心脏发育相关基因NKX2.5和GATA4突变与先天性心脏病的相关性 被引量：12

1

作者 许耘红 何穗镕 李丽青 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第22期2111-2113,共3页

目的观察心脏发育相关基因NKX2.5和GATA4突变与先天性心脏病之间的相关性。方法纳入214例先天性心脏病患儿,并入选186例健康儿童作为对照组,用脱氧核糖核酸聚合酶链反应(PCR-DNA)测序技术对先天性心脏病患儿外周血中NKX2.5和GATA4基因... 目的观察心脏发育相关基因NKX2.5和GATA4突变与先天性心脏病之间的相关性。方法纳入214例先天性心脏病患儿,并入选186例健康儿童作为对照组,用脱氧核糖核酸聚合酶链反应(PCR-DNA)测序技术对先天性心脏病患儿外周血中NKX2.5和GATA4基因的外显子及其侧翼序列进行分析。测序完成后,对NKX2.5的2个外显子和GATA4的6个外显子进行聚合酶链反应(PCR)扩增测序,将结果与Gene Bank中公布的DNA标准序列进行对比,观察是否发生突变。结果 NKX2.5测序发现,72例患儿位于21位氨基酸的第3位碱基发生同义突变(c.63A>G,E21E),8例患儿的94位氨基酸的第3位碱基发生同义突变(c.282A/C,P94P),以上突变基因均位于外显子1;48例患儿的246位氨基酸的第3位碱基均发生突变(T→A,c.738A/T,N246K),位于外显子2的第一部分;8例患儿的2个杂合发生同义突变[(c.769C/G,P257P)和(c.780C/A,G260G)],位于外显子2的第二部分。GATA4测序发现,8例患儿的第744位碱基发生杂合同义突变(c.744C>T,N248N),位于外显子3。结论在先天性心脏病患儿中,NKX2.5外显子发现了5个突变位点,GATA4发现了1个突变位点,这些单核苷酸多态性与先心病可能存在着相关性。 展开更多

关键词 心脏发育相关基因 nkx2.5 GATA4 基因突变 先天性心脏病

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房间隔缺损患儿NKX2-5基因突变的研究 被引量：9

2

作者 刘兴元 杨奕清 +2 位作者 杨颖 林小平 陈义汉 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期696-700,共5页

目的本研究旨在识别先天性房间隔缺损（atrialseptaldefect，ASD）患者的分子遗传缺陷，为其早期防治奠定基础。方法收集180例特发性ASD患者（其中12例有阳性ASD家族史）的临床资料和血标本，以200名健康者为对照。应用聚合酶链反应扩增... 目的本研究旨在识别先天性房间隔缺损（atrialseptaldefect，ASD）患者的分子遗传缺陷，为其早期防治奠定基础。方法收集180例特发性ASD患者（其中12例有阳性ASD家族史）的临床资料和血标本，以200名健康者为对照。应用聚合酶链反应扩增NKX2-5基因的全部外显子和外显子两侧的部分内含子，采用双脱氧核苷链末端合成终止法对全部扩增片段进行测序。借助BLAST程序将所测序列与GenBank中的已知序列进行比对以识别基因突变，并用clustalw软件分析突变氨基酸的保守性。结果在1例家族史阳性的ASD患者的NKX2-5基因识别出一个新的杂合突变，即编码核苷酸序列第536位的胞嘧啶变为胸腺嘧啶，导致第179位的丝氨酸变为苯丙氨酸。该突变也存在于这个家系中的另外3位患病成员，但不存在于这一家系中的健康成员和200名正常对照者，多物种NKX2-5基因编码氨基酸序列比对显示突变氨基酸在进化上高度保守。此外，还发现了一个常见的单核苷酸多态，即编码核苷酸序列第63位的腺嘌呤变为鸟嘌呤，但这种多态在ASD患者和健康对照者间的频率分布差异无统计学意义（X2=2．8641，P=0．0906）。结论NKX2-5基因突变能够导致家族性ASD。 展开更多

关键词 先天性心脏病 房间隔缺损 遗传学 nkx2-5 转录调节

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NKX2-5、TBX5、GATA4基因与先天性心脏病关系研究进展 被引量：10

3

作者 杜佳 易岂建 《儿科药学杂志》 CAS 2018年第5期58-61,共4页

先天性心脏病（congenital heart disease,CHD）是指胚胎发育异常所致的心脏、大血管结构及功能异常,在新生儿中的发病率为0.4%～1.0%,是最常见的出生缺陷类型。心脏是胚胎最先形成的器官,心脏发育过程由基因调控,其任一基因的表达异常... 先天性心脏病（congenital heart disease,CHD）是指胚胎发育异常所致的心脏、大血管结构及功能异常,在新生儿中的发病率为0.4%～1.0%,是最常见的出生缺陷类型。心脏是胚胎最先形成的器官,心脏发育过程由基因调控,其任一基因的表达异常,均能引起心脏发育畸形。 展开更多

关键词 GATA4 基因突变 心脏发育 nkx2-5 CHD 先天性心脏病

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外源表达Nkx2-5基因诱导P19细胞向心肌分化 被引量：7

4

作者 张金平 张雷 +4 位作者 王惠娟 王多 赵昱 尹青 赵春芳 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期725-729,共5页

目的:构建人Nkx2-5基因融合绿色荧光蛋白真核表达质粒pEGFP-N1-Nkx2-5,探讨外源性Nkx2-5基因诱导P19细胞向心肌分化的作用。方法:以真核表达质粒pEFSA-HA-Nkx2-5为模板,PCR扩增得到人Nkx2-5基因,将目的片段亚克隆到pEGFP-N1载体,鉴定正... 目的:构建人Nkx2-5基因融合绿色荧光蛋白真核表达质粒pEGFP-N1-Nkx2-5,探讨外源性Nkx2-5基因诱导P19细胞向心肌分化的作用。方法:以真核表达质粒pEFSA-HA-Nkx2-5为模板,PCR扩增得到人Nkx2-5基因,将目的片段亚克隆到pEGFP-N1载体,鉴定正确。将重组质粒pEGFP-N1-Nkx2-5以脂质体法转染P19细胞,G418筛选2周,聚集4d,贴壁培养16d。以免疫细胞化学检测desmin、α-sarcomeric actin和cardiac Troponin T(cTnT)的表达。结果:将Nkx2-5基因正确插入pEGFP-N1载体,外源表达Nkx2-5基因可使P19细胞在无诱导剂、聚集条件下表达desmin、α-sarcomeric actin和cTnT蛋白。结论:成功构建真核表达质粒pEGFP-N1-Nkx2-5,外源表达Nkx2-5基因诱导P19细胞向心肌分化。 展开更多

关键词 nkx2-5 质粒构建 P19细胞 基因转染 心肌分化

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先天性室间隔缺损患者NKX2—5基因新突变的识别 被引量：8

5

作者 刘兴元 杨奕清 +2 位作者 杨颖 林小平 陈义汉 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第34期2395-2399,共5页

目的识别先天性室间隔缺损（VSD）患者新的分子遗传缺陷。方法收集2006年3月至2008年6月在上海儿童医学中心、上海同济医院和上海市儿童医院160例先天性VSD患者的临床资料和血标本，以200名健康者为对照。应用聚合酶链反应扩增NKX2-5基... 目的识别先天性室间隔缺损（VSD）患者新的分子遗传缺陷。方法收集2006年3月至2008年6月在上海儿童医学中心、上海同济医院和上海市儿童医院160例先天性VSD患者的临床资料和血标本，以200名健康者为对照。应用聚合酶链反应扩增NKX2-5基因的全部外显子，采用双脱氧核苷链末端合成终止法对全部扩增片段进行测序。借助BLAST程序将所测序列与GenBank中的已知序列进行比对以识别基因突变，并用Clustal W软件分析突变氨基酸的保守性。结果在3例VSD患者的NKX2-5基因识别出2个新的杂合错义突变，即2例VSD患者的第179位密码子TCC变为TTC，导致第179位的丝氨酸变为苯丙氨酸，1例VSD患者的第36位密码子CGC变为AGC，导致第36位的精氨酸变为丝氨酸。200名健康对照者均无此突变，多物种NKX2．5序列比对显示突变氨基酸在进化上均高度保守。此外，还发现了2个不改变氨基酸的单核甘酸多态，即常见的c．63A〉G多态和少见的C．606G〉C多态，但这些多态在VSD患者和健康对照者间的分布差异均无统计学意义（c．63A〉G多态：χ^2=3．403、P=0．0651，c．606G〉C多态：χ^2=3．278、P=0．0702）。结论在先天性VSD患者识别出新的NKX2．5基因突变，揭示了VSD新的分子病因。 展开更多

关键词 心脏缺损 先天性 室间隔缺损 调节元件 转录 nkx2-5

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Nkx2.5基因与先天性心脏病 被引量：8

6

作者 蔡花 付四清 《中国优生与遗传杂志》 2014年第4期1-3,共3页

先天性心脏病(CHD)是人类出生缺陷中最常见的畸形,也是婴幼儿非感染性疾病中最主要的死亡原因。大量研究表明Nkx2.5是重要的转录因子,在心脏发育过程中起很重要的作用,该基因的突变将影响心脏发育导致先心病。本文就Nkx2.5基因与先心病... 先天性心脏病(CHD)是人类出生缺陷中最常见的畸形,也是婴幼儿非感染性疾病中最主要的死亡原因。大量研究表明Nkx2.5是重要的转录因子,在心脏发育过程中起很重要的作用,该基因的突变将影响心脏发育导致先心病。本文就Nkx2.5基因与先心病的关系与最新进展予以综述。 展开更多

关键词 先天性心脏病 nkx2 5 基因突变

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单纯性先天性心脏病中TBX5基因表达异常的机制 被引量：7

7

作者 辛娜 邱广蓉 +2 位作者 宫立国 徐小延 孙开来 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期374-380,共7页

为探讨人类单纯性先天性心脏病患者中TBX5基因表达下调的可能原因,应用变性高效液相色谱(DHPLC)方法检测100例单纯性先天性心脏病患者中TBX5基因上游1200bp调控区的突变情况;应用甲基化敏感性限制性内切酶(MS-RE)法检测50例单纯性先天... 为探讨人类单纯性先天性心脏病患者中TBX5基因表达下调的可能原因,应用变性高效液相色谱(DHPLC)方法检测100例单纯性先天性心脏病患者中TBX5基因上游1200bp调控区的突变情况;应用甲基化敏感性限制性内切酶(MS-RE)法检测50例单纯性先天性心脏病患者和5例非先天性心脏病患者心肌组织TBX5基因启动子区两个CpG岛(转录起始点上游-49～-188bp和-247～-464bp处)的甲基化情况;应用P-match软件预测小鼠Tbx5基因上游转录因子Nkx2-5的结合位点,构建Nkx2-5表达载体转染小鼠H9C2(2-1)心肌细胞,RT-PCR及Western blotting检测Tbx5基因表达,凝胶阻滞实验(EMSA)验证Nkx2-5和Tbx5基因的作用。结果在100例单纯性先天性心脏病患者中,未检测到TBX5基因上游1200bp调控区突变;非先天性心脏病患者和单纯性先天性心脏病患者在两个CpG岛存在相同的甲基化;小鼠Tbx5基因转录起始点上游-312～-315bp可能存在Nkx2-5的结合位点,转染Nkx2-5表达载体后Tbx5基因在mRNA及蛋白质水平均有表达增高趋势,Nkx2-5在体外可以与Tbx5基因上游-312～-315bp序列相结合。以上结果提示TBX5基因调控区突变和两个CpG岛的甲基化不是单纯性先天性心脏病患者心肌组织中TBX5基因表达下调的原因,TBX5基因表达下调可能由于NKX2-5的表达异常引起。 展开更多

关键词 先天性心脏病 TBX5 nkx2—5

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妊高症患者胎盘MiR-26b和Nkx2-5的表达水平及临床意义 被引量：7

8

作者 魏娜 李江丽 宋亚南 《医学研究杂志》 2019年第1期99-102,173,共5页

目的探究妊娠高血压疾病患者胎盘micro RNA-26b(MiR-26b)和Nkx2-5的表达水平及临床意义。方法选择2016年3月～2017年10月于笔者医院接受治疗的60例妊高症患者(包括20例妊娠期高血压、20例轻度子痫前期和20例重度子痫前期)为实验组,另选... 目的探究妊娠高血压疾病患者胎盘micro RNA-26b(MiR-26b)和Nkx2-5的表达水平及临床意义。方法选择2016年3月～2017年10月于笔者医院接受治疗的60例妊高症患者(包括20例妊娠期高血压、20例轻度子痫前期和20例重度子痫前期)为实验组,另选择同期住院的20例健康孕妇作为对照组。实时定量PCR(q RT-PCR)技术检测胎盘组织MiR-26b水平;蛋白质印迹(Western blot)技术检测胎盘组织Nkx2-5水平。结果轻度子痫前期组和重度子痫前期组的新生儿体重及胎盘重量较健康对照组均显著降低(P<0.05)。q RT-PCR结果显示,妊娠期高血压组、轻度子痫前期组和重度子痫前期组胎盘组织MiR-26b水平较健康对照组均显著升高(P<0.05),且随着病情的加重,MiR-26b水平逐渐上升(P<0.05)。Western blot法检测结果显示,妊娠期高血压组、轻度子痫前期组和重度子痫前期组胎盘组织Nkx2-5水平较健康对照组均显著降低(P<0.05),且随着病情的加重,MiR-26b水平逐渐降低(P<0.05)。妊高症患者胎盘组织MiR-26b水平与Nkx2-5水平显著呈负相关(P<0.05)。妊高症患者胎盘组织MiR-26b水平与新生儿体重、胎盘重量呈负相关(P<0.05),Nkx2-5水平与新生儿体重、胎盘重量显著呈正相关(P<0.05)。结论妊高症患者胎盘组织中MiR-26b表达上调、Nkx2-5表达下调,且与病情严重程度相关,暗示MiR-26b、Nkx2-5可作为妊高症的独立诊断因子。 展开更多

关键词 妊高症 MiR-26b nkx2-5 胎盘

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Nkx2-5基因诱导P19细胞分化中心肌标志物的表达 被引量：5

9

作者 张金平 王慧娟 +5 位作者 史玉兰 王立轩 赵昱 郭艳红 赵春芳 张雷 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期2658-2662,共5页

目的研究同源框基因Nkx2-5在心肌发生中的作用。方法实验分转染组和未转染组,转染组细胞为稳定表达Nkx2-5的P19细胞,未转染组细胞为P19细胞。两组细胞悬浮培养4d,形成聚集体后贴壁培养,于贴壁培养的4、8、12、16d,免疫细胞化学检测α横... 目的研究同源框基因Nkx2-5在心肌发生中的作用。方法实验分转染组和未转染组,转染组细胞为稳定表达Nkx2-5的P19细胞,未转染组细胞为P19细胞。两组细胞悬浮培养4d,形成聚集体后贴壁培养,于贴壁培养的4、8、12、16d,免疫细胞化学检测α横纹肌肌动蛋白(α-sarcomeric actin,α-SA)和心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)的表达;RT-PCR检测GATA-4、α-肌球蛋白重链(α-myosin heavy chain,α-MHC)、心房利钠因子(atrial natriuretic factor,ANF)基因的表达。结果转染组α-SA和cTnT两种蛋白在聚集体贴壁的8、12、16d出现表达,表达量有增高趋势;16d与8d比有显著差异(P<0.01);RT-PCR结果显示:转染组GATA-4在贴壁培养的4d有表达,8、12d表达逐渐增多,16d时表达有所下降。α-MHC和ANF在贴壁培养的8d有表达,12d和16d时表达逐渐增多。统计结果表明GATA-4在8、12、16d的表达量与4d比有显著差异(P<0.05或P<0.01),α-MHC在12、16d的表达量与8d比有显著差异(P<0.05,P<0.01),ANF在16d的表达量与8d比有显著差异(P<0.01),16d表达量与12d比也有显著差异(P<0.01);未转染组结果均为阴性。结论外源表达Nkx2-5基因可诱导P19细胞逐渐表达心肌标志物。 展开更多

关键词 同源框基因 nkx2-5 P19细胞 心肌标志物

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GATA-4、NKx2-5转录因子的研究进展 被引量：6

10

作者 冉莉 文格波 《现代医药卫生》 2008年第15期2287-2288,共2页

转录因子GATA家族是能与核酸共同序列（A/T）GATA（A／G）结合的细胞核转录因子。包括6个成员，即GATA-1、-2、-3、-4、-5和-6。1995年Huang等通过筛查人类心脏cDNA文库首次克隆出人类GATA-4cDNA，以后相继在人类肺、肝脏和小肠等器官... 转录因子GATA家族是能与核酸共同序列（A/T）GATA（A／G）结合的细胞核转录因子。包括6个成员，即GATA-1、-2、-3、-4、-5和-6。1995年Huang等通过筛查人类心脏cDNA文库首次克隆出人类GATA-4cDNA，以后相继在人类肺、肝脏和小肠等器官中检测到GATA-4 mRNA和蛋白的表达。人们应用果蝇同源结构域（homeodomain，HD）寡核苷酸探针筛查果蝇cDNA文库，克隆出NK型同源盒基因。随后分离出一种与果蝇背侧血管，心脏发育密切相关的果蝇NK-2型基因tinman基因。GATA-4和NKx2-5是目前研究较多的与心脏发育密切相关的转录因子。 展开更多

关键词 细胞核转录因子 GATA-4 nkx2-5 cDNA文库 同源盒基因 GATA-1 人类心脏 寡核苷酸探针

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转录因子Nkx2.5、ISL-1表达与小鼠胚胎心的早期发育 被引量：4

11

作者 冯先玲 景雅 +3 位作者 李海荣 杨艳萍 乔从进 张涛 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期577-580,594,F0002,共6页

目的：探讨转录因子Nkx2.5和ISL-1的表达与小鼠胚胎早期心发育的关系.方法：胚龄7.5～13d小鼠胚胎连续石蜡切片,用抗α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、抗心肌肌球蛋白重链（MHC）、抗转录因子ISL-1、抗Nkx2.5抗体,进行免疫组织化学显色.结... 目的：探讨转录因子Nkx2.5和ISL-1的表达与小鼠胚胎早期心发育的关系.方法：胚龄7.5～13d小鼠胚胎连续石蜡切片,用抗α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、抗心肌肌球蛋白重链（MHC）、抗转录因子ISL-1、抗Nkx2.5抗体,进行免疫组织化学显色.结果：转录因子Nkx2.5在胚龄7.5d生心板表达早于心肌特异性蛋白MHC及SMA.随心外形建立,Nkx2.5在心各部表达逐渐增强.胚龄9d, Nkx2.5阳性表达从原始心管动脉端延伸至心包腔背侧脏壁中胚层及咽周围轴旁中胚层.Isl-1开始表达于胚龄8d原始心管心背系膜及前肠腹侧脏壁中胚层间充质,阳性细胞数量在11～12d达顶峰,形成前肠腹侧连接流出道远端和心房背侧壁的ISL-1阳性细胞带.11～12d,流出道远端出现Nkx2.5和MHC阴性,ISL-1、SMA阳性表达区.胚龄13d后,Nkx2.5和ISL-1在心和前肠腹侧间充质的表达强度下降.结论：Nkx2.5是原始生心区心肌前体细胞早期分化的标记蛋白,在第2生心区表达限于胚龄9d、咽周脏壁和轴旁中胚层心肌前体细胞亚群.第2生心区标记蛋白ISL-1主要表达在胚龄8～12d前肠腹侧脏壁中胚层心肌前体细胞,并向心管添加心肌细胞,参与流出道发育及心管成襻.11d后,第2生心区间充质细胞开始分化为升主动脉和肺动脉干平滑肌. 展开更多

关键词 转录因子nkx2.5 转录因子ISL-1 第2生心区 胚胎心 小鼠

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NKX2-5 63A/G多态性与中国人群先天性心脏病易感性的Meta分析 被引量：3

12

作者 洪媛 王维鹏 +2 位作者 魏中南 石祖亮 聂波 《中国优生与遗传杂志》 2014年第10期21-23,共3页

目的探讨NKX2-5 63A>G多态性与先天性心脏病易感性之间的关系。方法全面检索相关文献,收集2014年1月前有关NKX2-5 63A>G多态性与先心病易感性的病例对照研究,使用Stata 10.0进行Meta分析。结果最终纳入病例对照研究7项,累计病例1... 目的探讨NKX2-5 63A>G多态性与先天性心脏病易感性之间的关系。方法全面检索相关文献,收集2014年1月前有关NKX2-5 63A>G多态性与先心病易感性的病例对照研究,使用Stata 10.0进行Meta分析。结果最终纳入病例对照研究7项,累计病例1243例,对照1139例。Meta分析的OR值及95%CI为1.26(1.02-1.56),异质性显著(I2=65.1%)。经分层分析和敏感性分析初步锁定异质性来源。结论 NKX2-5 63A>G多态性与先心病易感性显著关联。 展开更多

关键词 先天性心脏病 nkx2-5 多态性 META分析

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NKX2-5基因与先天性心脏病的关系 被引量：3

13

作者 刘兴元 杨奕清 +2 位作者 杨颖 林小平 陈义汉 《国际心血管病杂志》 2009年第4期232-235,253,共5页

目的:探讨NKX2-5基因与先天性心脏病(congenital heart disease,CHD)的关系。方法:收集130例无血缘关系的CHD患者的临床资料和血标本,以100名无血缘关系的健康者为对照。应用聚合酶链反应扩增CHD候选基因NKX2-5的全部外显子和外显子两... 目的:探讨NKX2-5基因与先天性心脏病(congenital heart disease,CHD)的关系。方法:收集130例无血缘关系的CHD患者的临床资料和血标本,以100名无血缘关系的健康者为对照。应用聚合酶链反应扩增CHD候选基因NKX2-5的全部外显子和外显子两侧的部分内含子,采用双脱氧核苷链末端合成终止法对全部扩增片段进行测序。将所测的序列与GenBank数据库中公布的NKX2-5基因序列进行比对以识别出NKX2-5基因变异。比较识别出的NKX2-5基因多态在CHD患者和健康对照者间的频率分布差异。结果:在CHD患者的NKX2-5基因识别出2个单核苷酸多态,一个是NKX2-5基因编码序列第63位的腺嘌呤(A)变为鸟嘌呤(G),即c.63A>G多态;另一个是NKX2-5基因编码序列第606位的G变为胞嘧啶(C),即c.606G>C多态。在NKX2-5基因第606位点的等位基因G、C及其构成的3种基因型GG、GC、CC在CHD患者和健康对照者间的频率分布有显著性差异(等位基因频率比较:χ2=4.125,P=0.042;基因型频率比较:χ2=4.279,P=0.039)。但在NKX2-5基因第63位点的等位基因A、G及其构成的3种基因型AA、AG、GG在CHD患者和健康对照者间的频率分布无显著性差异(等位基因频率比较:χ2=0.704,P=0.402;基因型频率比较:χ2=0.626,P=0.429)。结论:NKX2-5基因c.606G>C多态可能与CHD有关,等位基因606C携带者可能对CHD的易感性增加。 展开更多

关键词 先天性心脏病 遗传学 nkx2—5 转录调节

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Nkx2-5、GATA-4转录因子在心脏发育中的作用 被引量：2

14

作者 张勇 陈如坤 蔡振杰 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2004年第4期257-260,共4页

心脏是胚胎发育过程中最先形成的器官。导致心脏形成和发育的确切机制目前还不清楚。转录因子以组织特异性和定量的方式调节其它器官形成和发育 ,从而在胚胎发育过程中起主要的调节作用。转录因子在心脏发育过程中可以调节心肌特异性基... 心脏是胚胎发育过程中最先形成的器官。导致心脏形成和发育的确切机制目前还不清楚。转录因子以组织特异性和定量的方式调节其它器官形成和发育 ,从而在胚胎发育过程中起主要的调节作用。转录因子在心脏发育过程中可以调节心肌特异性基因的表达。 展开更多

关键词 nkx2-5 GATA-4 转录因子 心脏发育 基因表达

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5-氮胞苷诱导单层P19细胞向心肌分化 被引量：1

15

作者 张金平 赵秀军 +4 位作者 王慧娟 赵静 陈炜 赵春芳 张雷 《第四军医大学学报》 北大核心 2009年第20期2086-2089,共4页

目的:研究Nkx2-5基因在5-氮胞苷(5-aza)诱导单层P19细胞向心肌分化中的作用.方法:实验分实验组和对照组,实验组细胞为稳定表达Nkx2-5的P19细胞,对照组为P19细胞.两组细胞均单层培养,以5-aza(1μmol/L)诱导,倒置显微镜观察细胞的生长状态... 目的:研究Nkx2-5基因在5-氮胞苷(5-aza)诱导单层P19细胞向心肌分化中的作用.方法:实验分实验组和对照组,实验组细胞为稳定表达Nkx2-5的P19细胞,对照组为P19细胞.两组细胞均单层培养,以5-aza(1μmol/L)诱导,倒置显微镜观察细胞的生长状态;5-aza诱导的4,8,12,16d,免疫细胞化学检测横纹肌α-actin(α-SA)和心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达;取5-aza诱导16d的细胞透射电镜观察超微结构的变化.结果:实验组5-aza诱导的8,12,16d检测到α-SA和cTnT的阳性表达,表达量逐渐增多.对照组没有两种抗体的阳性表达;实验组5-aza诱导16d,电镜观察发现部分相邻细胞分化出细胞连接和心肌发育早期的闰盘结构,胞质中出现密集平行排列肌丝样结构.对照组没有发现分化的细胞.结论:外源表达Nkx2-5基因促进P19细胞单层生长时向心肌分化. 展开更多

关键词 5-氮胞苷 nkx2-5 P19细胞 心肌分化

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中国人单纯性先天性心脏病患儿NKX2-5与GATA4基因突变分析 被引量：2

16

作者 庄太凤 景红 +2 位作者 邢继伟 张巍 魏珉 《中华临床医师杂志（电子版）》 CAS 2011年第13期3737-3740,共4页

目的初步研究中国人单纯性先天性心脏病患儿的基因突变类型,为中国人单纯性先天性心脏病患儿的产前诊断和治疗提供依据。方法收集96例曾住院治疗的、临床确诊的单纯性先天性心脏病患儿的外周静脉血至乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝采血管,提取D... 目的初步研究中国人单纯性先天性心脏病患儿的基因突变类型,为中国人单纯性先天性心脏病患儿的产前诊断和治疗提供依据。方法收集96例曾住院治疗的、临床确诊的单纯性先天性心脏病患儿的外周静脉血至乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝采血管,提取DNA,设计引物,行NKX2-5与GATA4外显子扩增并测序。结果 96例患者中,有6例检测出致病基因突变,检出率为6.25%,具体突变为NKX2-5:c.536C>T(S179F),c.508C>T(Q170X),c.88A>T(A30T),c.554G>T(W185L),GA-TA4:c.1273G>A(D425N),c.799A>G(V267M)。本课题检测出4个NKX2-5突变以及两个GATA4基因突变,均为已经报道的突变。结论本课题突变检出率为6.25%,表明NKX2-5或者GATA4突变可能不是造成中国人单纯性先天性心脏病的最主要原因;检出5例房间隔缺损(ASD)突变,表明遗传因素可能对ASD更重要;检出4个NKX2-5基因的突变,表明NKX2.5在早期心脏发育起重要作用。 展开更多

关键词 心脏病 基因 突变 nkx2-5 GATA4

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Nkx2-5基因的克隆及其与黑色素细胞黑色素生成相关性的研究 被引量：2

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作者 聂瑞强 石轶男 +2 位作者 杨玉静 谢建山 董常生 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2016年第15期12-14,共3页

本实验旨在探究Nkx2—5基因在小鼠黑色素细胞中是否表达，同时通过生物信息学的方法预测其是否与调控黑色素生成的基因有相互作用。结果表明：转录因子Nkx2—5在小鼠黑色素细胞中表达，其编码的蛋白作为转录因子与下游基因作用的主要位... 本实验旨在探究Nkx2—5基因在小鼠黑色素细胞中是否表达，同时通过生物信息学的方法预测其是否与调控黑色素生成的基因有相互作用。结果表明：转录因子Nkx2—5在小鼠黑色素细胞中表达，其编码的蛋白作为转录因子与下游基因作用的主要位点在144～196位氨基酸残基处，且其在黑色素生成中的关键基因MITF、TYR、TYRP1、TYRP2的启动子中都有作用位点，同时Nkx2—5蛋白与对神经嵴分化有重要影响的Hand1、Hand2存在相互作用，故可以推测转录因子Nkx2—5在黑色素细胞的黑色素生成中发挥着重要的作用，进而为从分子水平解释动物被毛白化的发病机理提供新的思路。 展开更多

关键词 nkx2—5 黑色素 生物信息学

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5-氮胞苷诱导外源表达Nkx2-5的P19细胞向心肌分化的研究 被引量：1

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作者 张金平 赵静 +3 位作者 王慧娟 赵秀军 赵春芳 张雷 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第18期1778-1781,共4页

目的研究在单层培养条件下,5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)诱导表达Nkx2-5的P19细胞向心肌分化的可能性和效率。方法实验分为实验组和对照组,实验组细胞为稳定表达Nkx2-5的P19细胞,对照组为P19细胞。2组细胞均在单层培养条件下,以5-aza(... 目的研究在单层培养条件下,5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)诱导表达Nkx2-5的P19细胞向心肌分化的可能性和效率。方法实验分为实验组和对照组,实验组细胞为稳定表达Nkx2-5的P19细胞,对照组为P19细胞。2组细胞均在单层培养条件下,以5-aza(1μmol/L)诱导。倒置显微镜观察细胞的生长状态;诱导4、8、12、16d,Western blot检测α-sarcomeric actin和cTnT的表达;并用免疫荧光双标检测α-sarcomeric actin和cTnT的共表达。结果实验组和对照组细胞在5-aza诱导下,生长缓慢,死亡细胞数目增多。随贴壁细胞密度增加,形成类似于聚集体贴壁生长的状态,中心细胞小、密集,周边细胞呈放射状排列,胞体长梭形,伸出突起。实验组诱导8、12、16d检测到α-sarcomeric actin和cTnT2种蛋白的表达和共表达,表达量呈增多趋势;诱导12、16d时α-sarcomerica ctin的表达量与8d比差异有统计学意义(P<0.01),诱导16d的表达量与12d比差异有统计学意义(P<0.01);cTnT在诱导12、16d的表达量与8d比差异有统计学意义(P<0.01)。对照组没有2种蛋白的表达和共表达。结论5-aza可诱导单层生长的表达Nkx2-5的P19细胞向心肌分化。 展开更多

关键词 5-az8 nkx2—5 P19细胞 心肌分化

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急性心肌缺血对骨髓Nkx2-5^+心脏祖细胞的动员作用(英文) 被引量：1

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作者 董红燕 徐志伟 +2 位作者 张中明 于红丽 徐夏红 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期185-193,共9页

骨髓源性Nkx2-5+心脏祖细胞(bone marrow-derived Nkx2-5+ cardiac progenitor cells)具有高度特异性分化为心肌细胞的潜能,在病理状态下可能参与内源性心肌修复。但在器官缺血、特别在急性心肌缺血病理状态下,该细胞如何被动员的机制... 骨髓源性Nkx2-5+心脏祖细胞(bone marrow-derived Nkx2-5+ cardiac progenitor cells)具有高度特异性分化为心肌细胞的潜能,在病理状态下可能参与内源性心肌修复。但在器官缺血、特别在急性心肌缺血病理状态下,该细胞如何被动员的机制尚不清楚。本研究在观察Nkx2-5+心脏祖细胞在骨髓中分布特征的基础上,分析急性心肌缺血对骨髓源性Nkx2-5+心脏祖细胞的动员作用,探讨其细胞动员的可能机制。分别建立小鼠急性心肌缺血及脑、后肢急性缺血动物模型。采用纳米金-银免疫标记透射电镜、免疫荧光标记及分子生物学等检测方法,观察骨髓Nkx2-5+心肌祖细胞的定位及其形态学特征;检测急性心肌缺血后外周血Nkx2-5+细胞比例变化、缺血不同时段骨髓及外周血中Nkx2-5蛋白表达的变化;比较不同器官缺血对Nkx2-5+心脏祖细胞的动员作用;应用SDF-1/CXCR4通路特异性阻断剂AMD3100,分析SDF-1在急性心肌缺血后对Nkx2-5+心脏祖细胞动员作用的影响。结果显示:Nkx2-5+心脏祖细胞呈散在分布于骨髓血窦旁。与对照组相比,急性心肌缺血后,外周血Nkx2-5+心脏祖细胞比例显著增加(P<0.01)。心肌缺血早期(1d),外周血Nkx2-5蛋白表达显著增加(P<0.01),并可持续7d;而此间,骨髓中Nkx2-5蛋白表达立即升高,随后则降低。应用AMD3100阻断剂后,心肌缺血组外周血Nkx2-5蛋白表达受到明显抑制(P<0.05)。脑、后肢缺血后,外周血Nkx2-5蛋白表达显著少于急性心肌缺血组(P<0.01),而与对照组相比无显著差异。上述结果提示,生理状态下,骨髓中存在Nkx2-5+心脏祖细胞亚群;急性心肌缺血对骨髓Nkx2-5+心脏祖细胞具有显著的动员作用,且该动员作用具有显著的器官特异性,SDF-1/CXCR4通路在该动员作用中发挥了重要的趋化作用。 展开更多

关键词 心脏祖细胞 骨髓 nkx2-5 动员 心肌缺血

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纳米金-银加强法对骨髓微环境中Nkx2-5^+细胞定位的实验研究 被引量：1

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作者 于红丽 徐志伟 +1 位作者 张中明 董红燕 《徐州医学院学报》 CAS 2006年第4期296-298,共3页

目的应用包埋前纳米金-银加强法,电镜观察骨髓微环境中Nkx2-5+细胞并进行形态学分析。方法取BALB/c小鼠双后肢胫骨,脱钙后行冰冻切片,利用1.4 nm超微纳金颗粒标记骨髓纵切面Nkx2-5+的细胞,通过银加强使金颗粒增大,Epon 812树脂包埋,常... 目的应用包埋前纳米金-银加强法,电镜观察骨髓微环境中Nkx2-5+细胞并进行形态学分析。方法取BALB/c小鼠双后肢胫骨,脱钙后行冰冻切片,利用1.4 nm超微纳金颗粒标记骨髓纵切面Nkx2-5+的细胞,通过银加强使金颗粒增大,Epon 812树脂包埋,常规超薄切片,电镜下观察。结果免疫金颗粒主要标记Nkx2-5+细胞的胞质,极少数胞核也可见到免疫金颗粒。免疫金颗粒标记细胞均为体积较大的骨髓单核细胞,偶见双核细胞。结论包埋前纳米金-银加强法除可应用于神经系统的研究外,也可应用于骨髓微环境中抗原的精确定位。 展开更多

关键词 纳米金-银加强法 nkx2-5 骨髓微环境

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