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实验性变态反应性脑脊髓炎AQP-4、CD4^+CD25^+调节性T细胞研究
1
作者 翁益云 夏君慧 +2 位作者 叶好好 张国勇 张旭 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期631-638,共8页
目的:以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白细胞外免疫球蛋白样结构域(MOGIgd)为抗原免疫C57BL/6小鼠,建立EAE模型,并检测AQP-4、CD4+CD25+T细胞的表达水平。方法:①采用分子克隆技术诱导表达MOGIgd-TrxA融合蛋白,纯化后以此融合蛋白为抗原于侧腹... 目的:以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白细胞外免疫球蛋白样结构域(MOGIgd)为抗原免疫C57BL/6小鼠,建立EAE模型,并检测AQP-4、CD4+CD25+T细胞的表达水平。方法:①采用分子克隆技术诱导表达MOGIgd-TrxA融合蛋白,纯化后以此融合蛋白为抗原于侧腹壁皮下多点注射免疫C57BL/6小鼠作为实验组(MOG组);同时以硫氧还蛋白(TrxA)、豚鼠脊髓匀浆(GPSCH)免疫小鼠分别作为阴性、阳性组。评估动物的临床神经功能、组织病理情况,评价模型的质量。②免疫组化法、荧光定量PCR技术测定AQP-4表达水平;经流式细胞仪(FACS)检测小鼠脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞。结果:①MOG组及GP-SCH组小鼠均呈慢性非缓解型病程,两组在发病时间、达峰时间、临床神经功能评分等方面差异无统计学意义(P>0.05)。TrxA组无一动物发病。模型组(包括MOG组和GPSCH组)动物HE染色可见血管周围炎性细胞浸润,胶质结节形成,髓鞘染色可见斑片状髓鞘脱失,大脑、小脑、脑干和脊髓均有不同程度受累。免疫组化定性和半定量分析显示MOG组和GPSCH组病灶周围炎症浸润处AQP-4表达与TrxA组相比明显增高(P<0.05);②MOG组CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞比例为(4.71±1.61)%,GPSCH组为(1.44±0.65)%,均明显低于TrxA组(P<0.01),且MOG组和GPSCH组之间的差异亦具有统计学意义(P<0.01)。结论:用MOGIgd免疫C57BL/6小鼠诱导EAE模型稳定,发病率高,为今后进一步研究MS的免疫发病机制和采取有效治疗措施打下基础。EAE模型动物AQP-4的表达量与炎症浸润的严重程度相关。 展开更多
关键词 实验性变态反应性脑脊髓炎 mog AQP-4 CD4+CD25+调节性T细胞
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C57BL／6小鼠EAE模型的建立及Foxp3、CD4＋CD25＋调节性T细胞检测
2
作者 翁益云 夏君慧 +2 位作者 鲍剑虹 张国勇 张旭 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期273-280,共8页
目的以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白细胞外免疫球蛋白样结构域（MOG驯）为抗原免疫C57BL／6小鼠，建立实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型，并检测CIM＋CD25＋T细胞、Foxp3mRNA等指标的表达。方法采用分子克隆技术诱导表达MOGlgd-TrxA融合... 目的以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白细胞外免疫球蛋白样结构域（MOG驯）为抗原免疫C57BL／6小鼠，建立实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型，并检测CIM＋CD25＋T细胞、Foxp3mRNA等指标的表达。方法采用分子克隆技术诱导表达MOGlgd-TrxA融合蛋白，纯化后以此融合蛋白为抗原于侧腹壁皮下多点注射免疫C57BL／6小鼠作为实验组（MOG组）；同时以硫氧还蛋白（TrxA）、豚鼠脊髓匀浆（GPSCH）、生理盐水免疫小鼠分别作为阴性、阳性及正常对照组。双盲法连续早晚观察30d，通过评估动物的临床神经功能、组织病理（HE染色和Kltiver．Barrera法髓鞘染色、免疫组化法）情况，评价模型的质量。流式细胞仪（FACS）检测小鼠脾脏中CD4＋CD25＋调节性T细胞；real—timePCR检测Foxp3mRNA的相对表达水平，并分析两者相关性。结果MOG组及GPSCH组小鼠均呈慢性非缓解型病程，两组在发病时问、达峰时间、临床神经功能评分等方面差异均无统计学意义（P〉0．05）。TrxA组及正常对照组无一动物发病。模型组（包括MOG组和GPSCH组）动物HE染色可见血管周围炎性细胞浸润，胶质结节形成，髓鞘染色可见斑片状髓鞘脱失，大脑、小脑、脑干和脊髓均有不同程度受累。免疫组化定性和半定量分析显示MOG组和GPSCH组病灶周围炎症浸润处AQP-4表达与TrxA组相比明显增高（P〈0．05）；MOG组CIM＋CD25＋T细胞占CIM＋T细胞比例为（4．71±1．61）％，GPSCH组为（1．44±0．65）％，均明显低于TrxA组和正常对照组（P〈0．01），且MOG组和GPSCH组之间的差异亦具有统计学意义（P〈0．01）。MOG组标准化Foxp3mRNA的表达量为2．26±1．97，GPSCH组为1．44±1．20，均低于TrxA组的8．58±3．34（P〈0．01）；但MOG组和GPSCH组间的差异无统计学意义（P〉0．05）。相关性分析显示，模型组小鼠CIM＋CD25＋调节性T细胞与roxp3mRNA表达水平 展开更多
关键词 实验性自身免疫性脑脊髓炎 髓鞘少突胶质细胞糖蛋白 水通道蛋白-4 FOXP3 CD4+CD25+调节性T细胞
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