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慢病毒介导shRNA载体定向敲除ZNF217基因表达对人神经母细胞瘤KELLY细胞侵袭和凋亡的影响
1
作者 唐湘莲 文佳冰 +2 位作者 黎明 肖雅玲 李勇 《医学临床研究》 CAS 2019年第12期2295-2298,共4页
【目的】探究shRNA载体定向敲除ZNF217基因表达对神经母细胞瘤KELLY细胞侵袭和凋亡的影响。【方法】构建人ZNF217基因的shRNA慢病毒载体,以神经母细胞瘤细胞系KELLY细胞为研究对象,根据实验目的,设空白对照组(A组),空白载体病毒组(B组)... 【目的】探究shRNA载体定向敲除ZNF217基因表达对神经母细胞瘤KELLY细胞侵袭和凋亡的影响。【方法】构建人ZNF217基因的shRNA慢病毒载体,以神经母细胞瘤细胞系KELLY细胞为研究对象,根据实验目的,设空白对照组(A组),空白载体病毒组(B组)和ZNF217基因沉默表达载体慢病毒组(C组)。RT-PCR和Western blot检测ZNF217、Caspase-3和Caspase-9的表达水平。Transwell试剂盒检测细胞侵袭能力,AV-PI试剂盒检测细胞凋亡水平,CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力。【结果】慢病毒转染滴度为3×10^7 TU/mL,转染率为92%以上;RT-PCR和Western blot检测结果显示,C组ZNF217的mRNA和蛋白的相对表达量要明显低于于A组和B组(P<0.05),但是Caspase-3和Caspase-9的mRNA和蛋白的相对表达量要明显高于A组和B组(P<0.05);C组细胞增殖率要明显低于B组和A组,有显著性差异(P<0.05),C组细胞侵袭能力要明显低于B组和A组,有显著性差异(P<0.05);C组细胞的凋亡率要明显高于B组和A组,有显著性差异(P<0.05)。【结论】shRNA载体定向敲除ZNF217基因表达可以抑制人神经母细胞瘤细胞系KELLY细胞的增殖和侵袭,抑制凋亡,可以作为神经母细胞瘤的潜在治疗靶点。 展开更多
关键词 神经母细胞瘤/遗传学 神经母细胞瘤/病理学 细胞增殖
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miR-26a靶向调控AP-2γ表达对神经母细胞瘤细胞增殖的影响
2
作者 周丽群 苏茶英 +1 位作者 胡玉琼 王秉慧 《医学临床研究》 CAS 2014年第9期1705-1707,共3页
[目的]探讨miR-26a是否可通过靶向调控AP-2γ表达而抑制神经母细胞瘤细胞增殖.[方法]通过双荧光素酶基因分析检测miR-26a对AP-2γ 3＇非编码区（3＇UTR）-荧光素酶的影响;采用Western blot方法检测miR-26a模拟物转染神经母细胞瘤细胞中A... [目的]探讨miR-26a是否可通过靶向调控AP-2γ表达而抑制神经母细胞瘤细胞增殖.[方法]通过双荧光素酶基因分析检测miR-26a对AP-2γ 3＇非编码区（3＇UTR）-荧光素酶的影响;采用Western blot方法检测miR-26a模拟物转染神经母细胞瘤细胞中AP 2γ表达水平;将AP-2γ shRNA转染SK-N AS细胞,MTS细胞增殖活性检测分析干扰AP-2γ表达对神经母细胞瘤细胞增殖能力.[结果]双荧光素酶活性检测显示miR-26a特异性地与AP-2γ的3＇UTR结合,抑制其荧光素酶活性.过表达miR-26a的神经母细胞瘤细胞AP2γ蛋白表达水平降低;shRNA干扰AP-2γ表达能抑制SK-N-AS细胞的增殖能力.[结论]miR-26a通过靶向调控AP-2γ表达而抑制神经母细胞瘤细胞的增殖. 展开更多
关键词 微RNAS 神经母细胞瘤/遗传学 神经母细胞瘤/病理学 细胞增殖
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