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胃癌中钙黏附分子启动子甲基化与幽门螺杆菌感染及肿瘤生物学特性的关系 被引量:4
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作者 冯宁 高海德 +2 位作者 刘文志 陈希 伍晓汀 《华西医学》 CAS 2014年第1期43-46,共4页
目的建立甲基化特异性聚合酶链式反应方法检测组织中钙黏附分子(CDH1)的甲基化程度;探索CDH1启动子的甲基化与幽门螺杆菌(HP)感染及与肿瘤分化、浸润、淋巴及远处转移之间的关系。方法采用热转化甲基化特异性聚合酶链式反应法检测2008年... 目的建立甲基化特异性聚合酶链式反应方法检测组织中钙黏附分子(CDH1)的甲基化程度;探索CDH1启动子的甲基化与幽门螺杆菌(HP)感染及与肿瘤分化、浸润、淋巴及远处转移之间的关系。方法采用热转化甲基化特异性聚合酶链式反应法检测2008年1月-2009年12月共40例胃癌手术标本中CDH1的启动子甲基化情况,并回顾性地分析CDH1的启动子甲基化与HP感染、肿瘤分化、浸润、淋巴及远处转移等肿瘤生物学特性的统计学关联。结果胃癌组CDH1基因甲基化阳性率高于对照组(67.5%、12.5%,P<0.05)。胃癌组中低-未分化肿瘤组CDH1基因甲基化阳性率高于高-中分化肿瘤组(80.6%、22.2%,P<0.05);胃癌组中HP阳性患者的CDH1基因甲基化率高于HP阴性患者(78.1%、25.0%,P<0.05);而胃癌组中CDH1基因甲基化阳性率与患者性别、肿瘤浸润程度、淋巴转移及远处转移无明显关系(P>0.05)。结论 CDH1基因甲基化可能参与了胃癌的发展过程,并且CDH1基因甲基化可能导致了肿瘤分化程度的降低。CDH1基因甲基化与胃癌患者的HP感染之间可能存在密切关系,提示HP感染可能参与了抑癌基因甲基化失活及肿瘤演变的发展过程。 展开更多
关键词 DNA甲基化 钙黏附分子启动子 E-钙黏蛋白 甲基化特异性聚合酶链式反应 幽门螺杆菌 胃癌
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胃癌组织RASSF1基因启动子区甲基化的意义 被引量:2
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作者 李学彦 傅宝玉 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2007年第21期2354-2357,共4页
目的:探讨抑癌基因RASSF1A启动子在胃癌组织及胃良性病变中甲基化的发生情况及与临床特征的关系.方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS- PCR)方法检测32例胃癌组织及32例相应的癌旁组织,以及46例胃良性病变中RASSF1A基因甲基化发生情况... 目的:探讨抑癌基因RASSF1A启动子在胃癌组织及胃良性病变中甲基化的发生情况及与临床特征的关系.方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS- PCR)方法检测32例胃癌组织及32例相应的癌旁组织,以及46例胃良性病变中RASSF1A基因甲基化发生情况.结果:在32例胃癌DNA标本中,RASSF1A基因甲基化发生率为62.5%(20/32).而在32例癌旁组织中,只有1例存在甲基化,占3.1%(1/32),二者之间比较差异有统计学意义(P<0.05).在胃良性病变,浅表性胃炎和萎缩性胃炎中甲基化发生频率分别为3.3%和37.5%.RASSF1A基因甲基化发生率与胃癌分化程度、肿瘤大小及淋巴结转移之间无显著相关性.结论:RASSF1A基因启动子区甲基化在胃癌的发生发展中起重要作用. 展开更多
关键词 胃癌 RASSF1A 抑癌基因 甲基化特异性聚合酶链反应
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鼻息肉VEGF-B基因启动子甲基化研究 被引量:2
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作者 谭海燕 白伟良 +1 位作者 王枭维 徐婷婷 《临床耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS 北大核心 2017年第19期1482-1484,1491,共4页
目的:探讨VEGF-B基因启动子在鼻息肉中甲基化状态。方法:应用MS-PCR检测28例实验组鼻息肉组织和12例对照组正常组织VEGF-B基因启动子甲基化状态,并对MS-PCR产物进行测序。结果:VEGFB启动子甲基化在28例鼻息肉中有9例阳性,19例阴性;在12... 目的:探讨VEGF-B基因启动子在鼻息肉中甲基化状态。方法:应用MS-PCR检测28例实验组鼻息肉组织和12例对照组正常组织VEGF-B基因启动子甲基化状态,并对MS-PCR产物进行测序。结果:VEGFB启动子甲基化在28例鼻息肉中有9例阳性,19例阴性;在12例对照组织中8例阳性,4例阴性。鼻息肉组织和对照组织中VEGF-B基因启动子甲基化阳性率的差异有统计学意义(χ~2=4.096,P<0.05)。MS-PCR产物测序结果表明鼻息肉中存在VEGF-B基因启动子甲基化修饰。结论:鼻息肉中VEGF-B基因启动子可能存在低甲基化状态。推测鼻息肉VEGF-B基因甲基化调控着VEGF-B的表达,在鼻息肉的发生机制中占有重要地位。 展开更多
关键词 鼻息肉 VEGF-B 启动子 甲基化特异性聚合酶链反应
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宫颈癌组织中FHIT基因5'端CpG岛甲基化及其与基因失活的关系 被引量:20
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作者 史惠蓉 吴庆华 +1 位作者 索振河 Jahn M Nesland 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第1期7-11,共5页
背景与目的:脆性组氨酸三联基因(fragile histidine triad gene,FHIT)作为抑癌基因与多种实体瘤的发生有关,并在多种肿瘤中因甲基化而失活。本研究拟探讨宫颈癌组织中FHIT基因5'端CpG岛甲基化状况及其与基因失活的关系。方法:采用... 背景与目的:脆性组氨酸三联基因(fragile histidine triad gene,FHIT)作为抑癌基因与多种实体瘤的发生有关,并在多种肿瘤中因甲基化而失活。本研究拟探讨宫颈癌组织中FHIT基因5'端CpG岛甲基化状况及其与基因失活的关系。方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation鄄specificPCR,MSP)和免疫组织化学法分别检测10例正常宫颈鳞状上皮、40例宫颈癌组织中FHIT基因5'端CpG岛的甲基化发生状况和FHIT蛋白表达情况。结果:(1)正常宫颈鳞状上皮组织中未发现存在FHIT基因甲基化状态,而宫颈癌组织中FHIT基因5'端CpG岛的甲基化率为40.0%(16/40);(2)临床Ⅱ期宫颈癌病例中FHIT基因甲基化的发生率为56.5%(13/23),明显高于Ⅰ期的14.3%(2/14)(P<0.05);(3)宫颈癌组织中存在FHIT蛋白表达降低或缺失,阳性率仅为30.0%(12/40),显著低于正常宫颈组织的100.0%(10/10)(P<0.05)。结论:FHIT基因5'端CpG岛甲基化是宫颈癌中该基因失活的机制之一,可能与宫颈癌的发生发展有关。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 FHIT基因 甲基化 甲基化特异性PCR 免疫组织化学
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Aberrant gene methylation in the peritoneal fluid is a risk factor predicting peritoneal recurrence in gastric cancer 被引量:20
5
作者 Masatsugu Hiraki Yoshihiko Kitajima +4 位作者 Seiji Sato Jun Nakamura Kazuyoshi Hashiguchi Hirokazu Noshiro Kohji Miyazaki 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2010年第3期330-338,共9页
AIM:To investigate whether gene methylation in the peritoneal fluid (PF) predicts peritoneal recurrence in gastric cancer patients.METHODS: The gene methylation of CHFR (checkpoint with forkhead and ring finger domain... AIM:To investigate whether gene methylation in the peritoneal fluid (PF) predicts peritoneal recurrence in gastric cancer patients.METHODS: The gene methylation of CHFR (checkpoint with forkhead and ring finger domains), p16, RUNX3 (runt-related transcription factor 3), E-cadherin, hMLH1 (mutL homolog 1), ABCG2 (ATP-binding cassette, sub-family G, member 2) and BNIP3 (BCL2/adenovirus E1B 19 kDa interacting protein 3) were analyzed in 80 specimens of PF by quantitative methylation-specific polymerase chain reaction (PCR). Eighty patients were divided into 3 groups; Group A (n=35):the depth of cancer invasion was less than the muscularis propria; Group B (n=31): the depth of cancer invasion was beyond the muscularis propria. Both group A and B were diagnosed as no cancer cells in peritoneal cytology and histology; Group C (n=14): disseminated nodule was histologically diagnosed or cancer cells were cytologically defi ned in the peritoneal cavity.RESULTS: The positive rates of methylation in CHFR, E-cadherin and BNIP3 were significantly different among the 3 groups and increased in order of group A, B and C (0%,0% and 21% in CHFR, P<0.05; 20%, 45% and 50% in E-cadherin, P<0.05;26%,35% and 71% in BNIP3, P<0.05). In addition, the multigene methylation rate among CHFR, E-cadherin and BNIP3 was correlated with group A, B and C (9%,19% and 57%, P<0.001). Moreover, the prognosis was analyzed in group B, excluding 3 patients who underwent a non-curative resection. Two of the 5 patients with multigene methylation showed peritoneal recurrence after surgery, while those without or with a single gene methylation did not experience recurrence (P<0.05).CONCLUSION: This study suggested that gene methylation in the PF could detect occult neoplastic cells in the peritoneum and might be a risk factor for peritoneal metastasis. 展开更多
关键词 ASCITES DISSEMINATION Gastric cancer methylation Peritoneal fluid Quantitative methylation-specific polymerase chain reaction
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p16基因高甲基化在胃癌发展中的作用 被引量:15
6
作者 刘文天 焦焕利 +2 位作者 杨玉龙 王栋 张维铭 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2007年第26期2839-2843,共5页
目的:通过检测胃癌、癌前病变和正常对照组中p16基因启动子区CpG岛甲基化水平及其表达,并结合临床病理资料,分析他们在胃癌发生、发展中的作用.方法:用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)检测41例胃癌组织、40例... 目的:通过检测胃癌、癌前病变和正常对照组中p16基因启动子区CpG岛甲基化水平及其表达,并结合临床病理资料,分析他们在胃癌发生、发展中的作用.方法:用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)检测41例胃癌组织、40例癌前病变组织和38例正常对照组织中p16基因启动子5′CpG岛甲基化;应用免疫组化检测基因的蛋白表达.结果:胃癌组织中p16基因甲基化阳性率为56.1%(23/41),癌前病变组织中为17.5%(7/40),而正常对照组织中为2.6%(1/38),前组与后两组之间的差异有显著性(P<0.05).胃癌组织中p16基因表达阳性率为51.2%,癌前病变组织中为90.0%,正常对照组织中为100.0%,前组与后两组之间的差异有显著性(P<0.05).低分化型胃癌组织中的p16基因甲基化阳性率明显高于高分化型(81.3%vs 40.0%,P<0.05).有淋巴结转移的胃癌组织中,p16基因甲基化阳性率与无转移组的差异有显著性(81.0%vs 30.0%,P<0.05).浸润深达浆膜层的胃癌组织中,甲基化阳性率与未达浆膜层组无统计学差异(60.0%vs 52.4%,P>0.05).胃癌组织中p16基因甲基化阳性组的蛋白表达阳性率显著低于甲基化阴性组(26.1%vs 83.3%,P<0.01).结论:胃癌组织中存在有p16基因启动子5′CpG岛高甲基化,并导致其基因表达率显著低于正常对照及癌前病变组织.p16基因的高甲基化与胃癌分化程度、淋巴结转移相关.p16基因甲基化的发生,从正常、癌前病变到胃癌有逐渐增加的趋势,提示其基因CpG岛高甲基化有可能作为诊断早期胃癌的一项较为敏感的指标. 展开更多
关键词 胃癌 癌前病变 DNA甲基化 P16基因 甲基化特异性聚合酶链反应 免疫组化
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巢式MSP法检测恶性血液病细胞株p16基因启动子甲基化状态的研究 被引量:13
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作者 周华蓉 沈建箴 +3 位作者 付海英 叶宝国 范丽萍 林福安 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第2期375-378,共4页
本研究应用改进的甲基化特异性PCR(MSP)法,即巢式甲基化特异性PCR法检测6种肿瘤细胞株p16基因启动子的甲基化状态效率,探讨其在筛选p16基因启动子高甲基化的肿瘤细胞株,及将其作为研究基因甲基化与表达关系的理想细胞模型中的应用。6种... 本研究应用改进的甲基化特异性PCR(MSP)法,即巢式甲基化特异性PCR法检测6种肿瘤细胞株p16基因启动子的甲基化状态效率,探讨其在筛选p16基因启动子高甲基化的肿瘤细胞株,及将其作为研究基因甲基化与表达关系的理想细胞模型中的应用。6种肿瘤细胞株基因组DNA经碱变性后以亚硫酸盐修饰,再用巢式甲基化特异性聚合酶链反应扩增,分析检测其p16启动子区CpG岛的甲基化状态。结果表明:CA46、U266都有不同程度的p16基因启动子区甲基化,而Molt4、K562、HL-60、Jurkat的p16基因启动子区均未甲基化。结论:用巢式甲基化特异性PCR可以准确的检测出恶性血液病细胞株p16基因的甲基化状态,方法简单,灵敏且重复性强,可以广泛用于筛选各种p16基因启动子区甲基化的恶性血液病细胞株以及恶性血液病诊断。 展开更多
关键词 巢式甲基化特异性聚合酶链反应 恶性血液病细胞株 P16基因 基因甲基化
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类风湿性关节炎患者外周血单个核细胞IL-10基因启动子甲基化状态研究 被引量:12
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作者 付丽红 丛斌 +6 位作者 甄艳凤 李淑瑾 马春玲 倪志宇 张国忠 左敏 姚玉霞 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1357-1361,共5页
白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)是在类风湿性关节炎中发挥重要免疫调节作用的细胞因子,其基因失活与已分化的Th1和Th2细胞染色质结构重塑有关。为了探讨IL-10基因启动子甲基化及基因失活在类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA... 白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)是在类风湿性关节炎中发挥重要免疫调节作用的细胞因子,其基因失活与已分化的Th1和Th2细胞染色质结构重塑有关。为了探讨IL-10基因启动子甲基化及基因失活在类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)发病和进展中的作用,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)及甲基化特异性聚合酶链反应(MSP),分别检测34例类风湿性关节炎患者和30例健康人外周血单个核细胞IL-10mRNA、蛋白表达水平及基因启动子甲基化状态。结果显示,病例组IL-10mRNA及蛋白表达均低于健康对照组,无统计学差异(P>0.05)。病例组甲基化率(85.29%)高于健康对照组(43.33%),具有统计学差异(χ2=12.439,P=0.000)。IL-10基因启动子甲基化状态与其mRNA表达呈显著负相关(r=?0.579,P=0.001),与所累关节数显著相关,但与血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)、年龄均无相关性(P>0.05)。IL-10mRNA表达与年龄、所累关节数、ESR、CRP及RF均无相关性(P>0.05)。上述结果提示,启动子甲基化可能是IL-10基因失活的重要机制,IL-10基因异常高甲基化状态可能参与了RA的发生发展。 展开更多
关键词 类风湿性关节炎 白细胞介素-10 甲基化特异性聚合酶链反应
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急性髓系白血病中医证型与ID4基因启动子区甲基化相关性研究 被引量:13
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作者 刘菲 徐瑞荣 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期471-473,共3页
目的研究急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者骨髓细胞中ID4基因启动子区甲基化状态与中医证型的关系,探讨ID4基因甲基化与AML发生、发展的关系。方法选取35例2010年2-12月山东中医药大学附属医院血液科住院或门诊AML患者... 目的研究急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者骨髓细胞中ID4基因启动子区甲基化状态与中医证型的关系,探讨ID4基因甲基化与AML发生、发展的关系。方法选取35例2010年2-12月山东中医药大学附属医院血液科住院或门诊AML患者作为试验组,另选取10名山东中医药大学附属医院健康体检中心体检健康者作为对照组,采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific polymerasechain reaction,MS-PCR)检测两组ID4基因启动子区甲基化状态并进行组间及中医证型间比较,分析中医证型与基因启动子区甲基化相关性。结果 AML患者ID4基因启动子区甲基化为27例(77.1%),与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。各证型患者ID4基因启动子区甲基化阳性率由低到高依次为气阴两虚证<瘀血痰结证<毒热炽盛证,差异均有统计学意义(P<0.05)。ID4基因启动子区甲基化阳性患者外周血白细胞数、骨髓原始细胞比例高于阴性患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论毒热炽盛证、瘀血痰结证患者更易出现ID4基因甲基化,ID4基因启动子区甲基化阳性表达从分子水平验证了AML初期中医邪实内存的本质,也一定程度上反映了AML恶性程度。 展开更多
关键词 急性髓系白血病 ID4基因 DNA甲基化 中医分型 甲基化特异性聚合酶链反应
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新疆哈萨克族和汉族食管癌患者FHIT基因甲基化及其与预后的关系 被引量:9
10
作者 李磊 邓彦超 +1 位作者 赵燕 陈艳 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2012年第2期132-135,共4页
目的:探讨和比较新疆哈萨克族和汉族食管癌患者FHIT基因甲基化状态及其与食管癌发生及预后之间的关系。方法:采用甲基化特异性PCR法(methvlation-specific polymerase chain reaction,MSF)测定哈、汉两民族共71例食管癌及癌旁组织标本F... 目的:探讨和比较新疆哈萨克族和汉族食管癌患者FHIT基因甲基化状态及其与食管癌发生及预后之间的关系。方法:采用甲基化特异性PCR法(methvlation-specific polymerase chain reaction,MSF)测定哈、汉两民族共71例食管癌及癌旁组织标本FHIT基因启动子区甲基化状况,建立Cox回归模型分析临床病理指标及FHIT基因甲基化水平等因素与预后的关系。结果:36例哈族食管癌患者癌组织和癌旁组织的FHIT基因启动子甲基化率分别为58.3%和19.4%,35例汉族食管癌患者癌组织和癌旁组织的FHIT基因启动子甲基化率分别为51.4%和14.3%,两民族癌组织FHIT基因的甲基化率均明显高于癌旁组织(P<0.01);哈、汉民族食管癌患者癌组织之间、癌旁组织之间FHIT基因启动子甲基化率无显著性差异(P>0.05)。预后因素分析表明肿瘤浸润程度、TNM分期、淋巴结转移区域数是影响哈、汉民族食管癌预后的独立危险因素,女性性别是保护因素。结论:FHIT基因启动子区甲基化状态与新疆哈族、汉族食管癌的发生有密切的关系,但可能与食管癌预后无关。 展开更多
关键词 哈萨克族 汉族 食管癌 FHIT基因 甲基化特异性PCR
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甲基化特异性PCR检测Prader-Willi综合征 被引量:8
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作者 宋明浩 李麓芸 +2 位作者 傅俊江 李秀蓉 卢光琇 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期54-56,共3页
目的 探讨一种高效、快速检测PraderWilli综合征(PraderWillisyndrome,PWS)的方法。方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylationspecificPCR,MSPCR),其作用原理基于DNA经亚硫酸氢钠处理后,来自父方非甲基化序列的胞嘧啶转变为尿嘧... 目的 探讨一种高效、快速检测PraderWilli综合征(PraderWillisyndrome,PWS)的方法。方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylationspecificPCR,MSPCR),其作用原理基于DNA经亚硫酸氢钠处理后,来自父方非甲基化序列的胞嘧啶转变为尿嘧啶,而来自母方甲基化序列则保持不变,随后用具有高度特异性的引物进行扩增。结果 PWS患者的DNA经亚硫酸氢钠处理后,扩增仅能得到来自母方甲基化序列174bp的产物,与用PW71B印迹杂交甲基化分析结果一致,与临床诊断相符,确诊为PWS。结论 MSPCR可检测由目前已知3种机理导致的PWS,是一种有效的首选筛查方法。 展开更多
关键词 P-W综合征 甲基化 聚合酶链反应
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血清p16基因甲基化联合CYFRA21-1检测在肺癌诊断中的应用 被引量:8
12
作者 姚群峰 宁勇 +1 位作者 张利平 周宜开 《微循环学杂志》 2006年第1期29-31,共3页
目的:通过联合检测血清DNA中p16基因的异常甲基化以及血清细胞角蛋白CYFRA21-1的含量,以探讨两者联合检测在肺癌早期诊断中的临床意义。方法:分离提取53例肺癌患者的外周血血清DNA,采用巢式甲基化特异性PCR方法检测p16基因的甲基化状态... 目的:通过联合检测血清DNA中p16基因的异常甲基化以及血清细胞角蛋白CYFRA21-1的含量,以探讨两者联合检测在肺癌早期诊断中的临床意义。方法:分离提取53例肺癌患者的外周血血清DNA,采用巢式甲基化特异性PCR方法检测p16基因的甲基化状态,同时应用放射免疫法测定血清CYFRA21-1的含量,并与18例肺部良性疾病患者(BLD)和25例健康体检者作对照,分析两者联合应用的临床诊断价值。结果:在38例肺癌患者血清中检测到了p16基因的甲基化,阳性率为71.7%,而CYFRA21-1的阳性率为64.2%;平行联合检测时敏感性增至89.4%。BLD组中p16基因甲基化与CYFRA21-1阳性率分别为22.2%和11.1%;健康对照者血清中p16基因均无异常甲基化。结论:联合检测血清p16基因甲基化与CYFRA21-1含量可提高肺癌诊断的敏感性和特异性,对于肺癌的早期诊断具有重要意义。 展开更多
关键词 肺癌诊断 CYFRA21-1 P16基因甲基化 检测 原发性支气管肺癌 特异性标志物 早期诊断率 联合 血清 痰细胞学检查
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肺癌细胞株APC基因启动子甲基化对其转录的影响 被引量:10
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作者 张丽霞 潘世扬 +7 位作者 陈丹 谢而付 高丽 束永前 陆祖宏 程璐 杨迪 张寄南 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第6期576-580,共5页
背景与目的:抑癌基因家族性腺瘤样结肠息肉病易感基因(adenomatous polyposis coli,APC)启动子区的高甲基化在很多肿瘤中被发现,与这些肿瘤的发生发展相关。本实验室在肺癌患者肿瘤组织中检测到APC甲基化率达47%,为了研究其在肺癌细胞... 背景与目的:抑癌基因家族性腺瘤样结肠息肉病易感基因(adenomatous polyposis coli,APC)启动子区的高甲基化在很多肿瘤中被发现,与这些肿瘤的发生发展相关。本实验室在肺癌患者肿瘤组织中检测到APC甲基化率达47%,为了研究其在肺癌细胞株中的甲基化情况,并进一步了解甲基化对其转录的影响,本研究检测了3株肺癌细胞的抑癌基因APC启动子甲基化状态及其对该基因转录水平的影响。方法:提取3株肺癌细胞株(肺腺癌细胞株SPC-A1、小细胞肺癌细胞株NCI-H446、大细胞肺癌细胞株NCI-H460)的DNA,以经转甲基处理和未做处理的脐带血DNA为阳性、阴性对照,亚硫酸氢盐化学修饰后,用甲基化特异性基因扩增(methylation specific-polymerase chain reaction,MSP)和甲基化基因芯片对APC基因启动子1ACpG岛甲基化进行研究,并用实时荧光定量PCR(real time-polymerase chain reaction)技术,以Sybr-GreenⅠ为荧光染料,β-actin基因为内参照,检测mRNA转录;对甲基化阳性的NCI-H460细胞,分别用1、5、10、15μmol/L的5′-杂氮-2'-脱氧胞嘧啶(5-aza-2-deoxycytidine,5-aza-dC)试剂进行脱甲基化,提取RNA,荧光定量检测其转录变化。结果:SPC-A1和NCI-H446细胞APC甲基化阴性,NCI-H460细胞APC甲基化阳性;甲基化芯片检测NCI-H460细胞在APC启动子1A5个CpG位点均存在甲基化(687、707、714、719、726),SPC-A1和NCI-H446甲基化阴性,荧光定量结果NCI-H460的APC转录较SPC-A1和NCI-H446有明显的下降,仅为二者平均的30.04%;经5-aza-dC脱甲基化作用后,NCI-H460细胞的APC表达增加了约5~10倍,其中10μmol/L浓度作用下,APC表达增加最多。结论:肺癌细胞株NCI-H460中存在APC基因高甲基化,5-aza-dC脱甲基化试剂可以激活其转录。 展开更多
关键词 肺癌细胞株 APC MSP 甲基化芯片 5-AZA-DC 实时荧光定量PCR
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散发性乳腺癌中BRCA1基因甲基化状态与其mRNA表达水平的相关研究 被引量:8
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作者 吴琍 曹伟红 +2 位作者 陈庆峰 郑玲莉 吴艳艳 《外科理论与实践》 2011年第6期576-580,共5页
目的:探讨山东半岛地区散发性乳腺癌中BRCA1基因异常甲基化状态及其与mRNA表达的关系,进而研究其BRCA1基因异常的表观遗传学作用。方法:用甲基化特异性PCR和RT-PCR等方法研究乳腺癌组织、癌旁正常组织及乳腺良性肿瘤中BRCA1基因启动子... 目的:探讨山东半岛地区散发性乳腺癌中BRCA1基因异常甲基化状态及其与mRNA表达的关系,进而研究其BRCA1基因异常的表观遗传学作用。方法:用甲基化特异性PCR和RT-PCR等方法研究乳腺癌组织、癌旁正常组织及乳腺良性肿瘤中BRCA1基因启动子甲基化状态及其mRNA表达水平。结果:在30例散发性乳腺癌中,BRCA1基因甲基化率为43%,BRCA1 mRNA表达下降率为33%。在13例BRCA1发生甲基化的癌组织标本中,BRCA1 mRNA的表达下降率为55%,而在17例BRCA1未发生甲基化的癌组织中,BRCA1 mRNA的表达下降率为18%。在肿瘤分级中,T3分级病人的肿瘤组织中BRCA1甲基化率(74%)和mRNA表达下降率(54%),均分别高于T1+T2分级病人肿瘤组织的BRCA1甲基化率(26%)和mRNA表达下降率(30%);有淋巴结转移病人的肿瘤组织中,BRCA1甲基化率(61%)和mRNA表达下降率(46%),均分别高于无淋巴结转移的甲基化率(17%)和mRNA表达下降率(16%)。结论:BRCA1基因表观遗传学改变是其mRNA表达下降乃至失活的重要原因,且与散发性乳腺癌的恶性程度及淋巴结转移的发生密切相关。 展开更多
关键词 BRCA1基因 DNA甲基化 逆转录-聚合酶链反应 甲基化特异性 散发性乳腺癌
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血浆RNF180启动子甲基化及其蛋白表达在胃癌诊断中的价值 被引量:8
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作者 张学松 张谢 +4 位作者 孙蓓蕾 宋毓飞 陆宏娜 王丹萍 黄志刚 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2014年第22期1432-1436,共5页
目的:探讨血浆RNF180基因启动子甲基化及其蛋白表达在胃癌临床诊断中的价值。方法:采用甲基化特异性PCR法(MSP)和ELISA法检测各组患者血浆中RNF180甲基化状态和RNF180蛋白表达情况,并分别将其与各临床病理指标进行统计学分析。结果:MSP... 目的:探讨血浆RNF180基因启动子甲基化及其蛋白表达在胃癌临床诊断中的价值。方法:采用甲基化特异性PCR法(MSP)和ELISA法检测各组患者血浆中RNF180甲基化状态和RNF180蛋白表达情况,并分别将其与各临床病理指标进行统计学分析。结果:MSP结果显示胃癌患者血浆中RNF180基因启动子甲基化率为62.75%,健康者为21.88%,其差异具有统计学意义(P<0.01)。RNF180甲基化阳性率与肿瘤大小、临床分期、分化程度、淋巴结转移以及远处转移密切相关(P<0.05)。ELISA结果显示胃癌血浆RNF180蛋白水平(23.22±1.36)μg/m L明显低于对照健康组(34.25±2.44)μg/m L,差异具有统计学意义(P<0.01)。胃癌血浆RNF180蛋白表达水平与临床病理特征无统计学意义(P>0.05)。结论:胃癌患者血浆RNF180基因表达存在高甲基化率,而RNF180蛋白表达明显下降,提示血浆RNF180基因甲基化可作为一种微创的检测方法在临床胃癌诊断中有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 RNFl80基因 甲基化 胃癌 血浆 甲基化特异性PCR
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银屑病患者CDKN2A甲基化状态研究 被引量:8
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作者 张杰 《中华实用诊断与治疗杂志》 2012年第2期130-131,134,共3页
目的探讨银屑病患者表皮CDKN2A基因甲基化状态及其在疾病发生机制中的作用。方法采用甲基化特异性PCR技术对48例斑块状银屑病患者表皮(银屑病组)和18例外观正常皮肤表皮(对照组)进行CDKN2A基因甲基化的分析。结果银屑病组CDKN2A基因甲... 目的探讨银屑病患者表皮CDKN2A基因甲基化状态及其在疾病发生机制中的作用。方法采用甲基化特异性PCR技术对48例斑块状银屑病患者表皮(银屑病组)和18例外观正常皮肤表皮(对照组)进行CDKN2A基因甲基化的分析。结果银屑病组CDKN2A基因甲基化状态(37.5%)明显高于对照组(11.1%),差异有统计学意义(P<0.05);斑块状银屑病患者表皮CDKN2A甲基化阳性者PASI积分与阴性者比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论斑块状银屑病患者CDKN2A基因呈高甲基化状态,可能参与斑块状银屑病的发病机制。 展开更多
关键词 银屑病 CDKN2A基因 甲基化 甲基化特异性PCR
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甲基化特异性PCR技术的分析及改良 被引量:7
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作者 杨少辉 戴冬秋 《肿瘤研究与临床》 CAS 2006年第9期594-595,共2页
目的分析并改良甲基化特异性PC(RMSP)技术。方法采用改良MSP法检测胃癌患者胃黏膜组织中DAPK基因的甲基化情况。结果100%的新鲜组织和24.1%的石蜡包埋组织至少可以得到甲基化和非甲基化产物中的一种产物。结论该法操作简便、灵敏度高、... 目的分析并改良甲基化特异性PC(RMSP)技术。方法采用改良MSP法检测胃癌患者胃黏膜组织中DAPK基因的甲基化情况。结果100%的新鲜组织和24.1%的石蜡包埋组织至少可以得到甲基化和非甲基化产物中的一种产物。结论该法操作简便、灵敏度高、特异性强,适用于对新鲜组织的检测,但在石蜡包埋组织的研究中较为困难。 展开更多
关键词 甲基化特异性PCR技术
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脾源性酪氨酸激酶基因的再表达对乳腺癌细胞生长、转移的影响 被引量:3
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作者 曹华祥 丁永斌 王学浩 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期1074-1075,共2页
目的探讨脾源性酪氨酸激酶(Syk)基因的再表达对裸鼠乳腺癌肿瘤生长和转移的影响。方法5氮2′脱氧胞苷处理人乳腺癌细胞株MDAMB435s,甲基化特异性PCR(MSP)检测Syk基因的甲基化,用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测Syk基因的再表达,并用此处... 目的探讨脾源性酪氨酸激酶(Syk)基因的再表达对裸鼠乳腺癌肿瘤生长和转移的影响。方法5氮2′脱氧胞苷处理人乳腺癌细胞株MDAMB435s,甲基化特异性PCR(MSP)检测Syk基因的甲基化,用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测Syk基因的再表达,并用此处理过的细胞株和未经处理的细胞株分别接种于10裸鼠皮下,观察裸鼠成瘤率及肿瘤转移情况。结果MSP检测用5氮2′脱氧胞苷处理过的人乳腺癌MDAMB435s细胞株,Syk基因启动子没有甲基化,RTPCR可检测到Syk基因,用有Syk基因再表达的MDAMB435s细胞株接种于10只裸鼠皮下,8周后有2只形成肿瘤,无1例肺部转移,而无Syk基因表达细胞株10只都形成肿瘤,并在肺部形成转移灶。对照组的成瘤率及肺转移率显著高于治疗组。结论5氮2′脱氧胞苷通过去甲基化使MDAMB435细胞株中Syk基因再表达,Syk基因的再表达可抑制荷瘤裸鼠乳腺癌的生长和转移。 展开更多
关键词 5-氮-2’-脱氧胞苷 Syk 乳腺癌 甲基化特异性PCR 人乳腺癌细胞株 肺部转移 癌细胞生长 酪氨酸激酶 再表达 MDA-MB-435S
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Igr5启动子甲基化在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义 被引量:7
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作者 费梦 张传宏 《长江大学学报(自科版)(下旬)》 CAS 2012年第10期6-8,4-5,共3页
目的:探讨lgr5甲基化与人类卵巢癌临床病理之间的联系,以及其作为判定总的生存率的价值。方法:采用甲基化特异性聚合酶链式反应(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)方法分析卵巢癌患者石蜡组织中lgr5启动子DNA甲基化... 目的:探讨lgr5甲基化与人类卵巢癌临床病理之间的联系,以及其作为判定总的生存率的价值。方法:采用甲基化特异性聚合酶链式反应(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)方法分析卵巢癌患者石蜡组织中lgr5启动子DNA甲基化情况。结果:lgr5在正常卵巢组织中几乎无甲基化改变,而在良性卵巢肿瘤中频率升高,上皮性卵巢癌组织中甲基化频率明显升高(P<0.01);lgr5甲基化与低分化上皮性卵巢癌(P<0.01)、肿瘤分期Ⅲ~Ⅳ(P<0.05)以及淋巴结转移(P<0.01)相关,但与组织类型关系不明显(P>0.05)。在70例上皮性卵巢癌患者组织中,lgr5甲基化频率为62.9%(44/70),并且5年总的生存率明显低于未甲基化的患者(P<0.05)。结论:lgr5甲基化与上皮性卵巢癌分化程度、肿瘤分期Ⅲ~Ⅳ以及淋巴结转移密切相关,同时也可以作为上皮性卵巢癌患者总的生存率的判定指标之一。 展开更多
关键词 lgr5甲基化 上皮性卵巢癌 总的生存率 甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)
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抗凋亡基因bcl-2启动子CpG岛的高甲基化状态见于28.3%(13/46例)的膀胱癌患者尿沉淀细胞DNA 被引量:4
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作者 顾连平 余坚 +5 位作者 费琦 张红宇 徐慧莉 顾峻 朱同玉 朱景德 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期497-501,共5页
目的:检测上海地区膀胱癌患者尿沉淀细胞中3个肿瘤相关基因启动子CpG岛的甲基化谱式异常频率,继而评估其应用前景。方法:采用甲基化特异性PCR方法分析尿沉淀细胞DNA中DAPK1、bcl2和hTERT3个基因的启动子CpG岛甲基化状态,并通过RTPCR方... 目的:检测上海地区膀胱癌患者尿沉淀细胞中3个肿瘤相关基因启动子CpG岛的甲基化谱式异常频率,继而评估其应用前景。方法:采用甲基化特异性PCR方法分析尿沉淀细胞DNA中DAPK1、bcl2和hTERT3个基因的启动子CpG岛甲基化状态,并通过RTPCR方法评估DAPK1基因在膀胱癌细胞系中的表达状态。结果:对膀胱癌细胞系中DAPK1基因的启动子CpG岛甲基化状态及其表达(mRNA水平上)所做的分析,确立了高甲基化状态与表达静息化之间的相关性。对46例临床确诊的膀胱癌患者和84例非膀胱癌对照(包括前46例术后的36例)的尿沉淀细胞中DNA甲基化的分析发现,仅bcl2基因的高甲基化见之于28.3%(13/46例)的膀胱癌患者,而84例的对照中均为去甲基化状态。结论:在美国膀胱癌患者尿沉淀细胞中频发DNA高甲基化的靶点在上海地区膀胱癌患者人群中频率很低,因此寻找在后者中频发DNA高甲基化的新靶点实属必要。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 DNA甲基化 基因 BCL-2 启动区(遗传学) CPG岛 尿沉淀细胞 甲基化特异性聚合酶链反应
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