多重荧光定量PCR法检测海产品中副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌 被引量：13

1

作者 胡兴娟 沈飚 +3 位作者 余辉 周秀锦 张静 邵宏宏 《中国食品卫生杂志》 2016年第4期440-444,共5页

目的建立检测海产品中副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌的多重荧光定量PCR体系。方法针对副溶血性弧菌tlh基因,沙门菌Ompc基因和单增李斯特菌hly基因设计引物和Taq Man探针,建立多重荧光定量PCR体系,进行特异性与敏感性研究;利用该... 目的建立检测海产品中副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌的多重荧光定量PCR体系。方法针对副溶血性弧菌tlh基因,沙门菌Ompc基因和单增李斯特菌hly基因设计引物和Taq Man探针,建立多重荧光定量PCR体系,进行特异性与敏感性研究;利用该体系检测海产品中的副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌。结果副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌可得到特异性扩增,而共存于海产品中的其他细菌均未见扩增曲线。敏感性试验显示,该体系对副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌的最低检测限分别为72、40、80 cfu/ml。对舟山采集的150份样品进行检测,检出32份副溶血性弧菌、11份沙门菌、5份单增李斯特菌,与国标法检测结果一致。结论本研究建立的基于Taq Man探针的多重荧光定量PCR检测方法可以特异、灵敏、简单快速地实现对海产品中副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌的检测。 展开更多

关键词 海产品 副溶血性弧菌 沙门菌 单增李斯特菌 TAQ Man探针 多重荧光pcr 食源性致病菌

原文传递

TaqMan多重实时定量PCR快速检测3种常见食源性病原菌

2

作者 艾鹏飞 王珊 +3 位作者 高辉明 王雁伟 庞艳荣 张萌 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第5期373-380,共8页

建立一种可同时快速检测大肠杆菌O157:H7、单增李斯特菌和蜡样芽孢杆菌的多重实时定量PCR(qPCR)方法。依据大肠杆菌O157:H7 tir基因、单增李斯特菌mpl基因和蜡样芽孢杆菌entFM基因的保守序列分别设计特异性引物和TaqMan探针,建立多重qPC... 建立一种可同时快速检测大肠杆菌O157:H7、单增李斯特菌和蜡样芽孢杆菌的多重实时定量PCR(qPCR)方法。依据大肠杆菌O157:H7 tir基因、单增李斯特菌mpl基因和蜡样芽孢杆菌entFM基因的保守序列分别设计特异性引物和TaqMan探针,建立多重qPCR反应体系,进行灵敏度、特异性和稳定性试验,同步检测人工染菌牛奶样品中的病原菌并与国家标准方法作对比。结果表明,建立的多重qPCR方法灵敏度高,最低检出限为12 CFU/mL;特异性强,只对3种目标菌进行PCR扩增;稳定性好,各重复性试验中Ct值的变异系数<1%;所有受污染样品阳性检出率均为100%,与国家标准方法检测结果一致,且检测周期缩短至6 h。本研究建立的TaqMan多重qPCR方法能同时快速、准确地检测乳品中的大肠杆菌O157:H7、单增李斯特菌和蜡样芽孢杆菌,为食品安全提供技术支撑。 展开更多

关键词 TAQMAN探针 多重实时定量pcr 大肠杆菌O157:H7 单增李斯特菌 蜡样芽孢杆菌

下载PDF 职称材料

陕西株利什曼原虫ITS-1基因片段序列多态性分析 被引量：6

3

作者 刘东立 王凤萍 +5 位作者 王安礼 张铮 王天海 石一 关蓉晖 李文涓 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第3期282-286,共5页

目的分析陕西株利什曼原虫rRNA内转录间隔区间I(ITS-1)序列多态性,探讨利什曼原虫ITS-1分子遗传规律。方法陕西省韩城市犬、白蛉以及人体利什曼原虫阳性标本7份,提取核酸,PCR法扩增ITS-1片段,双向测序、拼接后与文献发表的代表株进行序... 目的分析陕西株利什曼原虫rRNA内转录间隔区间I(ITS-1)序列多态性,探讨利什曼原虫ITS-1分子遗传规律。方法陕西省韩城市犬、白蛉以及人体利什曼原虫阳性标本7份,提取核酸,PCR法扩增ITS-1片段,双向测序、拼接后与文献发表的代表株进行序列比对,构建系统发育树,进行系统发育分析。结果 7份标本均扩增出约320bp的片段,ITS-1序列之间同源性>99%,与国内山丘型疫区虫株高度一致,与荒漠型遗传距离较远。系统发育分析陕西株与婴儿利什曼原虫和杜氏利什曼原虫聚为一类。结论陕西省韩城市分离自病犬、传播媒介白蛉及黑热病患者的利什曼原虫ITS-1序列同源,应为犬源型婴儿利什曼原虫。 展开更多

关键词 利什曼原虫 ITS-1 序列多态性分析 陕西

原文传递

多重实时荧光定量PCR对9种常见呼吸道病原体检测 被引量：5

4

作者 王玉月 史伟峰 季云 《标记免疫分析与临床》 CAS 2015年第11期1160-1164,共5页

目的探讨多重实时荧光定量PCR(MRT-PCR)检测9种常见呼吸道病原体的临床应用价值。方法采用Primer Express3.0(ABI)和Primer3 Input 4.0设计引物和探针建立MRT-PCR法,通过构建质粒标准品分析该方法的最低检出限和特异性。并对204例临床... 目的探讨多重实时荧光定量PCR(MRT-PCR)检测9种常见呼吸道病原体的临床应用价值。方法采用Primer Express3.0(ABI)和Primer3 Input 4.0设计引物和探针建立MRT-PCR法,通过构建质粒标准品分析该方法的最低检出限和特异性。并对204例临床标本中副流感病毒1、2、3型、肺炎支原体、肺炎衣原体、呼吸道合胞病毒、腺病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒进行回顾性检测。结果 MRT-PCR法检测病原体的最低检出限达103copies/m L,特异性达100%,无交叉反应。204例咽拭子标本中,MRT-PCR检出呼吸道合胞病毒23例,副流感病毒1、2、3型13例,腺病毒15例,肺炎支原体15例,肺炎衣原体3例,甲型流感病毒13例与乙型流感病毒6例。该结果与其他试剂报告结果完全一致。结论多重实时荧光定量PCR具有快速、准确、特异性强等特点,在呼吸道病原体检测方面有重要价值。 展开更多

关键词 多重实时荧光定量pcr 间接免疫荧光法 呼吸道病原体

下载PDF 职称材料

3种常见金银花致病菌多重实时荧光定量PCR检测方法研究 被引量：1

5

作者 朱桐杉 刘艳艳 +7 位作者 谭晴晴 刘国霞 陈雪燕 步迅 王文博 于子涵 张全芳 张永清 《山东农业科学》 北大核心 2023年第7期145-151,共7页

为了建立可同时检测炭疽病病原菌(Colletotrichum gloeosporioides)、白粉病病原菌(Erysiphe lonicera)和褐斑病病原菌(Cercospora rhamni)3种金银花重要叶部病原菌的多重实时荧光定量PCR快速检测方法,本试验基于3种病原菌ITS片段序列... 为了建立可同时检测炭疽病病原菌(Colletotrichum gloeosporioides)、白粉病病原菌(Erysiphe lonicera)和褐斑病病原菌(Cercospora rhamni)3种金银花重要叶部病原菌的多重实时荧光定量PCR快速检测方法,本试验基于3种病原菌ITS片段序列分别设计特异引物和TaqMan荧光探针,并制备重组质粒建立标准曲线;对建立的多重实时荧光定量PCR检测方法进行特异性、灵敏度、准确性验证。结果表明,本研究建立的多重实时荧光定量PCR快速检测方法仅针对金银花炭疽病、白粉病和褐斑病病原菌有特异性扩增;最低检测限为2.94×10^(2)copies/μL,比普通PCR法高100倍;利用本方法检测15份有叶部病害症状的金银花病叶,与DNA测序结果完全一致。综之,本研究建立的多重实时荧光PCR检测方法特异性强、灵敏度高,为金银花炭疽病、白粉病和褐斑病的早期诊断提供了技术支持。 展开更多

关键词 金银花 炭疽病 白粉病 褐斑病 多重实时荧光定量pcr

下载PDF 职称材料

三种奶牛常见病菌多重PCR诊断方法的建立 被引量：3

6

作者 高瑞娜 张婷 《畜牧兽医杂志》 2015年第4期15-18,22,共5页

根据GenBank公布的布鲁氏菌Bcsp31、牛分枝杆菌pncA、炭疽杆菌capA三种特异基因的保守序列分别设计引物,在引物前添加通用引物(Tag),建立3种奶牛常见病菌的多重实时荧光定量PCR方法;通过构建3种病菌PCR扩增目的基因的质粒用于制备标准... 根据GenBank公布的布鲁氏菌Bcsp31、牛分枝杆菌pncA、炭疽杆菌capA三种特异基因的保守序列分别设计引物,在引物前添加通用引物(Tag),建立3种奶牛常见病菌的多重实时荧光定量PCR方法;通过构建3种病菌PCR扩增目的基因的质粒用于制备标准品进行敏感性验证;利用大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌用于特异性试验,并对30份样本进行了检测。结果表明,本研究构建的多重实时荧光定量PCR检测时间仅需2h,灵敏度为100个拷贝/uL,与其它细菌无交叉反应,特异性为100%,阳性检出率为88.89%。因此,本试验成功建立了检测3种奶牛常见病菌早期诊断的方法,可以在奶牛养殖中应用。 展开更多

关键词 奶牛 布鲁氏菌 牛分枝杆菌 炭疽杆菌 多重实时荧光定量pcr

下载PDF 职称材料

多重荧光定量PCR快速检测6种常见下呼吸道感染病原菌 被引量：3

7

作者 王然 刘雨 +3 位作者 于津伟 王冬梅 赵鹃 孙续国 《天津医科大学学报》 2021年第3期285-290,共6页

目的:探讨多重实时荧光定量PCR(MRT-PCR)检测6种常见呼吸道病原菌的检测方法。方法:采用BeaconDesigner7.9设计引物和探针建立MRT-PCR法,通过构建质粒标准品分析该方法的最低检出限。对176例临床标本中大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜... 目的:探讨多重实时荧光定量PCR(MRT-PCR)检测6种常见呼吸道病原菌的检测方法。方法:采用BeaconDesigner7.9设计引物和探针建立MRT-PCR法,通过构建质粒标准品分析该方法的最低检出限。对176例临床标本中大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌和鲍曼不动杆菌进行回顾性检测,并用一代基因测序验证。结果:MRT-PCR法检测病原菌的最低检出限达103 copies/mL,大肠埃希菌19例,金黄色葡萄球菌30例,铜绿假单胞菌37例,肺炎克雷伯菌53例,阴沟肠杆菌15例,鲍曼不动杆菌22例,与传统鉴定方法报告病原菌一致,特异性达100%。通过一代基因测序结果完全符合。结论:使用多荧光通道PCR仪,采用多重PCR技术检测痰液标本中6种常见病原菌的基因检测方法,敏感性和特异性高,提高了检测效率。 展开更多

关键词 多重实时荧光定量pcr 呼吸道病原菌 基因测序

下载PDF 职称材料

烈性呼吸道细菌多重荧光PCR检测方法建立 被引量：2

8

作者 张锦海 陈文琦 +5 位作者 朱进 吕恒 顾海涛 王平 鲁娟东 王长军 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1237-1239,共3页

目的建立多重实时荧光PCR检测炭疽杆菌、鼠疫耶尔森菌及嗜肺军团菌的方法。方法设计分别针对炭疽杆菌、鼠疫耶尔森菌、嗜肺军团菌毒力因子基因和特异性结构基因的引物和荧光双标记探针,优化反应体系,建立2套均可同时检测3种细菌的多重... 目的建立多重实时荧光PCR检测炭疽杆菌、鼠疫耶尔森菌及嗜肺军团菌的方法。方法设计分别针对炭疽杆菌、鼠疫耶尔森菌、嗜肺军团菌毒力因子基因和特异性结构基因的引物和荧光双标记探针,优化反应体系,建立2套均可同时检测3种细菌的多重实时荧光PCR方法,以及3种分别针对上述单一细菌的二重实时荧光定量PCR方法。结果构建的多重和二重实时荧光PCR方法,检测敏感性分别达到100模板拷贝每反应和20模板拷贝每反应,并且高浓度模板对低浓度模板的扩增检测干扰不明显,对阳性菌株均100%检出,对常见杆菌检测均为阴性。结论多重实时荧光定量PCR具有可以同时筛查、经济、快速、特异性强、灵敏度好等优点,在炭疽杆菌、鼠疫耶尔森菌、嗜肺军团菌的病原体检测方面有较大应用价值。 展开更多

关键词 多重实时荧光pcr 炭疽杆菌 鼠疫耶尔森菌 嗜肺军团菌

原文传递

多重荧光定量RT-PCR同时检测甲型乙型流感病毒 被引量：2

9

作者 赵丹燕 陈代全 《中国卫生检验杂志》 CAS 2009年第1期110-113,共4页

目的:建立一种快速、敏感、特异的多重荧光定量RT-PCR同时检测甲型、乙型流感病毒,并将建立的方法进行初步临床应用研究。方法:甲型、乙型流感病毒的引物及Taqman探针的设计,对甲型、乙型的探针标记不同的荧光素,优化多重荧光定量RT-PC... 目的:建立一种快速、敏感、特异的多重荧光定量RT-PCR同时检测甲型、乙型流感病毒,并将建立的方法进行初步临床应用研究。方法:甲型、乙型流感病毒的引物及Taqman探针的设计,对甲型、乙型的探针标记不同的荧光素,优化多重荧光定量RT-PCR反应体系,检测该方法的灵敏度和特异度。并对40例疑似流感含漱液标本进行检测。结果:多重荧光定量RT-PCR对甲型和乙型流感病毒有较高的灵敏度和特异性,与麻疹病毒、风疹病毒、流行性腮腺炎病毒等呼吸道病毒无交叉反应,可直接从疑似患者含漱液标本中同时检测甲型或乙型流感病毒。结论:多重荧光定量RT-PCR不仅特异性高,而且比常规RT-PCR和病毒分离法更敏感、快速,也更简便。 展开更多

关键词 多重荧光定量RT-pcr 流感病毒 逆转录聚合酶链反应 细胞培养

下载PDF 职称材料

基于16S rRNA基因的食源性致病菌实时荧光定量PCR检测研究 被引量：2

10

作者 刘玲雪 孙红炜 +4 位作者 李凡 徐晓辉 高瑞 杨淑珂 路兴波 《山东农业科学》 2017年第6期126-134,共9页

本研究以16S rRNA基因作为靶基因,利用TaqMan探针技术建立了针对志贺氏菌(Shigella)、沙门氏菌(Salmonella)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)三种主要食源性致病菌的多重实时荧光定量PCR检测技术。结果表明,建立的荧光定量PCR... 本研究以16S rRNA基因作为靶基因,利用TaqMan探针技术建立了针对志贺氏菌(Shigella)、沙门氏菌(Salmonella)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)三种主要食源性致病菌的多重实时荧光定量PCR检测技术。结果表明,建立的荧光定量PCR检测体系特异性良好、灵敏度高、简便快捷,大大缩短了检测时间,在食源性致病菌快速筛查方面具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 食源性致病菌 16S RRNA基因 多重实时荧光定量pcr TAQMAN探针

下载PDF 职称材料

外环境样本中产毒型O1群霍乱弧菌双重荧光定量PCR快速检测方法的建立

11

作者 黄世旺 徐丹戈 +6 位作者 徐昌平 张政 方叶珍 包芳珍 李剑 蒋雪凤 卢亦愚 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期29-32,36,共5页

目的研究建立双重荧光定量PCR技术快速检测产毒型O1群霍乱弧菌,并首次应用于外环境样本的检测中。方法从GenBank上下载O1群霍乱弧菌O抗原编码基因rfbO1和毒力基因CT序列,在rfbO1和CT保守区域设计特异性引物和探针,建立优化单一和双重荧... 目的研究建立双重荧光定量PCR技术快速检测产毒型O1群霍乱弧菌,并首次应用于外环境样本的检测中。方法从GenBank上下载O1群霍乱弧菌O抗原编码基因rfbO1和毒力基因CT序列,在rfbO1和CT保守区域设计特异性引物和探针,建立优化单一和双重荧光PCR反应体系,评价所建双重PCR反应体系的特异性、敏感性和稳定性,并应用于外环境样本的监测检验中。结果该方法对O1群霍乱弧菌检测具有高度特异性,对rfbO1和CT基因序列检出限达到1.0×102cfu/mL,构建的体系定量标准曲线相关系数分别为0.999和0.998,具有较好的稳定性,并首次从352件外环境样本中检测出了5株产毒型O1群霍乱弧菌。结论本研究建立的双重荧光定量PCR方法特异、灵敏、快速,可应用于外环境样本中产毒型O1群霍乱弧菌的大范围筛查。 展开更多

关键词 霍乱弧菌 双重荧光定量pcr 外环境 CT rfbO1

下载PDF 职称材料

呼吸道病原体多重实时荧光定量PCR的检测 被引量：12

12

作者 姚亚萍 徐冉行 吕棠山 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期592-594,共3页

目的建立多重实时荧光定量PCR检测方法,为实现对呼吸道病原体的快速、灵敏特异性检测。方法采用经报道的引物和探针对合胞病毒、腺病毒等8种呼吸道病原体进行多重实时荧光定量PCR检测。结果多重荧光定量PCR阳性检测率高达57.8%,无假阳... 目的建立多重实时荧光定量PCR检测方法,为实现对呼吸道病原体的快速、灵敏特异性检测。方法采用经报道的引物和探针对合胞病毒、腺病毒等8种呼吸道病原体进行多重实时荧光定量PCR检测。结果多重荧光定量PCR阳性检测率高达57.8%,无假阳性及假阴性,特异性强。结论多重实时荧光定量PCR具有经济、快速、特异性强等优点,在呼吸道病原体检测方面有巨大应用价值。 展开更多

关键词 呼吸道 病原体 多重实时荧光定量pcr

原文传递

多重实时荧光定量PCR方法在高危型人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA检测中的应用 被引量：10

13

作者 王晓明 戴卫健 +1 位作者 余道军 刘宏钱 《临床检验杂志》 CAS 2020年第11期841-844,共4页

目的建立一种基于多重实时荧光定量PCR(MRT-PCR)技术的可同时检测14种高危亚型人乳头瘤病毒(HPV16、18、31、33、35、39、52、45、51、56、58、59、66、68)癌基因E6/E7 mRNA的方法。方法对14种高危型HPV各自的E6/E7基因序列区域设计特... 目的建立一种基于多重实时荧光定量PCR(MRT-PCR)技术的可同时检测14种高危亚型人乳头瘤病毒(HPV16、18、31、33、35、39、52、45、51、56、58、59、66、68)癌基因E6/E7 mRNA的方法。方法对14种高危型HPV各自的E6/E7基因序列区域设计特异性引物和探针,配以优化的反应体系,形成HPV E6/E7 mRNA检测体系,评价方法检出限、特异性。收集223例临床样本,分别用自建的一步法MRT-PCR法与转录介导等温核酸扩增(TMA)技术(Aptima®HPV试剂盒)检测HPV E6/E7 mRNA,同时评估HPV E6/E7 mRNA检测结果与薄层液基细胞学检测、宫颈组织病理学检测结果的一致性。结果建立的检测方法对常见的低危型HPV无交叉检出,且对14种高危型HPV的检测限可达10~100 copies/μL。该方法检测223例临床标本的结果与Aptima®HPV检测结果相比,一致性较好(Kappa=0.910)。以组织病理结果为CINⅡ及以上的作为阳性,MRT-PCR法临床检测敏感性为84.0%,特异性为94.4%,阳性预测值为65.6%,阴性预测值为97.9%。结论建立的MRT-PCR方法具有特异性好、灵敏度高和稳定性好等优点,为HPV临床快速检测以及宫颈病变筛查提供了一个有效的技术平台。 展开更多

关键词 人乳头瘤病毒 高危型人乳头瘤病毒 E6/E7 mRNA 多重实时荧光定量pcr

下载PDF 职称材料

一种从羊奶中检测牛奶和大豆成分多重实时荧光定量PCR方法的建立 被引量：10

14

作者 范阳阳 张荦嘉 +5 位作者 刘艳艳 卞如如 霍胜楠 张卉 张全芳 步迅 《山东农业科学》 2016年第6期118-123,共6页

羊奶制品因其良好的营养功效备受消费者的青睐,也是乳制品主要掺假对象。本研究参考市场可能掺假现状,分别根据羊和牛线粒体基因组16S rRNA基因序列和大豆的KTi-S基因(GI:510514)序列,设计一对牛和羊特异性引物、一对大豆特异性引物以... 羊奶制品因其良好的营养功效备受消费者的青睐,也是乳制品主要掺假对象。本研究参考市场可能掺假现状,分别根据羊和牛线粒体基因组16S rRNA基因序列和大豆的KTi-S基因(GI:510514)序列,设计一对牛和羊特异性引物、一对大豆特异性引物以及相应的Taq Man-MGB探针,建立羊奶中牛奶和大豆成分多重实时荧光定量PCR检测方法,并引入内标质控有效保证检测体系的准确性。本检测体系对羊奶、牛奶及豆浆的基因组DNA检测敏感度为0.01 ng;对羊奶中掺入牛奶和豆浆的体积掺假检测灵敏度均为0.1%。因此,本研究建立的羊奶中牛奶和大豆成分多重实时荧光定量PCR检测体系具有通量大、灵敏度高、特异性好等优点,实现了对羊奶中其他源性成分快速、准确的检测,对保障相关产品市场安全具有重要意义。 展开更多

关键词 羊奶 牛奶 豆浆 多重实时荧光定量pcr

下载PDF 职称材料

检测EV71和EV-U的TaqMan-LNA探针多重荧光RT-PCR的建立 被引量：6

15

作者 茅凌翔 徐岚 +7 位作者 葛琴娟 鲍务新 杨静 吴斌 陈建国 徐顺高 黄新祥 许化溪 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期327-329,共3页

目的建立一种针对手足口病病原体的快速准确检测方法。方法利用TaqMan-LNA探针建立多重荧光定量RT-PCR方法,同时检测肠道病毒71型(EV71)和肠道病毒通用型(EV-U),用含有目的序列RNA的标准品制备标准曲线,对病毒进行准确定量,同时对该方... 目的建立一种针对手足口病病原体的快速准确检测方法。方法利用TaqMan-LNA探针建立多重荧光定量RT-PCR方法,同时检测肠道病毒71型(EV71)和肠道病毒通用型(EV-U),用含有目的序列RNA的标准品制备标准曲线,对病毒进行准确定量,同时对该方法的特异性、灵敏度、重复性进行评估。结果用TaqMan-LNA探针多重荧光RT-PCR法检测CoxA16、CoxB2、EV71病毒和其他人类病毒RNA,证实其特异性为100%;对EV71和EV-U的检测灵敏度均达到102拷贝/μl;将EV71和EV-U的RNA标准品进行重复性实验,其批内、批间变异系数分别为0.97%～2.02%和0.89%～2.13%。结论本方法灵敏度较高,特异性强,重复性好,适用于手足口病的临床检测。 展开更多

关键词 TaqMan-LNA探针 多重荧光定量RT-pcr 肠道病毒71型(EV71) 肠道病毒通用型(EV-U) 手足口病

下载PDF 职称材料

3种蜱传细菌性病原体多重实时荧光定量PCR法的建立

16

作者 胡伟超 李晋宇 +3 位作者 赵宁 刘起勇 温红玲 吴海霞 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS 2024年第3期334-338,共5页

目的建立一种多重实时荧光定量PCR法,同时检测常见蜱传病原体嗜吞噬细胞无形体、伯氏疏螺旋体及斑点热群立克次体(SFGR)。方法针对各病原体的保守区序列设计特异性引物及TaqMan探针,建立并优化多重实时荧光定量PCR反应体系,评价方法的... 目的建立一种多重实时荧光定量PCR法,同时检测常见蜱传病原体嗜吞噬细胞无形体、伯氏疏螺旋体及斑点热群立克次体(SFGR)。方法针对各病原体的保守区序列设计特异性引物及TaqMan探针,建立并优化多重实时荧光定量PCR反应体系,评价方法的特异性、灵敏度、重复性及对蜱样本的检测准确性。结果建立的多重实时荧光定量PCR法检测嗜吞噬细胞无形体、伯氏疏螺旋体、SFGR,与大肠埃希菌、问号钩端螺旋体、布鲁氏菌等病原体间无交叉反应,特异性良好;灵敏度均达到102拷贝/μl,重复性变异系数均<2.00%;蜱样本检测中,多重实时荧光定量PCR法与单重实时荧光定量PCR法检测结果一致性为100%。结论研究建立的3种蜱传细菌性病原体多重实时荧光定量PCR法特异性好、灵敏度高,为蜱传病原体的检测提供了技术手段。 展开更多

关键词 嗜吞噬细胞无形体 伯氏疏螺旋体 斑点热群立克次体 多重实时荧光定量pcr法

原文传递

猪链球菌和猪多杀性巴氏杆菌多重实时荧光PCR方法的建立 被引量：5

17

作者 刘艳艳 吕婷婷 +7 位作者 吴家强 刘飞 任素芳 张玉玉 郝小静 蒋皓静 李华 于江 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期5112-5125,共14页

【背景】猪链球菌(Streptococcus suis,SS)和猪多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)都是能引起宿主致病的人畜共患病原菌,常出现混合感染,临床诊断上易与猪瘟、猪丹毒等混淆。【目的】快速、有效鉴别猪链球菌病和猪多杀性巴氏杆菌... 【背景】猪链球菌(Streptococcus suis,SS)和猪多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)都是能引起宿主致病的人畜共患病原菌,常出现混合感染,临床诊断上易与猪瘟、猪丹毒等混淆。【目的】快速、有效鉴别猪链球菌病和猪多杀性巴氏杆菌病,建立一种能同时检测2种病原的多重实时荧光定量PCR检测方法。【方法】基于猪链球菌的gdh基因和猪多杀性巴氏杆菌的plpE基因,设计2对特异引物及TaqMan探针,以细菌16S rRNA基因设计通用引物及探针,通过对反应条件优化,建立了一种能同时检测猪链球菌和猪多杀性巴氏杆菌的多重实时荧光定量PCR检测方法。【结果】该方法能够特异性地检测猪链球菌和猪多杀性巴氏杆菌,与细菌分离后的测序结果验证完全一致。此方法对重组质粒标准品的最低检出浓度分别为4.53×10^(2)copies/μL和3.97×10^(2) copies/μL。重复性试验结果显示,该方法的组内和组间变异系数均小于3%。【结论】本实验所建立的方法准确、简便、可靠,能够用于2种病原菌的同时检测,为猪链球菌病和猪多杀性巴氏杆菌病的防治提供了有效的检测工具,具有重要的流行病学意义和临床应用价值。 展开更多

关键词 猪链球菌(SS) 猪多杀性巴氏杆菌(Pm) 多重实时荧光定量pcr

原文传递

改良多重实时荧光定量PCR法测定抑癌基因MGMT、p16、CDH13和RASSF1A甲基化在肺癌早期诊断中的作用 被引量：6

18

作者 钟云华 李燕 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2019年第1期33-38,共6页

目的:建立改良多重实时荧光定量PCR法,检测抑癌基因MGMR、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化,探讨其在肺癌早期诊断中的应用。方法:选取30例病理确诊为肺癌的患者作为肺癌组,30例病理确诊为良性病变的患者作为对照组。建立改良实时荧光定量... 目的:建立改良多重实时荧光定量PCR法,检测抑癌基因MGMR、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化,探讨其在肺癌早期诊断中的应用。方法:选取30例病理确诊为肺癌的患者作为肺癌组,30例病理确诊为良性病变的患者作为对照组。建立改良实时荧光定量PCR体系。检测受试者血清MGMT、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化,对比两组基因甲基化阳性率,计算四项基因甲基化单独及联合用于肺癌早期诊断的敏感度和特异度。结果:肺癌组受试者血清MGMT、p16、CDH13和RASSF1A显著高于对照组(P<0.05);MGMT、p16、CDH13和RASSF1A四项基因甲基化联合检测用于肺癌早期诊断的敏感度和特异度显著高于单项指标检测(P<0.05)。结论:建立了多重实时荧光定量PCR法用于MGMT、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化检测,联合检测用于肺癌早期诊断具有较高的敏感度和特异度。 展开更多

关键词 改良多重实时荧光定量pcr法 抑癌基因 MGMT P16 CDH13 RASSF1A 肺癌早期诊断

下载PDF 职称材料

多重RT-PCR快速检测转基因油菜 被引量：1

19

作者 钟婷婷 郭诗芬 +2 位作者 卢文斌 张振乾 肖钢 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2023年第5期1576-1582,共7页

全球转基因油菜的数量和种类日益增多,其所带来的潜在风险也备受人们的关注,迫切需要开发一套精准、高效、便捷检测转基因油菜的技术体系。本研究针对花椰菜花叶病毒35 S启动子(pCaMV 35S)、膦丝菌素乙酰转移酶(bar)、5-莽草酸-3-磷酸... 全球转基因油菜的数量和种类日益增多,其所带来的潜在风险也备受人们的关注,迫切需要开发一套精准、高效、便捷检测转基因油菜的技术体系。本研究针对花椰菜花叶病毒35 S启动子(pCaMV 35S)、膦丝菌素乙酰转移酶(bar)、5-莽草酸-3-磷酸合成酶基因(epsps)3个目标基因的序列,以及油菜内源基因cruciferinA (CruA)序列设计四重实时荧光定量聚合酶链式反应(Multiplex real-time fluorescence quantitative,PCR)特异性强的引物和多重荧光探针。通过对多个转基因油菜材料验证,结果表明该方法检测特异性强,重复性好,4个基因的扩增效率都在90%~105%之间,标准曲线相关系数R2都大于0.99。转基因成分bar,epsps和pCaMV35S的检出限为0.1 ng/μL,内参基因CruA的检出限为0.01 ng/μL。本研究建立了一种能快速、高效、准确检测转基因油菜四重实时荧光定量PCR技术的检测体系。 展开更多

关键词 转基因油菜 多重实时荧光定量pcr 检测

原文传递

梅迪-维斯纳病毒和羊痘病毒多联实时定量PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：5

20

作者 徐军 孙志华 +4 位作者 刘娟 孟茹 戴莉 段晓东 叶志辉 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2012年第4期448-451,共4页

利用多联实时荧光定量PCR技术建立了一种梅迪-维斯纳病毒和羊痘病毒快速鉴别诊断方法。分别设计并合成梅迪-维斯纳病毒和羊痘病毒基因的引物,建立多联实时定量PCR快速鉴别诊断方法;对所建立的方法进行稳定性、特异性和敏感性试验;并用... 利用多联实时荧光定量PCR技术建立了一种梅迪-维斯纳病毒和羊痘病毒快速鉴别诊断方法。分别设计并合成梅迪-维斯纳病毒和羊痘病毒基因的引物,建立多联实时定量PCR快速鉴别诊断方法;对所建立的方法进行稳定性、特异性和敏感性试验;并用所建立的方法对临床样品进行检测。结果显示:设计的引物敏感性和特异性较好,该多联实时荧光定量PCR方法中梅迪-维斯纳病毒Tm值为89～90℃,羊痘病毒Tm值为91～92℃,对其他供试的菌株则为阴性,并且该方法对梅迪-维斯纳病毒的DNA最低检出量为25拷贝/μL,羊痘病毒为40拷贝/μL,两病原都存在时为80拷贝/μL。研究结果表明本实验建立的方法可用于同时检测梅迪-维斯纳病毒和羊痘病毒,为动物检疫提供了一种有效的检测方法。 展开更多

关键词 梅迪-维斯纳病毒 羊痘病毒 多联实时荧光定量pcr

下载PDF 职称材料