe infection than 7-and 21-d-old chickens with mortality highest in the intramuscular injection group.The serum from surviving chickens showed potent viral neutralizing capability.The complete genome of SD1511 was sequenced and analyzed.The strain was found to belong to the FAdV-4 cluster with more than 99%identity with the virulent FAdV-4 strains isolated in China in recent years except for some distinct variations,including deletions of open reading frame 27(ORF27),ORF48,and part of ORF19.Our findings suggest that SD1511 might be used as a prototype strain for the study of pathogenesis and vaccine development. 展开更多
关键词 Fowl adenovirus serotype 4(FAdV-4) PATHOGENICITY Infection way Virus neutralization activity Genome analysis
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东北地区大豆花叶病毒3号株系衣壳蛋白的表达、纯化及单克隆抗体制备 被引量:7
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作者 王永志 苏颖 +7 位作者 米丽娟 张伟 宋淑云 高旭东 刘颖 张正坤 董英山 李启云 《吉林农业科学》 CSCD 2011年第6期37-39,共3页
本研究克隆了东北大豆花叶病毒3号株系衣壳(CP)蛋白基因,在大肠杆菌中表达了CP蛋白,通过亲和层析获得了纯化的CP蛋白;制备了9株CP蛋白单克隆抗体,中和试验表明,6E7、2D3、1C2这3株单克隆抗体具有中和作用,能够阻断病毒的感染。本研究制... 本研究克隆了东北大豆花叶病毒3号株系衣壳(CP)蛋白基因,在大肠杆菌中表达了CP蛋白,通过亲和层析获得了纯化的CP蛋白;制备了9株CP蛋白单克隆抗体,中和试验表明,6E7、2D3、1C2这3株单克隆抗体具有中和作用,能够阻断病毒的感染。本研究制备的单克隆抗体为大豆花叶病毒检测试剂盒的研制和大豆花叶病毒抗病育种研究打下基础。 展开更多
关键词 大豆花叶病毒 衣壳蛋白 单克隆抗体 中和活性
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两种高危型HPV假病毒的构建及其在血清中和抗体测定中的应用 被引量:3
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作者 李雄雄 董占柱 +2 位作者 吴元元 安静 马超 《微生物学免疫学进展》 2019年第5期1-9,共9页
目的 构建人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)16型(HPV16)和18型(HPV18)假病毒,探索优化假病毒制备的条件,并利用制备的假病毒评价HPV疫苗血清抗体的中和活性。方法 将优化后的HPV16和HPV18 L1、L2和EGFP基因片段分别插入pcDNA3.1... 目的 构建人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)16型(HPV16)和18型(HPV18)假病毒,探索优化假病毒制备的条件,并利用制备的假病毒评价HPV疫苗血清抗体的中和活性。方法 将优化后的HPV16和HPV18 L1、L2和EGFP基因片段分别插入pcDNA3.1+载体中,通过多质粒共转染293FT细胞制备假病毒。对转染试剂、多质粒共转染比例、转染时间和细胞裂解时间进行摸索优化,通过测定假病毒的滴度,确定假病毒制备的最佳条件。收获的假病毒用30%的碘克沙醇作为介质进行超速离心纯化,纯化后的假病毒用于电镜观察。利用假病毒中和试验对制备的原核表达复性蛋白HPV16 L1免疫血清以及HPV16和HPV18病毒样颗粒(virus-like particles, VLP)免疫血清进行中和活性评价。结果 成功构建了假病毒,并确定了假病毒制备的最佳条件:pL1∶pL2∶pEGFP等3种质粒共转染比例为1∶0.1∶0.5,总量为4μg;转染时间为72 h,细胞裂解时间为24 h时获得的假病毒滴度最高。透射电镜观察结果显示,HPV16和HPV18假病毒颗粒基本呈规则圆形,形态上与天然病毒颗粒相似。中和试验结果显示,当用原核表达复性蛋白HPV16 L1免疫血清中和HPV16假病毒时,并不能抑制假病毒的感染活性;但HPV16和18 VLP免疫血清能明显的抑制HPV16和HPV18假病毒的感染活性。结论 成功构建并制备了2种高危型HPV假病毒,并可用于中和试验评价HPV疫苗血清抗体的中和活性。 展开更多
关键词 高危型人乳头瘤病毒 假病毒 中和试验 感染活性
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鸡新城疫病毒中和单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:2
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作者 李青梅 王丽 +9 位作者 冯丽丽 张雨杭 赵东 杨艳艳 邢广旭 柴书军 李赛赛 张丽萍 郭军庆 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第1期127-131,共5页
采用差速离心法纯化鸡新城疫病毒(NDV)标准毒株F48E8,免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤细胞技术制备抗NDV单克隆抗体,旨在为NDV中和抗原表位分析奠定基础。将NDV感染BHK-21细胞,建立异源免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)的单克隆抗体检测方法... 采用差速离心法纯化鸡新城疫病毒(NDV)标准毒株F48E8,免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤细胞技术制备抗NDV单克隆抗体,旨在为NDV中和抗原表位分析奠定基础。将NDV感染BHK-21细胞,建立异源免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)的单克隆抗体检测方法,筛选获得14株分泌抗NDV单克隆抗体杂交瘤细胞株,其单克隆抗体腹水IPMA效价均在0.50×10-2~2.56×10-5(F48E8株和La Sota株)。血凝抑制试验(HI)结果表明,单克隆抗体1G6、2C1、4D2、5F2和13A5具有血凝抑制活性,其HI效价在(6~12)log2(F48E8株)和(9~11)log2(La Sota株)。病毒中和试验结果表明,单克隆抗体5F2和13A5对F48E8株和La Sota株均有明显的病毒中和活性,中和效价分别为1∶400~1∶800和1∶25。夹心ELISA结果表明,单克隆抗体5F2识别NDV HN蛋白,13A5识别F蛋白。综上,成功制备了具有中和活性的NDV单克隆抗体(5F2和13A5)。 展开更多
关键词 鸡新城疫病毒 单克隆抗体 免疫过氧化物酶单层细胞试验 血凝抑制试验 中和试验 中和活性
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抗A型肉毒毒素卵黄抗体的制备、纯化及活性检测 被引量:2
5
作者 游哲荣 马臣杰 +4 位作者 辛文文 杨浩 康琳 高姗 王景林 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期174-177,180,共5页
目的制备特异性的抗A型肉毒毒素(BoNT/A)的卵黄抗体(IgY)并分析抗体的生物活性。方法人工合成密码子优化BoNT/A重链碳端蛋白(AHc)基因片段,并构建含有该目的片段的重组表达质粒pTIG-Trx-AHc。诱导表达的AHc蛋白经纯化定量后免疫健康母... 目的制备特异性的抗A型肉毒毒素(BoNT/A)的卵黄抗体(IgY)并分析抗体的生物活性。方法人工合成密码子优化BoNT/A重链碳端蛋白(AHc)基因片段,并构建含有该目的片段的重组表达质粒pTIG-Trx-AHc。诱导表达的AHc蛋白经纯化定量后免疫健康母鸡,4次免疫后通过水稀释和硫酸铵盐析法从鸡蛋中提取特异性IgY。在小鼠模型中测定纯化后IgY的中和能力。结果和结论 AHc蛋白在大肠杆菌中获得了可溶性表达,占菌体裂解液上清的20%。纯化后的IgY纯度较高,效价超过1∶100 000。小鼠体内中和实验证实,IgY可完全中和20LD50A型天然肉毒毒素,在预防和治疗肉毒中毒表现出良好的应用前景。 展开更多
关键词 肉毒梭菌毒素 A型 卵黄抗体 中和活性
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芋螺毒素GI抗血清制备及中和活性研究 被引量:2
6
作者 唐艺菲 胡小波 +1 位作者 余硕 戴秋云 《军事医学》 CSCD 北大核心 2017年第5期338-341,共4页
目的测定芋螺毒素GI与牛血清白蛋白(BSA)偶联物免疫小鼠后产生的抗血清是否具有中和GI毒素作用。方法戊二醛法制备GI-BSA偶联物,免疫小鼠,制备GI小鼠抗血清,应用抗血清的抗体中和实验,验证其对GI的解毒作用。结果 SDS-PAGE蛋白电泳结果... 目的测定芋螺毒素GI与牛血清白蛋白(BSA)偶联物免疫小鼠后产生的抗血清是否具有中和GI毒素作用。方法戊二醛法制备GI-BSA偶联物,免疫小鼠,制备GI小鼠抗血清,应用抗血清的抗体中和实验,验证其对GI的解毒作用。结果 SDS-PAGE蛋白电泳结果显示,GI与BSA成功偶联,GI-BSA在>标志物相对分子质量(120×10~3)处有两条新蛋白带;GI-BSA(99μg/只)每隔2周免疫1次,共免疫4次,第4次免疫后第10天抗血清中和滴度效价>1∶64 000;混合100及200μl小鼠抗血清与≥1 LD_(50)剂量GI,腹腔注射,100μl血清可使1×LD_(50)毒素(16.3μg/kg)组小鼠75%存活,200μl血清可使25.8μg/kg毒素组小鼠75%存活。结论基于GI-BSA半抗原免疫的小鼠抗血清对GI毒素具有明显的解毒作用。 展开更多
关键词 芋螺毒素类 牛血清白蛋白 偶联 免疫 中和活性
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Antihaemolytic and snake venom neutralizing effect of some Indian medicinal plants
7
作者 Chidambaram Kumarapppan Albert Iaswanth Karpagam Kumarasunderi 《Asian Pacific Journal of Tropical Medicine》 SCIE CAS 2011年第9期743-747,共5页
Objective:To validate traditional claims of usefulness of the Indian plants in management of poisonous snakebite and evaluate the antivenom properties displayed bv the alcoholic extracts of Andrographis paniculata(A.... Objective:To validate traditional claims of usefulness of the Indian plants in management of poisonous snakebite and evaluate the antivenom properties displayed bv the alcoholic extracts of Andrographis paniculata(A.paniculata),Crutera magna(C.magna).Gloriosa superba (G.superba) and Hydrocotyle javanica(H.javanica).Methods:These plants were collected, identified and the extracts were prepared bv using conventional Soxhlet ethanol extraction technique.The venom neutralization activity was accessed in mice(20-25g) and number of mortalities was observed against clinically important snake(Naja nigricollis) venom.Present study also deals with in vitro membrane stabilizing activity of these plants against hyposaline induced human red blood corpuscles(HRBC).Results:Extracts of H.javanica and G.superba gave 80%and 90%protection to mice treated with minimum lethal dose of venom(LD<sub>99</sub>).These two plants showed significant neutralization effect against the venoms of Naja nigricollis venom.H. javanica and G.superba(25-100 mg/ml.) produced significant changes of membrane stabilization of human red blood cells(HRBC) exposed to hyposaline-induced haemolysis.Conclusions:We conclude that probably due to presence of various phytochemicals plays an important role in the anti-venom potential of these Indian medicinal plants against Naja nigricollis venom.The above observations confirmed that.4.paniculata,G,magna.G.superba and H.javanica plant extracts possess potent snake venom neutralizing capacity and could potentially be used as an adjuvants for antivenin therapy in case of snakebite envenomation.especially against the local effects of cobra venoms. 展开更多
关键词 ANTIVENOM activity Naja nigricollis HEMOLYSIS neutralization INDIAN MEDICINAL plants
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Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D在杆状病毒表达系统中的表达、纯化及免疫效果评价 被引量:1
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作者 姜德玉 刘坤 +4 位作者 张伟 周朋 李君丽 王希良 于三科 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期494-497,共4页
目的:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)糖蛋白D(gD2)进行表达,纯化后评价其免疫效果,以探索HSV-2重组亚单位疫苗的研制。方法:提取HSV-2DNA作为模板,用聚合酶链式反应(PCR)扩增gD2基因,克隆至pFastBac HTA载体... 目的:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)糖蛋白D(gD2)进行表达,纯化后评价其免疫效果,以探索HSV-2重组亚单位疫苗的研制。方法:提取HSV-2DNA作为模板,用聚合酶链式反应(PCR)扩增gD2基因,克隆至pFastBac HTA载体中,利用载体中的His基因标记gD2,通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达His-gD2融合蛋白,表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot检验,用镍柱进行纯化,免疫小鼠评价其免疫原性。结果:HSV-2gD2在昆虫细胞Sf9中得到特异性表达,纯化后的重组蛋白诱导小鼠体内产生高水平的IgG抗体及中和抗体。结论:gD2基因在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中获得表达,表达产物表现出良好的免疫原性及中和活性,为发展HSV-2亚单位疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 Ⅱ型单纯疱疹病毒 糖蛋白D Bac-to-Bac杆状病毒表达系统 免疫原性 中和活性
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基于HEV中和表位的基因免疫诱导特异性抗体及中和作用研究 被引量:1
9
作者 王春玲 杨书才 +1 位作者 孟继鸿 王立新 《东南大学学报(医学版)》 CAS 2010年第3期276-280,共5页
目的:观察基于戊型肝炎病毒中和表位(p179)的基因免疫是否能在小鼠体内诱导具有中和作用的抗体应答。方法:构建含HEV中和表位p179编码基因的真核表达质粒pVAX-179,以肌肉注射法对BALB/c小鼠实施基因免疫,实验组每只小鼠给pVAX-179 100... 目的:观察基于戊型肝炎病毒中和表位(p179)的基因免疫是否能在小鼠体内诱导具有中和作用的抗体应答。方法:构建含HEV中和表位p179编码基因的真核表达质粒pVAX-179,以肌肉注射法对BALB/c小鼠实施基因免疫,实验组每只小鼠给pVAX-179 100μg,并设立空质粒pVAX和HEV-p179蛋白两个对照组。定期采集小鼠血清,ELISA法检测其特异性抗HEV-IgG抗体及其亲合力;以基于PCR的体外中和实验检测抗体的中和活性。结果:pVAX-179质粒基因免疫诱导小鼠体内产生了特异性抗-HEV-IgG抗体,抗体水平于第10周达高峰,OD值为0.55±0.13,与空质粒pVAX组(0.15±0.07)比较差异有统计学意义(P<0.001)。第6周实验组抗体亲合力(ED50为2.5 mo.lL-1)高于蛋白对照组(ED50为2.0 mol.L-1),基因免疫促进了抗体亲合力的成熟;体外中和实验证实产生的特异性抗体能够阻止HEV感染人肝癌细胞7721,具有中和HEV的活性。结论:基于戊型肝炎病毒中和表位(p179)的基因疫苗pVAX-179能够在小鼠体内诱导产生具有中和作用的抗体应答。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 中和表位 基因疫苗 抗体应答 中和作用
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糖基工程酵母表面呈现抗体库的构建及抗真菌β甘露糖型抗体的筛选 被引量:1
10
作者 房泽轩 刘波 +2 位作者 巩新 唱韶红 吴军 《生物技术通讯》 CAS 2016年第3期326-330,370,共6页
目的:通过构建糖基工程酵母表面呈现免疫抗体库,筛选与毕赤酵母表达的禽流感血凝素HA7结合的特异性抗体。方法:利用糖基工程毕赤酵母细胞膜锚定蛋白Sed将人Ig G的Fc段锚定在酵母表面,然后用毕赤酵母表达的HA7免疫小鼠,从小鼠脾脏细胞中... 目的:通过构建糖基工程酵母表面呈现免疫抗体库,筛选与毕赤酵母表达的禽流感血凝素HA7结合的特异性抗体。方法:利用糖基工程毕赤酵母细胞膜锚定蛋白Sed将人Ig G的Fc段锚定在酵母表面,然后用毕赤酵母表达的HA7免疫小鼠,从小鼠脾脏细胞中扩增抗体轻重链可变区基因构建抗体转化锚定了Fc的糖基工程酵母,构建表面展示免疫抗体库,通过免疫磁珠法筛选与毕赤酵母表达的HA7特异性结合的抗体表达酵母,分析筛选该抗体的特异性结合靶点。结果:构建了多态性良好的抗体表达质粒库,转化糖基工程酵母后筛选得到特异性结合HA7的抗体呈现酵母,Western印迹分析发现该抗体只与糖基化的HA7结合而不与切除糖链后的HA7结合,说明抗体结合区域在HA7的糖链上,进一步实验发现该抗体不与α甘露糖型和哺乳动物复杂型糖型结合,通过β甘露糖苷酶切研究发现抗体结合靶点为酵母表达HA7糖链上的β甘露糖。结论:利用糖基工程酵母构建抗体库,筛选得获得了抗真菌β甘露糖的抗体,动物实验发现抗体具有中和活性。 展开更多
关键词 糖基工程酵母抗体库 免疫磁珠筛选 β甘露糖抗体 中和活性
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N-糖链切除对重组抗狂犬病毒单克隆抗体中和活性的影响 被引量:1
11
作者 吕若芸 王辉 +4 位作者 陈忱 张世雄 张晓楠 曹晨华 魏敬双 《生物技术进展》 2016年第4期277-282,共6页
重组抗狂犬病毒单克隆抗体是一种全人源的抗病毒感染单抗,主要用于狂犬病毒暴露后预防。采用糖苷酶处理2种重组抗狂犬病毒单克隆抗体Mab1、Mab2水解切除N-糖链,通过糖染色和毛细管电泳检测确定N-糖链酶解程度,利用快速荧光灶抑制试验检... 重组抗狂犬病毒单克隆抗体是一种全人源的抗病毒感染单抗,主要用于狂犬病毒暴露后预防。采用糖苷酶处理2种重组抗狂犬病毒单克隆抗体Mab1、Mab2水解切除N-糖链,通过糖染色和毛细管电泳检测确定N-糖链酶解程度,利用快速荧光灶抑制试验检测其中和活性,分析N-糖链切除对该单抗中和活性的影响。结果显示,N-糖链切除后抗体中和活性无明显变化。说明N-糖链对这两株抗狂犬病毒单抗的体外中和活性不是必须的结构成分。 展开更多
关键词 重组抗狂犬病毒单克隆抗体 N-糖链切除 毛细管电泳 中和活性
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具有中和活性抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体的制备及鉴定
12
作者 林林 孟淑芳 +3 位作者 郎叔惠 王佑春 尹红章 李德富 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2004年第1期26-28,共3页
目的 制备具有中和活性抗呼吸道合胞病毒的单克隆抗体。方法 采用杂交瘤技术制备单克隆抗体 ,并以ELISA结合免疫组化技术进行筛选。结果 获得 8株分泌抗呼吸道合胞病毒的特异性单克隆抗体的细胞株 ,其中 2株分泌的单抗具有中和活性 ... 目的 制备具有中和活性抗呼吸道合胞病毒的单克隆抗体。方法 采用杂交瘤技术制备单克隆抗体 ,并以ELISA结合免疫组化技术进行筛选。结果 获得 8株分泌抗呼吸道合胞病毒的特异性单克隆抗体的细胞株 ,其中 2株分泌的单抗具有中和活性 ,效价 1∶16 0和 1∶32 0。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 单克隆抗体 中和活性 杂交瘤技术
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具有中和活性的鸭肠炎病毒单克隆抗体的制备与鉴定
13
作者 王怡平 张忠伟 +2 位作者 蒲路莎 赵丽丽 陈洪岩 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期977-982,共6页
为制备抗鸭肠炎病毒(DEV)的单克隆抗体(MAb)并对其生物学活性进行鉴定,本研究采用蔗糖密度梯度离心法提纯DEV鸭胚成纤维细胞适应毒,以此作为抗原免疫BALB/c小鼠,随后取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,有限稀释法克隆杂交瘤细胞株,经间... 为制备抗鸭肠炎病毒(DEV)的单克隆抗体(MAb)并对其生物学活性进行鉴定,本研究采用蔗糖密度梯度离心法提纯DEV鸭胚成纤维细胞适应毒,以此作为抗原免疫BALB/c小鼠,随后取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,有限稀释法克隆杂交瘤细胞株,经间接ELISA筛选,获得了1株稳定分泌抗DEV MAb的杂交瘤细胞株2E3。鉴定结果显示,该MAb为Ig M亚类,ELISA效价可达到1∶10~5以上;间接免疫荧光试验(IFA)中MAb可与细胞中增殖的DEV结合,Western-blot试验中MAb不与变性病毒蛋白作用,表明该MAb可能是构象表位的单抗;病毒中和试验表明,该MAb具有较强的病毒中和活性。上述结果表明,本试验获得的一株具有DEV中和活性的MAb杂交瘤细胞株为建立DEV的检测方法和DEV的相关研究提供了材料支持。 展开更多
关键词 鸭肠炎病毒 单克隆抗体 中和活性
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Neutralization activity of influenza A virus humanized antibodies against new subtypes of influenza viruses
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作者 Jing Liu Tiecheng Wang +8 位作者 Ying Xie Yuanguo Li Jian He Xinghai Zhang Weiyang Sun Na Feng Chuan Qin Yuwei Gao Xianzhu Xia 《Biosafety and Health》 2019年第3期159-161,共3页
Antibodies are ideal for controlling the influenza A virus,but their effect on newly emerging strains is unclear.Here,we assessed the neutralization activity of the humanized monoclonal antibodies(mAbs)F10,H98 and H40... Antibodies are ideal for controlling the influenza A virus,but their effect on newly emerging strains is unclear.Here,we assessed the neutralization activity of the humanized monoclonal antibodies(mAbs)F10,H98 and H40 against circulating influenza viruses(H5N1,H1N1,H3N2 and H7N7 and new subtypes viruses H5N6 and H7N9).The results showed that all the three humanized mAbs(F10,H98 and H40)displayed different degrees of virus neutralization activities when encountered with different subtypes of influenza viruses.Remarkably,the humanized monoclonal antibody F10 produced higher and broader neutralization titers(range 25–1.56μg/ml)than those of the other two humanized mAbs(H98(range 50–3.12μg/ml),H40(range 50–5.56μg/ml))to against the viruses H5N1,H1N1,H3N2,H7N7,H5N6 and H7N9.This mAb may represent a new class of heterosubtypic neutralizing humanized mAb that could replace vaccines and chemical drugs. 展开更多
关键词 Influenza A virus humanized antibodies neutralization activity New subtypes of influenza viruses
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重组抗A型肉毒毒素人鼠嵌合单克隆抗体的瞬时表达及中和活性研究
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作者 秦海艳 南建军 +2 位作者 熊颖 王建锋 陈继军 《生物资源》 CAS 2020年第4期437-443,共7页
为了制备重组抗A型肉毒毒素(botulinum neurotoxin A,BoNT/A)人鼠嵌合单克隆抗体并分析中和活性,以BoNT/A作为抗原筛选鼠源抗BoNT/A噬菌体单链抗体库,将筛选得到的鼠源抗BoNT/A特异性单链抗体的重链和轻链可变区分别克隆到pGP5KCγ和pGP... 为了制备重组抗A型肉毒毒素(botulinum neurotoxin A,BoNT/A)人鼠嵌合单克隆抗体并分析中和活性,以BoNT/A作为抗原筛选鼠源抗BoNT/A噬菌体单链抗体库,将筛选得到的鼠源抗BoNT/A特异性单链抗体的重链和轻链可变区分别克隆到pGP5KCγ和pGP5KCκ载体构建表达质粒。表达质粒共转染HEK-293EBNA1细胞,瞬时表达抗BoNT/A人鼠嵌合单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)。蛋白A亲和纯化mAb,分子排阻高效液相色谱(size exclusion high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)分析mAb纯度,小鼠中和试验评价mAb中和活性。结果显示,经过筛选得到4个序列正确且各不相同的抗BoNT/A单链抗体。4个抗BoNT/A人鼠嵌合mAb表达质粒均构建成功并转染HEK-293EBNA1细胞,根据转染效率指示绿色荧光蛋白的表达推测,50%~62.5%的细胞表达抗BoNT/A抗体。表达上清经过蛋白A亲和纯化,浓度均>200μg/mL,单体纯度均>90%。小鼠中和试验显示mA1、mA2、mA3和mA4单株抗体均不能完全中和4 LD50的A型肉毒毒素,但从延迟小鼠生存时间可以得出4个抗体的中和活性为mA3>mA2>mA1>mA4。mA1、mA2、mA4中任何一个抗体与mA3连用中和活性为80 LD50/mg。本研究制备了4个具有不同程度中和活性的抗BoNT/A人鼠嵌合mAb,为A型肉毒神经毒素鸡尾酒疗法奠定了基础。 展开更多
关键词 A型肉毒毒素 人鼠嵌合 瞬时表达 中和活性
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Similar Neutralizing Activity in the HIV-1 Infected Long Term Non-progressors(LTNPs) and Typical Progressors(TPs)
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作者 Zheng Wang Tian-yi Li +8 位作者 Jing-yun Li Li-li Chen Yong-jian Liu Han-ping Li Zuo-yi Bao Xiao-lin Wang Dao-min Zhuang Si-yang Liu Lin Li 《Virologica Sinica》 CAS CSCD 2012年第3期165-171,共7页
Neutralizing antibodies are considered to be an important protective parameter used in HIV-1 vaccine evaluation. However, the exact role that neutralizing antibodies plays in controlling the disease progression of HIV... Neutralizing antibodies are considered to be an important protective parameter used in HIV-1 vaccine evaluation. However, the exact role that neutralizing antibodies plays in controlling the disease progression of HIV-1 infected peoples is still undetermined. In this paper, we compared the protective function of the neutralizing antibody response in the plasma from LTNP and TP against clade B and clade C pseudoviruses. No difference in the neutralizing activities between the plasma from LTNP and TP was found, which was consistent with the most recent reports. In addition, no correlations between the titer or breadth and CD4+ or viral load in HIV-1 infected individuals were found. The protective roles played by neutralizing antibodies in controlling disease progression of HIV-1 infected people need to be considered in a new viewpoint. 展开更多
关键词 HIV-1 Long term non-progressor (LTNP) Typical progressor (TP) neutralization activity
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大鼠TNFR-Fc重组腺相关病毒载体的构建、表达及中和活性鉴定
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作者 王芳 杜芝燕 +5 位作者 王琳 姜云波 于继云 阎瑾琦 徐元基 张巍 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期992-996,共5页
目的构建携带大鼠肿瘤坏死因子II型受体胞外区(TNFR)融合大鼠IgG Fc片段的重组2型腺相关病毒载体(pAAV2/TNFR-Fc),并对目的蛋白TNFR-Fc的表达和生物学活性进行初步鉴定,为后续的类风湿关节炎基因治疗研究做准备。方法构建大鼠TNFR-Fc融... 目的构建携带大鼠肿瘤坏死因子II型受体胞外区(TNFR)融合大鼠IgG Fc片段的重组2型腺相关病毒载体(pAAV2/TNFR-Fc),并对目的蛋白TNFR-Fc的表达和生物学活性进行初步鉴定,为后续的类风湿关节炎基因治疗研究做准备。方法构建大鼠TNFR-Fc融合基因重组腺相关病毒(AAV)载体,体外转染293T细胞,收集转染上清,以ELISA和Western blot等方法检测目的蛋白的表达,并应用L929细胞测定重组表达产物的TNF-α细胞毒中和活性。结果成功构建重组表达载体pAAV2/TNFR-Fc,在转染细胞上清中检测到目的蛋白TNFR-Fc的表达,其可有效中和大鼠TNF-α的L929细胞毒活性。结论成功构建了大鼠TNFR-Fc融合基因,并验证了其在2型AAV载体上的分泌性表达,为进一步病毒包装及动物实验奠定了基础。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 TNFR—Fc 重组腺相关病毒载体 中和活性
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人源天然抗TNF-α ScFv抗体的筛选及性质分析
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作者 乔玉玲 卢卫嘉 +5 位作者 陈继军 秦海艳 王建锋 张超 熊颖 毛晓燕 《微生物学免疫学进展》 2018年第2期20-26,共7页
目的以人肿瘤坏死因子(human tumour necrosis factor-α,human TNF-α)为靶抗原,从构建好的人源天然单链抗体(single-chain antibody fragment,ScFv)噬菌体抗体库中筛选对应的ScFv抗体,验证其中和活性后测定动力学常数(kinetic dissoci... 目的以人肿瘤坏死因子(human tumour necrosis factor-α,human TNF-α)为靶抗原,从构建好的人源天然单链抗体(single-chain antibody fragment,ScFv)噬菌体抗体库中筛选对应的ScFv抗体,验证其中和活性后测定动力学常数(kinetic dissociation,KD)。方法以TNF-α梯度稀释后包被免疫管,对人源天然ScFv噬菌体抗体库进行3轮吸附-洗脱-扩增的富集筛选,制备TNF-α单克隆噬菌体抗体颗粒,经ELISA试验筛选阳性克隆后测序并分析;将正确的阳性抗体序列亚克隆到pET-26b表达载体上,原核表达后用Ni Sepharose 6 Fast Flow介质进行纯化;用MTT比色法对筛选的ScFv进行中和活性验证,并测定其中和抗体的KD。结果通过3轮筛选共得到18个正确的抗体氨基酸序列,对其原核表达及纯化后得到的6株可溶性表达的抗TNF-αScFv进行中和活性验证,并对其中有中和活性的4株ScFv抗体测定KD。结论从人源天然ScFv噬菌体抗体库中成功地筛选出4株抗人TNF-α的ScFv中和抗体,其中1株ScFv抗体的KD为4.80×10^(-8),细胞毒中和率达到48.9%,达到了药用级抗人TNF-α中和抗体的研发要求,为全分子抗体药物的构建及稳定细胞株的筛选奠定了一定的基础。 展开更多
关键词 噬菌体抗体库 人肿瘤坏死因子Α 筛选 中和活性 亲和力
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人凝血酶原复合物中凝血因子Ⅸ效价检测中影响因素的探讨 被引量:4
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作者 李青 刘晓 +5 位作者 张璘 包正琦 窦姿 张安山 张金 何彦林 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1249-1251,共3页
目的探讨人凝血酶原复合物(PCC)中凝血因子Ⅸ效价检测的影响因素,优化检测条件。方法研究不同的Ca2+浓度对一期法检测凝血因子Ⅸ效价的影响,并分别考察磷酸三丁酯、聚山梨酯-80(S/D)以及硫酸鱼精蛋白中和肝素对检测的影响。结果 Ca2+浓... 目的探讨人凝血酶原复合物(PCC)中凝血因子Ⅸ效价检测的影响因素,优化检测条件。方法研究不同的Ca2+浓度对一期法检测凝血因子Ⅸ效价的影响,并分别考察磷酸三丁酯、聚山梨酯-80(S/D)以及硫酸鱼精蛋白中和肝素对检测的影响。结果 Ca2+浓度为0.012 5 mol/L时,检测结果最稳定,标准曲线的相关性(r2)为0.999±0.001,回收率为(99.2±1.789)%,5次重复试验的变异系数为1.80%;S/D对PCC样品中凝血因子Ⅸ效价检测的影响无统计学意义(P>0.1);PCC样品的肝素未中和时,稀释倍数的影响较大,中和后凝血因子Ⅸ效价受稀释倍数影响较小。结论优化了凝血因子Ⅸ效价检测的影响因素,最优Ca2+离子浓度为0.012 5 mol/L;S/D试剂无影响;硫酸鱼精蛋白中和肝素后,凝血因子Ⅸ效价受稀释倍数影响较小。 展开更多
关键词 CA^2+浓度 S/D 肝素中和 凝血因子Ⅸ效价
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东方鲎Factor C中的结构域在结合脂多糖中的作用 被引量:3
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作者 孙向军 王东宁 +1 位作者 张惟杰 吴祥甫 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第8期736-740,共5页
FactorC是鲎血细胞中的一种丝氨酸蛋白酶原 ,因其能以高亲和力结合脂多糖 (LPS) ,在医药产品的内毒素检测中起着重要的作用 .以往研究表明处于N端的 3个Sushi结构域对FactorC的LPS结合活性起着关键作用 ,而FactorCN端的其他 3个结构域 ... FactorC是鲎血细胞中的一种丝氨酸蛋白酶原 ,因其能以高亲和力结合脂多糖 (LPS) ,在医药产品的内毒素检测中起着重要的作用 .以往研究表明处于N端的 3个Sushi结构域对FactorC的LPS结合活性起着关键作用 ,而FactorCN端的其他 3个结构域 ,包括Cys rich结构域、EGF like结构域和Lectin like结构域对LPS结合活性的影响尚不清楚 .利用Bac to Bac昆虫细胞表达系统可使rFactorC及其 4个截短的片段rCES12 3L ,rCES12 3,rS12 3L和rS12 3获得表达 ,并且可采用亲和层析柱将这 5个重组表达产物纯化 .通过测定 5个重组表达产物的LPS结合活性及抑菌活性 ,可以确定FactorC的LPS结合位点位于S12 3区域 .尽管Cys rich结构域、EGF like结构域和Lectin like结构域中不存在LPS结合位点 ,但当这 3个结构域同时存在时 ,可提高FactorC或CES12 3L的LPS结合能力 ,因此rCES12 3L具有与rFactorC非常相近的LPS结合能力 .实验结果表明 ,rCES12 3L在昆虫细胞中的表达量比rFactorC高出 4倍 ,预示出rCES12 展开更多
关键词 东方鲎 血细胞 丝氨酸蛋白酶原 体外抑菌活性 细菌内毒素 脂多糖
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