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不同剂量X射线对细胞周期检测点和细胞凋亡的影响 被引量:20
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作者 谢大兴 冯永东 +3 位作者 张鹏 吴剑宏 陶德定 龚建平 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期798-800,共3页
目的比较G1期检测点和G2期检测点两种检测点的放射敏感性及细胞凋亡发生规律。方法野生型p53功能正常的人类急性淋巴细胞性白血病(MOLT4)细胞株在体外对数生长期给予不同剂量(2、5、10、20GY)的X射线照射后,继续培养0、3、6、9h,随后分... 目的比较G1期检测点和G2期检测点两种检测点的放射敏感性及细胞凋亡发生规律。方法野生型p53功能正常的人类急性淋巴细胞性白血病(MOLT4)细胞株在体外对数生长期给予不同剂量(2、5、10、20GY)的X射线照射后,继续培养0、3、6、9h,随后分成两组:一组细胞收获并固定,用Cyclins/DNA流式细胞术对CyclinE,CyclinA和CyclinB1分别进行标记,Cellquest软件分析;另一组同步采用膜联蛋白V/碘化丙锭(API技术)和AnnexinV/PI技术分析细胞凋亡。结果小剂量X射线(2、5GY)照射后,MOLT4细胞G2期检测点被激活,表现为:照射后3~9h,G2期Cyclins(CyclinA和CyclinB1)迅速升高并累积于G2期,G1期Cyclins(CyclinE)含量逐渐减少;9h时G2期细胞出现明显凋亡(凋亡率为9.5%)。大剂量X射线(10、20GY)照射后,细胞G1期检测点被激活,表现为:照射后3~9h,G1期Cyclins(CyclinE)持续性升高并累积于G1期,G2期Cyclins(CyclinA和CyclinB1)含量下降;且3h时G1期细胞便出现明显凋亡(凋亡率为10.28%)。结论不同剂量X射线可激活不同的细胞周期检测点,并诱导相应周期时相内的细胞凋亡,细胞凋亡率的高低及诱导速度呈现剂量依赖性。 展开更多
关键词 细胞周期检测点 不同剂量 X射线 急性淋巴细胞性白血病 molt-4细胞 CYCLINS 野生型p53 G1期 放射敏感性 对数生长期 x射线照射 流式细胞术 膜联蛋白V 剂量依赖性 细胞凋亡率 功能正常 继续培养 软件分析 诱导速度 I技术
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应用基因芯片分析曲古菌素A促人白血病细胞株Molt-4凋亡的机制 被引量:6
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作者 洪振亚 易莉莎 +3 位作者 苗新宇 卢运萍 周剑锋 刘文励 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第8期946-953,共8页
背景与目的:研究表明组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylase,HDAC)抑制剂曲古菌素A(trichostatinA,TSA)能以较低浓度诱导多种肿瘤细胞凋亡,但具体机制不甚明了。本实验拟研究TSA诱导人白血病细胞株Molt-4凋亡的作用及其分子机制。方法:... 背景与目的:研究表明组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylase,HDAC)抑制剂曲古菌素A(trichostatinA,TSA)能以较低浓度诱导多种肿瘤细胞凋亡,但具体机制不甚明了。本实验拟研究TSA诱导人白血病细胞株Molt-4凋亡的作用及其分子机制。方法:应用细胞培养、MTT、PI单标流式细胞术、DNAladder观察TSA诱导Molt-4细胞和健康人外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcell,PBMC)凋亡的作用,用基因芯片(microarray)、逆转录聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)和Westernblot等方法检测特定浓度TSA作用Molt-4细胞一定时间后基因表达的差异。结果:TSA能以时间、浓度依赖性方式诱导Molt-4细胞凋亡,相同浓度和时间范围内TSA对PBMC无明显的诱导凋亡作用。TSA处理9h,基因芯片分析发现Molt-4细胞中表达下调的基因有313个。下调基因编码产物包括信号转导分子、转录因子、酶、受体等,其生物学功能包括调节细胞生长、分化发育、凋亡等。其中STAT5A下调80.4%,MYC下调77.3%,ikaros下调83.1%,半定量RT-PCR验证均显示TSA作用9h后这些基因的表达下调,同时STAT5A及MYC蛋白在TSA作用24h时表达也明显降低。结论:TSA能诱导Molt-4细胞凋亡并抑制其增殖,但对PBMC无明显作用。TSA对Molt-4细胞的这种选择性诱导凋亡和抑制增殖的机制与促进增殖、抗凋亡基因的变化有关。 展开更多
关键词 曲古菌素A molt-4细胞 凋亡 基因芯片 基因差异表达
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PHI调控Molt-4细胞组蛋白甲基化诱导p15基因去甲基化后再表达 被引量:7
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作者 马旭东 黄轶群 +1 位作者 蒋少红 郑瑞玑 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2010年第3期583-587,共5页
本研究探讨异硫氰酸苯己酯(PHI)对急性T淋巴细胞性白血病Molt-4细胞组蛋白H3K4、H3K9甲基化,及p15基因的去甲基化的调控作用及诱导沉默基因重新表达的机制。用Western blot方法检测PHI作用后Molt-4细胞的组蛋白H3K4、H3K9甲基化状态及P1... 本研究探讨异硫氰酸苯己酯(PHI)对急性T淋巴细胞性白血病Molt-4细胞组蛋白H3K4、H3K9甲基化,及p15基因的去甲基化的调控作用及诱导沉默基因重新表达的机制。用Western blot方法检测PHI作用后Molt-4细胞的组蛋白H3K4、H3K9甲基化状态及P15蛋白的表达的变化;应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测PHI作用前后Molt-4细胞株p15基因甲基化状态的变化;半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Molt-4细胞经过PHI处理后p15基因的mRNA的表达变化。结果表明,PHI作用于Molt-4细胞可增强组蛋白H3K4甲基化表达,抑制组蛋白H3K9甲基化表达,并呈浓度及时间依赖性;PHI作用于Molt-4细胞5天后,p15基因的甲基化程度减弱,p15基因的异常高甲基化现象被逆转,沉默的p15基因重新表达;p15 mRNA、P15蛋白表达增加,并呈浓度依赖性。结论:PHI可能通过特异性调节组蛋白H3K4、H3K9甲基化水平,引起染色体空间结构发生变化,使p15基因的CPG岛去甲基化,从而诱导p15基因重新表达。 展开更多
关键词 异硫氰酸苯己酯 molt-4细胞 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 组蛋白甲基化 p15基因去甲基化
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联合放/化疗对细胞周期特异性凋亡的影响 被引量:6
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作者 喻春钊 陶德定 +3 位作者 冯永东 余源 吴剑宏 龚建平 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期10-14,共5页
目的 以急性T淋巴细胞白血病细胞株MOLT 4为模型,探讨作用于细胞周期相同或不同时相的放疗/化疗药物联合应用时是否具有抗癌增效作用、引起细胞凋亡的周期时相性是否发生改变及对细胞周期检测点(ckeckpoint)的影响。方法 分别将作用于... 目的 以急性T淋巴细胞白血病细胞株MOLT 4为模型,探讨作用于细胞周期相同或不同时相的放疗/化疗药物联合应用时是否具有抗癌增效作用、引起细胞凋亡的周期时相性是否发生改变及对细胞周期检测点(ckeckpoint)的影响。方法 分别将作用于G1 期的X ray(10Gy)及药物金克(JinKe) (2.0g/L);S期的喜树碱(CPT) (0.25μmol/L)及阿糖胞苷(Ara C) (1.00μmol/L);G2 /M期的药物威猛(Vm 26) (0.5μg/mL)及长春花碱(Vinblastine, Vin) (0.05μg/mL)分别联合分组应用对其进行不同时间段的培养,采用流式细胞术中的API法对凋亡细胞进行定量并对凋亡细胞的周期时相性进行定位检测。结果 G1 期的药物JinKe和X ray(10Gy)联合应用时,具有协同作用,其作用点仍以G1 期细胞为主。S期的两种药物CPT和Ara C联合应用时,两者也具有协同作用,其细胞周期作用点仍以S期为主。作用于G2 /M期的两种药物VM 26和Vin联合应用时,两者还是具有协同作用,但其细胞周期作用点几乎发生在细胞周期的所有时相。作用于G1 期的药物JinKe和作用于S期的药物CPT联合应用, 具有增强效应, 联合应用时其细胞周期作用点以G1 期和S期细胞为主。作用于G1 期的药物金克和作用于G2 /M期的药物VM 26联合应用,两者具有增强效应。作用于G2 展开更多
关键词 肿瘤 molt-4细胞 药物疗法 联合 放射疗法 细胞周期 细胞凋亡
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携带CUEDC1基因的慢病毒载体的构建及其对MOLT-4细胞株增殖和集落形成能力的影响 被引量:4
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作者 庄万传 吴庆运 +1 位作者 孟凡静 徐开林 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期1257-1262,共6页
目的:构建过表达人CUEDC1的慢病毒载体pCDH-CUEDC1,利用慢病毒介导的感染获得稳定表达重组质粒的MOLT-4细胞,分析过表达CUEDC1对MOLT-4细胞增殖和集落形成能力的影响。方法:利用RT-PCR的方法获得CUEDC1全长片段,将CUEDC1 DNA片段酶切回... 目的:构建过表达人CUEDC1的慢病毒载体pCDH-CUEDC1,利用慢病毒介导的感染获得稳定表达重组质粒的MOLT-4细胞,分析过表达CUEDC1对MOLT-4细胞增殖和集落形成能力的影响。方法:利用RT-PCR的方法获得CUEDC1全长片段,将CUEDC1 DNA片段酶切回收后克隆至慢病毒转移质粒pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFPT2A-Puro(以下简称pCDH),获得pCDH-CUEDC1慢病毒重组质粒。经三质粒包装系统包装后获得高滴度慢病毒颗粒并感染人白血病细胞系MOLT-4,通过流式细胞仪分选获得稳定表达的白血病细胞系,应用real-time PCR和Western blot方法分别检测稳定转染细胞系的CUEDC1 mRNA和CUEDC1的表达。应用CCK-8法和集落形成试验测定CUEDC1对MOLT-4细胞增殖和集落形成能力的影响。结果:经限制性内切酶检测及基因测序证实成功构建了携带CUEDC1的重组慢病毒载体;病毒感染MOLT-4细胞后经流式细胞仪分选获得GFP阳性细胞。实时定量PCR及Western blot证实,病毒感染后CUEDC1的mRNA和蛋白表达上调;CCK-8法及集落形成试验显示,过表达CUEDC1促进MOLT-4细胞的增殖和集落形成能力,与对照组相比,均有统计学差异(P<0.05)。结论:成功构建了表达CUEDC1的慢病毒载体,CUEDC1可以促进MOLT-4细胞的增殖和集落形成能力。 展开更多
关键词 CUEDC1 慢病毒载体 白血病 载体构建 molt-4细胞
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长春花碱诱导MOLT-4细胞产生M期细胞阻滞的初步研究 被引量:3
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作者 钟以胜 潘长穿 +4 位作者 金昌男 林建军 熊共鹏 张建溪 龚建平 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第2期358-362,共5页
本研究探讨化疗药物M期阻滞剂长春花碱(vinblastine,VLS)对MOLT-4急性淋巴细胞白血病细胞株产生的生物学影响并分析其意义。0.05μg/ml的VLS诱导MOLT-4细胞0-12小时产生M期细胞阻滞和/或细胞凋亡,流式细胞术检测DNA直方图和共聚焦显微... 本研究探讨化疗药物M期阻滞剂长春花碱(vinblastine,VLS)对MOLT-4急性淋巴细胞白血病细胞株产生的生物学影响并分析其意义。0.05μg/ml的VLS诱导MOLT-4细胞0-12小时产生M期细胞阻滞和/或细胞凋亡,流式细胞术检测DNA直方图和共聚焦显微镜观测细胞形态,采用阻滞增长率、阻滞效率、凋亡率及形态学指标分析阻滞前后的细胞周期分布、凋亡和细胞形态变化。结果表明,细胞阻滞可不伴随有凋亡率的显著增加;细胞阻滞的流式DNA直方图呈时间依赖的细胞周期分布动态改变,阻滞程度可量化;M期阻滞伴随有S期细胞堆栈;阻滞后细胞增殖率减低;M期阻滞细胞具有特征性细胞分裂的形态学特征。结论:长春花碱能单独诱导MOLT-4细胞M期阻滞,M期细胞阻滞的流式细胞检测和形态学特征的研究有助于进一步研究细胞阻滞与凋亡、检测点机制和抗癌新药开发提供参考。 展开更多
关键词 细胞阻滞 细胞周期 细胞凋亡 长春花碱 molt-4细胞
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Wnt/β-catenin信号通路在白藜芦醇抗急性T淋巴细胞白血病中的作用机制研究 被引量:2
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作者 史敏 李伊瑶 +4 位作者 亢培颖 王少华 王文静 张媛媛 李永军 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2023年第1期50-57,共8页
目的:通过细胞水平和动物模型探讨Wnt/β-catenin信号通路在白藜芦醇体内外抗急性T淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)中的作用及其可能机制。方法:细胞实验(人淋巴细胞白血病Molt-4和Jurkat细胞)分为空白对照... 目的:通过细胞水平和动物模型探讨Wnt/β-catenin信号通路在白藜芦醇体内外抗急性T淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)中的作用及其可能机制。方法:细胞实验(人淋巴细胞白血病Molt-4和Jurkat细胞)分为空白对照组(Control组)、二甲基亚砜组(DMSO组)和白藜芦醇处理组(Res组),动物实验分为正常对照组(Control组)、T-ALL模型组(T-ALL组)和白藜芦醇处理组(Res组)。采用CCK-8法检测白藜芦醇对Molt-4和Jurkat细胞增殖能力的影响,选取适合的给药浓度进行后续实验;尾静脉注射ICN1-GFP^(+)T-ALL细胞建立T-ALL小鼠模型;采用流式细胞术检测小鼠外周血中ICN1-GFP^(+)T-ALL细胞百分比,监测T-ALL小鼠造模后的一般情况;应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)分别检测细胞和小鼠脾脏组织中c-Myc和Cyclin D1 mRNA的表达水平;应用蛋白免疫印迹法(Western Blot法)分别检测细胞和小鼠脾脏组织中β-catenin、TCF-1、LEF-1、c-Myc和Cyclin D1的蛋白表达水平。结果:白藜芦醇明显抑制Molt-4和Jurkat细胞增殖能力(P<0.01),抑制作用随白藜芦醇浓度增加逐渐增强(P<0.01);经白藜芦醇处理后,Molt-4和Jurkat细胞中c-Myc和Cyclin D1 mRNA表达水平明显降低(P<0.01),β-catenin、TCF-1、LEF-1及其靶蛋白c-Myc和Cyclin D1表达水平均显著降低(P<0.05);T-ALL小鼠脾脏组织中c-Myc和Cyclin D1 mRNA表达水平显著增高(P<0.01),β-catenin、TCF-1、LEF-1及靶蛋白c-Myc和Cyclin D1表达水平显著升高(P<0.01);经白藜芦醇处理后,小鼠外周血中GFP^(+)白血病细胞比例明显下降(P<0.01),c-Myc和Cyclin D1 mRNA表达水平明显降低(P<0.01),各蛋白表达水平明显下调(P<0.01)。结论:在T-ALL细胞株和动物模型中,白藜芦醇可能通过下调Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin、TCF-1和LEF-1的表达进而抑制靶蛋白c-Myc和Cyclin D1水平,发挥抗急性T淋巴细胞白血病作用。 展开更多
关键词 白藜芦醇 急性T淋巴细胞白血病 molt-4细胞 JURKAT细胞 T-ALL小鼠模型 WNT/Β-CATENIN信号通路
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金克诱导肿瘤细胞凋亡的细胞周期特异性定性 被引量:1
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作者 王家顿 龚建平 《武汉钢铁学院学报》 CAS 2004年第1期86-88,共3页
体外培养的Molt 4细胞与不同浓度的金克孵育,通过Sub G1法和PA法分析细胞凋亡率及细胞凋亡的周期时相性。发现浓度为1.5g/L的金克诱导G1期Molt 4细胞18h后细胞发生明显凋亡,36h后凋亡达到最高峰。金克诱导肿瘤细胞凋亡的周期时相性的阐... 体外培养的Molt 4细胞与不同浓度的金克孵育,通过Sub G1法和PA法分析细胞凋亡率及细胞凋亡的周期时相性。发现浓度为1.5g/L的金克诱导G1期Molt 4细胞18h后细胞发生明显凋亡,36h后凋亡达到最高峰。金克诱导肿瘤细胞凋亡的周期时相性的阐明有助于揭示金克的抗肿瘤机制。 展开更多
关键词 金克 细胞周期 细胞凋亡 molt.4细胞 抗肿瘤机制 白血病
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曲古抑菌素A诱导MOLT-4细胞凋亡的机制 被引量:1
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作者 苗新宇 洪振亚 +1 位作者 易莉莎 周剑峰 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期344-347,共4页
目的通过研究曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)作用前后MOLT-4细胞基因表达谱的差异,初步探讨TSA诱导细胞周期阻滞和凋亡的机制。方法TSA以不同浓度和不同作用时间作用MOLT-4细胞,通过流式细胞仪检测其凋亡率的变化。提取细胞RNA,应用... 目的通过研究曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)作用前后MOLT-4细胞基因表达谱的差异,初步探讨TSA诱导细胞周期阻滞和凋亡的机制。方法TSA以不同浓度和不同作用时间作用MOLT-4细胞,通过流式细胞仪检测其凋亡率的变化。提取细胞RNA,应用基因芯片方法分析TSA作用前后的基因表达变化,RT-PCR验证芯片结果的可靠性。结果MOLT-4细胞对TSA非常敏感,纳摩尔级水平即可诱导显著的细胞凋亡,而且这种凋亡与TSA作用浓度及时间呈现明显的线性关系。基因芯片结果显示,200nmol/LTSA作用MOLT-424h后共有952个基因发生不同程度的变化,其中上调的有477种,下调的有475种,部分结果经RT-PCR证实。结论TSA诱导肿瘤细胞周期阻滞和凋亡是一个多基因参与的复杂过程。 展开更多
关键词 曲古抑菌素A molt-4细胞 周期阻滞 细胞凋亡 基因芯片
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长春新碱诱导白血病MOLT-4细胞凋亡及其机制研究 被引量:2
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作者 董如男 《西南国防医药》 CAS 2016年第3期278-281,共4页
目的观察长春新碱(VCR)对人急性淋巴细胞性白血病MOLT-4细胞促凋亡作用,并探讨其作用机制。方法分别用0、0.01、0.02、0.04、0.08μmol/L长春新碱处理MOLT-4细胞,然后用CCK-8法检测细胞活性,用Hochest33258对细胞核进行染色,用Rhodamine... 目的观察长春新碱(VCR)对人急性淋巴细胞性白血病MOLT-4细胞促凋亡作用,并探讨其作用机制。方法分别用0、0.01、0.02、0.04、0.08μmol/L长春新碱处理MOLT-4细胞,然后用CCK-8法检测细胞活性,用Hochest33258对细胞核进行染色,用Rhodamine123对细胞进行染色,检测线粒体膜电位情况。用caspase 8、9、3抑制剂预处理MOLT-4细胞,检测caspase8、9、3对细胞活性的影响。结果长春新碱对细胞活性具有抑制作用,且呈明确的剂量-效应关系;细胞核染结果显示,长春新碱可以促进细胞凋亡,剂量越大,凋亡现像越明显;同时,长春新碱可以引起细胞线粒体膜电位下降,并发现caspase 9和3参与了细胞凋亡过程。结论长春新碱可以促进MOLT-4细胞凋亡,作用机制可能是线粒体膜电位下降,进而诱导caspase 9和3活化而促发细胞的凋亡。 展开更多
关键词 长春新碱 凋亡 急性淋巴细胞性白血病 molt-4细胞
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一种新的双向电泳蛋白样品制备方法 被引量:1
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作者 李小兰 谢大兴 +7 位作者 肖徽 吴剑宏 姚静 冯永东 陶德定 刘双又 胡俊波 龚建平 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期662-664,共3页
目的探讨双向凝胶电泳(2-DE)样品裂解液对蛋白质分离和双向凝胶电泳结果的影响。方法以MOLT-4细胞为例,采用3种溶解性能不同的裂解液提取细胞中的蛋白质组,并分别进行双向聚丙烯酰胺凝胶电泳。结果通过对2-D PAGE图谱的比较分析,发现采... 目的探讨双向凝胶电泳(2-DE)样品裂解液对蛋白质分离和双向凝胶电泳结果的影响。方法以MOLT-4细胞为例,采用3种溶解性能不同的裂解液提取细胞中的蛋白质组,并分别进行双向聚丙烯酰胺凝胶电泳。结果通过对2-D PAGE图谱的比较分析,发现采用8 mol/L Urea,2 mol/L Thiourea,4%CHAPS,1%NP-40,4%TritonX-100,65 mmol/L DTT,0.5 mmol/L PMSF,0.5%pharmalyte 3-10,能获得质量较高的2-DE图谱。结论采用高浓度脲、三去污裂解液有利于获得优质的蛋白质样品,从而提高蛋白质提取率和双向电泳分辨率等。 展开更多
关键词 蛋白质组 双向电泳 固相PH梯度 molt-4细胞
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TSA诱导MOLT-4细胞中p21^(WAF1/Cip-1)表达的功能机制研究 被引量:2
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作者 宋宜 刘梅菊 +8 位作者 赵国伟 钱俊杰 董燕 刘华 孙国敬 梅柱中 刘斌 田宝磊 孙志贤 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第2期174-181,共8页
为了研究去乙酰化酶抑制剂TSA诱导MOLT-4细胞周期阻滞和凋亡反应中p21WAFl/Cip-1的表达及其功能, 以组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA处理急性淋巴细胞白血病细胞系MOLT-4,流式细胞仪和细胞吖啶橙染色、瑞士染 色检测细胞周期和凋亡,Western检... 为了研究去乙酰化酶抑制剂TSA诱导MOLT-4细胞周期阻滞和凋亡反应中p21WAFl/Cip-1的表达及其功能, 以组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA处理急性淋巴细胞白血病细胞系MOLT-4,流式细胞仪和细胞吖啶橙染色、瑞士染 色检测细胞周期和凋亡,Western检测p21p21WAFl/Cip-1的表达。结果表明:组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA可有效的诱导 MOLT-4细胞发生G2/M阻滞和凋亡,并且呈现明显的剂量效应关系和时间效应关系;在此周期阻滞与凋亡反应过 程中,p21WAFl/Cip-1蛋白的表达水平在周期阻滞前快速增高,而在凋亡早期开始下降。p21WAFl/Cip-1分子在细胞中的表 达规律与TSA诱导的细胞G2/M阻滞和凋亡反应间存在明显的剂量效应关系和时间效应关系;蛋白酶体抑制剂 MG-132提升p21WAFl/Cip-1分子在细胞中的表达可以增进细胞的G2/M阻滞反应而延缓凋亡。结论:蛋白酶体途径参 与TSA诱导的MOLT-4细胞周期阻滞向凋亡转换过程中p21WAFl/Cip-1分子的降解调控;p21WAFl/Cip-1在TSA诱导的 MOLT-4细胞G2/M阻滞和凋亡反应中起着重要调节作用。 展开更多
关键词 TSA molt-4细胞 p21^WAF1/Cip-1 G2/M阻滞 MG-132
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VPA和As2O3对Molt-4细胞的协同作用及可能机制 被引量:2
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作者 叶宝国 林福安 +2 位作者 沈建箴 范丽萍 林聪猛 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第6期1288-1292,共5页
本研究探讨丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)单药或与亚砷酸(arsenie trioxide,As2O3)联用对人急性T细胞白血病细胞株Molt-4增殖活力的抑制、去甲基化作用及其可能机制。用MTT法检测药物对细胞增殖的抑制作用,利用金氏公式观察两药联用... 本研究探讨丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)单药或与亚砷酸(arsenie trioxide,As2O3)联用对人急性T细胞白血病细胞株Molt-4增殖活力的抑制、去甲基化作用及其可能机制。用MTT法检测药物对细胞增殖的抑制作用,利用金氏公式观察两药联用体外抗癌的协同作用。采用半巢式甲基化特异PCR(hnMS-PCR)检测p15INK4B基因甲基化,RT-PCR方法检测p15基因、DNA甲基转移酶DNMT-1、DNMT3A、DNMT3B的表达。结果表明:VPA和As2O3均可明显抑制细胞增殖,二者联用在体外有相加作用(Q值均大于0.85),在5mmol/L VPA与10μmol/L As2O3联用时抑制率达(70.31±2.54)%。Molt-4细胞p15基因因高甲基化而失表达,经VPA和As2O3联合作用后p15基因甲基化程度明显下降,p15基因表达增强,两药联用时DNMT-1、DNMT-3A、DNMT3BmRNA的表达都有下降。结论:VPA可能通过抑制DNA甲基转移酶DNMT-1和(或)DNMT3B使p15INK4B基因去甲基化,使p15基因表达上调,恢复其活性。VPA和As2O3均可明显抑制Mol-4细胞增殖,两药合用有协同相加作用,可减少砷剂的副作用。 展开更多
关键词 丙戊酸钠 AS2O3 molt-4细胞 甲基转移酶 P15基因甲基化
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阿司匹林抑制Molt-4细胞体外增殖的作用及机制研究
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作者 时杰 胡丽华 《临床血液学杂志(输血与检验)》 CAS 2009年第3期302-305,共4页
目的:探讨非甾体类抗炎药阿司匹林对存在有β-连环素异常表达的T淋巴细胞白血病Molt-4细胞株的作用及机制。方法:MTT法观察阿司匹林对Molt-4细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪(FCM)检测阿司匹林对Molt-4细胞细胞周期分布的影响。实时荧光定... 目的:探讨非甾体类抗炎药阿司匹林对存在有β-连环素异常表达的T淋巴细胞白血病Molt-4细胞株的作用及机制。方法:MTT法观察阿司匹林对Molt-4细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪(FCM)检测阿司匹林对Molt-4细胞细胞周期分布的影响。实时荧光定量RT-PCR法分析经不同浓度的阿司匹林处理后的Molt-4细胞β-连环素及cyclin D1基因的表达水平的影响。结果:阿司匹林呈剂量依赖性抑制Molt-4细胞的增殖,72h半数抑制浓度为1.58mmol/L;随浓度增加,cyclin D1基因及蛋白的表达水平均下调。结论:非甾体类抗炎药阿司匹林可能通过影响Wnt信号通路调节某些细胞周期相关基因的表达,将Molt-4细胞阻滞于G0/G1期,从而抑制白血病细胞株Molt-4的增殖。 展开更多
关键词 细胞株 molt-4 基因 Β-连环素 CYCLIND1 阿司匹林 细胞增殖 细胞周期
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双参数流式细胞术检测Molt-4和Jurkat细胞膜受体途径凋亡的始动位点 被引量:1
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作者 杨长永 陈传波 +2 位作者 陶德定 黄丹 龚建平 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2010年第2期195-198,共4页
目的:建立稳定的膜受体途径的细胞凋亡模型,探讨Cyclin/DNA双参数流式细胞术检测膜受体途径细胞凋亡的周期特异性的方法。方法:用典型的受体途径诱导剂TNF-α分别处理Molt-4、Jurkat以及健康人外周血淋巴细胞;应用膜联蛋白V(Annex... 目的:建立稳定的膜受体途径的细胞凋亡模型,探讨Cyclin/DNA双参数流式细胞术检测膜受体途径细胞凋亡的周期特异性的方法。方法:用典型的受体途径诱导剂TNF-α分别处理Molt-4、Jurkat以及健康人外周血淋巴细胞;应用膜联蛋白V(AnnexinV)/碘化丙啶(PI)、API和Cyclin/DNA双参数流式细胞术等方法检测细胞凋亡。结果:AnnexinV/PI法检测早期凋亡细胞,早期凋亡率控制在8%~18%的周期特异性凋亡模型最典型;API法显示膜受体介导的细胞凋亡主要发生在细胞周期的G,期。Cyclin/DNA双参数流式细胞术显示受体途径的细胞周期特异性细胞凋亡的始动位点为G.早期。结论:应用AnnexinV/PI和API法能为建立稳定而典型的受体途径周期特异性细胞凋亡模型提供技术支撑;Cyclin/DNA双参数流式细胞术能够精确显示受体途径的细胞周期特异性细胞凋亡的始动位点。 展开更多
关键词 始动位点 细胞凋亡 双参数流式细胞术 膜受体途径 molt-4细胞 JURKAT细胞
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山椒子烯酮对急性T淋巴细胞白血病的抗肿瘤药效及安全性评价 被引量:1
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作者 王菲菲 杨淑贤 +5 位作者 黄立无 庞敏 单宇 胡小勤 李立勇 曹丽 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期100-106,共7页
目的:探究山椒子烯酮对急性T淋巴细胞白血病的抗肿瘤药效、机制及安全性。方法:体外培养Molt-4细胞,不同浓度山椒子烯酮(0.2,0.4,0.8,1.6,3.2μmol·L^-1)给药48 h,通过细胞增殖-毒性检测法(CCK-8)检测Molt-4细胞的活性。非肥胖糖尿... 目的:探究山椒子烯酮对急性T淋巴细胞白血病的抗肿瘤药效、机制及安全性。方法:体外培养Molt-4细胞,不同浓度山椒子烯酮(0.2,0.4,0.8,1.6,3.2μmol·L^-1)给药48 h,通过细胞增殖-毒性检测法(CCK-8)检测Molt-4细胞的活性。非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠随机分为正常组,模型组,长春新碱组(1 mg·kg^-1),山椒子烯酮低、中、高剂量组(12.5,25,50 mg·kg^-1)。除正常组外,小鼠预先照射60Co,皮下接种Molt-4细胞建立Molt-4细胞移植瘤小鼠模型。第13天,小鼠脱臼处死并解剖。计算抑瘤率、相对肿瘤增殖率、肝指数及脾指数;苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织、脾组织的病理变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤组织中磷酸化信号转导与转录激活因子-3(p-STAT3),B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白的表达。结果:体外实验结果表明,与空白组比较,山椒子烯酮对Molt-4细胞有明显的抑制作用,半数抑制浓度(IC50)为1.49μmol·L^-1。体内实验结果表明,与模型组比较,山椒子烯酮中剂量组和高剂量组抑瘤效果显著,抑制率分别为50.24%和60.75%(P<0.01)。病理结果表明,与长春新碱组比较,山椒子烯酮对肝组织、脾组织损伤较小,安全性更好。蛋白印迹结果表明,与模型组比较,山椒子烯酮中剂量组和高剂量组可以显著下调p-STAT3,Caspase-3,Bcl-2蛋白的表达(P<0.05,P<0.01),上调Bax蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:山椒子烯酮有明显抑制Molt-4细胞增殖,诱导Molt-4细胞凋亡的作用,其作用机制可能与下调p-STAT3,Caspase-3,Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达有关。同时,山椒子烯酮对肝组织、脾组织的损伤较小,安全性更好。 展开更多
关键词 急性T淋巴细胞白血病 山椒子烯酮 细胞凋亡 抗肿瘤 molt-4细胞
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流式细胞术BrdU/DNA双染法测定云芝糖肽诱导的Molt-4细胞周期阻滞 被引量:1
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作者 刘佳 杨晓彤 杨庆尧 《现代生物医学进展》 CAS 2011年第20期3826-3829,共4页
目的:探究云芝糖肽(PSP)对人急性淋巴母细胞白血病Molt-4细胞周期的影响。方法:采用流式细胞术BrdU/DNA双染法获得各时相细胞分布状况和细胞周期的动力学参数。结果:0.1 mg/mlPSP处理12 h后,G2/M期细胞百分比由对照组的11.09%减少至3.69... 目的:探究云芝糖肽(PSP)对人急性淋巴母细胞白血病Molt-4细胞周期的影响。方法:采用流式细胞术BrdU/DNA双染法获得各时相细胞分布状况和细胞周期的动力学参数。结果:0.1 mg/mlPSP处理12 h后,G2/M期细胞百分比由对照组的11.09%减少至3.69%。DNA合成时间由12.10 h延长至108.40 h。24 h处理组中,S期细胞百分比由对照组的43.29%增加至67.26%,而G0/G1期和G2/M期细胞百分比均减少,G0/G1期细胞百分比由对照组的37.47%减少至27.43%,G2/M期细胞百分比由对照组的19.24%降低至5.31%。DNA合成时间更是由11.95 h延长至114.52 h。结论:PSP对人急性淋巴母细胞白血病Molt-4细胞周期的阻滞作用在于S期,该作用与DNA合成抑制有关。 展开更多
关键词 云芝糖肽(PSP) 细胞周期 molt-4 流式细胞术BrdU/DNA双染法
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曲古菌素A对Molt-4细胞细胞周期阻滞和凋亡的作用
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作者 易莉莎 周剑锋 《武汉大学学报(医学版)》 CAS 2006年第3期295-298,329,共5页
目的:本研究旨在探讨曲古菌素A(TSA)对Molt-4细胞的诱导细胞周期阻滞及凋亡的作用及TSA高效低毒的抗肿瘤特性。方法:应用细胞培养、PI单标流式细胞术和DNA Ladder等方法初步探讨TSA对Molt-4细胞的诱导细胞周期阻滞及凋亡的作用。结果:... 目的:本研究旨在探讨曲古菌素A(TSA)对Molt-4细胞的诱导细胞周期阻滞及凋亡的作用及TSA高效低毒的抗肿瘤特性。方法:应用细胞培养、PI单标流式细胞术和DNA Ladder等方法初步探讨TSA对Molt-4细胞的诱导细胞周期阻滞及凋亡的作用。结果:在一定浓度范围内,TSA能以浓度依赖性诱导Molt-4细胞S期及G2期阻滞。TSA以浓度依赖性方式诱导Molt-4细胞凋亡,随着TSA的浓度的升高,细胞凋亡率也显著增高。TSA的各实验组的凋亡率和对照组的凋亡率相比均有显著性差异,P<0.01。经200 nmol/L的TSA处理后,Molt-4细胞凋亡率增高,且呈时间依赖性效应关系。TSA在显著诱导Molt-4细胞凋亡的浓度范围内对正常人外周血单个核细胞(NPBMNC)无明显的诱导凋亡作用。结论:TSA有明确的诱导Molt-4细胞周期阻滞和诱导Molt-4细胞凋亡的能力,并且这种作用呈浓度和时间依赖性,这可能是TSA体外抑制白血病细胞系Molt-4生长和发挥抗白血病作用的主要机理之一,与NPBMNC相比较,TSA能够选择性诱导Molt-4细胞凋亡。 展开更多
关键词 曲古菌素A 组蛋白乙酰化 细胞凋亡 molt-4细胞
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Apoptosis-inducing effect of Jinke on Molt-4 cells and its mechanism
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作者 Zhenchuang Zhu Yixin Tong Yangping Yue Yu Deng Dongdong Yu Wei Xiao Xiaolan Li Deding Tao Junbo Hu Jianping Gong 《The Chinese-German Journal of Clinical Oncology》 CAS 2008年第8期487-491,共5页
Objective: To investigate the apoptosis-inducing effect of Jinke on Molt-4 cells and its possible mechanism. Methods: The Molt-4 cells were treated with different concentrations of Jinke and then cultured for necess... Objective: To investigate the apoptosis-inducing effect of Jinke on Molt-4 cells and its possible mechanism. Methods: The Molt-4 cells were treated with different concentrations of Jinke and then cultured for necessary time. The Annexin-V / PI method was used to detect the apoptosis rate. The cell cycle was analyzed by DNA content with flow cytometry. Double parameters analysis of cyclins / DNA was performed to detect the expression of cyclin E. API method was used to confirm the cell cycle-specific apoptosis. The expressions of Bcl-2 and Bax were detected by westem blot. Results: 24 h after the treatment of 0.5, 1.0, 1.5, 2.0 and 3.0 mg/mL Jinke, the apoptosis rate of Molt-4 cells was evaluated in a concentration-dependent manner, from 5.2% of the control group to 41.0% of the 3.0 mg/mL Jinke group. When the Molt-4 cells were cultured with 1.5 mg/mL Jinke, the apoptosis rate was evaluated in a time-dependent manner. DNA content analysis showed that G0/G1 phase of Molt-4 cells increased in a time-dependent manner. The expression of cyclin E increased gradually. API assay showed the apoptosis cells were almost in G0/G1 phase. Western blot showed the Bcl-2 was down-regulated and the Bax was up-regulated. Conclusion: Jinke could induce G1 phase-specific apoptosis in Molt-4 cells in time-and concentration-dependent manners involving G1 phase arrest. The mechanism of apoptosis inducing effect may be related to the upregulation of Bax and the down-regulation of Bcl-2. 展开更多
关键词 Jinke molt-4 cells APOPTOSIS cell cycle flow cytometry Bcl-2 family
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丙戊酸钠对Molt-4细胞增殖的影响及其作用途径探讨 被引量:1
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作者 林聪猛 林福安 +3 位作者 梅序桥 朱艺芳 郑源海 叶宝国 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期835-838,共4页
目的 观察丙戊酸钠(VPA)对人急性T细胞白血病细胞系Molt-4细胞增殖和细胞周期的影响,并探讨其对Molt-4细胞p15INK4B基因甲基化状态的影响.方法 不同浓度VPA作用Molt-4细胞后,用MTr法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期的变化... 目的 观察丙戊酸钠(VPA)对人急性T细胞白血病细胞系Molt-4细胞增殖和细胞周期的影响,并探讨其对Molt-4细胞p15INK4B基因甲基化状态的影响.方法 不同浓度VPA作用Molt-4细胞后,用MTr法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期的变化,半巢式甲基化特异PCR(MSP)法检测p15INK4B基因甲基化状态,RT-PCR方法检测p15基因、DNA甲基转移酶DNMT-1、DNMT3A、DNMrT3B mRNA的表达.结果 VPA可明显抑制细胞增殖,影响Molt-4细胞周期分布,5.0mmol/L VPA作用Molt-4细胞48 h,G0/G1期细胞为(66.87±3.31)%,S期细胞为(8.47±2.56)%,与未加VPA组相比,S期细胞明显下降,G0/G1期细胞明显升高(P<0.05).经VPA作用后Molt-4细胞p15基因甲基化程度明显下降,p15基因表达水平明显增加,DNMT-1、DNMT3B mRNA表达水平下降,以DNMT-1下降较明显.结论 VPA可能通过抑制甲基转移酶DNMT-1和(或)DNMT3B表达使p15INK4B基因去甲基化,使p15基因表达上调,从而抑制Molt-4细胞增殖,使细胞周期阻滞于G0/G1期. 展开更多
关键词 丙戊酸钠 molt-4细胞 基因 p15 甲基化
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