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比色法与HPLC法对比测定桑叶茶中γ-氨基丁酸的含量 被引量:28
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作者 汤彩云 王涛 +3 位作者 屠洁 刘冠卉 黎鹏 赵静 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第24期256-260,共5页
应用酶标仪定量分析桑叶茶(下称桑茶)中的γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA),经优化的显色体系在波长640 nm处有最大吸收波长,建立GABA质量浓度与吸光度的相关方程。比色法与高效液相色谱(high performance liquid chromatography... 应用酶标仪定量分析桑叶茶(下称桑茶)中的γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA),经优化的显色体系在波长640 nm处有最大吸收波长,建立GABA质量浓度与吸光度的相关方程。比色法与高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法所测GABA在所需质量浓度范围内线性关系均良好(R^2>0.99)。比色法的平均相对标准偏差为1.28%,平均回收率为98.46%;HPLC法的平均相对标准偏差为0.37%,平均回收率为100.10%。表明2种检测方法均可准确定量测定GABA。经t检验比较分析,无统计学差异。采用比色法对桑叶与桑茶进行检测,结果表明不同加工方式会影响GABA含量。比色法方便快捷,更适合大量样品的检测。 展开更多
关键词 Γ-氨基丁酸 桑叶茶 比色法 高效液相色谱 酶标仪
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基于3,5-二硝基水杨酸比色法建立一种快速测定总糖含量的方法 被引量:18
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作者 任婧 李景富 +3 位作者 张佳 刘俊芳 许向阳 姜景彬 《黑龙江科学》 2017年第10期66-69,共4页
本实验利用3,5-二硝基水杨酸(DNS)比色法对番茄果实总糖含量进行了测定,并初步建立了微型化DNS比色法测定总糖含量的实验方法和DNS比色法测定番茄总糖含量的最佳条件,对影响测定结果的因素:测定波长、显色剂用量、显色时间进行了单因素... 本实验利用3,5-二硝基水杨酸(DNS)比色法对番茄果实总糖含量进行了测定,并初步建立了微型化DNS比色法测定总糖含量的实验方法和DNS比色法测定番茄总糖含量的最佳条件,对影响测定结果的因素:测定波长、显色剂用量、显色时间进行了单因素试验。结果表明,540 nm波长、0.2 m L DNS、沸水浴4 min为最佳测定条件。该最佳测定条件下,葡萄糖含量在20~200μg与吸光值呈良好的线性关系。利用得到优化方法对4个番茄品种的总糖含量进行了测定,结果表明测定样品在1.5 h内的吸光值较为稳定,RSD为2.19%~2.88%。本研究得到番茄果实总糖含量测定的优化方法,是一种稳定、高效可行的测定方法,为番茄高糖品种的鉴定和筛选提供了依据。 展开更多
关键词 番茄 DNS 酶标仪
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A new method for determination of antithrombotic activity of egg white protein hydrolysate by microplate reader 被引量:15
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作者 Wan Gen Yang Zhang Wang Shi Ying Xu 《Chinese Chemical Letters》 SCIE CAS CSCD 2007年第4期449-451,共3页
A new method for the determination of antithrombotic activity of egg white protein hydrolysate (EWPH) was developed using a microplate reader. Reaction was carried out at 37℃and pH 7.2 with fibrinogen concentration... A new method for the determination of antithrombotic activity of egg white protein hydrolysate (EWPH) was developed using a microplate reader. Reaction was carried out at 37℃and pH 7.2 with fibrinogen concentration 0.1%. Microplate reading was conducted at 405 nm. Inhibition rate of EWPH on thrombin activity showed linearity (R2 = 0.9971), when the inhibition rate was in the range of 10-90%. The lower limit of detection (LLD, at 99.7% probability) and the biological limit of detection (BLD, at 99.7% probability) of the method were 10.643 and 40 mg/mL, respectively. The repeatability standard deviation (R.S.D.) was 1.08%. The standard deviation of the method was ±0.027 AT-U. 展开更多
关键词 Egg white protein hydrolysate Antithrombotic activity microplate reader
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微量滴定蒽酮法测定甜玉米芯可溶性糖含量方法的建立 被引量:15
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作者 韩烨 马永强 +3 位作者 王鑫 高艺昕 张凯 薛也 《食品科技》 CAS 北大核心 2019年第11期327-334,共8页
以甜玉米芯为原料,利用单因素及响应面实验,优化微量滴定蒽酮-硫酸法测定甜玉米芯可溶性糖含量,所优化方法与苯酚-硫酸法测定结果无差异,操作简便快速,具有良好的线性、稳定性、重复性及精密度。结果表明,微量滴定蒽酮法最佳测定条件为... 以甜玉米芯为原料,利用单因素及响应面实验,优化微量滴定蒽酮-硫酸法测定甜玉米芯可溶性糖含量,所优化方法与苯酚-硫酸法测定结果无差异,操作简便快速,具有良好的线性、稳定性、重复性及精密度。结果表明,微量滴定蒽酮法最佳测定条件为:料液量50μL、硫酸浓度90%、蒽酮用量0.2 g、加热温度91℃、加热时间15.4 min,在此条件下测得甜玉米芯中可溶性糖含量为20.8%。该方法快速安全、节约试剂,适用于高通量样品测定。 展开更多
关键词 蒽酮-硫酸法 甜玉米芯 可溶性糖 酶标仪 响应面法
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酶标仪法测定γ-氨基丁酸 被引量:13
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作者 梁慧 薛正莲 +2 位作者 周扬 汪冬冬 叶杨 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期156-160,共5页
通过诱变所获得的乳酸菌突变株较多,经96孔板发酵后用传统的分光光度计法测定γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的含量效率低、成本高。为快速、高效地测定GABA的含量,基于Berthelot反应,该实验采用酶标仪法测定GABA含量并对影响... 通过诱变所获得的乳酸菌突变株较多,经96孔板发酵后用传统的分光光度计法测定γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的含量效率低、成本高。为快速、高效地测定GABA的含量,基于Berthelot反应,该实验采用酶标仪法测定GABA含量并对影响该方法的主要因素进行优化。确定了在测定GABA的适宜反应体系中0.2 mol/L pH10.0硼酸盐缓冲液为0.75 mL,6%的重蒸苯酚为2.5 mL,有效氯5.2%的NaClO溶液为2 mL时,酶标仪测定可获得较高的GABA含量,同时进行了精密度试验。最后,通过对诱变后的75株突变株经96孔板发酵后,分别使用分光光度计与酶标仪测定发酵液中GABA的含量并进行拟合,以验证该方法的可行性。得出2种方法的相关系数R=0.949 3,显示2种测定方法具有很好的一致性。该实验结果表明酶标仪法能简便、快速、准确地测定发酵液中GABA的含量,为后续高通量选育GABA乳酸菌奠定了基础。 展开更多
关键词 Γ-氨基丁酸 测定 分光光度计 酶标仪 优化
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桃蚜高效氯氰菊酯抗性选育过程中酯酶含量和活性变化 被引量:7
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作者 帅霞 王进军 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期101-105,共5页
采用生物测定和微量滴度酶标板法监测了桃蚜对高效氯氰菊酯抗性的发展趋势。结果表明 ,随着筛选次数增加 ,桃蚜对高效氯氰菊酯的抗药性逐渐增强 :筛选 3代后相对抗性倍数为 13 0 0 ,10代后为 4 9 86倍。随着抗性增强 ,桃蚜酯酶酶源蛋白... 采用生物测定和微量滴度酶标板法监测了桃蚜对高效氯氰菊酯抗性的发展趋势。结果表明 ,随着筛选次数增加 ,桃蚜对高效氯氰菊酯的抗药性逐渐增强 :筛选 3代后相对抗性倍数为 13 0 0 ,10代后为 4 9 86倍。随着抗性增强 ,桃蚜酯酶酶源蛋白含量从 35 86 32增加到 6 6 2 990 μg/mL ,酯酶活性从 33 6 76 0增加到 171 0 0 5 2μmol/ (mL·min)。比较抗性发展过程中酯酶酶源蛋白含量及其活性个体频率分布结果发现 ,随着选育次数的增多 ,更多的桃蚜个体分布在酯酶酶源蛋白含量和酯酶活性高的区域。相关分析结果表明 ,抗性筛选过程中的LD50 与酯酶含量及活性变化之间呈显著正相关 ,酯酶在桃蚜对高效氯氰菊酯抗药性发展中可能起着十分重要的作用。 展开更多
关键词 桃蚜 高效氯氰菊酯 抗药性 酯酶 含量 酶活性 杀虫剂 微量滴度酶标板法
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一种蛋白质游离氨基含量测定方法—三硝基苯磺酸法的探究 被引量:9
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作者 褚千千 韩秋煜 +1 位作者 陈必文 包斌 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期275-279,共5页
三硝基苯磺酸(trinitrobrnzen sulfonic acid,TNBS)法是测定蛋白质中游离氨基含量的方法。该文比较了该方法的2种终止反应条件及分析方法,探究了该方法对不同蛋白质(牛血清蛋白、胰蛋白酶、溶菌酶)的适用性。结果表明,碱性条件下的响应... 三硝基苯磺酸(trinitrobrnzen sulfonic acid,TNBS)法是测定蛋白质中游离氨基含量的方法。该文比较了该方法的2种终止反应条件及分析方法,探究了该方法对不同蛋白质(牛血清蛋白、胰蛋白酶、溶菌酶)的适用性。结果表明,碱性条件下的响应值显著高于酸性(P<0.01);紫外可见分光光度计和酶标仪2种测定方法对蛋白质游离氨基含量的测定结果在一定范围内没有显著差异(P>0.05),紫外可见分光光度计测定结果精确度较高,对浓度变化的响应更灵敏。蛋白质种类不仅影响到该方法的取样浓度,而且蛋白质中的巯基含量会干扰该方法的准确性。 展开更多
关键词 游离氨基 蛋白质 三硝基苯磺酸 紫外-可见分光光度计 酶标仪
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全波长扫描式多功能读数仪-靛酚蓝比色法测定水样铵态氮含量 被引量:9
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作者 郭文淼 辛宇 +1 位作者 张金尧 汪洪 《中国土壤与肥料》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期166-170,共5页
全波长扫描式多功能读数仪(酶标仪)是一种多通道光学系统的分光光度计,将靛酚蓝比色法与酶标仪相结合,建立了酶标仪-靛酚蓝测定水中铵态氮的方法,方法检出限为0.046 mg/L。方法的加标回收率在90.7%~101.8%之间,该方法与连续流动分析仪-... 全波长扫描式多功能读数仪(酶标仪)是一种多通道光学系统的分光光度计,将靛酚蓝比色法与酶标仪相结合,建立了酶标仪-靛酚蓝测定水中铵态氮的方法,方法检出限为0.046 mg/L。方法的加标回收率在90.7%~101.8%之间,该方法与连续流动分析仪-水杨酸分光光度法相比,两者测定数据之间回归直线方程为Y(连续流动分析仪-NH_4^+-N)=1.052 4X(酶标仪-NH_4^+-N)-0.009,相关系数R=0.976 1**(n=32,P<0.01)。5个水样重复6次测定,测定结果的相对标准偏差均小于3%。全波长扫描式多功能读数仪(酶标仪)结合靛酚蓝比色法测定重现性好,结果准确,快速方便,可用于水样中铵态氮含量测定。 展开更多
关键词 铵态氮 靛酚蓝 全波长扫描式多功能读数仪(酶标仪)
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酶标仪法测定微孔板发酵液中林可霉素 被引量:9
9
作者 余飞 秦艳飞 +3 位作者 王洲 孙俊峰 张敏 薛正莲 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 2019年第1期47-51,共5页
目的建立酶标仪法测定微孔板发酵液中林可霉素的含量。方法对酶标仪法的主要影响因素进行优化,并验证此方法的精密度;在此基础上,分别利用酶标仪法与分光光度计法测定25株突变株经48孔板发酵后林可霉素的含量并进行曲线拟合,以验证两种... 目的建立酶标仪法测定微孔板发酵液中林可霉素的含量。方法对酶标仪法的主要影响因素进行优化,并验证此方法的精密度;在此基础上,分别利用酶标仪法与分光光度计法测定25株突变株经48孔板发酵后林可霉素的含量并进行曲线拟合,以验证两种方法的相关性。结果确定了在测定林可霉素含量的适宜反应体系中0.02mol/L氯化钯溶液为150μL,盐酸添加浓度为1mol/L,且该方法精密度良好;拟合曲线相关系数R2=0.9551,显示两种方法具有很好的相关性。结论该实验结果表明酶标仪法能准确、快速地测定微孔板发酵液中林可霉素的含量,为后续高通量选育林可霉素高产菌株奠定了基础。 展开更多
关键词 林可霉素 测定 分光光度计 酶标仪 优化
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痕量氟化物快速测定方法建立 被引量:8
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作者 张志瑜 韩冰 钱聪 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期255-256,共2页
目的建立准确、快速、经济、实用的微量、痕量氟化物检测方法。方法采用酶标仪-氟试剂分光光度法,测定生物、食品、环境等样品或其消化处理液中的氟化物含量,并以3水平4因素正交设计对该法的试剂浓度、比例、用量进行多因素分析,以优化... 目的建立准确、快速、经济、实用的微量、痕量氟化物检测方法。方法采用酶标仪-氟试剂分光光度法,测定生物、食品、环境等样品或其消化处理液中的氟化物含量,并以3水平4因素正交设计对该法的试剂浓度、比例、用量进行多因素分析,以优化最佳实验条件;以重现性、加标回收率和检出限评价方法的精密度、准确度及灵敏度。结果最佳实验条件为氟试剂与硝酸镧比例为1∶1,稳定剂为丙酮-乙酰丙酮,缓冲液3.5 mol/L;利用该方法可精确测定微量氟(氟含量>0.06μg/mL),痕量氟(氟含量≤0.06μg/mL);r为0.998 6~0.999 1,检出限为0.000 9μg,检测精度可达0.001μg,回收率为97.6%~100.1%,变异系数<2.65%。结论将酶标仪引入氟化物的检测,分析速度快,检出限低,且具有较高的精密度、准确度。 展开更多
关键词 酶标仪 氟试剂 痕量氟 检出限
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Determination of Total Flavonoids in Leaves of Paliurus ramosissimus and Orthogonal Experiment Optimization Process 被引量:5
11
作者 Yuanchun ZHUANG Chun ZHANG +1 位作者 Lilan OU Pixian SHUI 《Medicinal Plant》 CAS 2018年第2期40-43,47,共5页
[Objectives] To screen the optimal extraction conditions of flavonoids from leaves of Paliurus ramosissimus( Lour.) Poir.,measure the content of flavonoids in leaves of P. ramosissimus. using the Microplate Reader,and... [Objectives] To screen the optimal extraction conditions of flavonoids from leaves of Paliurus ramosissimus( Lour.) Poir.,measure the content of flavonoids in leaves of P. ramosissimus. using the Microplate Reader,and provide experimental basis for the development of medicinal resources of P. ramosissimus. [Methods] The ultrasonic extraction method was adopted and orthogonal design was carried out to study the effects of ethanol concentration( A),ultrasonic time( B),the solid-to-liquid ratio( C) on the extraction of flavonoids from leaves of P. ramosissimus. The Microplate Reader was used to measure the content of flavonoids in leaves of P. ramosissimus. in different extraction conditions,P. ramosissimus. and the optimal extraction conditions were used to measure the content of flavonoids from leaves of P. ramosissimus.[Results]Effects of the ultrasonic extraction method on the extraction rate of flavonoids from leaves of P. ramosissimus: extraction times >ethanol concentration > Ultrasound time > solid-liquid ratio. The screened optimal extraction process was: ethanol concentration of 65%,the solid-to-liquid ratio of 1∶ 25,ultrasonic time of 2 h and extraction times Under this condition,the extraction rate of total flavonoids in leaves of P. ramosissimus. was 2. 56%. [Conclusions] This method is simple and feasibility,reliable,and suitable for rapid measurement with large samples. 展开更多
关键词 Leaves of Paliurus ramosissimus(Lour.) Poir. Total flavonoids Ultrasonic extraction Orthogonal experiment microplate reader
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酶标仪法测定麦苗中γ-氨基丁酸的探讨 被引量:7
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作者 张扬 肖卫洪 +2 位作者 蓝新隆 张秋英 陈剑锋 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1462-1466,共5页
为了提高植物中γ-氨基丁酸的检测效率和准确性,对用酶标仪测定麦苗中γ-氨基丁酸含量的方法进行了提取方式、反应试剂用量、波长选取和测定时间等参数的优化研究,并对检测结果进行了分析。结果表明,酶标仪测量γ-氨基丁酸的最佳条件为... 为了提高植物中γ-氨基丁酸的检测效率和准确性,对用酶标仪测定麦苗中γ-氨基丁酸含量的方法进行了提取方式、反应试剂用量、波长选取和测定时间等参数的优化研究,并对检测结果进行了分析。结果表明,酶标仪测量γ-氨基丁酸的最佳条件为:55℃超声波提取30 min,当待测液为1 m L时,需2 mol·L-1氯化铝0.4 m L,1 mol·L-1氢氧化钾1.0 m L,0.2 mol·L-1p H值10.0的缓冲液1.0 m L,6%重蒸酚1.5 m L,5%次氯酸钠1 m L,最适测量波长为635μm,测定时间为反应后100~160 min。该检测方法稳定性高,重现性好。 展开更多
关键词 酶标仪 麦苗 GABA检测 体系优化
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纸层析-酶标仪法测定发酵液中γ-氨基丁酸 被引量:7
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作者 张敏 薛正莲 +2 位作者 余飞 刘艳 王洲 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第15期262-267,共6页
建立纸层析-酶标仪法对微孔板发酵液中γ-氨基丁酸产量进行测定。对影响纸层析-酶标仪法测定结果的重要因素进行优化,并建立相应的分光光度法。优化后层析液中显色剂-茚三酮的浓度为8g/L,展开剂-正丁醇、冰醋酸与水3者体积比为2∶1∶1;... 建立纸层析-酶标仪法对微孔板发酵液中γ-氨基丁酸产量进行测定。对影响纸层析-酶标仪法测定结果的重要因素进行优化,并建立相应的分光光度法。优化后层析液中显色剂-茚三酮的浓度为8g/L,展开剂-正丁醇、冰醋酸与水3者体积比为2∶1∶1;洗脱液中乙醇的体积分数为75%,乙醇与质量浓度为6g/LCuSO4·5H2O的体积比为39∶1;γ-氨基丁酸质量浓度在1~7g/L之间,吸光度与样品浓度线性关系良好(R2=0.9990),平均回收率为98.2485%,重复性RSD为2.6255%。纸层析-酶标仪法能快速、准确地测定微孔板发酵液中γ-氨基丁酸产量,为后续高通量选育γ-氨基丁酸高产菌株奠定了基础。 展开更多
关键词 Γ-氨基丁酸 测定 纸层析 酶标仪
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建立酶标仪法检测沙棘的羟自由基清除活性 被引量:7
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作者 李倩茹 夏珊 +5 位作者 黄婷 吴婷 石桂莲 叶译蔓 罗林碧 李生茂 《食品科技》 CAS 北大核心 2020年第9期287-294,共8页
基于Fenton反应原理,以吸光度值为指标,通过单因素实验建立了基于酶标仪检测的羟自由基清除活性测定方法,确定的最佳检测条件为:水杨酸浓度10 mmol/L、盐酸浓度2.5 mmol/L、硫酸亚铁浓度3.6 mmol/L、H2O2浓度0.88 mmol/L、反应时间20 mi... 基于Fenton反应原理,以吸光度值为指标,通过单因素实验建立了基于酶标仪检测的羟自由基清除活性测定方法,确定的最佳检测条件为:水杨酸浓度10 mmol/L、盐酸浓度2.5 mmol/L、硫酸亚铁浓度3.6 mmol/L、H2O2浓度0.88 mmol/L、反应时间20 min、反应温度37℃、510 nm测定。应用该方法测定了10批沙棘清除羟自由基的活性,同时分析了其与沙棘总黄酮含量的相关性。结果表明,沙棘具有较好的清除羟自由基的活性,所得结果与传统的紫外分光光度法检测结果较为一致,有较好的可比性。沙棘总黄酮含量与其清除羟自由基活性具有明显相关性(P<0.05,r=—0.690),表明总黄酮可能是沙棘清除羟自由基的主要活性成分之一。文章首次建立了基于酶标仪检测的羟自由基清除活性测定方法,具有消耗的试剂和样品量少、方法简单实用、可操作性强、结果稳定可靠等优点,可快速、高通量进行羟自由基清除剂的筛选。 展开更多
关键词 FENTON反应 酶标仪 羟自由基 沙棘 总黄酮
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农药沉积利用率喷雾指示剂诱惑红的酶标仪测定方法 被引量:7
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作者 石鑫 高赛超 +2 位作者 杨代斌 袁会珠 闫晓静 《现代农药》 CAS 2021年第1期35-37,共3页
诱惑红是一种水溶性染料,近年来被用作农药沉积利用率测定的指示剂。诱惑红的检测方法为高效液相色谱法和分光光度法。高效液相色谱法需要专门的分析仪器,且价格昂贵,可见分光光度计法操作繁琐,试剂用量大,耗时长,均不适宜田间快速高效... 诱惑红是一种水溶性染料,近年来被用作农药沉积利用率测定的指示剂。诱惑红的检测方法为高效液相色谱法和分光光度法。高效液相色谱法需要专门的分析仪器,且价格昂贵,可见分光光度计法操作繁琐,试剂用量大,耗时长,均不适宜田间快速高效测定。笔者发展了诱惑红的酶标仪测定方法,简单高效,可批量检测多个样品,且准确度和精密度高,线性关系良好,514 nm检测波长下不受其他农药影响,并应用于玉米无人飞机喷雾场景下农药雾滴在玉米冠层的沉积利用率测定。 展开更多
关键词 农药沉积利用率 诱惑红 酶标仪 方法验证
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酶联免疫吸附和胶体金技术对黄曲霉毒素M1检测的结合验证
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作者 乔宽 王路阳 +2 位作者 王艳飞 张云鲜 时长旭 《中国乳业》 2024年第1期69-72,77,共5页
[目的]为准确完成生牛乳中黄曲霉毒素M1检测。[方法]对比分析酶标仪、胶体金读数仪检测生牛乳中黄曲霉毒素M1的处理过程和检测数据。[结果]发现2种方法检验操作过程各有优劣,检测结果能满足不同需求。酶标仪可用于半定量检测,并进行精... [目的]为准确完成生牛乳中黄曲霉毒素M1检测。[方法]对比分析酶标仪、胶体金读数仪检测生牛乳中黄曲霉毒素M1的处理过程和检测数据。[结果]发现2种方法检验操作过程各有优劣,检测结果能满足不同需求。酶标仪可用于半定量检测,并进行精准检测和半定量复核。胶体金读数仪适合快速定性筛查。[结论]2种方法可配合使用,相互补充,灵活运用设备优势,高效完成检测需求。 展开更多
关键词 酶标仪 胶体金读数仪 黄曲霉毒素M1 生牛乳
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医学检验仪器串口传送技术的开发与应用 被引量:5
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作者 郑定容 陈灿锋 梁新郁 《中国医疗设备》 2009年第7期47-49,共3页
目的利用串口技术和数据库技术,将酶标仪等检验仪器与LIS系统连接,实现计算机自动采集检验数据、管理检验数据。方法利用Delphi7.0等工具开发联机程序和数据库管理程序,实现检验仪器与LIS的联机通讯。结果此软件的使用解决了手工录入检... 目的利用串口技术和数据库技术,将酶标仪等检验仪器与LIS系统连接,实现计算机自动采集检验数据、管理检验数据。方法利用Delphi7.0等工具开发联机程序和数据库管理程序,实现检验仪器与LIS的联机通讯。结果此软件的使用解决了手工录入检验数据耗时多、易出错等问题。结论串口通讯技术结合数据库技术在医学检验中的应用,将大大提高医学检验工作者分析和处理实验数据的效率;为开发双向通讯仪器的双向控制奠定了基础。 展开更多
关键词 酶标仪 检验仪器 LIS 串口技术 数据库
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3-甾酮-Δ^(1)-脱氢酶突变体文库高通量筛选方法的建立
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作者 董新林 胡青 +3 位作者 何建新 吕德强 宋士奎 苏正定 《生物技术》 CAS 2024年第2期158-164,共7页
[目的]建立一种快速、高通量筛选3-甾酮-Δ^(1)-脱氢酶(KstD)突变体库的方法。[方法]基于已发表KstD蛋白晶体结构,设计饱和突变引物,构建突变体文库,优化蛋白表达条件,利用冻融法结合溶菌酶法获得粗酶液;基于分光光度法原理,优化检测反... [目的]建立一种快速、高通量筛选3-甾酮-Δ^(1)-脱氢酶(KstD)突变体库的方法。[方法]基于已发表KstD蛋白晶体结构,设计饱和突变引物,构建突变体文库,优化蛋白表达条件,利用冻融法结合溶菌酶法获得粗酶液;基于分光光度法原理,优化检测反应体系,利用酶标仪检测吸光度的变化来反映酶活力。[结果]利用饱和突变引物成功构建突变体文库,表达KstD最佳条件为:IPTG终浓度0.3 mmol/L,20℃诱导20 h;缓冲液中溶菌酶浓度为0.5 mg/mL时上清目的蛋白含量最高。优化后的酶活检测条件为:Tris-HCl缓冲液50 mmol/L、pH 8.0、0.4 mmol/L DCPIP、1.5 mmol/L PMS、0.7 mmol/L雄烯二酮(4AD)和适量的酶液组成,温度30℃、酶反应时间5 min,于600 nm波长下测定。[结论]成功建立了一种5 min检测96个3-甾酮-Δ^(1)-脱氢酶(KstD)突变体的高通量筛选方法,重复性变异系数在3%以下。 展开更多
关键词 3-甾酮-Δ^(1)-脱氢酶 定点饱和突变 高通量筛选 半理性设计 雄烯二酮 酶标仪 酶法脱氢 突变体文库
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酶标法检测牛奶中硫氰酸盐 被引量:6
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作者 侯东军 韩合敬 +1 位作者 吴艳芳 姜艳彬 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2015年第4期67-70,共4页
本试验基于酶标仪法建立了用于快速、准确检测牛奶中硫氰酸根浓度值的方法,该方法用三氯乙酸除去牛奶中的蛋白和脂肪,过滤后取上清液,硫氰酸根与硝酸铁溶液显色后,用酶标仪在450 nm波长处测吸光度值,用模拟奶做标准曲线,通过科学的数据... 本试验基于酶标仪法建立了用于快速、准确检测牛奶中硫氰酸根浓度值的方法,该方法用三氯乙酸除去牛奶中的蛋白和脂肪,过滤后取上清液,硫氰酸根与硝酸铁溶液显色后,用酶标仪在450 nm波长处测吸光度值,用模拟奶做标准曲线,通过科学的数据处理,定量测定牛奶中硫氰酸盐的含量。试验检测体系适用对象为生鲜乳及复原乳,试验结果表明:当硫氰酸根的浓度在0.5~16 mg/kg范围内时,硫氰酸根的质量浓度与溶液的吸光度值呈现良好的线性关系,相关系数为0.999 7,回收率为98.6%~105%,仪器检测下限为0.3 mg/kg。本试验所建立的方法数据可信度高,检测灵敏度高,成本低廉,操作方便,适合中小单位对牛奶中硫氰酸根做定量分析。 展开更多
关键词 硫氰酸盐 牛奶 酶标仪
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孵育系统中的微孔板支架结构优化
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作者 姜容 陈正伟 +2 位作者 樊伟东 骆志成 黄俊 《浙江科技学院学报》 CAS 2023年第6期495-503,526,共10页
【目的】为提高多功能微孔板读数仪的孵育性能,针对微孔板温度均一性,提出微孔板支架组件的结构改进方案。【方法】首先分析影响微孔板读数仪孵育性能的因素,包括支架组件的结构尺寸、表面处理和加工材料等,并设计改进方案;然后通过多... 【目的】为提高多功能微孔板读数仪的孵育性能,针对微孔板温度均一性,提出微孔板支架组件的结构改进方案。【方法】首先分析影响微孔板读数仪孵育性能的因素,包括支架组件的结构尺寸、表面处理和加工材料等,并设计改进方案;然后通过多通道数据采集仪进行试验,收集不同方案的微孔板支架组件孵育时微孔板中各孔位的实际温度;最后,对比不同改进方案在最大温差、升温速率等孵育性能方面的提升程度,评价各改进方案的孵育性能并确定最佳改进方案。【结果】相比改进前的支架组件结构,与微孔板底部完全接触的支架组件改进方案在试验中的表现最佳:各孔位间最大温差从2.9℃降至1.1℃,降低了62.07%;升温过程中最大温差超过1℃的持续时间从1650 s降至120 s,降低了92.72%;前7 min平均升温速率从0.774℃/min升至1.065℃/min,提升了37.60%;前7 min平均升温速率标准差从0.100降至0.043,降低了57.00%。【结论】本优化设计提供了一种可行的微孔板支架组件结构改进思路,对提升微孔板读数仪的孵育性能具有一定的参考价值。 展开更多
关键词 微孔板读数仪 微孔板支架 热传导 接触热阻 升温曲线
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