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丙型肝炎病毒HVR1抗血清体外阻断HCV的感染 被引量：13
1
作者 宋志强 郝飞 +2 位作者 王永刚 闵峰 王宇明 《世界华人消化杂志》 CAS 2000年第2期171-174,共4页
目的 体外观察含HCV高变区1多抗原肽(MAP)及其抗血清对HCV感染有无阻断作用。 方法 将前期合成的MAP及其抗血清和HCV感染血清按不同比例充分混合并在37℃下孵育2h或4℃下孵育12h,再将此混合血清接种7721细胞,分别以逆转录-聚合酶链反应... 目的 体外观察含HCV高变区1多抗原肽(MAP)及其抗血清对HCV感染有无阻断作用。 方法 将前期合成的MAP及其抗血清和HCV感染血清按不同比例充分混合并在37℃下孵育2h或4℃下孵育12h,再将此混合血清接种7721细胞,分别以逆转录-聚合酶链反应、免疫组化、原位杂交检测细胞的感染情况。 结果 各比例混合的阻断血清组在孵育后细胞和培养上清中均可检出HCV RNA;免疫组化证实有表达HCV抗原的阳性细胞。 结论 前期合成的HCV包膜糖蛋白及其抗血清在体外不能明确阻断HCV感染/吸附肝细胞。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 细胞模型 多抗原肽 疫苗
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Fmoc固相直接法合成Aβ_(1-15)肽疫苗及其免疫活性 被引量：4
2
作者 杨学森 汪华侨 +5 位作者 袁群芳 谢瑶 姚志彬 叶小舟 吴继明 邹爱国 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期121-125,共5页
【目的】探讨实验室合成Aβ1-15肽疫苗的方法,并对其进行鉴定。【方法】选取Aβ42主要包含B细胞抗原决定簇的片段Aβ1-15,采用8分支多重抗原肽系统,以Fmoc固相直接法合成MAPAβ1-15;用MAPAβ1-15疫苗免疫接种C57BL/6小鼠,ELISA检测血清... 【目的】探讨实验室合成Aβ1-15肽疫苗的方法,并对其进行鉴定。【方法】选取Aβ42主要包含B细胞抗原决定簇的片段Aβ1-15,采用8分支多重抗原肽系统,以Fmoc固相直接法合成MAPAβ1-15;用MAPAβ1-15疫苗免疫接种C57BL/6小鼠,ELISA检测血清特异性抗Aβ抗体。【结果】用Fmoc法直接合成方法成功制备MAPAβ1-15疫苗,质谱检测其主要离子峰的相对分子质量为15458,与理论相对分子质量15451十分接近,但还有其它不同分子质量的离子峰存在。以合成的MAPAβ1-15免疫C57BL/6小鼠后,可产生高滴度的特异性抗Aβ42抗体,第3次接种后抗体平均滴度为1:467±196,第5次免疫接种后,平均滴度为1∶4367±1120。对照组的血清抗体检测基本无明显变化。【结论】Fmoc固相直接法可成功合成出MAPAβ1-15,合成出的MAPAβ1-15具有很好免疫活性。 展开更多
关键词 Fmoc固相多肽直接合成 多重抗原肽 Aβ1-15疫苗 阿尔茨海默病
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不可分型流感嗜血杆菌OMP6优势T-B联合抗原表位及其免疫原性研究 被引量：4
3
作者 张颖颖 王荣山 +2 位作者 陈旭 金洪星 严杰 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1053-1059,共7页
目的了解无荚膜不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)临床菌株P6外膜蛋白(OMP6)编码基因(omp6)分布及其序列保守性,筛选并鉴定OMP6序列中优势T和B细胞(T-B)联合抗原表位及其免疫原性。方法采用PCR扩增NTHi临床菌株全长omp6基因,T-A克隆后测序。... 目的了解无荚膜不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)临床菌株P6外膜蛋白(OMP6)编码基因(omp6)分布及其序列保守性,筛选并鉴定OMP6序列中优势T和B细胞(T-B)联合抗原表位及其免疫原性。方法采用PCR扩增NTHi临床菌株全长omp6基因,T-A克隆后测序。采用生物信息学软件分析OMP6序列保守性与膜定位并预测其T-B联合抗原表位。采用噬菌体展示联合免疫印迹法和ELISA分别检测重组噬菌体PIII蛋白(rPIII)展示的OMP6中T-B联合抗原表位肽免疫原性和免疫反应性。结果 35株NTHi临床菌株均能检出omp6基因,其核苷酸和氨基酸序列相似性分别为98.3%~100%和99.3%~100%。OMP6为外膜表面蛋白,具有OMP6-2-25、OMP6-61-86和OMP6-98-126三个预测T-B联合抗原表位。Western Blot和ELISA结果显示,OMP6-2-25能与NTHi抗血清产生较强的杂交条带,96.9%(59/62)、69.4%(43/62)和74.2%(46/62)NTHi感染患儿血清标本OMP6-2-25、OMP6-61-86和OMP6-98-126抗原表位肽抗体阳性。结论 OMP6是分布广泛且序列保守的NTHi跨膜蛋白,OMP6-2-25为OMP6优势T-B联合抗原表位,可作为NTHi多抗原肽疫苗的候选表位。 展开更多
关键词 不可分型流感嗜血杆菌 P6外膜蛋白 优势抗原表位 免疫原性 多抗原肽疫苗
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基于幽门螺杆菌UreB优势抗原表位多抗原肽疫苗制备及其免疫保护作用 被引量：2
4
作者 王艳芳 王欢 +2 位作者 张慧 严杰 阮萍 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期268-275,共8页
目的构建串联式幽门螺杆菌UreB抗原优势表位UreB322和UreB527原核重组表达系统，制备UreB322和UreB527表位与多肽载体Poly—Asp．Lys的多抗原肽（MAP）疫苗并确定其免疫原性和免疫保护性。方法采用连接引物PCR构建含肠激酶（EK）位点的... 目的构建串联式幽门螺杆菌UreB抗原优势表位UreB322和UreB527原核重组表达系统，制备UreB322和UreB527表位与多肽载体Poly—Asp．Lys的多抗原肽（MAP）疫苗并确定其免疫原性和免疫保护性。方法采用连接引物PCR构建含肠激酶（EK）位点的串联式UreB322和UreB527表位基因及其原核表达系统。表达的目的重组融合蛋白8×[rEK-UreB322-EK-UreB527-EK]经EK水解后用SephadexG-25柱分离rUreB322-EK和rUreB527-EK片段。采用碳二亚胺法将rUreB322-EK、rUreB527-EK与Poly．Asp—Lys载体分子交联，制备出多抗原肽疫苗MAP—rUreB322／B527。采用ELISA和Westernblot分别检测各重组表位肽及MAP-rUreB322／527的抗原性和免疫反应性。采用幽门螺杆菌SS1株感染BALB／c小鼠模型检测MAP—rUreB322／527免疫保护效果。结果获得了8次重复串联的UreB322和UreB527编码基因及其原核表达系统，目的融合蛋白8x[rEK—UreB322-EK—rUreB527-EK]表达量可达细菌总蛋白的48％。肠激酶可将目的融合蛋白完全水解为rUreB322-EK和rUreB527-EK片段。rUreB322-EK和rUreB527-EK与Poly—Asp-Lys交联率高达92．5％。幽门螺杆菌全菌抗体及rUreB．IgG均能识别rUreB322．EK、rUreB527．EK和MAP．rUreB322／527并与之结合。MAP．rUreB322／527免疫小鼠血清抗体水平明显高于rUreB（P〈0．05）。50或100p,gMAP—rUreB322／527对幽门螺杆菌SS1株感染小鼠的保护率（83．3％和91．7％）明显高于等量rUreB（41．7％和50．0％）（P〈0．05）。结论本研究成功地构建了幽门螺杆菌UreB抗原优势表位UreB322和UreB527重复串联式编码基因及其原核表达系统，基于UreB优势抗原表位的多抗原肽疫苗MAP—rUreB322／527能显著提高免疫保护效果。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 尿素酶B亚单位基因 优势抗原表位 多抗原肽疫苗 免疫保护
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不可分型流感嗜血杆菌Hap黏附素T-B优势抗原表位及其免疫原性研究
5
作者 吴中秀 王荣山 +2 位作者 黄燕颖 金洪星 严杰 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期594-600,共7页
目的 了解无荚膜型流感嗜血杆菌（NTHi）临床菌株中Hap黏附素编码基因（hap）分布及其序列保守性,筛选并鉴定Hap蛋白优势T和B细胞（T-B）联合抗原表位及其免疫原性.方法采用生物信息学软件分析NTHi菌株hap基因序列保守性并预测其T-B联... 目的 了解无荚膜型流感嗜血杆菌（NTHi）临床菌株中Hap黏附素编码基因（hap）分布及其序列保守性,筛选并鉴定Hap蛋白优势T和B细胞（T-B）联合抗原表位及其免疫原性.方法采用生物信息学软件分析NTHi菌株hap基因序列保守性并预测其T-B联合抗原表位.采用PCR扩增NTHi临床菌株hap基因5′端156 bp和3′端855 bp片段（hap-5′-156和hap-3′-855）后测序.构建Hap蛋白N端52 aa和C端285 aa片段（Hap-N52和Hap-C285）7个T-B联合抗原表位肽噬菌体展示系统.采用Western blot和ELISA分别检测重组噬菌体PⅢ蛋白（rPⅢ）展示的T-B联合抗原表位肽抗原性和免疫反应性.结果 hap基因产物为NTHi膜表面蛋白.不同NTHi菌株hap基因5′端156 pb和3′端855 bp序列相对保守,中间区变异较大.56株NTHi临床菌株均能检出hap-5′-156和hap-3′-855片段,其核苷酸和氨基酸序列相似性为92.3％～100％.Hap-N52片段中Hap-N5-24以及Hap-C285片段中Hap-C4-27、Hap-C28-47、Hap-C114-129、Hap-C150-173、Hap-C200-227和Hap-C241-267为评分较高且变异较小的预测T-B联合抗原表位.Western blot和ELISA检测结果显示,rPⅢ展示的Hap-C4-27或Hap-C150-173表位肽能与NTHi抗血清产生较强的杂交条带且96.9％（63/65）和92.3％（60/65）NTHi感染患儿血清标本相应抗体阳性.结论 hap基因在NTHi临床菌株中分布广泛且5′端156 pb和3′端855 bp序列保守.Hap-C4-27和Hap-C150-173为Hap蛋白优势T-B联合抗原表位,可作为NTHi多抗原肽疫苗的候选表位. 展开更多
关键词 不可分型流感嗜血杆菌 Hap黏附素 优势抗原表位 免疫原性 多抗原肽疫苗
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肝素酶特异性细胞毒T淋巴细胞表位多抗原肽负载的树突状细胞疫苗体外抗肿瘤免疫效应研究 被引量：4
6
作者 王国珍 汤旭东 +5 位作者 吴玉云 李宁 李长珠 陈陵 房殿春 杨仕明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期761-764,共4页
目的研究肝素酶(heparanase,Hpa)细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位多抗原肽(multi-ple antigen peptides,MAP)疫苗能否诱导更强的Hpa特异性CTL反应。方法 HLA-A2.1限制性肝素酶CTL表位多抗原肽负载正常人外周血来源(per... 目的研究肝素酶(heparanase,Hpa)细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位多抗原肽(multi-ple antigen peptides,MAP)疫苗能否诱导更强的Hpa特异性CTL反应。方法 HLA-A2.1限制性肝素酶CTL表位多抗原肽负载正常人外周血来源(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)树突状细胞(dendritic cell,DC),诱导CTL,采用4 h标准51Cr释放实验检测上述CTL对不同肿瘤细胞的免疫杀伤效应;采用ELISPOT实验检测效应细胞分泌IFN-γ的能力。结果肝素酶CTL表位MAP疫苗诱导的CTL对Hpa阳性且HLA-A2.1匹配的KATO-Ⅲ胃癌细胞、U2OS骨肉瘤细胞、SW480结肠癌细胞具有杀伤效应,且其杀伤效应强于相应的单肽,在最大效应细胞/靶细胞(effector/target,E/T)时高出率均大于16%;其对HLA-A2.1阴性的HepG2肝癌细胞和Hpa阴性的MCF-7乳腺癌细胞不具有杀伤效应,但是对MCF-7/Hpa乳腺癌细胞和HepG2/HLA-A2肝癌细胞具有杀伤效应,且其杀伤效应强于相应的单肽,在最大E/T时高出率均大于18%;其对自体淋巴细胞和DC不具有杀伤效应。另一方面人肝素酶CTL表位MAP疫苗诱导的IFN-γ分泌水平强于相应的单肽。结论肝素酶CTL表位MAP疫苗能激发较相应单肽更强的特异性和非特异性抗肿瘤效应。 展开更多
关键词 肝素酶 CTL表位 多抗原肽 树突状细胞 肿瘤疫苗
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人端粒酶逆转录酶表位多抗原肽疫苗的体外抗肿瘤免疫效应研究 被引量：2
7
作者 廖忠莉 汤旭东 +6 位作者 王国珍 周媛 杨武晨 周圆圆 覃勇 胡建 郭红 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1035-1039,共5页
目的检测基于人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位R540的多抗原肽(multiple antigen peptide,MAP)的体外抗肿瘤活性。方法将HLA-A2限制性hTERT CTL表位... 目的检测基于人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位R540的多抗原肽(multiple antigen peptide,MAP)的体外抗肿瘤活性。方法将HLA-A2限制性hTERT CTL表位的多抗原肽负载正常人外周血来源(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)的树突细胞,并将负载多肽的树突细胞刺激淋巴细胞产生hTERT特异性的CTL细胞,采用51Cr释放实验检测所诱导的CTL细胞体外抗肿瘤杀伤效应。结果 hTERT特异性CTL表位的多抗原肽所诱导的CTL细胞对hTERT及HLA-A2表达均阳性的肿瘤细胞杀伤作用较之其单肽疫苗杀伤活性明显增强,在最大效靶比(E/T)80∶1时,高出率均大于25%。而对HLA-A2阴性的HepG2肝癌细胞及hTERT阴性的U2OS骨肉瘤细胞不具有杀伤效应,同时其对自体淋巴细胞和树突细胞也不具有杀伤效应。结论 HLA-A2限制性hTERT CTL表位多抗原肽相较于其单肽能在体外诱导更强的抗肿瘤免疫效应。 展开更多
关键词 人端粒酶逆转录酶 多抗原肽 肿瘤疫苗
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间接偶联法合成Aβ_(1-15)多重抗原肽疫苗及其免疫学活性
8
作者 杨学森 汪华侨 +3 位作者 姚志彬 叶小舟 吴继明 邹爱国 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期391-394,共4页
目的探索合成Aβ1-15重抗原肽疫苗的方法,并对其免疫学活性进行鉴定。方法采用间接偶联法合成8分支Aβ1-15重抗原肽（MAP）,通过高效反相液相色谱（RP-HPLC）、SDS-PAGE以及氨基酸成分分析对其进行初步鉴定。以合成的MAP Aβ1-15C57BL/... 目的探索合成Aβ1-15重抗原肽疫苗的方法,并对其免疫学活性进行鉴定。方法采用间接偶联法合成8分支Aβ1-15重抗原肽（MAP）,通过高效反相液相色谱（RP-HPLC）、SDS-PAGE以及氨基酸成分分析对其进行初步鉴定。以合成的MAP Aβ1-15C57BL/6小鼠,用ELESA法检测血清特异性抗Aβ抗体。结果间接偶联法合成的MAP Aβ1-15RP-HPLC层析后,呈现为一宽大主峰。SDS-PAGE检测显示,共有8条蛋白带,条带梯度比较均匀,分别为1～8分支的MAP Aβ1-15基酸组份及含量基本与Aβ1-15肽的序列一致。以合成的MAP Aβ1-15免疫C57BL/6小鼠后,可产生高滴度的特异性抗Aβ抗体。结论间接偶联法可成功地合成MAP Aβ1-15,且具有很好的免疫学活性,但合成的MAP产物难以纯化。 展开更多
关键词 间接偶联法 多肽合成 Aβ1-15多重抗原肽疫苗 免疫学活性
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