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人非小细胞肺癌NCI-H1299细胞特异性结合肽的筛选及鉴定 被引量：3
1
作者 左琪 郭超 +2 位作者 樊卫平 杨晓峰 张帆 《中国肺癌杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1023-1030,共8页
背景与目的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是最常见的肺癌组织学类型,也是病死率最高的恶性肿瘤之一。多肽作为光学分子成像探针的主体可以实现肿瘤的早期筛查及诊断,提高患者存活率。本研究旨在利用体内噬菌体展示技... 背景与目的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是最常见的肺癌组织学类型,也是病死率最高的恶性肿瘤之一。多肽作为光学分子成像探针的主体可以实现肿瘤的早期筛查及诊断,提高患者存活率。本研究旨在利用体内噬菌体展示技术筛选与人NSCLC细胞NCI-H1299高度结合的小分子多肽并通过体外实验鉴定其结合特异性。方法制备NCI-H1299细胞荷瘤裸鼠模型,用噬菌体展示环七肽库进行3轮体内筛选后随机挑取噬菌体克隆,免疫组织化学法及酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)鉴定噬菌体克隆对NCI-H1299细胞的亲和力。提取阳性单克隆噬菌体DNA测序获得外源多肽氨基酸序列,将重复率最高的序列化学合成多肽并进行异硫氰酸荧光素(fluorescein,FITC)标记,制备光学分子探针,初步鉴定其对NCI-H1299细胞的特异性。结果经3轮体内筛选后噬菌体富集率是首轮的341.3倍;免疫组织化学染色显示随着筛选次数增加,肿瘤组织中结合的噬菌体不断增加,且结合量明显高于正常组织;ELISA结果显示随机挑取的30个噬菌体克隆中20个为阳性克隆,经测序后将重复率最高的序列合成多肽并命名为NSP1;四甲基偶氮唑盐比色法(methyl thiazolyl tetrazolium assay,MTT)、细胞划痕实验表明NSP1不会影响细胞增殖、迁移;流式细胞术、细胞免疫荧光结果表明NSP1可与NCI-H1299细胞特异性结合。结论利用体内噬菌体展示技术成功得到了与肺癌NCI-H1299细胞特异性结合的多肽NSP1,为NSCLC的早期诊断及靶向治疗奠定了研究基础。 展开更多
关键词 噬菌体展示技术 肺肿瘤 nci-h1299细胞 特异性结合肽
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噬菌体肽库与NCI-H1299细胞筛选肺癌特异性结合多肽ZS-9的初步研究 被引量：1
2
作者 王军业 石磊 +4 位作者 戴淑琴 潘琴 巫玮 臧林泉 戎铁华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期868-872,共5页
目的:利用噬菌体肽库与肺癌NCI-H1299细胞筛选出肺癌特异性结合的多肽,研究其亲和力和特异性。方法:以肺癌细胞NCI-H1299为靶细胞,肺二倍体成纤维细胞MRC-5为吸附细胞,与噬菌体随机十二肽库进行三轮筛选,挑取单克隆扩增并测序,进行生物... 目的:利用噬菌体肽库与肺癌NCI-H1299细胞筛选出肺癌特异性结合的多肽,研究其亲和力和特异性。方法:以肺癌细胞NCI-H1299为靶细胞,肺二倍体成纤维细胞MRC-5为吸附细胞,与噬菌体随机十二肽库进行三轮筛选,挑取单克隆扩增并测序,进行生物信息学分析、比对;利用ELISA、细胞免疫化学、组织免疫化学方法测定多肽的亲和力和特异性。结果:经过三轮减性筛选发现,随机挑选的9个单克隆中,其中1个对NCI-H1299和A549均具有较高亲和力,将其命名为ZS-9,测序结果为CAT AAT AAG CAT CTT CCG TCT ACG CAG CCT CTT GCG,根据测序结果推导出ZS-9的氨基酸序列HNKHLPSTQPLA,生物信息学分析表明ZS-9的氨基酸序列与美国国立生物技术信息中心(NCBI)GenBank DNA序列数据库和Swiss-Prot蛋白数据库中的已知基因和蛋白无同源性,表明我们筛选到一种新的肺癌相关抗原的配体。结论:利用噬菌体随机十二肽成功筛选出与肺癌细胞NCI-H1299和A549具有较高亲和力的多肽ZS-9,为肺癌的早期诊断和靶向治疗奠定基础。 展开更多
关键词 噬菌体肽库 肺肿瘤 nci—h1299细胞 多肽ZS-9
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肺癌特异性结合多肽的体外筛选和鉴定 被引量：2
3
作者 潘雪刁 何冰 +3 位作者 王桂香 刘金泳 曹成明 臧林泉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期342-346,共5页
目的应用噬菌体随机肽库技术筛选出与肺癌细胞特异性结合的多肽。方法以人肺癌细胞NCI-H1299为靶细胞,人胚肺细胞MRC-5为吸附细胞,对噬菌体随机12肽库进行3轮全细胞减性筛选后,随机挑取噬菌体克隆进行ELISA鉴定;对亲和力较高的阳性克隆... 目的应用噬菌体随机肽库技术筛选出与肺癌细胞特异性结合的多肽。方法以人肺癌细胞NCI-H1299为靶细胞,人胚肺细胞MRC-5为吸附细胞,对噬菌体随机12肽库进行3轮全细胞减性筛选后,随机挑取噬菌体克隆进行ELISA鉴定;对亲和力较高的阳性克隆进行DNA测序并翻译为氨基酸序列;化学合成异硫氰酸荧光素标记的多肽(FITC-ZS-5),采用细胞和组织免疫荧光法鉴定FITC-ZS-5与肺癌细胞的亲和力及特异性。结果通过3轮减性筛选后,与NCI-H1299细胞结合的噬菌体克隆得到有效的富集;ELISA结果显示5号克隆对NCI-H1299细胞亲和力最高,将其命名为Phage ZS-5;测序结果显示Phage ZS-5所表达的多肽序列在国内外均未见报道,细胞及组织免疫荧光实验结果显示FITC-ZS-5对肺癌细胞及组织具有较高的亲和力和特异性。结论应用噬菌体随机肽库技术筛选到肺癌靶向性多肽ZS-5,为肺癌的靶向治疗和诊断奠定基础。 展开更多
关键词 肺癌 噬菌体展示技术 多肽 减性筛选 nci-h1299细胞 肽库
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LV-ERK1-RNAi转染人非小细胞肺癌细胞的ERK1/2、DNA甲基转移酶1表达观察
4
作者 张恒 孙宇 +2 位作者 刘俊 陈尚威 周华富 《山东医药》 CAS 2020年第3期5-8,共4页
目的观察细胞外信号调节激酶1基因RNA干扰慢病毒载体(LV-ERK1-RNAi)转染后人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞NCI-H1299中细胞外信号调节激酶1(ERK1)、ERK2、DNA甲基转移酶1(DNMT1) mRNA及ERK1、磷酸化ERK1(p-ERK1)、DNMT1蛋白表达情况。方法体... 目的观察细胞外信号调节激酶1基因RNA干扰慢病毒载体(LV-ERK1-RNAi)转染后人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞NCI-H1299中细胞外信号调节激酶1(ERK1)、ERK2、DNA甲基转移酶1(DNMT1) mRNA及ERK1、磷酸化ERK1(p-ERK1)、DNMT1蛋白表达情况。方法体外培养NCI-H1299细胞,将细胞随机分为3组,KD组和NC组细胞分别转染LV-ERK1-RNAi、阴性对照病毒,CON组不作处理。转染72 h后,采用荧光显微镜观察细胞荧光率,实时荧光定量基因扩增法检测细胞中ERK1/2、DNMT1 mRNA,蛋白免疫印迹法检测细胞中ERK1、p-ERK1、DNMT1蛋白。结果空白对照组细胞无绿色荧光蛋白表达,阴性对照病毒组、LV-ERK1-RNAi组转染效率达80%以上。与NC组、CON组比较,KD组ERK1、DNMT1 mRNA及ERK1、p-ERK1、DNMT1蛋白表达下降(P均<0. 05)。结论 LV-ERK1-RNAi转染后NCI-H1299细胞ERK1、DNMT1 mRNA及ERK1、p-ERK1、DNMT1蛋白表达降低,ERK2表达正常,表明LV-ERK1-RNAi特异敲低ERK1而调控DNMT1的表达。 展开更多
关键词 细胞外信号调节激酶1基因 RNA干扰技术 慢病毒载体 非小细胞肺癌 nci-h1299细胞 细胞外信号调节激酶1 DNA甲基转移酶1 磷酸化ERK1
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香芹酚诱导非小细胞肺癌1299细胞凋亡的实验研究 被引量：6
5
作者 罗磊 王永坤 李世康 《天津医药》 CAS 2016年第12期1418-1422,共5页
目的探讨香芹酚(CV)对人非小细胞肺癌(NSCLC)NCI-H1299细胞的增殖、凋亡及侵袭的作用及可能机制。方法以不同浓度的CV(20、40、60、80μmol/L)处理NCI-H1299细胞,以未经CV处理的细胞为对照组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存... 目的探讨香芹酚(CV)对人非小细胞肺癌(NSCLC)NCI-H1299细胞的增殖、凋亡及侵袭的作用及可能机制。方法以不同浓度的CV(20、40、60、80μmol/L)处理NCI-H1299细胞,以未经CV处理的细胞为对照组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;Transwell法检测40μmol/L CV处理组和对照组细胞侵袭能力;实时荧光定量PCR及Western blot检测40μmol/L CV处理组和对照组的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-9、基质金属蛋白酶(MMP)-9、TIMP-1的m RNA及蛋白水平的表达变化。结果与对照组比较,CV各处理组NCI-H1299细胞存活率均明显降低,而凋亡率增加(P<0.05),但抑制效应均不呈浓度依赖性(P>0.05)。CV处理组侵袭细胞数(40.67±3.63)个明显低于对照组(76.00±5.78)个(P<0.01)。CV处理组较对照组caspase-9、TIMP-1的m RNA和蛋白表达水平均增高,MMP-9的m RNA和蛋白表达水平均降低(P<0.01)。结论CV可诱导人NSCLC NCI-H1299细胞凋亡,抑制其侵袭,作用机制可能与caspase-9的活性增加及MMP-9的下调有关。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 细胞凋亡 肿瘤侵润 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9 基质金属蛋白酶9 金属蛋白酶类组织抑制剂 香芹酚 人非小细胞肺癌nci-h1299细胞
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