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嗜酸乳杆菌3-磷酸甘油醛脱氢酶的分离纯化 被引量:8
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作者 潘渠 丛延广 +4 位作者 侯瑞 陈志谨 胡福泉 邱岳 王广科 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期461-464,共4页
目的分离纯化嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)ATCC 4356的3-磷酸甘油醛脱氢酶。方法利用硫酸铵分级沉淀法、亲和层析、阴离子交换和分子筛层析对嗜酸乳杆菌GAPDH进行了分离纯化。通过N端测序鉴定了纯化产物;并用分子筛测定了嗜... 目的分离纯化嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)ATCC 4356的3-磷酸甘油醛脱氢酶。方法利用硫酸铵分级沉淀法、亲和层析、阴离子交换和分子筛层析对嗜酸乳杆菌GAPDH进行了分离纯化。通过N端测序鉴定了纯化产物;并用分子筛测定了嗜酸乳杆菌GAPDH的相对分子质量(Mr)。结果纯化产物在SDS-PAGE胶上呈现Mr为3.7×104的单一条带,产量为0.9 mg/L(嗜酸乳杆菌培养物)。N端测序结果证明纯化产物为嗜酸乳杆菌GAPDH。分子筛测定的GAPDH的Mr为7.08×104,表明嗜酸乳杆菌GAPDH是二聚体。结论通过该纯化方案,可大量获得电泳纯的嗜酸乳杆菌GAPDH,为进一步研究其免疫功能以及开发为免疫促进剂打下了基础。 展开更多
关键词 3-磷酸甘油醛脱氢酶 嗜酸乳杆菌 纯化 n端测序 二聚体
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应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱和N端测序鉴定重组人粒/巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)的结构 被引量:6
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作者 王红霞 杨松成 +3 位作者 张学敏 蔡耘 桑志红 王杰 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期312-316,共5页
目的 :应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 (MALDI -TOF -MS)和N端测序方法鉴定重组人粒 /巨噬细胞集落刺激因子 (rhGM -CSF)的结构。方法 :1 用Edman降解法进行N端测序。 2 应用MALDI-TOF -MS测定分子量并鉴定纯度。 3 通过还原、... 目的 :应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 (MALDI -TOF -MS)和N端测序方法鉴定重组人粒 /巨噬细胞集落刺激因子 (rhGM -CSF)的结构。方法 :1 用Edman降解法进行N端测序。 2 应用MALDI-TOF -MS测定分子量并鉴定纯度。 3 通过还原、烷基化确定rhGM -CSF分子中二硫键数目。 4 通过蛋白内切酶Glu -C酶切的肽质量指纹谱确证氨基酸序列并确证其中两对二硫键的配对。结果 :1 测定的rhGM -CSFN端 15个氨基酸序列与从cDNA推导的序列一致。 2 测定的rhGM -CSF分子量与理论计算值一致。 3 证明rhGM -CSF没有自由巯基 ,含有两对二硫键 ,与理论值一致。 4 证明rhGM -CSF的氨基酸序列是正确的 ,并确证其中的两对二硫键配对正确。结论 :确证重组人粒 /巨噬细胞集落刺激因子 (rhGM -CSF)的结构是正确的 ,没有修饰、变异和氨基酸的丢失。应用的方法灵敏、准确。 展开更多
关键词 重组人粒/巨噬细胞集落刺激因子 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 n端测序 肽质量指纹谱 RHGM-CSF
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铜绿假单胞菌噬菌体PaP2的结构蛋白及其编码基因的研究 被引量:2
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作者 黄建军 胡晓梅 +4 位作者 朱军民 申晓冬 李明 饶贤才 胡福泉 《医学研究生学报》 CAS 2004年第4期292-295,共4页
目的 :确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP2结构蛋白的构成及其编码基因。 方法 :CsCl梯度离心纯化噬菌体PaP2颗粒 ,SDS PAGE电泳 ,确定结构蛋白条带及其相对分子质量 ;然后电转印于PVDF膜上 ,用Edman降解法进行N端测序。根据所测的N端氨基酸... 目的 :确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP2结构蛋白的构成及其编码基因。 方法 :CsCl梯度离心纯化噬菌体PaP2颗粒 ,SDS PAGE电泳 ,确定结构蛋白条带及其相对分子质量 ;然后电转印于PVDF膜上 ,用Edman降解法进行N端测序。根据所测的N端氨基酸残基序列在PaP2预测基因编码的蛋白质中检索 ,从而逆推其编码基因。 结果 :SDS PAGE显示PaP2含有 10条带 ,其中 1、3、4、5、8、9等 6条带的含量足以回收进行N端测序 ,测得N端氨基酸残基分别依次为 :Met Ile Glu Leu Gly、Ala Ile Ser Pro、Ala Arg Phe Ile Asp、Ser Val Tyr Ala Gly、Ala Ile Ser Arg Asn 和Ser Phe Ser Leu Gly。据此推论出它们的编码基因分别是ORF18340 2 3889、ORF4 4 19 6 4 19、ORF16 5 89 1832 2、ORF82 74 95 30、OrF15 70 8 16 6 2 5、ORF75 6 3 830 9。 结论 :噬菌体PaP2含有 10个结构蛋白 ,其中 6个主要结构蛋白的编码基因分别是orf 2 4、orf 8、orf 2 3、orf 12、orf 2 2、orf 11。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 噬菌体 蛋白质n端测序 编码基因
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分离纯化内切β-葡聚糖苷酶和部分N-末端序列分析 被引量:1
4
作者 沈志扬 郭春腾 +1 位作者 邓文汉 饶平凡 《生物技术》 CAS CSCD 2001年第6期7-9,共3页
使用硫酸铵分级沉淀、DEAE -TOYOPEARL 6 5 0M和POROS 2 0PI弱阴离子交换色谱等分离技术 ,从黑曲霉 (Aspergillusniger)发酵酶粉中分离提纯出一种新内切 β -葡聚糖苷酶 ,在非还原条件下分子量为 36kD ,还原条件为 38kD ,该酶最适pH3 5 ... 使用硫酸铵分级沉淀、DEAE -TOYOPEARL 6 5 0M和POROS 2 0PI弱阴离子交换色谱等分离技术 ,从黑曲霉 (Aspergillusniger)发酵酶粉中分离提纯出一种新内切 β -葡聚糖苷酶 ,在非还原条件下分子量为 36kD ,还原条件为 38kD ,该酶最适pH3 5 ,最适温度 5 5℃ ,N -末端部分氨基酸序列为XXXFKCVGSMEDGAES。 展开更多
关键词 黑曲霉 内切β-葡聚糖苷糖 分离纯化 n-末端序列 性质
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PHA-L4的纯化及结构分析
5
作者 张晓元 郭勇 +2 位作者 吴晖 赵起 黄敏 《华南理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第12期145-150,共6页
通过阴离子交换层析对植物血球凝集素(PHA)提取物进行组分分离、纯化和活性检测,制得了高丝裂原活性的PHA-L4糖蛋白,并利用SDS-PAGE、质谱、N-端氨基酸序列、肽质量指纹谱等分析方法对其结构进行了鉴定.结果表明,PHA-L4是由4个PHA-L蛋... 通过阴离子交换层析对植物血球凝集素(PHA)提取物进行组分分离、纯化和活性检测,制得了高丝裂原活性的PHA-L4糖蛋白,并利用SDS-PAGE、质谱、N-端氨基酸序列、肽质量指纹谱等分析方法对其结构进行了鉴定.结果表明,PHA-L4是由4个PHA-L蛋白亚基组成的四聚体糖蛋白,相对分子质量为120000,每个亚基N-端第12位天冬酰胺残基被糖基化,糖基化呈现微不均一性. 展开更多
关键词 植物血球凝集素 纯化 鉴定 质谱 n-端氨基酸序列 肽质量指纹谱
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Family-level diversity of extracellular proteases of sedimentary bacteria from the South China Sea 被引量:5
6
作者 Jinyu Yang Yangyang Feng +4 位作者 Xiulan Chen Binbin Xie Yuzhong Zhang Mei Shi Xiying Zhang 《Acta Oceanologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2019年第12期73-83,共11页
Protease-producing bacteria and their extracellular proteases are key players in degrading organic nitrogen to drive marine nitrogen cycling and yet knowledge on both of them is still very limited. This study screened... Protease-producing bacteria and their extracellular proteases are key players in degrading organic nitrogen to drive marine nitrogen cycling and yet knowledge on both of them is still very limited. This study screened protease-producing bacteria from the South China Sea sediments and analyzed the diversity of their extracellular proteases at the family level through N-terminal amino acid sequencing. Results of the 16 S rRNA gene sequence analysis showed that all screened protease-producing bacteria belonged to the class Gammaproteobacteria and most of them were affiliated with different genera within the orders Alteromonadales and Vibrionales. The Nterminal amino acid sequence analysis for fourteen extracellular proteases from fourteen screened bacterial strains revealed that all these proteases belonged to the M4 family of metalloproteases or the S8 family of serine proteases. This study presents new details on taxa of marine sedimentary protease-producing bacteria and types of their extracellular proteases, which will help to comprehensively understand the process and mechanism of the microbial enzymatic degradation of marine sedimentary organic nitrogen. 展开更多
关键词 protease-producing bacteria DIVERSITY extracellular proteases protease families n-terminal amino acid sequencing South China Sea
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小麦返白系胆色素原脱氨酶纯化及编码cDNA序列分析 被引量:3
7
作者 程冬梅 范三红 +3 位作者 刘香莉 陈根云 邓志勇 郭蔼光 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期973-978,共6页
以小麦(Triticumaestivum)返白系F772为材料,通过粗提、加热处理、硫酸铵分级沉淀和凝胶柱层析等方法,对胆色素原脱氨酶(PBGD)进行了提取纯化,纯化倍数为1092,得率为15%.纯化的PBGD约为37kD.对其部分生化性质的研究表明:高浓度的NH4+对... 以小麦(Triticumaestivum)返白系F772为材料,通过粗提、加热处理、硫酸铵分级沉淀和凝胶柱层析等方法,对胆色素原脱氨酶(PBGD)进行了提取纯化,纯化倍数为1092,得率为15%.纯化的PBGD约为37kD.对其部分生化性质的研究表明:高浓度的NH4+对酶活性有强烈的抑制,光照处理可以使酶活性降低.对纯化后的PBGDN末端氨基酸序列进行了测定.根据N端序列设计简并引物,获得了PBGD的cDNA全部编码区序列.它编码一个351个氨基酸的前体蛋白,有一个叶绿体导肽的序列.通过比较小麦PBGD与来自与其他物种的同源蛋白表明,有些氨基酸残基非常保守. 展开更多
关键词 小麦返白系 胆色素原脱氨酶 n末端氨基酸测序 纯化 CDnA克隆
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N-末端氨基酸测序数据估计N-末端不均一的单链重组蛋白制品主肽链比例方法的建立 被引量:4
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作者 史新昌 杨靖清 +2 位作者 韩春梅 陶磊 饶春明 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2016年第10期1073-1081,共9页
目的建立应用N-末端氨基酸测序数据估计N-末端不均一的单链重组蛋白制品主肽链比例的方法。方法利用氨基酸测序仪的摩尔归一化数据,经信号和噪音分离、信号的筛选等数据处理过程,将主肽链N-末端序列数据与其他次要序列数据分开,进而估... 目的建立应用N-末端氨基酸测序数据估计N-末端不均一的单链重组蛋白制品主肽链比例的方法。方法利用氨基酸测序仪的摩尔归一化数据,经信号和噪音分离、信号的筛选等数据处理过程,将主肽链N-末端序列数据与其他次要序列数据分开,进而估计主肽链所占比例。将本方法计算结果与质谱结果进行比较,另用混合样品数据进行验证分析。结果本方法所计算结果基本符合实际情况,可较准确地估计主肽链比例。结论初步建立了应用N-末端氨基酸测序数据估计N-末端不均一的单链重组蛋白制品主肽链比例的方法,为相关蛋白的分析和研究提供了辅助。 展开更多
关键词 n-末端氨基酸测序 n-末端不均一 重组蛋白 相关蛋白 数据处理 比例估计
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重组人胰岛素原料药N末端氨基酸序列的测定 被引量:3
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作者 田沛霖 张国林 《中国合理用药探索》 CAS 2020年第12期89-94,共6页
目的:建立重组人胰岛素原料药N末端氨基酸序列的测定方法。方法:基于Edman降解原理,重组人胰岛素原料药样品经1%乙酸溶液处理,采用PPSQ-53A蛋白质测序仪依序切割N末端氨基酸后,注入高效液相色谱仪,使用Wakopak Wakosil PTH-GR硅胶柱,通... 目的:建立重组人胰岛素原料药N末端氨基酸序列的测定方法。方法:基于Edman降解原理,重组人胰岛素原料药样品经1%乙酸溶液处理,采用PPSQ-53A蛋白质测序仪依序切割N末端氨基酸后,注入高效液相色谱仪,使用Wakopak Wakosil PTH-GR硅胶柱,通过梯度洗脱分离,流速为0.3 ml/min,柱温为35℃,进样体积为50μl,PDA检测器分析波长为269 nm。同时,采用PPSQ-53A蛋白测序仪进行等度洗脱分析N末端序列。结果:重组人胰岛素原料药N末端氨基酸理论序列:A链为Gly-Ile-Val-Glu-Gln-Cys-Cys-Thr-Ser-Ile-Cys-Ser-Leu-Tyr-Gln;B链为Phe-Val-Asn-Gln-His-Leu-Cys-Gly-Ser-His-Leu-Val-Glu-Ala-Leu。经测定,样品梯度洗脱的测定结果与理论序列一致,等度洗脱获得的N末端序列也与理论序列一致。结论:所用方法操作简便、可行,能够用于测定重组人胰岛素原料药的N末端氨基酸序列。 展开更多
关键词 重组人胰岛素 n末端氨基酸 序列测定 Edman降解 中国药典 梯度洗脱
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重组抗体的N-端氨基酸序列测定 被引量:2
10
作者 魏敬双 程立均 贾茜 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第12期1118-1120,共3页
目的建立具有焦谷氨酸封闭N-端的重组抗体N-端氨基酸序列分析方法。方法利用高温稳定的焦谷氨酸肽酶,在重组人源抗狂犬病病毒单抗样品高温变性条件下,去除其N-端焦谷氨酸封闭。经还原SDS-PAGE和电印迹后,进行N-端氨基酸序列测定,并与电... 目的建立具有焦谷氨酸封闭N-端的重组抗体N-端氨基酸序列分析方法。方法利用高温稳定的焦谷氨酸肽酶,在重组人源抗狂犬病病毒单抗样品高温变性条件下,去除其N-端焦谷氨酸封闭。经还原SDS-PAGE和电印迹后,进行N-端氨基酸序列测定,并与电印迹后在PVDF膜上去封闭处理效果进行比较。结果用该方法去封闭后的抗体样品N-端焦谷氨酸去除效果较好,可顺利进行N-端氨基酸序列测定;而电印迹后在PVDF膜上去封闭处理,N-端焦谷氨酸不能充分去除,无法进行N-端氨基酸序列测定。结论该方法适于具有焦谷氨酸封闭N-端的单抗的N-端氨基酸序列分析。 展开更多
关键词 重组单克隆抗体 焦谷氨酸封闭 n-端氨基酸 序列测定
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基因工程单克隆抗体N-端氨基酸序列的测定 被引量:1
11
作者 郭玮 张晶 +4 位作者 张峰 沈卫群 赵方萄 徐燕英 王佑春 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1059-1063,共5页
目的:建立了具有焦谷氨酸封闭N-端的重组抗体N-端氨基酸序列分析方法。方法:利用高温稳定的焦谷氨酸肽酶,基因工程重组单抗样品在高温变性条件下,去除其N-端焦谷氨酸封闭。经还原SDS-PAGE和电印迹后,进行N-端氨基酸序列测定,并与电印迹... 目的:建立了具有焦谷氨酸封闭N-端的重组抗体N-端氨基酸序列分析方法。方法:利用高温稳定的焦谷氨酸肽酶,基因工程重组单抗样品在高温变性条件下,去除其N-端焦谷氨酸封闭。经还原SDS-PAGE和电印迹后,进行N-端氨基酸序列测定,并与电印迹后在PVDF膜上去封闭处理效果进行比较。结果:测定了17种基因工程单克隆抗体,其中有7个为重链去封闭处理后再进行测序的抗体样品,用2种方法都可顺利去除N-端封闭的焦谷氨酸,从而进行N-端氨基酸序列测定;如果不进行去封闭处理,部分样品无法进行N-端氨基酸序列测定。结论:2种方法都适于N-端具有焦谷氨酸封闭单抗的氨基酸序列分析。 展开更多
关键词 基因工程 单克隆抗体 n-端氨基酸 序列测定 焦谷氨酸 聚丙烯酰胺凝胶电泳 电印迹
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重组C8orf32蛋白的表达、纯化及抗体制备 被引量:1
12
作者 朱镭 张政希 +3 位作者 倪国新 徐学敏 林标扬 李伟 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期1-5,共5页
C8orf32是一种功能未知基因,其mRNA含量在乳腺癌组织中显著高于正常乳腺组织。将其开放式阅读框插入pGEX-6P1原核表达载体T7启动子控制下的GST编码基因下游,构建了C8orf32蛋白表达质粒pGEX-6P-C8。表达质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,... C8orf32是一种功能未知基因,其mRNA含量在乳腺癌组织中显著高于正常乳腺组织。将其开放式阅读框插入pGEX-6P1原核表达载体T7启动子控制下的GST编码基因下游,构建了C8orf32蛋白表达质粒pGEX-6P-C8。表达质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导,成功表达了GST-C8orf32融合蛋白。经带有GST标签的位点特异性蛋白酶切割除去GST-C8orf32融合蛋白的GST标签,获得了N端带有8个多余氨基酸残基的C8orf32蛋白,蛋白纯度为95%左右。N端氨基酸序列分析表明该蛋白N端氨基酸序列正确,质谱鉴定进一步证明所表达C8orf32蛋白的正确性。用制备的C8orf32蛋白免疫新西兰白兔,获得了能够正确识别C8orf32蛋白的抗血清。该蛋白及其抗体的成功制备,为进一步研究C8orf32蛋白的结构功能和体内分布打下了基础。 展开更多
关键词 C8orf32 GST融合蛋白 位点特异性蛋白酶 n端氨基酸序列分析 质谱鉴定
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