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检测非洲猪瘟McAb-ELISA竞争试剂盒的建立及初步应用 被引量：13
1
作者 董志珍 肖妍 +2 位作者 赵祥平 栾慎顺 张霞 《中国动物检疫》 CAS 2012年第4期37-40,共4页
用基因重组技术制备的非洲猪瘟蛋白P54免疫BALB/C小鼠,将免疫鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用有限稀释法进行克隆,获得能稳定分泌抗ASFV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。使用该单克隆抗体,建立了检测血清中非洲猪瘟抗体的竞争法ELISA... 用基因重组技术制备的非洲猪瘟蛋白P54免疫BALB/C小鼠,将免疫鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用有限稀释法进行克隆,获得能稳定分泌抗ASFV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。使用该单克隆抗体,建立了检测血清中非洲猪瘟抗体的竞争法ELISA。实验结果表明:ELISA竞争法特异性高,无交叉反应,灵敏度高于间接免疫荧光法,可用于猪血清的非洲猪瘟抗体检测。该法的建立对非洲猪瘟实验诊断的标准以及流行病学调查具有重要的现实意义。 展开更多
关键词 单克隆抗体 mcab-elisa 非洲猪瘟 实验诊断
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抗猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体制备及部分特性鉴定 被引量：13
2
作者 裴敦国 葛俊伟 +2 位作者 马广鹏 姜艳萍 李一经 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2008年第7期84-89,共6页
以原核表达系统pGEX-6p-1-N/BL21经IPTG诱导表达的重组PEDV N-GST融合蛋白作为免疫抗原,免疫BALB/c小鼠,运用淋巴细胞杂交瘤技术,制备单克隆抗体,用原核表达系统T12-pPROHTa/BL21经IPTG诱导表达的PEDV N蛋白做筛选抗原,通过间接ELISA进... 以原核表达系统pGEX-6p-1-N/BL21经IPTG诱导表达的重组PEDV N-GST融合蛋白作为免疫抗原,免疫BALB/c小鼠,运用淋巴细胞杂交瘤技术,制备单克隆抗体,用原核表达系统T12-pPROHTa/BL21经IPTG诱导表达的PEDV N蛋白做筛选抗原,通过间接ELISA进行筛选,获得两株抗PEDV N蛋白杂交瘤细胞,命名为2E3、4C6。亚类鉴定为IgG1和IgG2a型,均为к链抗体,染色体数平均为(91±7)对。用制备的单抗与pGEX-6p-1-N/BL21、T12-pPROHTa/BL21诱导表达后的菌体裂解物做Western Blot试验,在不同载体表达的N蛋白处出现明显的特异性条带;通过间接ELISA做病原检测,这两株单抗不与TGEV、PRV和PrV发生交叉反应,而与PEDV显示良好的特异性反应。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 单克隆抗体 WESTERNBLOT 间接elisa
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抗重组日本血吸虫P38抗原单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：6
3
作者 吴锦雅 周晓红 陈晓光 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期110-113,共4页
目的在大肠埃希菌中可溶性表达日本血吸虫P38(SjP38)抗原分子,并以其纯化产物为抗原,制备抗SjP38单克隆抗体(McAb)。方法将pET32(a)-P38重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),在1mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导下表达,超声破菌后获得... 目的在大肠埃希菌中可溶性表达日本血吸虫P38(SjP38)抗原分子,并以其纯化产物为抗原,制备抗SjP38单克隆抗体(McAb)。方法将pET32(a)-P38重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),在1mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导下表达,超声破菌后获得可溶性表达产物,通过镍柱一步法纯化,以纯化的重组SjP38为抗原,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb,用ELISA和有限稀释法筛选出高分泌滴度McAb杂交瘤细胞株,测定其免疫球蛋白亚类及其效价,蛋白质印迹法(Westernblotting)分析其特异性。结果筛选出能稳定分泌抗重组SjP38单克隆抗体的8株杂交瘤细胞株,均为IgG1;Westernblotting分析显示8株单抗能与日本血吸虫虫卵抗原中的天然P38发生特异性结合。结论制备的抗P38杂交瘤细胞株能分泌高滴度、高特异性的McAb。 展开更多
关键词 单克隆抗体 重组日本血吸虫 制备 38抗原 BL21(DE3) 杂交瘤细胞株 BALB/c小鼠 blotting 免疫球蛋白亚类 Western 大肠埃希菌 鉴定 mcab 蛋白质印迹法 可溶性表达 mol/L 有限稀释法 elisa 杂交瘤技术 特异性结合 抗原分子
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应用单克隆抗体夹心酶联免疫吸附试验检测兔出血症病毒 被引量：3
4
作者 孙智锋 杜念兴 徐为燕 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期334-337,共4页
应用建立的单克隆抗体夹心酶联兔疫吸附试验（ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ），检测了人工感染兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）ＤＪＲＫ细胞毒、肝毒的兔以及自然感染ＲＨＤＶ的兔的组织样品。结果表明，感染死亡兔的肝、脾、肾、骨髓样品病毒抗原的... 应用建立的单克隆抗体夹心酶联兔疫吸附试验（ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ），检测了人工感染兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）ＤＪＲＫ细胞毒、肝毒的兔以及自然感染ＲＨＤＶ的兔的组织样品。结果表明，感染死亡兔的肝、脾、肾、骨髓样品病毒抗原的检出率为１００％，淋巴结和肌肉的检出率分别为９７．５％和７９．５％。ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ能检出肌肉中血凝试验不能检出的ＲＨＤＶ抗原。此外，还用ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ检测了肝毒人工感染兔血中ＲＨＤＶ的动态，并对１０份兔出血症脏器灭活苗的效价作了滴定。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 检测 mcab-elisa方法
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抗猪传染性胃肠炎M蛋白单克隆抗体的制备及部分特性鉴定 被引量：6
5
作者 乔薪瑗 李桂伟 +2 位作者 张冠群 李海滨 李一经 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期874-878,共5页
以纯化的猪传染性胃肠炎病毒重组M蛋白免疫BALB／c小鼠，按常规方法进行融合、筛选，最终获得3株抗TGEVM蛋白的杂交瘤细胞系183、3C2、4A5，染色体平均记数为89对、92对、90对，间接ELISA检测183、3C2、4A5细胞培养上清的效价分别为1／4... 以纯化的猪传染性胃肠炎病毒重组M蛋白免疫BALB／c小鼠，按常规方法进行融合、筛选，最终获得3株抗TGEVM蛋白的杂交瘤细胞系183、3C2、4A5，染色体平均记数为89对、92对、90对，间接ELISA检测183、3C2、4A5细胞培养上清的效价分别为1／4000、1／1000、1／4000，腹水效价分别为2×10^4、2×10^5、2×10^5。通过间接ELISA做病原检测，这3株单抗不与猪流行性腹泻病毒、猪伪狂犬病病毒和猪轮状病毒发生交叉反应，而与传染性胃肠炎病毒显示良好的特异性。用制备的单抗通过间接免疫荧光做病原检测，发现染色后TGEV感染的细胞培养物在胞浆和细胞膜上出现黄绿色荧光，未接种病毒的细胞培养物未见有黄绿色闪亮荧光，结果表明，所制备的抗重组TGEVM蛋白的单抗对病原检测具有很高的特异性，为TGEV准确快速的病原诊断和TGEV感染相关的基础性研究提供了物质基础。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 单克隆抗体 间接elisa 间接免疫荧光
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酶联免疫印渍法检测脑囊虫病人循环抗原的研究 被引量：5
6
作者 李素云 王恩荣 田边将信 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 1996年第2期114-116,共3页
用ＭｃＡｂ－ＥＬＩＢ检测脑囊虫病人血清中ＣＡｇ，并与ＤＡＢＳ－ＥＬＩＳＡ进行了比较，其阳性率分别为８９．２％和８１．１％。４０例正常人，３０例单纯绦虫病患者及２９例包虫病人血清，用ＭｃＡｂ－ＥＬＩＢ检测囊虫ＣＡｇ，除... 用ＭｃＡｂ－ＥＬＩＢ检测脑囊虫病人血清中ＣＡｇ，并与ＤＡＢＳ－ＥＬＩＳＡ进行了比较，其阳性率分别为８９．２％和８１．１％。４０例正常人，３０例单纯绦虫病患者及２９例包虫病人血清，用ＭｃＡｂ－ＥＬＩＢ检测囊虫ＣＡｇ，除１例包虫病患者呈轻度交叉反应外均为阴性。结果表明本法具有高特异性与敏感性。对５７例接受阿苯达唑治疗的脑囊虫病人，用ＭｃＡｂ－ＥＬＩＢ法及ＤＡＢＳ－ＥＬＩＳＡ于治疗后１年内检测血清中ＣＡｇ，累计检出率分别为４３．９％及２２．８％。表明ＭｃＡｂ－ＥＬＩＢ法测ＣＡｇ具有更好的疗效考核价值。 展开更多
关键词 DABS elisa 脑囊虫病 CAG 抗原 循环抗原
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猪繁殖与呼吸综合征病毒S1株单抗AG1的生物学特性及夹心ELISA诊断方法的建立 被引量：5
7
作者 祁贤 张婉华 +1 位作者 叶向阳 朱永军 《上海农业学报》 CSCD 2002年第3期87-91,共5页
用纯化的猪繁殖呼吸综合征病毒沪1株（PRRSV-SI）病毒液作抗原,免疫BALB/C小鼠,获得1株稳定分泌抗PRRSV单抗的杂交瘤细胞株,命名为AG1。ELISA交叉试验和阻断试验表明,AGI具有高度特异性。AGI可与PRRSV-S1、美洲株VR-2332、欧洲株LV反应... 用纯化的猪繁殖呼吸综合征病毒沪1株（PRRSV-SI）病毒液作抗原,免疫BALB/C小鼠,获得1株稳定分泌抗PRRSV单抗的杂交瘤细胞株,命名为AG1。ELISA交叉试验和阻断试验表明,AGI具有高度特异性。AGI可与PRRSV-S1、美洲株VR-2332、欧洲株LV反应,对猪细小病毒（PPV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪乙型脑炎病毒（JEV）均不反应。阳性杂交瘤细胞的上清液效价是1:256～512,腹水效价在1:10-3～10-5之间。AG1有100条染色体,琼脂双扩散试验结果表明AG1属于IgG2b。Western blotting试验表明 AG1是针对 N蛋白抗原表位的特异性单抗。以AG1为捕捉抗原抗体和酶标抗体,建立了快速检测PRRSV抗原的单抗夹心ELISA法,该方法具有快速、灵敏、准确、广谱等特点。 展开更多
关键词 生物学特性 诊断方法 繁殖呼吸综合征病毒 单克隆抗体 S1株 夹心elisa 猪
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相思子毒素-a双抗体夹心ELISA法的建立和初步应用 被引量：5
8
作者 李小兵 谢光洪 +7 位作者 周昌芳 张志刚 周晓翠 宋文学 张乃生 王兴龙 高宏伟 王哲 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期962-964,967,共4页
以已制备的抗相思子毒素-a(abrin-a)的单克隆抗体(McAb)4G1和兔源多抗建立了abrin-a双抗体夹心ELISA法。abrin-a质量浓度在15.62~250.00μg/L的范围内,质量浓度的对数值与其D450值呈直线相关,回归方程为y=1.0467x+0.5277(R2=0.9992,n=5)... 以已制备的抗相思子毒素-a(abrin-a)的单克隆抗体(McAb)4G1和兔源多抗建立了abrin-a双抗体夹心ELISA法。abrin-a质量浓度在15.62~250.00μg/L的范围内,质量浓度的对数值与其D450值呈直线相关,回归方程为y=1.0467x+0.5277(R2=0.9992,n=5),检测灵敏度为7.81ng/mL。该法与相思子凝集素、蓖麻毒素(ri-cin)和蓖麻凝集素无交叉反应。经初步用于人工污染abrin-a香肠样品和自来水样品检测,回收率分别为92.0%和85.0%,变异系数(CV)<6%。表明该检测方法具有快速、特异、灵敏等特点,可望用于食品、饲料和饮用水中abrin-a检验。 展开更多
关键词 相思子毒素-a mcab elisa 检测
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罗非鱼无乳链球菌双抗体夹心ELISA检测方法的建立 被引量：6
9
作者 张新艳 《福建农业学报》 CAS 2014年第6期570-574,共5页
通过杂交瘤技术制备抗罗非鱼无乳链球菌SIP融合蛋白单克隆抗体2株:1C9和6G5,均为IgM,效价分别为10-5和10-4,间接ELISA结果显示单克隆抗体1C9对无乳链球菌具有良好的检测特异性和灵敏性;同时制备兔抗罗非鱼无乳链球菌SIP融合蛋白多克隆... 通过杂交瘤技术制备抗罗非鱼无乳链球菌SIP融合蛋白单克隆抗体2株:1C9和6G5,均为IgM,效价分别为10-5和10-4,间接ELISA结果显示单克隆抗体1C9对无乳链球菌具有良好的检测特异性和灵敏性;同时制备兔抗罗非鱼无乳链球菌SIP融合蛋白多克隆抗体及其HRP酶标记物,兔抗SIP蛋白多克隆抗体的效价为10-6,经标记的抗体效价为10-4,最佳抗体工作浓度为1∶400。建立双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)检测罗非鱼无乳链球菌的方法,具良好的特异性,检测灵敏度为0.85×106 CFU·mL-1。双抗体夹心ELISA检测实际应用结果与双重PCR检测比较,相对符合率为98.33%,检测结果可靠性高。 展开更多
关键词 罗非鱼 无乳链球菌 SIP蛋白 单克隆抗体 DAS-elisa
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消灭丝虫病地区病原学监测方法的研究 被引量：5
10
作者 邓绪礼 高长兰 +8 位作者 李桂萍 陈锡欣 徐凤全 赵中平 缪峰 李顺平 刘新 王培义 刘波 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2000年第4期266-268,共3页
为筛选适宜在消灭丝虫病地区应用的简易、经济、实用的病原学监测方法 ,对单克隆抗体 (Mc Ab) - EL ISA检测丝虫特异 Ig G4和快速免疫色谱技术 (ICT)检测血清和血浆中的班氏丝虫抗原诊断丝虫病的效果进行对比研究。结果检测班氏微丝蚴... 为筛选适宜在消灭丝虫病地区应用的简易、经济、实用的病原学监测方法 ,对单克隆抗体 (Mc Ab) - EL ISA检测丝虫特异 Ig G4和快速免疫色谱技术 (ICT)检测血清和血浆中的班氏丝虫抗原诊断丝虫病的效果进行对比研究。结果检测班氏微丝蚴血症者 5 9例 ,丝虫特异 Ig G4阳性 5 7例 ,阳性率 96 .6 1% ;ICT丝虫抗原阳性 5 6例 ,阳性率为 94.92 %。两种方法均具有较高的敏感性 ,差异无显著性 (P>0 .0 5 )。同时分别检测非流行区健康者 40人 ,囊虫病患者 30例及 2 5例华支睾吸虫病患者血清 ,两种方法均呈阴性 ,未出现交叉反应 ,特异性为 10 0 %。现场研究两种方法分别检测基本消灭丝虫病后出生儿童 30 2人 ,消灭丝虫病地区人群 372人 ,晚期丝虫病患者 5 5例 (乳糜尿41例 ,象皮肿 14例 ) ,原微丝蚴血症转阴者 6 0例。结果仅消灭丝虫病地区人群中 1例 (以往血检阴性 )丝虫特异Ig G4强阳性 ,ICT丝虫抗原弱阳性 ,但反复镜检未发现微丝蚴。其余均为阴性。研究表明 ,两种方法均具有较高的敏感性和特异性 ,均可用于消灭丝虫病地区病原学的监测。Mc Ab- EL ISA检测丝虫特异 Ig G4可大面积用于消灭丝虫病地区的病原学监测。而 ICT检测班氏丝虫抗原更适用于个案病例的检测。 展开更多
关键词 丝虫病 mcab IGG4 流行病学 病原学
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猪瘟病毒单克隆抗体的制备及其免疫组织化学研究 被引量：4
11
作者 杨艳艳 张改平 +5 位作者 王选年 邓瑞广 邢广旭 柴书军 赵东 杨坡 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期782-786,共5页
通过杂交瘤技术制备猪瘟病毒单克隆抗体,对酶联免疫吸附试验筛选的阳性单克隆抗体进行免疫组织化学研究,从中发现1株单克隆抗体能与感染猪瘟病毒的猪肾、肝病理组织切片及PK15细胞产生特异性染色反应,与非感染猪的肾、肝组织切片和PK15... 通过杂交瘤技术制备猪瘟病毒单克隆抗体,对酶联免疫吸附试验筛选的阳性单克隆抗体进行免疫组织化学研究,从中发现1株单克隆抗体能与感染猪瘟病毒的猪肾、肝病理组织切片及PK15细胞产生特异性染色反应,与非感染猪的肾、肝组织切片和PK15细胞无染色反应。单克隆抗体与猪瘟病毒感染的PK15细胞或猪肝、肾小血管内皮细胞中的猪瘟病毒呈现较强的特异性棕色着染,表明该单抗是针对猪瘟病毒的单克隆抗体,对研究猪瘟病毒在宿主细胞中的生命活动和繁殖定位有非常重要的意义。该单抗命名为YNF,培养上清液和腹水的抗体效价分别为1∶80和1∶10 000。抗体蛋白属IgG类,亚类为IgG2/κ。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 单克隆抗体 酶联免疫吸附试验 免疫组织化学
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三种快速检测结核分支杆菌方法的评价 被引量：5
12
作者 李晓明 庄玉辉 +5 位作者 李国利 吴雪琼 张小刚 张敦熔 王巍 夏湘萱 《中国防痨杂志》 CAS 1996年第2期76-77,共2页
用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术、单克隆抗体（ＭｃＡｂ）ＴＢ１５－Ｃ＿３经酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）及抗酸染色等３种方法，对１０种抗酸杆菌及２种非分支杆菌进行检测。ＰＣＲ仅对结核分支杆菌复合体扩增出２４５ｂｐ特异性条... 用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术、单克隆抗体（ＭｃＡｂ）ＴＢ１５－Ｃ＿３经酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）及抗酸染色等３种方法，对１０种抗酸杆菌及２种非分支杆菌进行检测。ＰＣＲ仅对结核分支杆菌复合体扩增出２４５ｂｐ特异性条带，ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ检测除人型结核分支杆菌外，还与ＢＣＧ、鸟型及瘰疬分支杆菌反应阳性，抗酸染色则所有分支杆菌均呈阳性。用ＰＣＲ、ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ及抗酸染色检测了１２４份临床标本，ＰＣＲ的检出率高于抗酸染色涂片的阳性率（Ｐ＜０．０５），ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ检测阳性率明显高于抗酸染色涂片和ＰＣＲ的阳性率（Ｐ＜０．０１）。认为三种方法在使用中各自有其优点，不可偏废。 展开更多
关键词 结核杆菌 聚合酶链反应 elisa 单克隆抗体
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猪圆环病毒2型Cap蛋白单克隆抗体的制备与应用 被引量：5
13
作者 翟淑燕 陈兴慧 +2 位作者 白娟 王先炜 姜平 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1022-1028,共7页
利用纯化的猪圆环病毒2型(PCV2)免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术,筛选获得3株能稳定分泌抗PCV2蛋白抗体的杂交瘤细胞株,分别被命名为3E5、3E6和5A6。经ELISA测定,它们的培养上清的效价分别为1∶12 800、1∶1 600和1∶6 400,腹水效价... 利用纯化的猪圆环病毒2型(PCV2)免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术,筛选获得3株能稳定分泌抗PCV2蛋白抗体的杂交瘤细胞株,分别被命名为3E5、3E6和5A6。经ELISA测定,它们的培养上清的效价分别为1∶12 800、1∶1 600和1∶6 400,腹水效价分别为1∶6 400 000、1∶640 000和1∶800 000;亚类鉴定结果显示,3株单克隆抗体为IgG2a亚类,轻链为κ型;Western-blot结果显示,3株单克隆抗体均能与PCV2Cap蛋白发生特异性反应;间接免疫荧光试验(IFA)结果显示,3株单克隆抗体均能与感染PCV2的PK-15细胞产生特异性荧光反应;病毒中和试验显示,3E5和3E6具有中和活性。利用单克隆抗体3E5建立了检测PCV2抗原的夹心ELISA;它可被用于检测经β-丙内酯灭活的PCV2和杆状病毒表达系统表达的PCV2Cap蛋白。上述研究成果为PCV2感染的诊断和PCV2蛋白功能的研究提供了重要工具和手段。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 CAP蛋白 中和活性 单克隆抗体 夹心elisa
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抗奶牛衣原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立 被引量：5
14
作者 谢琴 何存利 史建斌 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第4期278-280,共3页
将奶牛衣原体抗原免疫的 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／ｃ 小鼠脾细胞与 Ｓ Ｐ２／ Ｏ 细胞在聚乙二醇作用下融合， 用间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 试验筛选， 以有限稀释法克隆３ 次， 得到６ 株分泌抗奶牛衣原体单克隆抗体（ Ｍｃ Ａｂ） ， 选择抗体分泌... 将奶牛衣原体抗原免疫的 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／ｃ 小鼠脾细胞与 Ｓ Ｐ２／ Ｏ 细胞在聚乙二醇作用下融合， 用间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 试验筛选， 以有限稀释法克隆３ 次， 得到６ 株分泌抗奶牛衣原体单克隆抗体（ Ｍｃ Ａｂ） ， 选择抗体分泌较高的 Ｇ２ 、 Ｆ２３ 、 Ａ 株进行详细的研究， 结果表明， 其核内染色体数为９０３５ 、９２１４ 、９４４２ ； 抗体属性为 Ｉｇ Ｇ２ａ 、 Ｉｇ Ｇ１ 、 Ｉｇ Ｍ， 用交叉 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法对３ 株 Ｍｃ Ａｂ 作特异性分析， 该 Ｍｃ Ａｂ 只与奶牛衣原体抗原， 猪衣原体抗原、羊衣原体抗原发生反应，而不与沙眼衣原体抗原、伪狂犬病抗原、布鲁氏杆菌抗原发生反应。 展开更多
关键词 奶牛衣原体 单克隆抗体 elisa
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O型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备和鉴定 被引量：3
15
作者 宋帅 林彤 +4 位作者 邵军军 丛国正 独军政 高闪电 常惠芸 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期325-328,共4页
利用O型口蹄疫病毒(FMDV)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞进行融合,经间接ELISA方法筛选和7次亚克隆后获得2株能稳定分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。经间接ELISA检测,2株杂交瘤细胞株(3E1、7E6)的腹水效价分别为1∶25600、1... 利用O型口蹄疫病毒(FMDV)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞进行融合,经间接ELISA方法筛选和7次亚克隆后获得2株能稳定分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。经间接ELISA检测,2株杂交瘤细胞株(3E1、7E6)的腹水效价分别为1∶25600、1∶102400。间接免疫荧光试验和特异性试验表明2株McAb可与不同株的O型FMDV反应,而不与其他血清型的FMDV反应。Western blot和叠加试验表明2株单抗可识别O型FMDV结构蛋白VP1上的同一个抗原表位。此特异性McAb的获得将为O型FMDV疫苗的研制和诊断方法的建立奠定基础。 展开更多
关键词 O型口蹄疫病毒 单克隆抗体 间接elisa
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柠檬黄色素免疫学检测方法的研究 被引量：4
16
作者 任立松 卢士英 +4 位作者 周玉 郭德军 李岩松 孟宪梅 柳增善 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第12期258-261,共4页
将柠檬黄分子与卵清蛋白(OVA)、牛血清白蛋白(BSA)偶联为检测原和免疫原,免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术获得分泌抗柠檬黄单克隆抗体杂交瘤细胞株3D4,纯化腹水得到单克隆抗体,建立间接竞争ELISA检测方法,回归方程和相关系数分别为:y=-40... 将柠檬黄分子与卵清蛋白(OVA)、牛血清白蛋白(BSA)偶联为检测原和免疫原,免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术获得分泌抗柠檬黄单克隆抗体杂交瘤细胞株3D4,纯化腹水得到单克隆抗体,建立间接竞争ELISA检测方法,回归方程和相关系数分别为:y=-40.134x+133.46,R2=0.9692,最低检出浓度为0.36μg/L。该方法与柠檬黄色素常用的检测方法薄层分析及分光光度计法相比,检测限低、耗时短、成本低,适用于大批量样品检测。 展开更多
关键词 柠檬黄 单克隆抗体 酶联免疫吸附反应 检测
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温和气单胞菌单克隆抗体的制备及特性分析 被引量：3
17
作者 黄钧 梁明龙 朱芸 《淮阴师范学院学报（自然科学版）》 CAS 2006年第1期74-77,共4页
利用细胞融合技术建立了5株分泌抗温和气单胞菌CR79-1-1株单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系,通过特异性鉴定获得两株与参考菌株中的温和气单胞菌发生反应,但与嗜水气单胞菌以及鳗弧菌、爱德华氏菌、克鲁氏耶尔森菌、大肠杆菌、荧光假单... 利用细胞融合技术建立了5株分泌抗温和气单胞菌CR79-1-1株单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系,通过特异性鉴定获得两株与参考菌株中的温和气单胞菌发生反应,但与嗜水气单胞菌以及鳗弧菌、爱德华氏菌、克鲁氏耶尔森菌、大肠杆菌、荧光假单胞菌均不反应的杂交瘤细胞系,分别命名为2G3和1A4.快速酶联免疫分析法(ELISA)测得2G3和1A4的亲和常数分别为1.72×108和5×108M-1;应用方阵配对实验证实,2株单抗针对特异性抗原上不同表位. 展开更多
关键词 温和气单胞菌 单克隆抗体 表位 酶联免疫吸附分析
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囊虫病特异诊断方法的研究 被引量：4
18
作者 翟春生 王永山 施正良 《兽医大学学报》 CSCD 1990年第3期214-219,共6页
应用间接ELISA对囊虫粗抗原、B抗原、用等电聚焦技术分离的抗原组分及特异McAb亲和层析抗原的特异性作了评价,结果均不理想。用McAb分析查明,在某些囊虫抗原分子上既有特异性抗原决定簇,又有非特异性决定簇。应用特异McAb以R-PIⅡ和Ⅰ-E... 应用间接ELISA对囊虫粗抗原、B抗原、用等电聚焦技术分离的抗原组分及特异McAb亲和层析抗原的特异性作了评价,结果均不理想。用McAb分析查明,在某些囊虫抗原分子上既有特异性抗原决定簇,又有非特异性决定簇。应用特异McAb以R-PIⅡ和Ⅰ-ELISA检测囊虫病人和猪的血清抗体,结果完全消除了假阳性反应;用R-PIⅡ微量法和Ⅰ-ELISA检测,病人血清的阳性率为87.36%(76/87)和89.66%(78/87),病猪血清的阳性率为89.32%(92/103)和86.41%(89/103);用R-PHI玻片法检测,病猪血清的阳性率为87.32%(90/103)。 展开更多
关键词 囊虫病 单克隆抗体 猪 诊断 抗原
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McAb捕获抗原检测EDS76病毒抗体的ELISA方法的建立和应用 被引量：1
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作者 王雪敏 《中国家禽》 北大核心 2002年第1期10-11,共2页
将三株EDS76病毒单克隆抗体IgG混合,包被ELISA板,捕获病毒抗原后用于检测鸡血清中的EDS76抗体,以OD490nm>0.3,P/N>2.1判为阳性结果。经测定,待检血清做1∶100倍稀释时可以很好地区分阴阳性。所建方法与鸡的其它传染病血清无交叉反... 将三株EDS76病毒单克隆抗体IgG混合,包被ELISA板,捕获病毒抗原后用于检测鸡血清中的EDS76抗体,以OD490nm>0.3,P/N>2.1判为阳性结果。经测定,待检血清做1∶100倍稀释时可以很好地区分阴阳性。所建方法与鸡的其它传染病血清无交叉反应,可被免抗EDS76病毒高免血清竞争性抑制。对11个鸡场330份未接种EDS76疫苗的产蛋鸡血清检测结果表明,血清阳性率最高可达93.33%。 展开更多
关键词 mcab捕获抗原 elisa EDS76 鸡 产蛋下降综合征 单克隆抗体 抗体监测
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滴滴涕代谢物DDA单克隆抗体的制备及其酶联免疫检测方法的建立 被引量：3
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作者 刘磊 刘仁沿 +2 位作者 许道艳 江天久 梁玉波 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期925-928,共4页
为建立一种快速检测生物体中有机氯农药滴滴涕(DDT)代谢物DDA的酶联免疫检测(Enzyme-linked immunosorbant assay,ELISA)方法,利用碳二亚胺(EDC)法将DDT代谢产物半抗原DDA(2,2-双(4-氯苯基)乙酸)与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联... 为建立一种快速检测生物体中有机氯农药滴滴涕(DDT)代谢物DDA的酶联免疫检测(Enzyme-linked immunosorbant assay,ELISA)方法,利用碳二亚胺(EDC)法将DDT代谢产物半抗原DDA(2,2-双(4-氯苯基)乙酸)与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,分别作为免疫抗原和包被抗原.采用杂交瘤技术制备特异性抗DDA单克隆抗体,同时建立DDA间接竞争ELISA检测方法,并应用到海产贝类DDA的检测分析中.结果显示,本研究制备抗体所建立的ELISA方法在优化条件下对DDA的半抑制浓度IC50和检测限(Limit of Detection,LOD)分别为110 ng/mL和7.5ng/g,具有高灵敏度.该抗体同DDT其他几种同系物的交叉反应率都较低,只对DDA具有较强的特异性.本研究所制备抗体能够满足海产贝类DDT代谢物DDA的检测. 展开更多
关键词 DDA DDT 单克隆抗体 海产贝类 elisa
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