细胞工厂在水痘疫苗生产中的应用 被引量：17

1

作者 王亮 杨月莲 +5 位作者 周锋 谢蕾 孙世杰 彭晓 周翎乔 马相虎 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1178-1181,共4页

目的:提高水痘疫苗产量和厂房的利用率。方法:采用细胞工厂培养MRC-5细胞,以Roux瓶培养作对照,比较两种工艺的细胞生产情况、原液收获量等,并进行各项检定。结果:在同样细胞复苏量的条件下,采用细胞工厂比Roux瓶工艺生产的水痘疫苗产量... 目的:提高水痘疫苗产量和厂房的利用率。方法:采用细胞工厂培养MRC-5细胞,以Roux瓶培养作对照,比较两种工艺的细胞生产情况、原液收获量等,并进行各项检定。结果:在同样细胞复苏量的条件下,采用细胞工厂比Roux瓶工艺生产的水痘疫苗产量要高,且各项检测指标均合格。结论:利用细胞工厂制备水痘疫苗,不仅提高了疫苗产量,而且节省了培养空间,降低了污染率,可用于水痘疫苗的大规模生产。 展开更多

关键词 水痘疫苗 细胞工厂 mrc-5细胞

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莪术醇对人胚肺成纤维细胞增殖的影响 被引量：14

2

作者 朱星 杨长福 《中国实验方剂学杂志》 CAS 北大核心 2012年第1期226-228,共3页

目的:探讨莪术醇对人胚肺成纤维细胞增殖抑制作用。方法:MTT法观察莪术醇对人胚肺成纤维细胞增殖的抑制作用;天狼猩红染色法测定细胞胶原的分泌能力,流式细胞术检测细胞周期时相分布。结果:50～200 mg.L-1莪术醇作用细胞后能抑制人胚肺... 目的:探讨莪术醇对人胚肺成纤维细胞增殖抑制作用。方法:MTT法观察莪术醇对人胚肺成纤维细胞增殖的抑制作用;天狼猩红染色法测定细胞胶原的分泌能力,流式细胞术检测细胞周期时相分布。结果:50～200 mg.L-1莪术醇作用细胞后能抑制人胚肺成纤维细胞的增殖和制胶原沉积,以96 h效果最为明显,并阻滞细胞停滞于G0/G1期,降低S期和G2/M期细胞时相比例。结论:莪术醇通过将细胞周期阻滞于G0/G1,减少DNA复制,抑制人胚肺成纤维细胞增殖和细胞分泌胶原。 展开更多

关键词 莪术醇 人胚肺成纤维细胞 胶原 细胞周期

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Lin28B/let-7d环路调控成纤维细胞功能参与肺纤维化发生 被引量：9

3

作者 梁海海 李天宇 +1 位作者 解岩 单宏丽 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期175-180,共6页

目的研究Lin28B/let-7d环路诱导肺成纤维细胞增殖、分化的作用及分子机制,为临床肺纤维化的治疗提供新的策略。方法气管注射博来霉素(bleomycin,BLM)造成小鼠肺纤维化模型;血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及转化生长因子(transforming growth facto... 目的研究Lin28B/let-7d环路诱导肺成纤维细胞增殖、分化的作用及分子机制,为临床肺纤维化的治疗提供新的策略。方法气管注射博来霉素(bleomycin,BLM)造成小鼠肺纤维化模型;血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1诱导人胚肺成纤维细胞(MRC-5)纤维性变;qRT-PCR检测组织及细胞中Lin28B、collagen 1α1、collagen 3α1变化;Western blot检测Lin28B蛋白表达;MTT、Edu染色和免疫荧光实验分别检测细胞活力、增殖及成纤维细胞向肌成纤维细胞的转变。结果 Lin28B在肺纤维化小鼠和细胞中表达明显升高。Lin28B可诱导MRC-5细胞胶原合成增加,而过表达let-7d则减轻Lin28B的这一作用。进一步研究发现,Lin28B可诱导成纤维细胞增殖,并促进成纤维细胞向肌成纤维细胞转变,这一作用是通过抑制let-7d来实现的。结论 Lin-28B通过抑制let-7d进而促进成纤维细胞增殖、分化,最终增加成纤维细胞胶原合成,诱发肺纤维化的发生,Lin28B可能作为肺纤维化的治疗新靶点。 展开更多

关键词 肺纤维化 Lin28B let-7d mrc-5细胞 肌成纤维细胞 细胞增殖

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转化生长因子β1对肺成纤维细胞中平滑肌肌动蛋白表达的影响 被引量：10

4

作者 孙林清 周倩文 王发选 《宁夏医科大学学报》 2019年第5期461-464,共4页

目的观察不同浓度转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)刺激人胚肺成纤维细胞(MRC-5)后对细胞内平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)表达的影响。方法以浓度为0、2.5、5.0和10.0ng·mL^-1的TGF-β... 目的观察不同浓度转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)刺激人胚肺成纤维细胞(MRC-5)后对细胞内平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)表达的影响。方法以浓度为0、2.5、5.0和10.0ng·mL^-1的TGF-β1刺激后收集细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应(Quantitative Real-time PCR)检测MRC-5细胞内α-SMA基因的相对表达水平,Western blot法测定MRC-5细胞内α-SMA蛋白的相对表达水平,采用Spearman秩相关分析TGF-β1剂量与MRC-5细胞中α-SMA基因和蛋白的相对表达量之间的相关性。结果随着TGF-β1剂量的增加,各组MRC-5细胞中α-SMA基因表达水平增高,5.0ng·mL^-1和10.0ng·mL^-1剂量组高于0ng·mL^-1组和2.5ng·mL^-1组(P均<0.05);10.0ng·mL-1剂量组高于5.0ng·mL^-1(P=0.004)。5.0ng·mL^-1组和10.0ng·mL^-1组MRC-5细胞中的α-SMA蛋白相对表达量高于0ng·mL^-1组(P均<0.05)。TGF-β1剂量与α-SMA基因和蛋白间均呈正相关关系(r基因=0.972,r蛋白=0.878;P基因=0.000,P蛋白=0.042)。结论TGF-β1能影响肺成纤维细胞中α-SMA的表达情况。 展开更多

关键词 转化生长因子Β1 肺纤维化 平滑肌肌动蛋白α-SMA 肺成纤维细胞

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人胎盘间充质干细胞调控TGF-β1/Smad3信号通路抑制肺纤维化的发生 被引量：1

5

作者 曹佳伟 丁劭瑞 +4 位作者 铁华 薛菁 贾元元 梁雪云 李锋 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2024年第31期4970-4974,共5页

背景:研究表明人胎盘间充质干细胞能有效抑制肺纤维化的发展,但其发挥作用的具体机制目前并不清楚。目的:探究人胎盘间充质干细胞对二氧化硅诱导人胚肺成纤维细胞发生肺纤维化的治疗作用及相关机制。方法:CCK-8法检测不同质量浓度二氧... 背景:研究表明人胎盘间充质干细胞能有效抑制肺纤维化的发展,但其发挥作用的具体机制目前并不清楚。目的:探究人胎盘间充质干细胞对二氧化硅诱导人胚肺成纤维细胞发生肺纤维化的治疗作用及相关机制。方法:CCK-8法检测不同质量浓度二氧化硅干预不同时间对MRC-5细胞增殖活力的影响,结合免疫荧光染色法筛选出最佳的二氧化硅刺激质量浓度与时间用于后续实验。将MRC-5细胞分为空白组、二氧化硅组、二氧化硅+人胎盘间充质干细胞组,空白组细胞不予任何处理,二氧化硅组MRC-5细胞给予100μg/mL二氧化硅刺激48 h,二氧化硅+人胎盘间充质干细胞组MRC-5细胞先给予100μg/mL二氧化硅刺激48 h后再与人胎盘间充质干细胞共培养24 h。免疫荧光染色检测各组细胞α-平滑肌肌动蛋白、胶原蛋白Ⅰ型蛋白的表达;Western blot检测各组细胞肺纤维化相关蛋白和TGF-β1/Smad 3信号通路相关蛋白表达。结果与结论:①CCK-8结果显示,100μg/mL二氧化硅刺激MRC-5细胞48 h为最佳质量浓度与时间;②免疫荧光染色结果显示,与二氧化硅组相比,二氧化硅+人胎盘间充质干细胞组α-平滑肌肌动蛋白、胶原蛋白Ⅰ型蛋白表达明显降低;③Western blot结果显示,与二氧化硅组相比,二氧化硅+人胎盘间充质干细胞组α-平滑肌肌动蛋白、胶原蛋白Ⅰ型、N-钙黏蛋白、粘连蛋白、转化生长因子β1、p-Smad3、Smad3的蛋白表达均降低,E-钙黏蛋白表达升高,差异均有显著性意义(P<0.05);④结果说明,人胎盘间充质干细胞能够对二氧化硅诱导的肺纤维化有显著的治疗作用;人胎盘间充质干细胞可以通过调控TGF-β1/Smad3信号通路抑制肺纤维化的发生。 展开更多

关键词 人胎盘间充质干细胞 肺纤维化 mrc-5细胞 转化生长因子Β1 SMAD3 信号通路

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稀有人参皂苷对特发性肺纤维化的影响 被引量：3

6

作者 姚磊 屈琳琳 范代娣 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期607-613,共7页

探究稀有人参皂苷是否可以缓解特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)。体内实验选用C57BL/6小鼠,小鼠分为对照组、博来霉素(bleomycin,BLM)诱导IPF组、稀有人参皂苷Rk1、Rk3、Rh4、Rg5组,除对照组外其余小鼠均腹腔注射BLM... 探究稀有人参皂苷是否可以缓解特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)。体内实验选用C57BL/6小鼠,小鼠分为对照组、博来霉素(bleomycin,BLM)诱导IPF组、稀有人参皂苷Rk1、Rk3、Rh4、Rg5组,除对照组外其余小鼠均腹腔注射BLM 28 d以构建IPF模型,各治疗组同时分别灌胃给予人参皂苷Rk1、Rk3、Rh4、Rg5,实验结束后收集小鼠的肺脏组织,通过苏木精-伊红染色法(HE)观察小鼠肺部的病理变化;测量小鼠肺部组织羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量;检测小鼠肺部组织IPF相关基因的表达。体外实验选用人胚肺成纤维细胞(MRC-5),使用(TGF-β1)诱导IPF细胞模型,通过细胞毒性实验、HYP含量测定和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析4种皂苷对IPF相关基因表达的影响。4种稀有人参皂苷均能有效缓解IPF引起的肺泡结构破坏等病理进程,降低HYP含量,下调IPF相关基因的表达,表明稀有人参皂苷能够有效缓解IPF。 展开更多

关键词 肺纤维化 稀有人参皂苷 mrc-5细胞 转化生长因子Β1 博来霉素

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TGF-β1致MRC-5细胞转分化的差异microRNAs表达分析 被引量：3

7

作者 杨培琰 赵阿会 +6 位作者 金路恒 赵有亮 于兴浩 张建会 翟若南 郝长付 姚武 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2019年第5期551-558,共8页

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激的人胚肺成纤维细胞株MRC-5细胞基因表达微阵列芯片的差异表达微小RNA(miRNA),筛选成纤维细胞转分化的关键基因和信号通路。方法从美国国立信息中心的高通量基因表达数据库下载TGF-β1刺激MRC-5... 目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激的人胚肺成纤维细胞株MRC-5细胞基因表达微阵列芯片的差异表达微小RNA(miRNA),筛选成纤维细胞转分化的关键基因和信号通路。方法从美国国立信息中心的高通量基因表达数据库下载TGF-β1刺激MRC-5细胞的miRNA表达芯片数据集GSE43992,采用R语言Limma包进行差异表达miRNAs的筛选,通过miRWalk数据库预测其对应的靶基因,对差异表达的miRNAs和靶基因进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路分析,构建蛋白质相互作用(PPI)网络。结果共筛选出5条差异表达的miRNAs,包括4个上调的miRNAs和1个下调的miRNA,并预测出42个对应的差异表达靶基因。GO富集分析结果显示,靶基因主要参与胶原蛋白分解代谢、胞外基质组织、膜组织、胶原纤维组织和细胞对氨基酸刺激的反应等生物学过程;KEGG信号通路分析结果显示,miRNAs和相应靶基因所对应的信号通路主要集中在18条信号通路上,主要与miRNAs在肿瘤方面、糖尿病并发症中的年龄-种族信号通路和蛋白质消化与吸收有关。PPI网络筛选出的3个成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化核心基因分别为苏氨酸激酶1、雌激素受体1和β-连环蛋白。结论共筛选出与TGF-β1致MRC-5细胞转分化相关的5个差异表达的miRNAs、42个靶基因、18条信号通路和3个核心基因,可为包括尘肺病及肺纤维化在内的多种疾病的治疗和研究提供新的参考。 展开更多

关键词 成纤维细胞 转化生长因子-Β1 mrc-5细胞 转分化 生物信息学 肺纤维化 尘肺病

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微载体技术高密度培养MRC-5细胞初探 被引量：2

8

作者 姜云水 李剑波 +7 位作者 顾春燕 陈科达 唐彩华 包佳源 毛岱敏 张峰 庄昉成 王平 《国际流行病学传染病学杂志》 CAS 2014年第1期6-10,共5页

目的 通过探索MRC-5细胞的微载体培养条件,以期建立MRC-5细胞的高密度培养方法.方法 用3种不同培养基（MEM、M199、DMEM）分别培养3.0×104/mL的MRC-5细胞,观察它们的细胞增殖及传代能力；在Spinner培养系统中,用1.0 g/L Cytopore 2... 目的 通过探索MRC-5细胞的微载体培养条件,以期建立MRC-5细胞的高密度培养方法.方法 用3种不同培养基（MEM、M199、DMEM）分别培养3.0×104/mL的MRC-5细胞,观察它们的细胞增殖及传代能力；在Spinner培养系统中,用1.0 g/L Cytopore 2和3.0 g/L Cytodex 3分别培养密度为3.70× 105/mL和2.98×105/mL的MRC-5细胞,观察两种载体对细胞生长代谢和细胞密度的影响,筛选出最适宜的培养基及微载体.使用5 L CelliGen310生物反应器对筛选获得的培养基及微载体进行MRC-5细胞的灌流培养初步摸索.结果 MRC-5细胞在MEM、M199、DMEM培养基中培养96 h细胞分别增殖了7.0、4.4和3.0倍；在MEM培养基中连续传代至5次以上,细胞增殖稳定,1：3传代72 h形成致密单层,而在M199和DMEM培养基中连续传代均未能获得理想的细胞形态.经96～120 h的培养后,使用1.0 g/L Cytopore 2培养的MRC-5细胞密度达到2.20× 106/mL高于使用3.0 g/L Cytodex 3的1.12×106/mL,且前者葡萄糖和乳酸代谢较后者更为活跃.首选MEM和Cytopore 2作为MRC-5细胞的灌流培养体系.在5L生物反应器中以1.0 g/L Cytopore 2和2.5LMEM培养基培养MRC-5细胞至144h,细胞密度达到1.54×106/mL.结论 初步建立的MEM Cytopore 2微载体细胞培养方法能够获得高密度、活性良好的MRC-5传代细胞. 展开更多

关键词 细胞培养技术 微载体 高密度培养 mrc-5细胞

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银杏叶提取物对人胚肺成纤维细胞氧化应激的保护作用 被引量：1

9

作者 潘尚领 刘承武 +6 位作者 黄龄瑾 张锡流 陈晶 罗晓秋 李辉 甘瑞静 陈文成 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1128-1130,共3页

目的探讨银杏提取物(EGb)对体外培养的人类成纤维细胞的抗氧化作用。方法分别于常态氧(氧浓度为21%)及高氧(氧浓度为40%)环境下培养人胚肺成纤维细胞(MRC-5),并给予不同浓度(0,7.5,15,30,60μg/ml)的EGb,以400μmol/L的α-苯基-N-4-丁... 目的探讨银杏提取物(EGb)对体外培养的人类成纤维细胞的抗氧化作用。方法分别于常态氧(氧浓度为21%)及高氧(氧浓度为40%)环境下培养人胚肺成纤维细胞(MRC-5),并给予不同浓度(0,7.5,15,30,60μg/ml)的EGb,以400μmol/L的α-苯基-N-4-丁基硝酮(PBN)为阳性对照,观察不同条件下细胞的生长曲线,并用流式细胞仪测定不同时期、不同条件下MRC-5细胞内活性氧(ROS)的含量。结果常规培养条件下,MRC-5在不同浓度EGb下的生长曲线无明显差别,不同时期测定的ROS含量与阴性或阳性对照比较,总体上无显著差异;而在高氧环境中,使用EGb的MRC-5细胞生长绝对数明显比空白对照多,且呈现EGb浓度越高,细胞绝对数越多、不同时期ROS含量越低、衰老细胞越少的趋势。结论银杏叶提取物对慢性氧化应激下的MRC-5有保护及抗衰老作用。 展开更多

关键词 银杏液提取物 抗氧化 抗衰老 mrc-5 细胞培养

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合成的哌啶并噻吩类化合物抑制肺癌细胞生长的初步研究 被引量：1

10

作者 韦杰 潘卉 +1 位作者 赵扬 冯阳 《生命科学研究》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期382-386,共5页

为了发现新的可用于肺癌治疗的小分子药物,从实验室现有的小分子化合物库中,选取13个未见报道的新型哌啶并噻吩类化合物,对其抑制肺癌A549细胞生长的作用进行初步评价。通过体外培养A549细胞,应用WST-1法检测小分子化合物(终浓度为10μm... 为了发现新的可用于肺癌治疗的小分子药物,从实验室现有的小分子化合物库中,选取13个未见报道的新型哌啶并噻吩类化合物,对其抑制肺癌A549细胞生长的作用进行初步评价。通过体外培养A549细胞,应用WST-1法检测小分子化合物(终浓度为10μmol/L)处理后细胞存活率的变化,发现化合物11(噻吩并[2,3-c]哌啶-3-甲酰胺-2-[(3-甲氧基-萘-2-羰基)-氨基]-6-苄基-,盐酸盐)能显著抑制A549细胞的生长,抑制率可达到(71.34±0.96)%。对小分子化合物结构与活性关系的分析发现苯并结构可能是增强化合物对A549细胞生长的抑制作用的关键结构基团。随后,进一步分析了化合物11(终浓度分别为1、2.5、5、10μmol/L)对A549细胞和正常人胚肺成纤维MRC-5细胞生长的抑制作用。结果表明,随着该化合物浓度增加,对A549细胞生长的抑制率逐渐增大,用GraphPad Prism软件计算出该化合物的IC50为2.407μmol/L;而该化合物对MRC-5细胞生长的抑制率显著低于对A549细胞生长的抑制率,当作用终浓度为10μmol/L时,其对MRC-5细胞生长的抑制率也只有30.41%。这些研究结果初步显示化合物11是一种新的较为理想的治疗肺癌药物先导化合物的候选分子。 展开更多

关键词 肺癌 A549细胞 mrc-5细胞 细胞生长 哌啶并噻吩 结构活性关系

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毒胡萝卜素对人胚肺成纤维细胞凋亡影响及部分机制的初步探讨 被引量：2

11

作者 王亚丽 李俊 +4 位作者 黄成 黄艳 于明哲 任丹阳 徐涛 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1281-1285,共5页

目的研究内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)标识物葡萄糖调节蛋白(glucose regulated protein,GRP)和CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancerbinding protein homologous protein,CHOP)在人胚肺成纤维细胞凋亡过程中... 目的研究内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)标识物葡萄糖调节蛋白(glucose regulated protein,GRP)和CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancerbinding protein homologous protein,CHOP)在人胚肺成纤维细胞凋亡过程中的表达变化,初步探讨毒胡萝卜素对人胚肺成纤维细胞凋亡的作用及部分机制。方法体外用毒胡萝卜素(TG)诱导人胚肺成纤维细胞(MRC-5)后,采用流式细胞仪检测细胞的凋亡变化,RT-PCR检测细胞中GRP78、CHOPmRNA的表达变化,Western blot检测GRP、CHOP及Caspase-3蛋白的表达情况。结果与对照组比较,经TG作用24 h后,细胞凋亡率增加,并呈浓度依赖性,差异具有统计学意义(P<0.05)。TG组在24 h的GRP、CHOP表达均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);同时不同刺激组中Caspase-3的表达高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论毒胡萝卜素可诱导人胚肺成纤维细胞发生凋亡,该凋亡可能与ERS有关。 展开更多

关键词 内质网应激 人胚肺成纤维细胞 毒胡萝卜素 GRP CHOP Caspase-3

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不同pH值对人胚肺二倍体成纤维细胞MRC-5生长的影响 被引量：1

12

作者 陈通威 赵鹏 《山西医科大学学报》 CAS 2014年第5期347-349,共3页

目的在不同pH值培养液中培养人胚肺二倍体成纤维细胞(MRC-5),观察其生长情况,选出最有利于MRC-5细胞生长的pH值范围。方法采用细胞培养技术,分别在pH值为6.8,6.9,7.0,7.1,7.2,7.3,7.4,7.5,7.6的培养液中培养MRC-5细胞,通过显微技术观察... 目的在不同pH值培养液中培养人胚肺二倍体成纤维细胞(MRC-5),观察其生长情况,选出最有利于MRC-5细胞生长的pH值范围。方法采用细胞培养技术,分别在pH值为6.8,6.9,7.0,7.1,7.2,7.3,7.4,7.5,7.6的培养液中培养MRC-5细胞,通过显微技术观察细胞形态、对细胞进行计数,然后对MRC-5细胞的生长情况进行分析比较。结果在不同pH值的培养液中,MRC-5细胞的生长状况不同,细胞数量和细胞形态都有差异,当培养液的pH值为7.2-7.3时,细胞生长形态最好,细胞数量最高可达2.37×106/ml。结论研究表明,培养液的pH值为7.2-7.3时,MRC-5细胞的生长状况最佳。 展开更多

关键词 人胚肺二倍体成纤维细胞 mrc-5 PH值 细胞培养

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国产与进口MEM培养基培养MRC-5细胞效果的比较 被引量：1

13

作者 陈嘉雯 王佳凤 +3 位作者 徐俊峰 周欣 曲成 陈维金 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第5期639-641,共3页

目的对国产及进口MEM培养基培养MRC-5细胞的效果进行比较。方法用国产及进口MEM培养基培养37代MRC-5细胞,于显微镜下观察培养24、48、72 h后的细胞的生长情况,并对细胞在33~37代传代过程中的细胞活性进行检测;以0.008 MOI的Oka株水痘-... 目的对国产及进口MEM培养基培养MRC-5细胞的效果进行比较。方法用国产及进口MEM培养基培养37代MRC-5细胞,于显微镜下观察培养24、48、72 h后的细胞的生长情况,并对细胞在33~37代传代过程中的细胞活性进行检测;以0.008 MOI的Oka株水痘-带状疱疹病毒感染37代MRC-5细胞,观察细胞病变情况。结果国产及进口MEM培养基培养的37代MRC-5细胞,细胞形态、贴壁、伸展、牵手、成网、单层等生长情况均相似,细胞数量也无明显差异,均可使细胞保持较高的活力,两组间细胞存活率比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;细胞病变均比较典型、广泛,病变程度均在70%以上,且细胞完整,未见明显撕裂现象。结论国产及进口MEM培养基均可满足MRC-5细胞的生长和病毒培养的宿主条件。 展开更多

关键词 MEM培养基 mrc-5细胞 细胞培养

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BCG-CpG-DNA佐剂人用狂犬病疫苗(MRC-5细胞)在食蟹猴体内的免疫原性

14

作者 黄帅 王汀 《中国人兽共患病学报》 CSCD 北大核心 2023年第12期1146-1150,共5页

目的 评价BCG-CpG-DNA佐剂人用狂犬病疫苗(MRC-5细胞)在食蟹猴体内的免疫原性。方法 将食蟹猴随机分为对照组、3针组及4针组,经后肢肌肉免疫,1.0 mL/剂。3针组及4针组均接种BCG-CpG-DNA佐剂人用狂犬病疫苗,3针组于0 d、7 d、21 d各接种1... 目的 评价BCG-CpG-DNA佐剂人用狂犬病疫苗(MRC-5细胞)在食蟹猴体内的免疫原性。方法 将食蟹猴随机分为对照组、3针组及4针组,经后肢肌肉免疫,1.0 mL/剂。3针组及4针组均接种BCG-CpG-DNA佐剂人用狂犬病疫苗,3针组于0 d、7 d、21 d各接种1剂,4针组于0 d、3 d、7 d、14 d各接种1剂;对照组接种市售国产同类疫苗,于0 d注射2剂、7 d及21 d各1剂。初免前(0 d)及初免后7 d、14 d、28 d、35 d、49 d、63 d后肢隐静脉采血,分离血清及外周血淋巴细胞。快速荧光灶抑制实验(Rapid Fluorescent focus Inhibition Test, RFFIT)及酶联免疫斑点检测技术(Enzyme-linked Immunospot Assay, ELISPOT)分别检测血清中抗狂犬病病毒中和抗体水平和外周血淋巴细胞中细胞因子IFN-γ、IL-2的表达水平。结果 食蟹猴血清中和抗体水平于免疫前均呈阴性(抗体效价<0.5 IU/mL),3针组和对照组在初免后7~28 d呈上升趋势,于28 d达最高,4针组在14 d达最高;在初免后28 d,对照组、3针组中和抗体水平显著高于4针组;初免后35 d,3针组中和抗体水平显著高于4针组,其余时间点同时间各组间差异均无统计学意义(P均>0.05)。3针组及4针组外周血淋巴细胞中IL-2及IFN-γ水平在7~14 d呈上升趋势,于14 d达最高,且3针组IFN-γ水平显著高于对照组,其余时间点同时间各组间差异均无统计学意义。结论 BCG-CpG-DNA佐剂人用狂犬病疫苗(MRC-5细胞)具有良好的免疫原性,具有优化狂犬病免疫接种程序的应用价值。 展开更多

关键词 狂犬病疫苗 BCG-CpG-DNA佐剂 mrc-5细胞 食蟹猴 免疫原性

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人用疫苗检定用MRC-5和人横纹肌肉瘤细胞的短串联重复序列图谱鉴定

15

作者 宋彩花 段男 +7 位作者 任芳芳 高有 杨欢 李娜 雷银瓶 蔡秋龙 乔燕 易力 《国际生物制品学杂志》 CAS 2021年第6期305-309,共5页

目的用短串联重复序列(short tandem repeat,STR)基因分型法对人用疫苗检定用MRC-5和人横纹肌肉瘤细胞进行鉴定,确认无污染。方法选取人源细胞的20个STR位点进行等位基因PCR扩增及荧光检测,将得到的STR图谱与美国典型培养物保藏中心和... 目的用短串联重复序列(short tandem repeat,STR)基因分型法对人用疫苗检定用MRC-5和人横纹肌肉瘤细胞进行鉴定,确认无污染。方法选取人源细胞的20个STR位点进行等位基因PCR扩增及荧光检测,将得到的STR图谱与美国典型培养物保藏中心和德国微生物菌种保藏中心数据库比对分析。结果两株细胞均得到清晰的STR特征性图谱,未出现3单位基因,在两个数据库中均找到与其细胞分型完全匹配的细胞株。结论人用疫苗检定用MRC-5和人横纹肌肉瘤细胞均为正确细胞株,不存在污染和交叉污染。 展开更多

关键词 鉴别 短串联重复序列 mrc-5细胞 人横纹肌肉瘤细胞

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组织工程化三维支气管模型体外再造的实验研究

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作者 王健 张文君 +5 位作者 章烨 林秋霞 王滟濛 郝彤 段翠密 王常勇 《中国康复理论与实践》 CSCD 2008年第11期1038-1040,F0003,共4页

目的以人支气管上皮细胞系和人胎肺成纤维细胞系为种子细胞、胶原凝胶复合Matrigel为支架材料,探索采用体外构建组织工程化三维支气管模型的可行性,为研究支气管上皮细胞和成纤维细胞相互作用提供模型。方法将支气管上皮细胞和肺脏成纤... 目的以人支气管上皮细胞系和人胎肺成纤维细胞系为种子细胞、胶原凝胶复合Matrigel为支架材料,探索采用体外构建组织工程化三维支气管模型的可行性,为研究支气管上皮细胞和成纤维细胞相互作用提供模型。方法将支气管上皮细胞和肺脏成纤维细胞在添加Matrigel的液态Ⅰ型胶原中共培养,应用静态拉伸系统体外构建支气管模型。通过大体观察、相差显微镜观察、HE染色和免疫组织化学染色(广谱CK等)的方法对细胞的生长情况及形成的三维组织结构进行鉴定。结果在体外应用静态拉伸系统能构建出组织工程化三维支气管模型。大体观察可以看到收缩良好的组织片层,并具有一定韧性;相差显微镜下可以观察到网状结构的形成,细胞活性良好;HE染色表明了三维网状结构的形成;免疫组织化学染色广谱CK和Vimentin呈阳性。结论体外成功构建出组织工程化三维支气管模型,种子细胞共培养可在支架材料中完成极性生长过程并形成网状结构。 展开更多

关键词 组织工程 BEAS-2B细胞 mrc-5细胞 胶原 静态拉伸 支气管模型

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热休克条件下诱导型HSP70对人胚肺二倍体细胞衰老影响实验研究 被引量：1

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作者 海珊 董碧蓉 +2 位作者 林苹 张洁 赵志颖 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期1085-1088,共4页

目的探讨在热休克条件下,人胚肺二倍体细胞MRC-5株诱导型热休克蛋白70(HSP70)在细胞水平的表达机制,诱导型HSP70对MRC-5细胞衰老有无影响及影响MRC-5细胞衰老的相关机制。方法用热休克处理诱导MRC-5细胞HSP70的表达,同时采用HSP70反义... 目的探讨在热休克条件下,人胚肺二倍体细胞MRC-5株诱导型热休克蛋白70(HSP70)在细胞水平的表达机制,诱导型HSP70对MRC-5细胞衰老有无影响及影响MRC-5细胞衰老的相关机制。方法用热休克处理诱导MRC-5细胞HSP70的表达,同时采用HSP70反义寡核苷酸转染MRC-5细胞作对照,分别置42℃恒温水浴30 m in、1、2、4 h,及每日水浴1 h共3和5 d,各组细胞均在37℃复温。分别测定细胞HSP70的表达,细胞超氧化物歧化酶(SOD)总活力,并通过衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色和显微镜观察判断衰老细胞。结果在42℃热休克处理下,MRC-5细胞HSP70的表达随热处理时间延长而增加(P<0.05),且均高于同时点对照组水平(P<0.05);MRC-5细胞SOD总活力随热处理时间延长而增高,均高于同时间点对照组水平,差异有统计学意义(P<0.05);经HSP70反义寡核苷酸处理的细胞,在反复热处理第3天及第5天,SA-β-Gal染色阳性表达率高于实验组。结论热处理方法可成功诱导MRC-5细胞表达HSP70,随热处理时间延长,MRC-5细胞HSP70表达增加,HSP70可能通过增强细胞内源性抗氧自由基能力,影响MRC-5细胞的衰老进程。 展开更多

关键词 热休克蛋白70 反义寡核苷酸 人胚肺二倍体细胞 衰老

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补肺益肾方调控NF-κB通路抑制香烟烟雾提取物诱导的MRC-5细胞炎症反应机制

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作者 刘素晓 王洋 +4 位作者 芦晓帆 刘学芳 冯素香 郑万春 李亚 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期5648-5652,共5页

目的:观察补肺益肾方调控核因子-κB(NF-κB)通路对CSE诱导的人胚肺成纤维细胞(MRC-5)炎症反应的抑制作用。方法:正常培养和NF-κB p65 siRNA转染的MRC-5细胞经正常血清、5%CSE、5%CSE+补肺益肾方血清、5%CSE+氨茶碱血清处理24 h后,分... 目的:观察补肺益肾方调控核因子-κB(NF-κB)通路对CSE诱导的人胚肺成纤维细胞(MRC-5)炎症反应的抑制作用。方法:正常培养和NF-κB p65 siRNA转染的MRC-5细胞经正常血清、5%CSE、5%CSE+补肺益肾方血清、5%CSE+氨茶碱血清处理24 h后,分别采用流式细胞术测细胞增殖、凋亡情况,ELISA方法测细胞因子白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,qRT-PCR检测IL-1β、TNF-α、NF-κB p65和IκBαmRNA表达水平,Western Blot检测p-NF-κB p65和p-IκBα蛋白表达水平。结果:CSE诱导可以显著降低正常和siRNA转染MRC-5细胞增殖率,增加凋亡率,提高IL-1β和TNF-α分泌及mRNA表达水平,以及NF-κB p65和IκBα基因及蛋白磷酸化水平(P<0.01);补肺益肾方处理可显著改善上述指标(P<0.01),且与NF-κB p65 siRNA有良好的协同作用。结论:补肺益肾方可以显著抑制CSE诱导的MRC-5细胞炎症反应,其机制可能与下调NF-κB信号通路有关。 展开更多

关键词 补肺益肾方 核因子-κB通路 香烟烟雾提取物 mrc-5细胞 炎症

原文传递

CO2分压对贴壁细胞MRC-5连续传代培养的影响

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作者 张伊丽 刘照平 +2 位作者 陆敏依 蔡明勇 吴根鹏 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期169-173,共5页

研究培养过程中CO2的使用和pH稳定性对MRC-5细胞增殖、传代培养及产毒水平的影响。采用不同浓度的NaHCO3调节细胞培养液pH值,结合CO2使用,监测细胞培养过程中pH变化情况,以及在连续传代过程中的细胞形态和增殖情况。接种水痘-带状疱疹... 研究培养过程中CO2的使用和pH稳定性对MRC-5细胞增殖、传代培养及产毒水平的影响。采用不同浓度的NaHCO3调节细胞培养液pH值,结合CO2使用,监测细胞培养过程中pH变化情况,以及在连续传代过程中的细胞形态和增殖情况。接种水痘-带状疱疹病毒比较不同状态下细胞的产毒能力。采用碳酸氢盐缓冲体系时,无CO2分压的封闭培养组细胞培养液pH波动较大,在传代培养中观察到细胞形态较差,细胞状态下滑快;细胞连续传代至35-37代;细胞在31代平均产毒水平4.64 LgPFU/mL。有CO2分压的开放组细胞培养液pH相对平稳,在传代培养中细胞活率维持80%以上,细胞状态下滑趋势平缓,可连续传代至41代;31代细胞平均产毒水平4.83Lg PFU/mL。采用碳酸氢盐缓冲体系的细胞培养液匹配合适的CO2分压有助于细胞状态的优化提升。 展开更多

关键词 细胞培养 mrc-5 CO2分压 pH稳定性

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银染法检测短串联重复序列(STR)位点PCR产物鉴别MRC-5细胞

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作者 丁筱骏 许文婷 何春艳 《微生物学免疫学进展》 2006年第4期34-36,共3页

通过采用银染法鉴别短串联重复序列聚合酶链式反应(STR)位点的PCR产物来鉴别人二倍体细胞MRC-5株主细胞库、工作细胞库及限制代细胞。运用PCR方法对细胞库的9个STR位点(CSF1PO、TPOX、TH01、F13A01、FESFPS、vWA、D16S539、D7S820、D13S... 通过采用银染法鉴别短串联重复序列聚合酶链式反应(STR)位点的PCR产物来鉴别人二倍体细胞MRC-5株主细胞库、工作细胞库及限制代细胞。运用PCR方法对细胞库的9个STR位点(CSF1PO、TPOX、TH01、F13A01、FESFPS、vWA、D16S539、D7S820、D13S317)和性别鉴别位点Am elogen in进行扩增,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,银染法显影技术,检测MRC-5主细胞库、工作细胞库及限制代细胞的遗传标记。与ATCC公布的MRC-5的荧光STR图谱的8个STR位点和Am elogen in位点相比,MRC-5主细胞库、工作细胞库、限制代细胞的银染STR图谱的9个STR位点和Am elogen in位点,荧光法和银染法重叠的8个位点(CSF1PO、TPOX、TH01、FESFPS、vWA、D16S539、D7S820、D13S317和Am elogen in)数据完全吻合,说明细胞鉴别试验成立。STR图谱作为细胞鉴别的方法简单、易行、准确。 展开更多

关键词 银染法 STR PCR mrc-5细胞 细胞鉴别

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