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苜蓿遗传多样性和亲缘关系的SSR和ISSR分析 被引量：41
1
作者 魏臻武 符昕 +3 位作者 耿小丽 赵艳 曹致中 胡自治 《草地学报》 CAS CSCD 2007年第2期118-123,共6页
在苜蓿(Medicago sativa L.)基因组SSR和ISSR分析的基础上,筛选出8对SSR引物和12个ISSR随机引物,通过PCR扩增在55个国内外苜蓿品种(品系)中获得126条多态性位点。利用SSR和ISSR标记对其DNA指纹图谱和遗传多样性进行研究。采用类平均法(U... 在苜蓿(Medicago sativa L.)基因组SSR和ISSR分析的基础上,筛选出8对SSR引物和12个ISSR随机引物,通过PCR扩增在55个国内外苜蓿品种(品系)中获得126条多态性位点。利用SSR和ISSR标记对其DNA指纹图谱和遗传多样性进行研究。采用类平均法(UPGMA)Nei氏距离进行聚类分析,将55个苜蓿种质划分为4个大类群和7个类型,为苜蓿引种、亲本选配和种质资源评价提供依据。分子标记分析结果表明:我国苜蓿地方品种遗传基础广阔,在基因型表现特异性的同时又有较强的地域性;我国苜蓿育成品种间的遗传距离大,表现出遗传基础的异质性。 展开更多
关键词 苜蓿(medicago sativa l.) 分子标记 微卫星标记 苜蓿基因组 苜蓿种质资源
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黄土高原半湿润区苜蓿草地土壤干燥化与草粮轮作水分恢复效应 被引量：19
2
作者 方新宇 李军 +1 位作者 王学春 任晶晶 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第16期3348-3356,共9页
【目的】揭示黄土高原半湿润区苜蓿草地土壤干燥化发生规律与草粮轮作对干燥化苜蓿草地土壤水分恢复效应。【方法】在甘肃镇原试验站实地测定了不同生长年限苜蓿草地与不同类型草粮轮作粮田深层土壤湿度,分析了苜蓿草地土壤干层分布特... 【目的】揭示黄土高原半湿润区苜蓿草地土壤干燥化发生规律与草粮轮作对干燥化苜蓿草地土壤水分恢复效应。【方法】在甘肃镇原试验站实地测定了不同生长年限苜蓿草地与不同类型草粮轮作粮田深层土壤湿度,分析了苜蓿草地土壤干层分布特征与草粮轮作对土壤干层水分恢复效应。【结果】15—28年生苜蓿草地0—1000cm土层土壤湿度平均值为10.20%,土壤干燥化速率为34.2mm·a-1,土壤干层最大分布深度超过了1400cm;苜蓿草地翻耕并轮作3—25年粮食作物后土壤干层湿度能够逐步恢复,土壤干层恢复厚度为583cm,土壤湿度恢复速率为77.3mm·a-1,土壤湿度恢复度达到83.3%。通过草粮轮作方式使15年生苜蓿草地土壤湿度恢复到当地土壤稳定湿度值需要8年以上。【结论】有利于土壤水分恢复的适宜草粮轮作模式是"10年生苜蓿→8年以上轮作粮食作物"。 展开更多
关键词 黄土高原 半湿润区 紫花苜蓿 土壤干燥化 草粮轮作 水分恢复
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转GsPPCK1基因苜蓿植株的获得及其耐碱性分析 被引量：12
3
作者 魏正巍 朱延明 +5 位作者 化烨 才华 纪巍 柏锡 王臻昱 文益东 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期68-75,共8页
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶激酶(phosphoenolpyruvate carboxylase kinase,PPCK)是一种钙不依赖的丝氨酸/苏氨酸(Ser/Thr)类蛋白激酶,参与碳氮代谢等多个生物学过程,然而其在碱胁迫反应中的作用尚未见报道。本研究在前期野生大豆碱胁迫基... 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶激酶(phosphoenolpyruvate carboxylase kinase,PPCK)是一种钙不依赖的丝氨酸/苏氨酸(Ser/Thr)类蛋白激酶,参与碳氮代谢等多个生物学过程,然而其在碱胁迫反应中的作用尚未见报道。本研究在前期野生大豆碱胁迫基因表达谱数据基础上,采用同源克隆的方法分离野生大豆(Glycine soja)PPCK1基因,该基因编码的氨基酸序列与大豆(Glycine max)PPCK1蛋白(AAQ83695.1)具有99%的相似性,被命名为GsPPCK1。在50mmolL–1NaHCO3胁迫处理3h内,根和叶中GsPPCK1基因上调表达,属碱胁迫早期应答基因。通过农杆菌介导法对肇东苜蓿进行遗传转化,并对RT-PCR阳性的超表达转基因株系进行耐碱性分析,在100mmolL–1NaHCO3处理15d后转基因株系生长状态良好,而非转基因对照株系明显萎蔫、失绿、甚至死亡;转基因株系的丙二醛含量和相对质膜透性显著低于非转基因株系(P<0.05),而叶绿素含量和根系活力显著高于非转基因对照(P<0.05),说明超量表达GsPPCK1基因增强了苜蓿的耐碱能力。以上结果表明,GsPPCK1参于植物耐碱胁迫反应过程,在碱胁迫基因工程研究领域具有良好的理论和实际应用意义。 展开更多
关键词 苜蓿 GsPPCK1 转基因株系 耐碱性分析
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施氮对紫花苜蓿氮代谢及氮积累的影响 被引量：11
4
作者 刘晓静 张进霞 +1 位作者 叶芳 齐鹏 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1399-1405,共7页
本试验以2年龄的甘农3号紫花苜蓿为材料,研究不同氮素水平下不同刈割茬次紫花苜蓿氮代谢及对氮积累的影响。结果表明:与CK相比,施氮处理能显著(P<0.05)增加2年龄紫花苜蓿叶片中硝酸还原酶(NR)、谷氨酰胺合成酶(GS)、转氨酶(GOT、GPT... 本试验以2年龄的甘农3号紫花苜蓿为材料,研究不同氮素水平下不同刈割茬次紫花苜蓿氮代谢及对氮积累的影响。结果表明:与CK相比,施氮处理能显著(P<0.05)增加2年龄紫花苜蓿叶片中硝酸还原酶(NR)、谷氨酰胺合成酶(GS)、转氨酶(GOT、GPT)活性、可溶性蛋白含量及蛋白总量,施氮103.5 kg·hm-2时各氮代谢酶活性最高。相关性分析表明,施氮量(x)与紫花苜蓿蛋白总量(y)符合一元二次方程y=-0.113x2+53.632 x+1 681.911(R2=0.999**)。甘农3号紫花苜蓿各茬氮代谢关键酶活性、可溶性蛋白含量均与氮积累量呈极显著正相关关系,说明施氮能提高紫花苜蓿氮代谢关键酶活性和增加其氮积累。研究结果可为紫花苜蓿蛋白生产总量的提高奠定基础。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 氮素水平 氮代谢 氮积累
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利用AH1基因的遗传转化改良紫花苜蓿耐盐性 被引量：6
5
作者 金太成 孟大伟 +1 位作者 王悦 杨丽萍 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1724-1729,共6页
由于盐胁迫严重限制了苜蓿的产量,研究构建了沙打旺(Astragalus adsurgens Pall)解螺旋酶基因AH1的植物表达载体p Cambia-AH1,并利用农杆菌介导法将目的基因转化到紫花苜蓿(Medicago sativa L.)中,旨在获得抗盐胁迫能力强的转基因植株... 由于盐胁迫严重限制了苜蓿的产量,研究构建了沙打旺(Astragalus adsurgens Pall)解螺旋酶基因AH1的植物表达载体p Cambia-AH1,并利用农杆菌介导法将目的基因转化到紫花苜蓿(Medicago sativa L.)中,旨在获得抗盐胁迫能力强的转基因植株。半定量RT-PCR检测和Northern杂交表明AH1基因在5个转基因株系中稳定表达。在盐胁迫条件下,与野生型对照植株相比,AH1转基因株系对中度盐胁迫(200 mmol/L Na Cl)具有较强的耐受性。而且,在中度盐胁迫条件下(200 mmol/L Na Cl),转基因植株累积了大量的游离脯氨酸和可溶糖。研究表明AH1基因可以改善植物盐渗透调节能力,从而导致了AH1转基因植株的抗盐胁迫能力的提高。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 AH1 转基因苜蓿 耐盐性
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苜蓿矮化病毒实时荧光定量PCR检测体系的建立
6
作者 党开祥 万超越 +2 位作者 王思越 李克梅 托伦巴特·毕亚洪 《新疆农业大学学报》 CAS 2023年第3期234-239,共6页
为灵敏、快速检测紫花苜蓿(Medicago sativa L.)中的苜蓿矮化病毒(ADV),根据该病毒L蛋白保守序列设计特异性引物,建立基于SYBR GreenⅠ染料的实时荧光定量PCR检测体系,并应用该方法对田间样品和种子进行快速检测。结果表明,建立的RT-qPC... 为灵敏、快速检测紫花苜蓿(Medicago sativa L.)中的苜蓿矮化病毒(ADV),根据该病毒L蛋白保守序列设计特异性引物,建立基于SYBR GreenⅠ染料的实时荧光定量PCR检测体系,并应用该方法对田间样品和种子进行快速检测。结果表明,建立的RT-qPCR检测技术可对苜蓿中的苜蓿矮化病毒含量进行精确检测,最低检测浓度为9.8×10^(2)copies/μL,灵敏度约是常规PCR的100倍。通过对101份苜蓿样品的检测验证,该方法阳性检出率为61%,较常规PCR高6%。挑选的10份苜蓿种子中有3份被检测出携带苜蓿矮化病毒,病毒含量范围为0~3.02×10^(6)copies/μL。表明建立的RT-qPCR检测体系特异性强、灵敏度高,可应用于苜蓿矮化病毒的定量检测。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 苜蓿矮化病毒 实时荧光定量PCR 检测体系
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紫花苜蓿MsSQE1的克隆及对皂甙合成的功能分析 被引量：4
7
作者 康俊梅 张俏燕 +5 位作者 蒋旭 王珍 张铁军 龙瑞才 崔会婷 杨青川 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期247-260,共14页
【目的】鲨烯环氧酶(squalene epoxidases,SQE)是苜蓿皂甙合成途径中的一种限速酶,与苜蓿皂甙的合成密切相关。通过对苜蓿鲨烯环氧酶(MsSQE1)基因的克隆及在苜蓿中过表达,探究鲨烯环氧酶对皂甙合成的作用机制。【方法】以模式植物蒺藜... 【目的】鲨烯环氧酶(squalene epoxidases,SQE)是苜蓿皂甙合成途径中的一种限速酶,与苜蓿皂甙的合成密切相关。通过对苜蓿鲨烯环氧酶(MsSQE1)基因的克隆及在苜蓿中过表达,探究鲨烯环氧酶对皂甙合成的作用机制。【方法】以模式植物蒺藜苜蓿鲨烯环氧酶基因序列设计引物,同源克隆苜蓿MsSQE1。对MsSQE1进行生物信息学分析;通过基因枪轰击技术,使MsSQE1在洋葱表皮瞬时表达,进行亚细胞定位。利用qRT-PCR方法分析该基因在根、茎、叶中的表达水平,以及在紫外辐射、ABA和GA3条件下的表达模式。在茉莉酸甲酯(MeJA)的诱导下,分析MsSQE1的转录水平,及对苜蓿皂甙含量的影响。利用根癌农杆菌转化体系,获得过表达MsSQE1的阳性转基因植株,并测定转基因植株的皂甙含量。【结果】克隆了MsSQE1的cDNA序列,开放阅读框1 578 bp,编码525个氨基酸,等电点为8.59。同源性比对分析,其氨基酸序列与蒺藜苜蓿中SQE1氨基酸序列同源性为98.6%,与拟南芥的同源性为80%。亚细胞定位显示,MsSQE1可能定位于细胞膜。组织特异性表达分析显示,MsSQE1在叶中的表达量最高,茎中次之,根中的表达量最低。在紫外辐射、ABA和GA3的诱导表达显示,紫外辐射诱导24 h,叶中表达量最高;GA3(50μmol·L^-1)和ABA(100μmol·L^-1)处理,均为8 h叶中表达量最高;MeJA处理能诱导MsSQE1表达量上调的同时苜蓿总皂甙含量也随着MsSQE1表达的上调而增加。分析过表达MsSQE1转基因苜蓿和转空载体苜蓿株系发现,MsSQE1的表达水平和总皂甙含量均升高,其中MsSQE1的表达水平是对照的3.11-9.45倍,总皂甙含量比对照提高14.26%-28.05%,暗示MsSQE1是苜蓿皂甙合成途径中的一种关键调节酶。【结论】从豆科牧草紫花苜蓿中克隆了MsSQE1并进行功能分析。在苜蓿中过表达MsSQE1能增加苜蓿总皂甙含量,暗示MsSQE1的表达影响苜蓿皂甙的生物合成,可能对皂甙的合成有重� 展开更多
关键词 紫花苜蓿 鲨烯环氧酶基因(MsSQE1) 苜蓿皂甙 实时荧光定量PCR
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低pH对苜蓿共生结瘤与生长的影响研究 被引量：2
8
作者 杨敏 陈秀虎 +1 位作者 黎晓峰 玉永雄 《江西农业学报》 CAS 2007年第7期68-70,73,共4页
研究了低pH条件对苜蓿生长和结瘤的影响。结果表明:与对照(pH6.5)相比,pH4.5处理极显著地抑制苜蓿初生根的伸长和根瘤菌Rhizobium meliloti的生长,进而抑制共生结瘤和苜蓿植株的生长。低pH并不直接影响苜蓿根毛变形,导致根毛变形率下降... 研究了低pH条件对苜蓿生长和结瘤的影响。结果表明:与对照(pH6.5)相比,pH4.5处理极显著地抑制苜蓿初生根的伸长和根瘤菌Rhizobium meliloti的生长,进而抑制共生结瘤和苜蓿植株的生长。低pH并不直接影响苜蓿根毛变形,导致根毛变形率下降的根本原因在于根瘤菌受到低pH抑制。 展开更多
关键词 低PH 结瘤 根毛变形 结瘤因子 苜蓿 生长
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MsNHX1基因转化紫花苜蓿及转基因植株的鉴定 被引量：8
9
作者 刘小琳 康俊梅 +3 位作者 孙彦 王继峰 胡晓艳 杨青川 《草地学报》 CAS CSCD 2008年第2期115-120,共6页
以紫花苜蓿"中苜1号"(Medicago sativa L.cv.Zhongmu No.1)7日龄无菌苗子叶为外植体,建立适用于农杆菌介导的转基因组织再生体系,并进行MsNHX1基因转化试验。MsNHX1基因编码"中苜1号"液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白,将... 以紫花苜蓿"中苜1号"(Medicago sativa L.cv.Zhongmu No.1)7日龄无菌苗子叶为外植体,建立适用于农杆菌介导的转基因组织再生体系,并进行MsNHX1基因转化试验。MsNHX1基因编码"中苜1号"液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白,将其转化到"中苜1号"中,以期获得耐盐性更好的苜蓿材料。利用PCR技术、RT-PCR技术及Dot Blotting技术对转基因植株进行鉴定,结果显示:MsNHX1基因已经整合到"中苜1号"基因组内,并且可以转录为mRNA。 展开更多
关键词 中苜1号 紫花苜蓿 MsNHX1基因 转化 转基因植株鉴定
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紫花苜蓿MsZIP基因RNAi表达载体的构建及苜蓿转化 被引量：2
10
作者 李燕 孙彦 +3 位作者 康俊梅 张铁军 杨青川 房锋 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2012年第4期8-14,共7页
根据已经得到的MsZIP基因序列(GenBank序列号:HQ911778),设计两对含有酶切位点的引物ZIPF1/ZIPF2和ZIPR1/ZIPR2,合成用于构建干扰载体的正反义片段。将正反义片段插入到载体pART27中,构建成为含有发夹结构的RNAi干扰载体pART-F-R。采用... 根据已经得到的MsZIP基因序列(GenBank序列号:HQ911778),设计两对含有酶切位点的引物ZIPF1/ZIPF2和ZIPR1/ZIPR2,合成用于构建干扰载体的正反义片段。将正反义片段插入到载体pART27中,构建成为含有发夹结构的RNAi干扰载体pART-F-R。采用农杆菌介导的方法,将该干扰载体成功转化到苜蓿中,得到9株抗性苗,选取其中的3株进行PCR鉴定,结果表明成功得到转基因苜蓿。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 MsZIP基因 RNAi干扰载体构建 苜蓿转化
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